奥沙利铂神经毒性机制及防治新进展

摘 要奥沙利铂的神经毒性是其常见不良反应之一,具有独特的临床特征,其发生机制至今尚不清楚并且缺乏有效的防治方法。近年来的研究发现,瞬时受体电位通道、间隙连接通道、烟碱型乙酰胆碱受体等在介导奥沙利铂神经毒性中发挥了重要作用,基因多态性也与其显著相关。此外,研究者们利用锰福地吡、单唾液酸神经节苷脂和黄芪根提取物等药物在防治奥沙利铂的神经毒性中进行了探索,并显示出了良好的疗效。该文就近年来奥沙利铂神经毒性的发生机制及防治研究进展做一综述。     

1例丙戊酸钠所致高血氨脑病的案例分析

目的 探讨丙戊酸钠引起高血氨脑病的机制、危险因素以及防治措施,为临床用药提供建议。方法 临床药师参与并总结1例丙戊酸钠所致高血氨脑病患者的诊治。结果 丙戊酸钠在与苯巴比妥、托吡酯等药物联用时可能会增加高血氨脑病的风险。结论 临床上需要避免苯巴比妥等药物和丙戊酸钠的联用,对于有意识状态改变使用丙戊酸钠的患者及时监测血氨。     

丙戊酸钠及其代谢产物的体外肝毒性研究

目的 研究丙戊酸钠及3个代谢产物（2-丙基-4-五烯酸、3-羟基丙戊酸、5-羟基丙戊酸）对体外人正常肝细胞L02增殖活性及对肝细胞损伤相关指标的影响。方法 实验分为对照组和实验组,对照组细胞常规培养,实验组加入丙戊酸钠及3个代谢产物,采用CCK-8法检测细胞增殖活性,PCR法检测CYP1A1、CYP1A2、PCNA、Bax及Bcl-2的mRNA相对含量,Western Blotting法检测蛋白表达,同时检测细胞上清液中谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、乳酸脱氢酶（LDH）的含量。结果 与对照组相比,随着丙戊酸钠及3个代谢产物浓度和时间的增加,对 L02细胞增殖活性的抑制逐渐增强,CYP1A1、CYP1A2及Bax的mRNA相对含量和蛋白表达量升高,PCNA及Bcl-2的 mRNA相对含量和蛋白表达量均有下降,AST、ALT、LDH含量升高。结论 丙戊酸钠及3个代谢产物与肝毒性有关。     

基于拟胚体面积的体外胚胎毒性模型的建立和验证

目的 利用小鼠胚胎干细胞,以拟胚体面积为分化抑制终点,构建体外胚胎毒性模型。方法 模型建立：分别用训练集10个化合物青霉素G、异烟肼、5-氟尿嘧啶、羟基脲、阿司匹林、氟康唑、地塞米松、丙戊酸钠、洛伐他汀、苯海拉明处理小鼠胚胎干细胞ES-D3和小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3 5 d,用细胞活力检测试剂盒检测细胞活性,得到相应的半数抑制浓度（IC_{50 3T3}、IC_{50 D3}）;同时用10种化合物处理ES-D3细胞,用悬浮-悬滴培养的途径制备拟胚体,于第5天对拟胚体进行拍照,用 Image J 软件测量拟胚体的横截面积,并计算半数抑制细胞分化的浓度（ID₅₀）。根据得到的 IC_{50 3T3}、IC_{50 D3}、ID₅₀,用Python软件采用线性判别分析（LDA）拟合得到线性二分类判别式。模型验证：以上述同样的方法测定测试集3个化合物维生素C、布洛芬、顺铂的IC_{50 3T3}、IC_{50 D3}、ID₅₀,将其代入得到的判别式,并预测化合物的胚胎毒性。结果 通过训练集 10个化合物拟合出线性预测判别式为：判别值＝21.550 926 58×lg IC_{50 3T3}－7.600 241 83×lg IC_{50 D3}－14.007 571 16×lg ID₅₀＋6.675 517 2,判别值＜0,归为无胚胎毒性;判别值≥0,归为胚胎毒性。将测试集化合物的 IC_{50 3T3}、IC_{50 D3}、ID₅₀代入判别式,得到维生素C判别值＜0,为无胚胎毒性药物;顺铂和布洛芬判别值＞0,为胚胎毒性药物,均与文献中体内试验结果一致,预测正确。结论 基于拟胚体面积成功建立体外胚胎毒性模型。     

