七氟醚对卵巢癌干细胞特性及增殖、侵袭迁移能力的影响

目的 探究七氟醚对卵巢癌细胞SKOV3干细胞特性及增殖、侵袭迁移能力的影响。方法 常规培养人卵巢癌细胞SKOV3于培养瓶中,分为七氟醚组及对照组,七氟醚组以5% CO₂和1%七氟醚培养24 h,对照组仅以5% CO₂培养24 h,MTT法检测两组细胞增殖能力的变化,Transwell侵袭及迁移实验检测细胞侵袭及迁移能力,Western blotting检测两组细胞干细胞特性相关分子（Oct4及Sox2）及上皮间充质转化（EMT）相关分子（E-cadherin、Vimentin）的表达差异。结果 七氟醚组细胞72、96 h时间点增殖能力显著低于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。七氟醚组穿透Matrigel基质胶的细胞数、迁出Transwell上小室的细胞数均明显少于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。七氟醚组Oct4、Sox2、Vimentin表达均显著低于对照组,E-cadherin表达显著高于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 七氟醚可通过减轻卵巢癌细胞EMT进程及干细胞特性,抑制细胞增殖及侵袭迁移能力。     

阿司匹林对鼻咽癌CNE-1、5-8F细胞增殖、迁移与侵袭作用机制研究

目的 探讨阿司匹林对人鼻咽癌CNE-1、5-8F细胞增殖、迁移与侵袭的影响和机制。方法 将人鼻咽癌CNE-1、5-8F细胞株分为对照组和阿司匹林（0.00、1.25、2.50、5.00、10.00mmol/L）处理组。噻唑蓝（MTT）法检测不同浓度阿司匹林作用24、48、72h后对CNE-1、5-8F细胞的增殖能力,以半数抑制浓度（IC₅₀）作为后续实验药物处理浓度。集落形成实验检测CNE-1和5-8F细胞增殖能力,Transwell实验检测CNE-1和5-8F细胞迁移及侵袭能力的变化,Western blotting法检测CNE-1和5-8F细胞中蛋白激酶B（Akt）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、波形蛋白（Vimentin）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、Snail蛋白相对表达水平。结果 人鼻咽癌CNE-1、5-8F细胞分别经1.25、2.50、5.00、10.00mmol/L阿司匹林处理后,细胞增殖均受到不同程度抑制,且呈时间及浓度相关性,IC₅₀分别为3.3、2.7mmol/L。与对照组相比,经阿司匹林处理后,鼻咽癌CNE-1、5-8F细胞的细胞增殖和集落形成能力明显下降（P＜0.01）。与对照组相比,经阿司匹林处理后,划痕愈合率显著降低（P＜0.05）。Trasnwell迁移实验结果表明,与对照组相比,阿司匹林处理组鼻咽癌细胞CNE-1和5-8F 48h穿过小室的数目显著减少（P＜0.05、0.001）。与对照组相比,阿司匹林处理组CNE-1、5-8F细胞的E-cadherin蛋白表达显著增加（P＜0.05）,PI3K、Akt、Vimentin、Snail蛋白表达显著下降（P＜0.05、0.01）。结论 阿司匹林可通过上调E-cadherin蛋白的表达、抑制上皮间质转化进程从而抑制人鼻咽癌CNE-1、5-8F细胞迁移侵袭,同时下调PI3K、Akt、Vimentin、Snail蛋白的表达进而抑制CNE-1、5-8F细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

