注射性壳聚糖β甘油磷酸钠凝胶负载富血小板血浆和骨髓基质干细胞促进牙周再生的研究

【摘要】 目的 探究注射性壳聚糖β 甘油磷酸钠（chitosan/β glycerol phosphate disodium salt,C/GP）凝胶负载富血小板血浆（platelet rich plasma,PRP）和骨髓基质干细胞（(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）促进牙周再生的效果。方法 选取3只健康雄性杂种犬,分别在前磨牙、第一磨牙区制备30 颗牙的Ⅱ度根分叉区缺损模型,并随机将30颗牙纳入A组（C/GP）、B组（C/GP+PRP）、C组（C/GP+BMSCs）、D组（C/GP+PRP+BMSCs）和对照组,术中将所有牙周缺损处的组织瓣进行缝合,并在A~D组模型中注入凝胶,对照组则不予处理。采集术后8周时的组织标本,进行X线及组织学观察与评价。结果 B、C、D组与A组和对照组相比均有明显的牙周组织再生（P＜005）,D组与B、C组相比牙周组织再生最明显（P＜005）;A组和对照组仅有少量的牙周组织再生,两组差异不显著（P＞005）。结论 C/GP负载PRP和BMSCs有助于促进牙周组织的再生,值得进一步研究与利用。     

抑制TNFR/RIPK信号通路对神经细胞凋亡的影响及机制研究

【摘要】 目的 研究抑制TNFR/RIPK信号通路对急性脊髓损伤（ASCI）大鼠神经细胞凋亡的影响及作用机制。方法 160只雄性SD大鼠,随机分为空白对照组、假手术组、模型组、Nec 1组,每组又根据时间点分为12h、24h、3d、7d四个亚组。采用动脉夹钳夹法制作ASCI模型,空白对照组不做任何处理,假手术组仅暴露脊髓,不损伤脊髓,模型组和Nec 1组用动脉瘤夹脊髓全横截面1min,缝合伤口。空白对照组、假手术组和模型组注射给予生理盐水,Nec 1组注射坏死性凋亡抑制剂Necrostain 1（Nec 1）溶液1μl/kg,1次/d,分别给药12h、24h、3d、7d。给药后以BBB评分对各组大鼠后肢神经功能恢复情况进行评分,完成评分后,取10只给药7d的大鼠脊髓,进行HE染色、Nissl染色、碘化丙啶（PI）染色、Tunel染色;另取10只给药7d的大鼠,取脊髓,用Western Blot检测RIP1、RIP3、Bcl 2蛋白表达情况。结果 模型组和Nec 1组各时间点的BBB评分均显著低于空白对照组和假手术组（P＜005）,Nec 1组各时间点的BBB评分显著高于模型组（P＜005）。造模7d后,模型组脊髓出现坏死、空洞现象,大量炎性细胞浸润,坏死区域面积显著高于假手术组（P＜005）;尼氏体呈细颗粒状,神经元数量减少、染色浅、排列无序,坏死性凋亡细胞较多;PI红染细胞、Tunel阳性细胞数、凋亡小体数量,以及RIPK1、RIPK3、Bcl 2蛋白表达水平显著多于假手术组（P＜005）。给予Nec 1治疗7d后,Nec 1组脊髓坏死组织较模型组少,空洞现象得到改善,炎性细胞浸润现象好转,Nec 1组坏死区域面积显著低于空白对照组和假手术组（P＜005）;尼氏体着色的神经元细胞染色较深,颗粒变粗,存活神经元数量显著高于模型组（P＜005）;PI红染细胞数、凋亡小体数,以及RIPK1、RIPK3蛋白表达水平显著少于模型组（P＜005）,Bcl 2蛋白表达水平显著高于模型组（P＜005）。结论 坏死性凋亡抑制剂Nec 1能通过抑制TNFR/RIPK信号通路,下调RIPK1、RIPK3、上调Bcl 2的表达来缩小ASCI损伤面积,缓解炎症浸润,减少损伤周围神经元数量,改善神经元功能,提高损伤神经元及胶质细胞存活率,改善大鼠BBB评分,抑制坏死性凋亡。     