丙戊酸钠用药差错致肝损伤:病例分析

目的 从1例脑卒中后继发癫痫患者丙戊酸钠用药错误的处置过程,探讨医疗团队中临床药师在纠正治疗用药错误中的作用。方法 临床药师参与丙戊酸钠用药错误处置的全程治疗,向临床宣教血药浓度监测、丙戊酸钠合理用药（剂量和用法）,以及最常见的不良反应和潜在的药物相互作用。结果 患者抽搐症状得以控制,丙戊酸钠引起肝损伤得以恢复。结论 临床药师参与药物治疗,既要关注正常用法、用量下的药物不良反应,也应具有处置用药错误的能力,充分发挥临床药师的专业作用。     

临床药师参与颅脑损伤患者鼻饲给予丙戊酸钠的药学监护

目的 通过血药浓度监测,探讨临床药师对颅脑损伤患者鼻饲给予丙戊酸钠的药学监护模式。方法 利用HPLC检测颅脑损伤患者鼻饲给予及静脉给予丙戊酸钠后丙戊酸的血药浓度,研究不同给药方式对丙戊酸血药浓度的影响,探讨临床药师药学监护的作用。结果 丙戊酸钠鼻饲给药严重影响血浆药物浓度,其血药浓度均达不到有效参考范围。经临床药师建议后,丙戊酸钠改为静脉给药,血药浓度较鼻饲给药升高,达窗率提高,差异有统计学意义（P<0.01）。结论 临床药师在临床治疗团队中充分运用血药浓度监测方法及扎实的药学知识,在临床药物治疗过程中起到重要作用。     

新生小鼠神经干细胞体外培养、分化及鉴定

目的 简化神经干细胞原代培养的取材及步骤,明确体外定向诱导分化条件,为进一步神经干细胞移植相关实验提供基础条件。方法 新生24 h昆明种小鼠无菌条件下冰上取大脑组织,经机械分离加胰酶消化吹打后,加入含有碱性成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子和B27的DMEM/F12培养基中培养;加入不同浓度胎牛血清诱导其分化,应用免疫荧光技术行巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白、微管相关蛋白2染色,对培养细胞鉴定。结果 新生小鼠提取神经干细胞可形成神经球,并稳定增殖传代,经诱导可定向分化为神经元及星形胶质细胞。结论 新生小鼠较胎鼠取材简单,可培养高质量神经干细胞,血清浓度同向星型胶质细胞方向的分化概率呈正相关。     