基于Wnt/β-catenin信号对胡椒碱抗肿瘤作用机制的研究

目的 研究小剂量胡椒碱通过下调Wnt/β-catenin信号分子的表达调控胃癌细胞HGC-27增殖及侵袭的机制。方法 体外培养人胃癌HGC-27细胞,设置梯度浓度的胡椒碱,CCK-8法检测24 h细胞的活力,流式细胞术检测细胞凋亡率。将细胞分为正常组（HGC-27）细胞、对照组（Wnt/β-catenin抑制剂组）、实验组（小剂量胡椒碱）。CCK-8法检测12,24,48 h细胞的活力,BrdU标记流式细胞术检测细胞增殖率、划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力,Western-blot法检测Wnt/β-catenin信号分子的表达以及MMP2、MMP9和N-cadherin的表达水平,RT-qPCR检测β-catenin、MMP2、MMP9、N-cadherin的mRNA表达水平。结果 5 μmol·L^-1的胡椒碱可以抑制细胞的增殖但无明显细胞毒性,可以显著降低HGC-27细胞的增殖能力,且具有时间依赖性,相比正常组差异具有统计学意义（P<0.05）。划痕试验和Transwell小室试验结果显示,5 μmol·L^-1的胡椒碱可以降低HGC-27细胞的迁移能力和侵袭能力,相比正常组差异具有统计学意义（P<0.05）。胡椒碱可以显著下调Wnt/β-catenin信号分子的表达,以及关键蛋白MMP2、MMP9、N-cadherin的表达水平,相比正常组差异具有统计学意义（P<0.05）。RT-qPCR结果显示,β-catenin、MMP2、MMP9、N-cadherin的mRNA表达水平相比正常组显著下调（P<0.05）。结论 小剂量的胡椒碱可以通过下调Wnt/β-catenin信号分子的表达调控胃癌细胞HGC-27的增殖及侵袭,可能是胡椒碱抗肿瘤的作用机制之一。     

七氟醚的麻醉时间对大鼠认知功能及对海马内AChE和Aβ1-42含量的影响

目的 探讨七氟醚的麻醉时间对大鼠认知功能及海马内乙酰胆碱酯酶（AChE）活性和β-淀粉样蛋白（Aβ_1-42）含量的影响。方法 随机将120只成年SD大鼠分为七氟醚2、4、6 h组和对照组,每组30只。七氟醚2、4、6 h组分别给予3%七氟醚2、4、6 h,对照组吸入空气。麻醉完成后1、3、7 d行Morris水迷宫实验和旷场实验,记录逃避潜伏期、穿越平台次数、第3象限活动时间、中央格停留时间、2 min穿越格子数。实验结束后处死大鼠取海马组织标本,用比色法测定AChE活性、酶联免疫吸附试验测定Aβ_1-42含量。结果 七氟醚组逃避潜伏期较对照组显著延长（P<0.05）,第3象限活动时间、穿越平台次数较对照组显著减少（P<0.05）;七氟醚2、4 h组中央格停留时间、2 min内穿越格子数与对照组无统计学差异,七氟醚6 h组中央格停留时间显著大于对照组（P<0.05）,2 min内穿越格子数显著小于对照组（P<0.05）,且变化程度均与七氟醚吸入时长呈正相关性。七氟醚组海马AChE活性、Aβ_1-42含量显著高于对照组（P<0.05）,且随七氟醚吸入时间的延长而升高。结论 七氟醚麻醉可导致大鼠认知功能损伤,且损伤程度随麻醉时间延长而加重,其机制可能与七氟醚上调海马AChE活性、促进Aβ_1-42生成有关。     

MicroRNA-129-2靶向调控SOX4抑制食管癌细胞增殖与侵袭转移的研究

目的 探讨MicroRNA-129-2(miR-129-2)在体内外抑制食管癌细胞增殖和侵袭转移的作用及可能机制,为食管癌的预后评估及靶向治疗提供新的思路.方法 将miR-129-2 mimics及miR-129-2 mimics NC基因序列分别转染到食管癌NMC109细胞中,并设为miR-129-2 mimics高表达组和miR-129-2 mimics阴性对照组(miR-129-2 mimics NC组),将非转染的NMC109细胞设为空白对照组.体外实验:运用MTT法检测3组细胞的增殖能力、Transwell法检测细胞侵袭能力、蛋白印迹法检测SOX4蛋白表达.采用裸鼠体内移植瘤形成实验检测3组细胞在体内环境下的增殖能力.结果 miR-129-2 mimics组的食管癌细胞增殖活性及侵袭能力较miR-129-2 mimics NC组及空白对照组明显减弱(P<0.001),而空白对照组与miR-129-2 mimics NC组食管癌细胞增殖性及侵袭性无明显差异(P>0.05);miR-129-2 mimics组的食管癌细胞中,SOX4的表达下调(P<0.001);miR-129-2 mimics组裸鼠移植瘤体积及重量明显减小(P<0.001),而miR-129-2mimics NC组及空白对照组无明显差异(P>0.05).结论 miR-129-2具有抑制食管癌细胞NMC109增殖和侵袭转移的作用,其作用机制可能与靶向下调SOX4基因表达有关.     

