丹酚酸A抑制NF-κB信号通路减轻脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症反应

目的 利用脂多糖(LPS)刺激BV2小胶质细胞构建体外神经炎症模型,探讨丹酚酸A(SalA)对神经炎症的抑制作用及机制。方法 (1) BV2细胞分为细胞对照组(正常培养24 h)、LPS(1 mg·L^-1孵育24 h)组、SalA(0.01,0.05,0.5,5,10和20μmol·L^-1培养24 h)组和LPS+SalA(加入LPS 1 mg·L^-1及SalA 0.01,0.05,0.5,5,10和20μmol·L^-1共同培养24 h)组,MTT法检测细胞存活率。(2)除LPS+SalA组SalA给药浓度为0.05,0.5和5μmol·L^-1外,其他分组处理同方法(1)。Griess法检测BV2细胞一氧化氮(NO)分泌水平,ELISA检测BV2细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL^-1β)和IL-6分泌水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测TNF-α,IL^-1β和IL-6 mRNA表达水平,Western印迹...     

淫羊藿次苷Ⅱ通过调节IKK/IκB/NF-κB信号通路抑制脂多糖诱导的星形胶质细胞炎症反应

目的研究ICSⅡ对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞炎症反应的作用。方法体外分离新生SD大鼠脑皮质组织提取原代星形胶质细胞并进行培养。将星形胶质细胞分为空白组、空白+ICSⅡ高浓度组、模型组、模型+ICSⅡ低浓度组、模型+ICSⅡ中浓度组、模型+ICSⅡ高浓度组、模型+地塞米松组。ICSⅡ(5,10,20μmol·L-1)或DSMX(1μmol·L-1)预处理星形胶质细胞1 h后,继续与LPS共同作用24 h。采用MTT法检测ICSⅡ作用于星形胶质细胞的安全浓度范围,确定安全浓度后再观察ICSⅡ对LPS诱导的星形胶质细胞炎症反应的影响;采用ELISA法检测星形胶质细胞中TNF-α,IL-1β,NO,Aβ1-40和Aβ1-42的水平;采用Western蛋白免疫印迹技术检测COX-2,i NOS,IκB-α,NF-κB(p65)(胞核),NF-κB(p65)(胞质)和BACE1的蛋白表达,以及NF-κB(p65)、IKK-α和IKK-β磷酸化水平;采用分子对接技术模拟ICSⅡ与BACE1蛋白的结合。结果 ICSⅡ(0～50μmol·L-1)对星形胶质细胞无毒性作用。模型组较空白组星形胶质细胞中TNF-α,IL-1β和NO水平均显著上升(P<0.05);细胞炎症通路蛋白COX-2,i NOS,NF-κB(p65)(胞核)及BACE1表达升高(P<0.05);IκB-α和NF-κB(p65)(胞质)表达显著降低(P<0.05);NF-κB(p65),IKK-α和IKK-β的磷酸化水平明显上升(P<0.05)。给予ICSⅡ能够明显降低TNF-α,IL-1β和NO水平(P<0.05)。此外,ICSⅡ显著下调炎症相关蛋白COX-2,i NOS,NF-κB(胞核)及BACE1的表达(P<0.05),明显上调NF-κB(胞质)和IκB-α蛋白表达(P<0.05)。同时,明显降低NF-κB(p65),IKK-α和IKK-β的磷酸化水平(P<0.05),对LPS诱导的IκB-α降解、NF-κB活化及细胞核易位均具有显著的抑制作用。结论本研究条件下,ICSⅡ通过调节IKK/IκB/NF-κB信号通路发挥其对LPS诱导的星形胶质细胞炎症损伤的保护作用。     

姜黄素抑制NF-κB信号对人肝癌HepG_2细胞株增殖的影响

目的探讨姜黄素对Hep G2细胞株增殖的影响及其机制。方法不同浓度的姜黄素(0、1.0、3.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0μmol·L-1)处理Hep G2细胞株不同时间后,MTT法检测肝癌细胞株增殖情况;RT-PCR检测NF-κBp65和h TERT m RNA表达;Western blot检测h TERT蛋白表达,细胞免疫荧光法检测Hep G2肝癌细胞株中NF-κB活性。结果姜黄素能明显抑制Hep G2细胞的增殖,且呈时间与浓度依赖性;姜黄素能显著抑制NF-κBp65 m RNA表达及活性,同时伴有h TERT m RNA及蛋白表达降低。结论姜黄素抑制肝癌细胞株增殖,可能通过抑制NF-κBp65调控h TERT表达,进而下调端粒酶活性有关。     