药物神经发育毒性比较及筛查模型建立

目的：为建立药物神经发育毒性筛查模型选择可评价药物毒性的指标。方法：以受精后6 h（6 hpf）的斑马鱼胚胎为实验模型，E₃培养液为溶剂对照组，不同药物不同浓度的暴露液为染毒组。计算受精后24，72，96，110 h的死亡率；受精后48，54，60，72，96 h的孵化率；观察受精后6 d（6 dpf）的幼鱼对强光刺激的惊恐逃避反射、黑暗状态下的运动行为及趋触性。结果：对6 hpf的斑马鱼胚胎染毒，氯丙嗪质量浓度>4.0 mg·L^-1、丙戊酸钠质量浓度>2.0 mg·L^-1可引起斑马鱼胚胎出现浓度依赖性死亡。氯丙嗪染毒时，与对照组、0.25 mg·L^-1染毒组相比，高浓度染毒组斑马鱼幼鱼总移动距离和平均速度均降低，且具有显著性差异（P<0.05）；药物丙戊酸钠染毒时，与对照组相比，随浓度增加呈现移动距离和平均速度先增后降趋势，高浓度组2.0 mg·L^-1移动距离和平均速度明显降低，且具有显著性差异（P<0.05）。氯丙嗪和丙戊酸钠染毒时，中间1 min光照期与前3 min钟黑暗期相比，运动平均速度均有所下降，具有显著性差异（P<0.05）；后3 min黑暗期与中间1 min光照期相比，运动平均速度均有所上升，具有显著性差异（P<0.05），且丙戊酸钠染毒时各组后3 min黑暗期运动平均速度均大于前3 min黑暗期。结论：药物氯丙嗪和丙戊酸钠可能导致斑马鱼胚胎发育障碍以及幼鱼神经行为异常，且药物丙戊酸钠毒性大于氯丙嗪。初步认为模式动物斑马鱼作为一种高通量筛选模型，其死亡率、孵化率、半数致死浓度LC₅₀、斑马鱼幼鱼总移动距离和平均速度可作为评价药物神经毒性的指标。     

气相色谱内标法测定丙戊酸钠片含量的不确定度评定

摘 要 目的：建立GC内标法测定丙戊酸钠片含量不确定度评定方法,确定引入测量不确定度的主要来源。方法: 对采用GC内标法测定丙戊酸钠片含量过程中引入的称样量、稀释倍数、纯度、色谱峰面积重复性等多个分量不确定度进行系统分析。结果: GC内标法测定丙戊酸钠片含量扩展不确定度为2.7%,含量范围为（96.3±2.7）% （k=2）。结论:建立的不确定度评定结果可靠,其结果有利于提高丙戊酸钠片的质量评价与控制水平。     

丙戊酸钠和丙戊酸镁在大鼠体内的药动学研究

目的 研究丙戊酸钠和丙戊酸镁在大鼠体内的药动学特征,评价其优势丙戊酸盐,为临床合理用药提供参考。方法 SD大鼠随机分为2组,分别灌胃给予丙戊酸钠片和丙戊酸镁片。于不同时间点眼眶取血。采用HPLC测定血清中丙戊酸的血药浓度,计算2种丙戊酸盐在大鼠体内的药动学参数,并比较2种丙戊酸盐之间的差异。结果 HPLC测定丙戊酸血药浓度方法专属性好,血清丙戊酸浓度在10.00~110.00 μg·mL^-1内线性关系良好。精密度、稳定性和回收率均符合要求。丙戊酸钠和丙戊酸镁在大鼠体内的主要药动学参数：T_1/2分别为（14.02±3.86） h和（12.11±1.95） h;T_max分别为（3.67±0.58） h和（2.67±0.26） h;C_max分别为（67.10±10.87）μg·mL^-1和（75.67±12.94）μg·mL^-1;AUC_（0-t）分别为（969.86±72.08）μg·mL^-1·h和（1 093.56±48.69）μg·mL^-1·h;AUC_（0-∞）分别为（1 178.10±185.29）μg·mL^-1·h和（1 279.35±109.18）μg·mL^-1·h;MRT_0-t分别为（10.73±2.05） h和（13.06±3.24） h。V_d分别为（16.31±2.18） L和（23.47±2.19） L;CL分别为（0.056 3±0.009） L·h^-1和（0.051 1±0.004） L·h^-1。结论 与丙戊酸钠相比,丙戊酸镁在大鼠体内的药动学参数具有一定的优势,可能是一种更具有治疗优势的丙戊酸盐。     

Separating chemotherapy-related developmental neurotoxicity from cytotoxicity in monolayer and neurosphere cultures of human fetal brain cells