circ_0000264促进乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨环状RNA circ_0000264在乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭中的功能及作用机制。方法 采用qRT-PCR检测乳腺癌组织和细胞系中circ_0000264的表达;利用si-circ_0000264构建敲低circ_000026的细胞模型;分别采用CCK-8、BrdU和Transwell实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭;采用双荧光素酶报告基因实验验证circ_0000264与miR-622的靶向调控关系。结果 circ_0000264在乳腺癌组织和细胞中均呈高表达（P<0.05）。与对照组相比,敲低circ_0000264可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭（P<0.05）。circ_0000264对miR-622具有吸附作用。下调miR-622可部分逆转敲低circ_0000264对乳腺癌细胞增殖和转移的抑制作用。结论 circ_0000264在乳腺癌进展过程中发挥促进作用;circ_0000264通过负向调控miR-622促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

缺氧条件下白花丹醌对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡与侵袭及HIF-1α表达的影响

目的 研究白花丹醌在缺氧条件下对人肝癌细胞HepG2增殖、凋亡、侵袭和低氧诱导因子1α(hypoxia induced factor1α，HIF-1α)及其下游基因表达的影响。方法 采用二氯化钴(CoCl₂)化学诱导法建立HepG2细胞体外缺氧模型，经不同浓度(2，4，8 μmol·L^–1)白花丹醌处理24 h后，MTT、平板克隆形成试验观察HepG2细胞增殖水平变化；使用Annexin V/PI双染流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况；使用Transwell试验观察HepG2细胞侵袭能力的变化；使用qRT-PCR检测HepG2细胞内HIF-1A mRNA转录水平变化；使用Western blotting检测细胞内HIF-1α及其下游基因c-Myc、VEGFA、MMP9和TWIST1的蛋白表达水平。结果 当CoCl₂处理浓度为150 μmol·L^–1时，HepG2细胞增殖水平未见显著变化，而HIF-1α蛋白表达水平显著升高(P<0.01)，提示体外缺氧模型建立成功。与常氧对照组相比，MTT、平板克隆形成试验结果显示不同浓度白花丹醌作用HepG2细胞后，其增殖水平受到显著抑制(P<0.05或P<0.01)； Transwell试验结果显示白花丹醌可显著抑制HepG2细胞侵袭(P<0.05或P<0.01)；流式细胞术结果表明白花丹醌能显著诱导HepG2细胞凋亡(P<0.05或P<0.01)；Western blotting及qRT-PCR检测结果显示，白花丹醌能显著下调HIF-1α蛋白及HIF-1A mRNA表达水平(P<0.05或P<0.01)。Western blotting检测结果显示HIF-1α及其下游基因c-Myc、VEGFA、MMP9和TWIST1的蛋白表达水平均显著下调(P<0.05或P<0.01)。结论 CoCl₂体外模拟肝癌HepG2细胞缺氧的适宜浓度为150 μmol·L^–1；在缺氧条件下，白花丹醌可显著抑制肝癌HepG2细胞的增殖与侵袭，同时诱导细胞凋亡，其作用机制可能与下调HIF-1α蛋白及其下游靶基因蛋白表达有关。     