SOX4基因抑制肝癌细胞增殖与侵袭能力

【摘要】目的 探讨小干扰RNA技术（siRNA）沉默SOX4基因对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响。方法 构建siRNA转染人肝癌细胞株SMMC 7721,按转染质粒区别分为siRNA SOX4组、siRNA NC组,并设立空白对照组。实时荧光定量聚合酶联反应（RT PCR）检测各组细胞SOX4 mRNA,蛋白印迹法（WB）测定SOX4蛋白水平,噻唑蓝法（MTT）测定转染不同时间肝癌细胞增殖能力,流式细胞术测定肝癌细胞凋亡率,Transwell小室实验测定肝癌细胞侵袭能力。结果 转染后siRNA SOX4组SOX4 mRNA相对表达量低于空白对照组和siRNA NC组（P＜005）;转染后siRNA SOX4组SOX4蛋白表达量为低于空白对照组和siRNA NC组（P＜005）;转染不同时间siRNASOX4组细胞增殖活性均低于空白对照组和siRNA NC组（P＜005）;转染后siRNA SOX4组细胞凋亡率高于空白对照组和siRNA NC组（P＜005）;转染后siRNASOX4组穿膜细胞比例低于空白对照组和siRNA NC组（P＜005）。结论 siRNA技术沉默SOX4基因可降低肝癌细胞增殖及侵袭能力,促进癌细胞凋亡。     

金雀异黄酮对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响

【摘要】目的 探讨金雀异黄酮对心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)大鼠心肌细胞凋亡Bcl 2、Bax和Caspase 3蛋白及mRNA表达的影响。方法 60只雄性SD大鼠分别为假手术组、模型组、阿司匹林组（10 mg·kg-1·d-1）、金雀异黄酮低剂量组（20 mg·kg-1·d-1）、中剂量组（40 mg·kg-1·d-1）和高剂量组（80 mg·kg-1·d-1）,每组10只。给药2周后经典方法构建MI/RI大鼠模型后HE染色检测心肌组织;采集血清测乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同功酶(CK MB)和α 羟丁酸脱氢酶（α HBD）,采集心脏检测丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、总抗氧化能力(T AOC)和一氧化氮合酶（NOS）;同时,RT PCR和Western Blotting检测心肌组织中Bcl 2、Bax和Caspase 3蛋白及mRNA表达。结果 假手术组心肌排列整齐无断裂,模型组出现大量断裂;与模型组相比,各治疗组明显改善;模型组大鼠血清LDH、CK、CK MB、α HBD高于假手术组（P＜005）,心肌MDA水平高于假手术组（P＜005）,心肌SOD、T AOC及 NOS水平均低于假手术组（P＜005）;与模型组比较,金雀异黄酮三个剂量组和阿司匹林组血清LDH、CK、CK MB、α HBD明显降低（P＜005）,心肌MDA明显降低（P＜005）,心肌SOD、T AOC及NOS明显升高（P＜005）;模型组大鼠心肌Bcl 2蛋白和mRNA表达均低于假手术组（P＜005）,Bax和Caspase 3蛋白和mRNA表达均高于假手术组（P＜005）,而金雀异黄酮三个剂量组和阿司匹林组Bcl 2显著上调（P＜005）,Bax和Caspase 3显著下调（P＜005）。结论 金雀异黄酮可抑制心肌细胞凋亡,同时提高心肌抗氧化能力,抑制MI/RI给心肌带来的损伤。     

老年糖尿病患者牙周指数与血脂、血糖相关性分析

【摘要】 目的 探讨牙周指数与老年糖尿病患者血糖、血脂的相关性。方法 根据是否患有牙周炎将98例老年糖尿病患者分为糖尿病+牙周炎组（n=46）和糖尿病组（n=52）。另随机选择健康人群30例为对照组。比较各组受试者血小板参数、凝血四项、血糖、血脂。比较糖尿病患者的牙周指数,并进行与血糖、血脂各指标的相关分析。结果 3组血小板参数、凝血四项、血糖、血脂比较差异具有统计学意义（P＜005）。糖尿病+牙周炎组PLT、MPV明显高于对照组及糖尿病组,PT、FIB明显低于对照组及糖尿病组（P＜001）。糖尿病+牙周炎组TC、TG、LDL水平明显高于糖尿病组及对照组;HDL水平明显低于糖尿病组及对照组（P＜005）。糖尿病+牙周炎组龈沟出血指数（SBI）、附着丧失（AL）值高于糖尿病组（P＜001）。各牙周指标与FPG、HbAlc、TC呈正相关（P＜005）,与HDL呈负相关（P＜005）;简化牙石指数（CI S）与LDL呈正相关（P＜005）,其余牙周指标与LDL均无相关性（P＞005）。结论 牙周炎可能通过影响老年糖尿病患者血糖、血脂水平增加微血管病变风险,加重病情。     