Chemotherapy-induced neurotoxicity can reduce the quality of life of patients by affecting their intelligence, senses and mobility. Ten percent of safety-related late-stage clinical failures are due to neurological side effects. Animal models are poor in predicting human neurotoxicity due to interspecies differences and most in vitro assays cannot distinguish neurotoxicity from general cytotoxicity for chemotherapeutics.We developed in vitro assays capable of quantifying the paediatric neurotoxic potential for cytotoxic drugs. Mixed cultures of human fetal brain cells were differentiated in monolayers and as 3D-neurospheres in the presence of non-neurotoxic chemotherapeutics (etoposide, teniposide) or neurotoxicants (methylmercury). The cytotoxic potency towards dividing progenitors versus differentiated neurons and astrocytes was compared using: (1) immunohistochemistry staining and cell counts in monolayers; (2) through quantitative Western blots in neurospheres; and (3) neurosphere migration assays. Etoposide and teniposide, were 5–10 times less toxic to differentiated neurons compared to the mix of all cells in monolayer cultures. In contrast, the neurotoxicant methylmercury did not exhibit selectivity and killed all cells with the same potency. In 3D neurospheres, etoposide and teniposide were 24 to 10 times less active against neurons compared to all cells. These assays can be used prioritise drugs for local drug delivery to brain tumours.     

药物神经毒性评价体外模型的研究进展

神经毒性是药物安全性评价的重要方面。体外模型相比较体内动物实验在药物高通量筛选、分子机制研究、检测分析技术应用上具有显著优势。至今,研究和评价药物神经毒性的体外模型主要包括原代神经细胞培养、神经细胞系培养、诱导神经干细胞分化模型,三维细胞培养模型等。这些体外模型的复杂程度、对药物的敏感性及检测方法不尽相同。概述各种神经毒性体外模型的应用领域及研究进展,提出了神经毒性体外评价模型研究应用中存在的问题及今后的发展方向。     

胎鼠神经干细胞培养方法的建立及药物对干细胞增殖的影响

目的建立神经干细胞培养模型，观察药物对其增殖能力的影响。方法建立大鼠胎脑神经干细胞的培养方法，并用MTT法和3H-胸腺嘧啶核苷参入法观察黄皮酰胺、丹酚酸A及人参皂苷Rg1等对第2代神经球细胞状态的影响。结果免疫细胞化学结果显示，培养的神经细胞具备干细胞的基本特性；MTT和液闪结果则表明，上述3种药物可不同程度地影响神经干细胞的存活率和/或增殖活性。结论本实验所建立的胚胎大鼠神经干细胞培养模型可以观察到一些有脑保护作用的药物对干细胞存活和增殖有一定影响。     

Pharmacologic treatment of status epilepticus

Introduction: Status epilepticus (SE) requires rapid identification of its cause and urgent pharmacological treatment. Despite an estimated incidence of up to 61 per 100,000 per year, evidence from high-class clinical trials is only available for the early stages of SE.

Areas covered: Following a four-stage approach of SE (early, established, refractory and super-refractory), we present pharmacological treatment options and their clinical utility.

Expert opinion: Intravenous lorazepam and intramuscular midazolam appear as most effective treatments for early SE. In children, buccal midazolam has emerged as first-line non-intravenous drug with similar efficacy and safety to other intravenous or rectal benzodiazepines. In established SE intravenous antiepileptic drugs are in use. There are no double-blind, but six randomized open studies with valproate and two with levetiracetam. A meta-analysis found higher rates of seizure cessation with valproate 75.7% (95% CI 63.7–84.8) and phenobarbital 73.6%, (95% CI 58.3–84.8) than with levetiracetam (68.5%, 95% CI 56.2–78.7) or phenytoin (50.2%, 95% CI 34.2–66.1). Based on the favourable tolerability profile of levetiracetam and valproate, the authors prefer these drugs in established SE over phenytoin. Treatment options in refractory SE are intravenous anaesthetics. In super-refractory SE ketamine, magnesium, steroids and other drugs have been used with variable outcomes. At this stage therapeutic decisions are based on doctors’ preferences, patient factors such as age and comorbidity, and cause of SE, if identified.     