长链非编码RNA ATB调控miR-144对胶质瘤迁移和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA ATB （lncRNA ATB）调控miR-144对胶质瘤迁移和侵袭的影响。方法 采用qPCR检测lncRNA ATB在胶质瘤组织和癌旁正常组织中的表达差异以及慢病毒si-ATB对胶质瘤细胞的转染效率情况;通过双荧光素酶报告基因进行检测lncRNA ATB和miR-144之间的关系;通过平板克隆实验检测lncRNA ATB对胶质瘤细胞株U87和U251增殖能力的影响;流式细胞术检测lncRNA ATB对胶质瘤细胞株凋亡行为的影响;Transwell实验检测lncRNA ATB对细胞株侵袭能力的影响;裸鼠体内实验检测lncRNA ATB对裸鼠移植瘤的体积和质量的影响情况。结果 胶质瘤lncRNA ATB的表达水平高于癌旁正常组织（P<0.05）,高水平lncRNA ATB患者的生存率低于低水平lncRNA ATB患者;使用si-ATB1和si-ATB2分别转染胶质瘤U87和U251细胞后,lncRNA ATB的表达水平降低;过表达miR-144后,野生型lncRNA ATB的荧光素酶活性受到抑制,对突变型lncRNA ATB的荧光素酶活性影响不明显。转染si-ATB 24、48和72小时后,U87[（186.4±12.4）个比（73.6±8.6）个比（62.6±5.6）个,P<0.05]和U251细胞[（192.2±15.3）个比（63.6±6.3）个比（68.3±7.6）个,P<0.05]和U251细胞的增殖能力低于对照组;lncRNA ATB的下调提高了U87和U251凋亡百分比（P<0.05）;抑制lncRNA ATB后,U87细胞和U251细胞的细胞侵袭能力降低;与对照组相比,si-ATB组肿瘤体积和肿瘤重量均小于或低于对照组（P<0.05）。结论 lncRNA ATB通过调控miR-144的表达促进胶质瘤细胞的生物学行为。     

UNBS5162对脑胶质瘤细胞增殖和转移的抑制作用及机制

目的 通过体外实验,研究UNBS5162对脑胶质瘤细胞增殖和转移的抑制作用,并对其分子机制进行初步探究。方法 采用10 μmol/L UNBS5162处理脑胶质瘤细胞U251细胞为实验组,二甲基亚砜处理为对照组,分别应用CCK8实验、Transwell实验、流式细胞凋亡实验检测UNBS5162对U251细胞增殖、迁移和侵袭、凋亡的影响,应用蛋白免疫印迹法检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达水平。结果 实验组细胞增殖能力低于对照组（P<0.05）;并且其细胞迁移数和侵袭数均低于对照组;与对照组相比,实验组细胞凋亡率提高,且抗凋亡蛋白Bcl-2表达量降低、促凋亡蛋白Bax和Caspase-3表达量增加（P<0.05）。与对照组相比,PI3K/AKT信号通路的关键蛋白AKT和mTOR的磷酸化水平受到抑制,其下游p70S6K蛋白表达水平也相应降低（P<0.05）。结论 UNBS5162通过促进细胞凋亡对脑胶质瘤细胞的增殖和转移具有抑制作用,其机制与UNBS5162可以抑制PI3K/AKT信号通路的激活有一定相关性。     

黄芩茎叶总黄酮对结肠癌HCT116细胞凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 研究黄芩茎叶总黄酮（SBTF）对结肠癌HCT116细胞凋亡、迁移和侵袭的影响。方法 采用CCK8法检测SBTF（5、10、20、50、100、200、400、600 μg·mL^-1）对HCT116细胞增殖的影响;Annexin V/PI双染法检测SBTF （80、120、160 μg·mL^-1）对HCT116细胞凋亡的影响;JC-1染色法检测SBTF对细胞线粒体膜电位的影响;Transwell小室迁移和侵袭实验检测SBTF对细胞迁移和侵袭的影响;Western blotting法检测SBTF对细胞凋亡、迁移和侵袭相关蛋白表达的影响。结果 与对照组比较,SBTF可明显抑制HCT116细胞增殖,干预24、48 h后的半数抑制浓度（IC₅₀）值分别为156.50、98.59 μg·mL^-1;SBTF显著提高HCT116细胞凋亡率（P＜0.05、0.01）;SBTF明显促进HCT116细胞线粒体膜电位改变;SBTF显著降低HCT116细胞迁移和侵袭率（P＜0.05、0.01）;SBTF显著上调HCT116细胞的Bax/Bcl-2值和cleaved Caspase-3蛋白表达（P＜0.05、0.01）,显著下调MMP-2、MMP-9蛋白表达（P＜0.05、0.01）。结论 SBTF可通过诱导HCT116细胞凋亡和抑制细胞迁移、侵袭发挥抗结肠癌作用。     