基于NF-κB信号通路的高通量药物筛选细胞炎症模型的建立

目的 建立均相时间分辨荧光（homogeneous time-resolved fluorescence,HTRF）测定炎症细胞模型中NF-κB的方法,为高通量筛选呼吸道炎症药物提供实验依据。方法 采用HTRF检测细胞中Total-NF-κB及Phospho-NF-κB比率来确定NF-κB磷酸化程度。观察不同细胞密度（每孔5,25,50,100,150 k）、不同刺激因子（TNF-α、LPS）、不同作用时间（10,30,60 min）等条件对支气管平滑肌细胞（BSMC）、支气管上皮细胞（HBE）NF-κB磷酸化的影响,建立炎症细胞模型及HTRF测定NF-κB的方法。结果 采用HBE细胞,细胞密度为每孔10 k,刺激因子TNF-α（10 ng·mL^-1）刺激细胞,刺激10 min建立炎症细胞模型,可使细胞中NF-κB磷酸化水平达到52.6%,与正常对照组（14.2%）相比,有明显升高。结论 成功建立了快速、特异性高、操作简便的HTRF测定细胞炎症模型中NF-κB磷酸化程度的方法,为气道炎症药物筛选研究提供了依据。     

丹皮酚通过抑制NF-κB信号通路诱导Tca8113细胞凋亡

目的 研究丹皮酚对核因子κB（NF-κB）信号通路的影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制。方法 将丹皮酚以不同浓度及不同时间作用于人舌鳞癌Tca8113细胞,应用MTT法观察不同浓度丹皮酚在不同作用时间下对Tca8113细胞增殖的抑制作用,Hoechst 33342荧光染色及流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2,以及NF-κB信号通路组分中IκBα和p-IκBα的表达情况,并采用凝胶电泳迁移率检测（EMSA）对NF-κB活性进行测定。结果 经丹皮酚作用后,Tca8113细胞生长受到明显抑制,并呈明显的时间、剂量依赖效应关系。丹皮酚有明显诱导Tca8113细胞凋亡的作用,Western Blot 以及EMSA检测结果显示,丹皮酚上调Tca8113细胞中Bax与IκBα的表达,下调Bcl-2的表达,并能下调IκBα磷酸化及NF κB活性。结论 丹皮酚能够抑制NF-κB信号转导通路,进而抑制Tca8113细胞的增殖并诱导其凋亡。     

姜黄素调控NF-κB信号通路对糖尿病模型大鼠胰岛细胞形态和功能的影响

目的 探讨姜黄素通过核因子-κB（NF-κB）信号通路对高糖高脂饮食诱导的糖尿病模型大鼠胰岛细胞形态和功能的影响。方法 采用高糖高脂饲料＋ip链脲佐菌素法制备糖尿病大鼠模型,将模型成功 SD大鼠随机分为5组：模型组、二甲双胍（200 mg·kg^-1,阳性药）组和姜黄素低、中、高剂量（50、150、250 mg·kg^-1）组,对照组不造模。ig给药,每天1次,连续6周,对照组同时注射等量无菌磷酸盐缓冲液（PBS）。观察SD大鼠体质量变化;血糖仪检测空腹血糖;ELISA法检测血清C肽水平;生化分析仪检测血清中糖化血红蛋白、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBil）、血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、尿酸（UA）水平;取胰腺进行 HE 染色,于光镜下观察胰岛形态学改变;免疫组化染色法观察胰岛 NF-κB 的阳性表达;Western blotting法检测NF-κB信号通路相关蛋白表达;提取胰岛细胞,免疫荧光染色观察胰岛素分泌,葡萄糖刺激的胰岛素分泌（GSIS）实验检测胰岛素分泌量。结果 与模型组比较,各给药组体质量在治疗第2周时开始缓慢增长,第3、4周体质量显著升高（P＜0.05）;血糖水平显著降低（P＜0.05）,血清 C 肽水平显著升高（P＜0.05）;糖化血红蛋白、TG、TC、LDL-C、ALT、AST、Scr、BUN、UA水平显著降低（P＜0.05）,HDL-C水平显著升高（P＜0.05）;胰岛大小和形态逐渐恢复正常,胰岛细胞依次变得更清晰完整,导管系统内的囊性扩张也逐渐减少;NF-κB阳性细胞减少;p-P65蛋白表达显著降低（P＜0.05）,p-IκBα蛋白表达显著升高（P＜0.05）;胰岛原代细胞分泌胰岛素显著增加（P＜0.05）。结论 姜黄素可以保护糖尿病大鼠胰岛细胞正常形态,维持胰岛细胞功能,减轻糖尿病大鼠症状,其机制可能与调控NF-κB信号通路有关。     