Magnetic nanoparticle mediated transfection of neural stem cell suspension cultures is enhanced by applied oscillating magnetic fields

Safe genetic modification of neural stem cell (NSC) transplant populations is a key goal for regenerative neurology. We describe a technically simple and safe method to increase transfection in NSCs propagated in the neurosphere (suspension culture) model, using magnetic nanoparticles deployed with applied oscillating magnetic fields (‘magnetofection technology’). We show that transfection efficiency was enhanced over two-fold by oscillating magnetic fields (frequency = 4 Hz). The protocols had no effect on cell viability, cell number, stem cell marker expression and differentiation profiles of ‘magnetofected’ cultures, highlighting the safety of the technique. As far as we are aware, this is the first successful application of magnetofection technology to suspension cultures of neural cells. The procedures described offer a means to augment the therapeutic potential of NSCs propagated as neurospheres – a culture model of high clinical translational relevance – by safe genetic manipulation, with further potential for incorporation into ‘magneto-multifection’ (repeat transfection) protocols.From the Clinical EditorThis team of investigators describe a simple and safe method to increase transfection in neural stem cells using magnetic nanoparticles deployed with oscillating magnetic fields, demonstrating a greater than two-fold transfection efficiency increase by applying low frequency magnetic oscillation.     

外源表达持续活化型Gli2对小鼠星形胶质细胞生物学特性的影响

目的探讨外源表达持续活化型Gli2对小鼠星形胶质细胞生物学特性的影响。方法构建可表达持续活化型Gli2的慢病毒载体,包装慢病毒颗粒,继而感染小鼠星形胶质细胞,对其生物学特性的改变进行鉴定。结果研究发现,含有外源表达的持续活化型Gli2的小鼠星形胶质细胞在神经干细胞培养基中连续培养13 d后可获得形成细胞球的能力,且形成的细胞球与正常的小鼠神经球在形态上相近;对所形成的细胞球做免疫荧光染色,结果显示神经干细胞的特异性标志物Nestin呈阳性。结论在小鼠星形胶质细胞中外源表达持续活化型Gli2后可使其获得形成神经球样细胞球的能力。     

黑木耳多糖顺铂配合物抗HeLa和LoVo细胞增殖活性

目的 研究不同分子量黑木耳多糖（Auricularia auricula polysaccharide，AAP）能否与顺铂形成配合物，同时研究其配合物对HeLa和LoVo细胞的抗肿瘤细胞增殖活性。方法 采用"One pot"法合成不同分子量的黑木耳多糖顺铂配合物（Auricularia auricula polysaccharide-cis-diaminedichloroplatinum，AAP-CDDP），并应用MTT法对其体外抗肿瘤细胞增殖活性进行研究。结果 AAP-CDDP的抑制HeLa和LoVo肿瘤细胞增殖活性与其螯合顺铂量密切相关，相关系数r²分别为0.877 5和0.913 2；其中AAP（Ⅴ）-CDDP具有最强的抗肿瘤细胞增殖活性。结论 AAP与顺铂形成配合物具有很好的抗肿瘤细胞增殖活性。     

Can we develop improved derivatives of valproic acid?

Valproic acid is one of the major antiepileptic drugs. In animal models, valproate showed less anticonvulsant potency than the other three established antiepileptic drugs: phenobarbital, phenytoin and carbamazepine. In addition, two major side-effects, teratogenicity and hepatotoxicity, have been associated with valproate Iherapy. Due to the above and the shortage of new antiepileptic drugs there is a substantial need to develop improved derivatives of valproate. This paper analyses three kinds of valproate derivatives: valpromide, the primary amide of valproate, and its analogues; monoester prodrugs of valproate and an active metabolite of valproate, 2-n-propyl-2-pentenoate. The comparative evaluation was carried out by pharmacokinetic and pharmacodynamic analyses in animals. From the data accumulated so far, we can conclude that 2-n-propyl-2-pentenoatc and/or a valpromide isomer, which does not undergo amide acid biotransformation and preferably is not an epoxide hydrolase inhibitor, may prove to be improved derivatives of the parent compound valproic acid.