TIM-3在人胶质瘤中的表达及其对人胶质瘤细胞U251凋亡与侵袭的作用研究

目的 探讨T细胞免疫球蛋白黏蛋白3（TIM-3）在人胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞U251凋亡与侵袭的影响。方法 收集2018年3月—2019年3月在我院进行手术切除的30例胶质瘤患者术后的瘤组织和瘤旁正常组织,免疫组化检测胶质瘤组织中TIM-3的表达情况。将胶质瘤U251细胞分为正常组、对照组、实验组：正常组细胞常规培养,不做任何处理;对照组和实验组细胞分别转染TIM-3-siRNA-NC和TIM-3-siRNA。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组细胞中TIM-3 mRNA的表达,四甲基偶氮唑盐（MTT）实验检测各组细胞的增殖活力,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,Transwell小室检测各组细胞的侵袭能力。结果 TIM-3的表达主要定位在胞质中。TIM-3在Ⅰ级和Ⅱ级胶质瘤组织中的阳性表达率为（48.37±4.68）%,在Ⅲ级和Ⅳ级胶质瘤组织中的阳性表达率为（87.94±6.41）%,与正常组织中的阳性表达率［（12.34±4.92）%］相比,差异均有统计学意义（t=24.87, P<0.05）。与正常组细胞相比,实验组细胞中TIM-3的表达水平、细胞的增殖和侵袭能力均明显下降,凋亡率明显上升,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 TIM-3在胶质瘤中呈高表达,沉默其表达能明显抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭,并促进其凋亡。     

苦参碱对神经胶质瘤U87细胞增殖和侵袭的抑制作用研究

目的研究苦参碱对神经胶质瘤U87细胞增殖和侵袭的影响,探讨其作用机制。方法采用MTT法和Transwell侵袭实验分别检测苦参碱对U87细胞的增殖能力和侵袭能力。采用Western blotting法和qPCR法检测苦参碱对U87细胞的COX2蛋白和mRNA表达情况。结果药物作用24 h时,与对照组比较,随着苦参碱浓度(5、50、100μg/mL)的增加,苦参碱对U87细胞生长的抑制率不断地增加;相同浓度下,苦参碱对U87细胞增殖率在24、48、72 h时逐渐出现显著性差异(P0.05)。对照组通过的细胞数量明显多于苦参碱100μg/mL组,两组比较差异具有统计学意义(P0.01)。与对照组比较,随着苦参碱浓度的增加,COX-2的蛋白和mRNA表达水平明显降低,差异有统计学意义(P0.05、0.01)。结论苦参碱通过降低COX-2的蛋白和m RNA表达来抑制U87细胞的增殖和侵袭。     

RNAi沉默PCDGF基因对喉鳞癌Hep-2细胞生物学特性的影响

目的 研究RNAi沉默畸胎瘤细胞源性生长因子（PCDGF）表达对喉鳞癌Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法 RT-PCR检测喉鳞癌组织中PCDGF的mRNA表达水平;Hep-2细胞分为空白对照组、阴性对照组和PCDGF-siRNA组,Western blot检测转染效果及Bcl-2、Bax、E-cadherin和MUC1蛋白表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell 小室检测细胞侵袭能力。结果 喉鳞癌组织中的PCDGF mRNA表达水平显著高于声带息肉组织（t=6.88,P=0.005）。PCDGF在喉鳞癌组织中高表达。PCDGF-siRNA组喉鳞癌Hep-2细胞中PCDGF、Bcl-2、MUCI蛋白表达显著低于空白对照组（P<0.05）,Bax、E-cadherin蛋白表达显著高于空白对照组（P<0.05）,细胞增殖率显著低于空白对照组（P<0.05）,细胞侵袭数显著低与空白对照组（P<0.05）,细胞凋亡率显著高于空白对照组（P<0.05）。结论 抑制PCDGF的表达能够抑制喉鳞癌Hep-2细胞的增殖和侵袭能力,诱导细胞发生凋亡。     