柚皮素通过抑制NF-κB信号通路减轻哮喘大鼠气道炎症反应#br#

摘要：目的　探讨柚皮素对哮喘大鼠气道炎症反应的影响及其作用机制。方法　利用卵清蛋白（OVA）诱导建立哮喘大鼠模型,实验分为正常对照组、哮喘模型组、柚皮素100 mg/kg及柚皮素200 mg/kg组,实验结束后麻醉脱颈处死大鼠;Giemsa染色检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎性细胞的数量及分类;HE染色观察肺组织病理学变化;酶联免疫吸附测定试验（ELISA）检测血清中核因子κB（NF-κB）的含量和BALF中辅助性T2（Th2）细胞因子的含量;免疫组化和实时定量PCR（qPCR）检测哮喘大鼠肺部NF-κB蛋白及mRNA的表达水平。脂多糖（LPS）诱导建立A549炎症细胞模型,柚皮素处理细胞后免疫荧光和Western blot检测A549细胞中NF-κB蛋白的表达水平。结果　柚皮素100 mg/kg和柚皮素200 mg/kg组均可减少单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞对哮喘大鼠肺部和支气管的浸润,并可改善哮喘大鼠肺泡的生理结构,减少支气管黏膜上皮脱落,促进支气管假复层及纤毛结构修复。柚皮素可降低肺部NF-κB p65、NF-κB p50蛋白和mRNA的表达（P＜0.05）,降低血清中NF-κB p65、NF-κB p50和BALF中Th2细胞因子白细胞介素（IL）-4、IL-5、IL-13的含量（P＜0.05）。在体外LPS诱导的炎症A549细胞中,柚皮素可降低NF-κB p65、NF-κB p50蛋白的表达,上调IκBα的表达（P＜0.05）。结论　柚皮素可有效减轻哮喘大鼠肺部和支气管的炎症反应,其潜在的作用机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

MYR通过NF-κκB信号通路改善LPS诱导小鼠纹状体炎症反应

目的研究MYR对LPS诱导小鼠纹状体内神经炎症的作用及机制。方法雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、LPS模型组、MYR 20和50 mg·kg~(-1)给药组。连续给予MYR 7 d,于末次给药后,模型组和给药组小鼠采用腹腔注射LPS5 mg·kg~(-1)诱导小鼠急性神经炎症的发生,LPS注射6 h后,ELISA法检测小鼠纹状体中IL-1β,IL-6,TNF-α,MCP-1以及ICAM-1等炎症因子的变化;Western印迹法检测小鼠纹状体中NF-κB信号通路相关蛋白的表达变化。结果与正常对照组比较,LPS诱导组小鼠纹状体中炎症因子IL-1β,IL-6,TNF-α,MCP-1以及ICAM-1显著增加(所有P<0.01),NF-κB信号通路相关蛋白表达显著增加。而给予MYR 20和50 mg·kg~(-1)可显著抑制LPS诱导的小鼠纹状体炎症因子的释放,抑制NF-κB,IκB蛋白的磷酸化,抑制胞浆内NF-κB的核转位。结论 MYR可有效抑制LPS诱导的神经炎症,保护小鼠纹状体中多巴胺神经元,其抗炎保护作用与抑制NF-κB信号通路密切相关。     