局部注射脐带间充质干细胞治疗糖尿病足的效果及潜在机制

【摘要】目的 研究脐带间充质干细胞（UCMSC）治疗糖尿病足的效果及潜在机制。方法 选取2017年2月~2019年6月济宁市第一人民医院东院区接受诊治的86例糖尿病足患者作为观察对象,按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组各43例。对照组患者采用常规疗法治疗,观察组患者接受静脉联合局部注射UCMSC治疗。对比两组治疗前后的足部体征评分、Wagner分级、血清炎症指标、血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和基质细胞衍生因子 1α（SDF 1α）水平及总有效率。结果 观察组患者治疗后的足部皮肤温度、疼痛程度、皮肤色泽、踝肱指数和间歇性跛行评分较对照组明显增加（P＜005）,Wagner分级和血清肿瘤坏死因子 α（TNF α）、白介素 6（IL 6）、超敏C反应蛋白（hs CRP）水平较对照组明显降低（P＜005）,VEGF、bFGF和SDF 1α水平较对照组明显升高（P＜005）。观察组治疗总有效率明显高于对照组（P＜005）。结论 静脉联合局部注射脐带间充质干细胞治疗糖尿病足能明显减轻患者足部症状,降低患者Wagner分级,提高疗效,其机制可能与抗炎和促进血管新生作用相关。     

SAA、CRP和ACE2水平与急性胰腺炎患者病情严重程度的关系

【摘要】目的 探讨淀粉样蛋白A（SAA）、C反应蛋白（CRP）、血管紧张素转换酶2（ACE2）水平与急性胰腺炎患者病情严重程度的关系,以期为临床诊疗提供依据。方法 选择2017年1月～2019年7月我院收治的115例急性胰腺炎患者作为研究对象,所有患者均进行SAA、CRP、ACE2水平检测,根据患者病情严重程度将其分为轻症组（n=81）、中症组(n=20)和重症组（n=14）。比较3组SAA、CRP、ACE2水平和急性生理学与慢性健康状况评分系统（APACHEⅡ）、Ranson评分;采用Pearson相关性分析对SAA、CRP、ACE2水平与APACHEⅡ、Ranson评分相关性予以分析,并绘制ROC曲线探讨SAA、CRP、ACE2水平在预测急性胰腺炎患者病情严重程度中的价值。结果 3组SAA、CRP、ACE2水平比较差异有统计学意义（P＜005）,其中重症组SAA、CRP水平均高于轻症组和中症组（P＜005）,ACE2水平低于轻症组和中症组（P＜005）;中症组SAA、CRP水平均高于轻症组（P＜005）,ACE2水平低于轻症组（P＜005）。 3组APACHEⅡ、Ranson评分比较差异有统计学意义（P＜005）,其中重症组APACHEⅡ、Ranson评分高于轻症组和中症组（P＜005）,中症组APACHEⅡ、Ranson评分高于轻症组（P＜005）。SAA、CRP水平均与APACHEⅡ、Ranson评分呈正相关（P＜005）,ACE2水平与APACHEⅡ、Ranson评分均呈负相关（P＜005）。ROC曲线分析显示,SAA、CRP、ACE2预测中重症急性胰腺炎的曲线下面积分别为0879、0823、0690,预测中重症急性胰腺炎的敏感度分别为8529%、7353%、7059%,特异度分别为7778%、8395%、6667%,SAA、CRP预测中重症急性胰腺炎的AUC值均大于APACHEⅡ、Ranson评分（P＜005）。结论 SAA、CRP、ACE2水平与急性胰腺炎患者病情有关,SAA、CRP水平越高、ACE2水平越低,患者病情越严重,监测SAA、CRP、ACE2水平可预测患者病情严重程度。     

电针内关穴对异丙肾上腺素致心肌缺血大鼠的影响

【摘要】 目的 探讨采用不可逆电穿孔法消融对同种异体肌腱移植修复兔肌腱缺损的可行性及消融术后组织转归情况。方法 将新西兰大白兔112只随机分为自体肌腱移植组（A组）28只,深低温冷冻同种异体肌腱移植组（B组）28只,不可逆电穿孔消融法（IRE）灭活同种异体肌腱移植组（C组）28只和假手术对照组（D组）28只。各组制备动物后肢第3趾深屈肌腱缺损模型,并采用处理后的肌腱修复缺损;分别于术后1、4、8、12周取材行微血管定量、组织学观察及生物力学测试。 结果 术后各组移植肌腱直径比较均无统计学意义（P > 005）。组织学观察提示B组修复再生速度较慢,表现为成纤维细胞爬行替代及微血管再生能力均低于A、C组。微血管灌注观察提示：微血管有效灌注面积在术后1周时A、B、C组显著低于D组（P < 005）,术后4、8、12周时B组显著低于A、C、D组（P< 005）,且8周时A、C组显著高于D组（P < 005）。生物力学测试提示：B、D组比较移植肌腱最大载荷及硬度仅在术后4周时差异有统计学意义（P< 005）,其余时间点各组间比较差异均无统计学意义（P > 005）。各时间点各组移植肌腱破损形变比较,差异均无统计学意义（P > 005）。 结论 采用IRE灭活的同种异体肌腱修复兔肌腱缺损切实可行,术后移植肌腱组织形态及生物力学性能恢复与自体肌腱移植组无显著差异。     