铜绿假单胞菌注射液对NCI-N87胃癌细胞株增殖能力的影响及其机制研究

目的 探讨铜绿假单胞菌注射液（Pseudomonas aeruginosa mannose-sensitive hemagglutinin,PA-MSHA）对NCI-N87胃癌细胞增殖能力的影响及其分子作用机制。方法 MTT法检测PA-MSHA对NCI-N87胃癌细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率,划痕实验和侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力的变化,Western Blot检测PTEN蛋白和p-AKT蛋白的表达变化,转染PTEN siRNA敲低PTEN表达后,再次行MTT法检测PA-MSHA对细胞增殖的影响。结果 PA-MSHA抑制NCI-N87胃癌细胞的增殖具有剂量和时间依赖性。与对照组比较,NCI-N87细胞经PA-MSHA处理后,凋亡率显著增加（P<0.05）,迁移和侵袭能力显著下降（P<0.05）。与对照组比较,PA-MSHA显著提高PTEN蛋白表达,降低p-AKT蛋白表达（P<0.05）。通过siRNA转染敲低PTEN表达后,PA-MSHA抑制NCI-N87细胞增殖的能力较对照组显著下降（P<0.05）。结论 PA-MSHA对NCI-N87胃癌细胞具有抑制增殖、促进凋亡、抑制侵袭转移的作用,其机制与PTEN/AKT信号通路有关。     

上调microRNA-34a抑制胶质瘤细胞的增殖及侵袭

目的 探讨microRNA-34a （miR-34a）在胶质瘤组织中的表达情况以及对人脑胶质瘤细胞系U251增殖及侵袭的影响。方法 选取川北医学院附属医院2013年3月至2017年3月胶质瘤组织标本30例和重症脑外伤需行手术者正常脑组织标本10例作为研究对象,采用荧光定量PCR法检测miR-34a在胶质瘤组织表达情况。体外实验,将人工合成的miR-34a模拟物miR-34a mimic转染至U251细胞系,采用荧光定量PCR、MMT、Transwell法检测miR-34a在U251细胞系中表达以及对U251细胞增殖和侵袭能力的影响。依据细胞转染情况,分为Control组（不转染任何基因）、Mock组（转染miRNA-neg序列）和miRNA-34a mimic组（转染miRNA-34a mimic序列）。结果 miRNA-34a在人脑胶质瘤组织中相对表达水平为（0.35±0.07）,低于正常人脑组织的（1.00±0.13）,差异有统计学意义（P<0.05）;转染后,荧光定量PCR结果显示,Control组、Mock组、miRNA-34a mimic组miRNA-34a相对表达水平分别为（1.00±0.08）、（0.98±0.11）和（6.19±0.34）,miRNA-34a mimic组与Control、Mock组比较,差异有统计学意义（P<0.05）;MMT结果显示,在不同时间点,miRNA-34a mimic组U251细胞增殖抑制率高于Control组、Mock组,差异有统计学意义（P<0.05）;Transwell结果显示,Control组、Mock组、miRNA-34a mimic组侵袭细胞数分别为（90.53±5.84）个、（88.21±5.04）个和（27.46±2.76）个,miRNA-34a mimic组与Control、Mock组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-34a在胶质瘤组织中表达下调,上调miR-34a表达可抑制胶质瘤细胞的增殖及侵袭。     