丹参酮ⅡA调控NF-κB信号通路对急性呼吸衰竭大鼠炎症因子及细胞凋亡的影响

目的 评估丹参酮Ⅱ_A对急性呼吸衰竭（ARDS）大鼠模型的保护作用,并分析其通过核因子-κB(NF-κB)信号通路发挥抗炎、抗凋亡的分子机制。方法 采用脂多糖（LPS）诱导法建立ARDS大鼠模型。72只SPF级大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组以及丹参酮Ⅱ_A低、中、高剂量（5、10、20 mg/kg）组,每组各12只。比较各组大鼠肺组织湿/干质量比、肺组织病理评分、血清炎症因子水平（TNF-α、IL-6、IL-1β）、肺泡灌洗液（BALF）细胞计数与分类、肺组织中NF-κB信号通路相关蛋白表达[磷酸化核因子NF-κB抑制蛋白α(pIκBα)、p65、NF-κB DNA结合活性]、肺组织抗氧化指标[超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）]和肺组织细胞凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、活化半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)]表达。结果 与模型组相比,地塞米松组和丹参酮Ⅱ_A各剂量组肺组织湿/干质量比、病理评分、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、BALF总细胞数和中性粒细胞比例、p-IκBα/IκBα、p65/β-actin、NF-κB DNA结合活性、MDA水平、Bax/Bcl-2值和cleaved Caspase-3表达均显著降低（P<0.05、0.01）,而SOD活性显著升高（P<0.05）。结论 丹参酮Ⅱ_A通过调控NF-κB信号通路,能发挥抗炎、抗氧化和抗凋亡作用,对ARDS大鼠模型具有保护效果。     

田蓟苷下调TLR4/Myd88/NF-κB信号通路抑制NLRP3炎症小体和炎症反应

本研究通过脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导RAW264.7细胞建立炎症反应模型,探讨田蓟苷(tilianin)对炎症反应的影响及其作用机制。通过CCK-8 (cell counting kit-8)实验检测细胞活力,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immuno sorbent assay, ELISA)检测肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)和白细胞介素6(interleukin6,IL-6)含量;Griess试剂法检测一氧化氮(nitricoxide,NO)含量;2', 7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, DCFH-DA)荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen radical, ROS)水平;Western blot检测Toll样受体4 (Toll-like receptor 4, TLR4)、髓样分化因子88 (myeloid differentiation primary response gene 88, Myd88)、核转录因子-κB p65 (nuclear factor-κB p65, NF-κB p65)、磷酸化核转录因子-κB (phospho-nuclear factor-κB, p-NF-κB)、NF-κB抑制蛋白α (inhibitor of NF-κB α, IκBα)和磷酸化NF-κB抑制蛋白α (phospho-inhibitor of NF-κB α, p-IκBα)的蛋白表达水平; qRT-PCR法和Western blot检测Nod样受体蛋白3 (Nod-like receptor protein 3,NLRP3)、IL-1β前体(pro-IL-1β)、IL-18前体(pro-IL-18)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1前体(pro-caspase-1)的mRNA和蛋白水平。免疫荧光染色检测NF-κB p65核转位;使用TLR4抑制剂resatorvid (TAK242)进一步验证田蓟苷对TLR4/Myd88/NF-κB信号通路的影响。结果显示,田蓟苷显著降低了RAW264.7细胞上清中TNF-α、IL-6和NO水平以及细胞内ROS含量。田蓟苷降低了TLR4、Myd88、p-NF-κB p65和p-IκBα蛋白表达水平,抑制了NF-κB p65的核转位,同时显著降低了NLRP3、pro-IL-1β、pro-IL-18和pro-caspase-1的蛋白表达水平以及NLRP3和pro-IL-1β的mRNA水平。上述研究结果表明,田蓟苷能明显减轻LPS诱导RAW264.7细胞产生的炎症反应,其机制可能与下调TLR4/Myd88/NF-κB信号通路从而抑制NLRP3炎症小体有关。