miRNA-381靶向HMGB1对IHH-4细胞生长侵袭及迁移的影响

目的 探究微小RNA-381（miR-381）调控高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对甲状腺乳头状瘤IHH-4细胞生长、侵袭及迁移的影响。方法 购置甲状腺乳头状瘤IHH-4细胞及正常甲状腺细胞Nthy-ori-3各1株,取第3代细胞培养48 h后,采用实时定量PCR （qRT-PCR）检测miR-381和HMGB1在甲状腺乳头状瘤IHH-4细胞和正常甲状腺Nthy-ori-3细胞中的表达水平。利用Lipofectamine 2000转染miR-381 mimic后,检测IHH-4细胞中miR-381和HMGB1的表达水平。生物信息学预测miR-381和HMGB1的靶向关系,并用荧光素酶报告实验验证两者的靶向关系。每孔按2×10⁵/mL细胞密度接种IHH-4细胞,分为IHH-4组（甲状腺乳头状瘤细胞IHH-4组）、miR-381 mimic组（miR-381 mimic转染组）、pc-HMGB1组（HMGB1过表达转染组）、mimic+pc-HMGB1组（miR-381 mimic和pc-HMGB1共同转染组）,每组设3个复孔,采用CCK8法检测各组IHH-4细胞活性,Transwell及划痕实验分别检测IHH-4细胞侵袭及迁移能力,免疫印迹法检测IHH-4细胞中Ki67、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、MMP-9和晚期糖基化终产物受体（RAGE）的表达水平。结果 与Nthy-ori-3细胞比较,IHH-4细胞中miR-381 mRNA水平降低,HMGB1 mRNA水平升高,差异有统计学意义（P<0.01）。与IHH-4组相比,miR-381 mimic组miR-381表达增加（P<0.01）。miR-381和HMGB1存在靶向关系。与IHH-4组相比,miR-381 mimic组细胞增殖倍数、Ki67表达、侵袭细胞数、划痕闭合率、MMP-2、MMP-9和RAGE表达均降低（P均<0.01）,pc-HMGB1组上述指标均升高（P均<0.01）;与miR-381 mimic组相比,mimic+pc-HMGB1组细胞增殖倍数、Ki67表达、侵袭细胞数、划痕闭合率、MMP-2、MMP-9和RAGE水平也明显上升（P均<0.01）。结论 miR-381通过靶向下调HMGB1表达,抑制IHH-4细胞增殖、侵袭和迁移。     

miR-125a-5p对卵巢癌细胞的增殖迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨miR-125a-5p对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用的靶基因。方法 购入正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC,卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910各1株,通过实时定量聚合酶链式反应（RT-PCR）检测人卵巢上皮细胞HOSEpiC以及卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平。利用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,构建预测靶基因3’端非编码区（3’-UTR）的野生型（WT）和突变型（mut）荧光素酶报告基因质粒,通过双荧光素酶报告基因法验证miR-125a-5p与预测靶基因的靶向作用。利用慢病毒感染的方法建立稳定过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞,使用荧光定量PCR和Western blot检测靶基因的表达水平。利用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞增殖能力的变化,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞迁移和侵袭能力的变化。结果 正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC中miR-125a-5p的表达水平高于卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平,其中SKOV3中miR-125a-5p的表达水平最低,差异均有统计学意义（P<0.05）,选择SKOV3进行后续实验。生物信息学分析显示,miR-125a-5p能够靶向结合Rab3D的3’-UTR;双荧光素酶报告基因分析证实miR-125a-5p能够靶向作用于Rab3D的3’-UTR。筛选稳定表达miR-125a-5p和si-Rab3D及相应对照的SKOV3细胞,分别命名为SKOV3/miR-125a-5p组,SKOV3/si-Rab3D组,SKOV3/miR-NC组和SKOV3/si-NC组。在SKOV3/miR-125a-5p组中,Rab3D的表达水平低于SKOV3组和SKOV3/miR-NC组,差异均有统计学意义（P<0.05）。细胞增殖能力检测结果显示,与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,SKOV3/miR-125a-5p组在72小时和96小时细胞增殖能力降低,差异有统计学意义（P<0.05）。Transwell迁移和侵袭试验结果显示,SKOV3/miR-125a-5p组分别与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,细胞迁移和侵袭能力均显著下降,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-125a-5p能够靶向作用Rab3D,抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。