PFNA内固定和关节置换治疗高龄不稳定型转子间骨折的对比研究

【摘要】 目的 比较股骨近端防旋髓内钉（PFNA）内固定与关节置换治疗高龄不稳定型转子间骨折的临床效果。方法 收集2012年3月 2015年6月收治的84例高龄（年龄＞75岁）不稳定型转子间骨折患者的临床资料，按治疗方式分为PFNA组（n=44）与关节置换组（n=40），比较两组治疗效果、手术相关指标、术后并发症、髋关节功能评分及术后生活质量。结果 PFNA组手术时间短于关节置换组（P＜005），患者术中出血量少于关节置换组（P<005），关节置换组卧床时间、住院时间、患肢完全负重时间均短于PFNA组（P<005）；关节置换组与PFNA组并发症发生率对比差异无统计学意义（P>005）；关节置换组术后1年髋关节功能恢复优良率略高于PFNA组，但差异无统计学意义（P>005）；术后1年，两组日常生活能力评分均明显上升，与术前对比差异均有统计学意义（P<005），关节置换组评分上升幅度高于PFNA组（P<005）。结论 PFNA内固定对高龄不稳定型转子间骨折患者内环境影响小，手术时间短，术中出血量少，符合人体生物学特征，微创优势高；关节置换术手术时间长，对内环境干扰大，术中出血量大，但可快速恢复患者髋关节功能。     

右美托咪定调控miR 126对高糖诱导的心肌细胞氧化应激及凋亡的影响

【摘要】目的 探讨右美托咪定（DEX）对高糖诱导的心肌细胞氧化应激及凋亡的影响及作用机制。方法 体外培养心肌细胞H9C2,分别用葡萄糖浓度为55、35 mmol/L的DMEM培养基培养,分别作为对照组和高糖损伤模型组。分别使用不同浓度（5、10、20 μg/L）DEX处理心肌细胞记为实验1组、实验2组、实验3组。检测各组乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的含量。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT PCR）检测微小RNA 126（miR 126）的表达量。分别将miR NC、miR 126 mimicis转染至心肌细胞,使用含有葡萄糖浓度为35 mmol/L的DMEM培养基培养24 h,分别记为miR NC组、miR 126组。分别将miR NC、miR 126 mimcis、anti miR NC、anti miR 126转染至心肌细胞,采用含有葡萄糖浓度为35 mmol/L与DEX浓度为20 μg/L的 DMEM培养基培养,分别记为实验3+miR NC组、实验3+miR 126组、实验3+anti miR NC组、实验3+anti miR 126组。流式细胞术检测各组细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3的前体蛋白（pro caspase 3）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cl caspase 3）水平。结果 与对照组比较,高糖损伤模型组LDH、MDA含量显著升高（P＜005）,SOD含量显著降低（P＜005）,miR 126的表达水平显著降低（P＜005）,细胞凋亡率显著升高（P＜005）,cl caspase 3蛋白水平显著升高（P＜005）,pro caspase 3蛋白水平显著降低（P＜005）。与高糖损伤模型组比较,实验1组、实验2组、实验3组LDH、MDA含量显著降低（P＜005）,SOD含量显著升高（P＜005）,miR 126的表达水平升高（P＜005）,细胞凋亡率显著降低（P＜005）,cl caspase 3蛋白水平显著降低（P＜005）,pro caspase 3蛋白水平显著升高（P＜005）,实验1组、实验2组、实验3组间各指标比较差异有统计学意义（P＜005）。与miR NC组比较,miR 126组LDH、MDA含量显著降低（P＜005）,SOD含量显著升高（P＜005）,细胞凋亡率显著降低（P＜005）,cl caspase 3蛋白水平显著降低（P＜005）,pro caspase 3蛋白水平显著升高（P＜005）。miR 126过表达能增强DEX对高糖诱导心肌细胞氧化应激及凋亡,抑制miR 126表达能逆减弱DEX对高糖诱导心肌细胞氧化应激及凋亡。结论 DEX可通过上调miR 126的表达从而抑制高糖诱导的心肌细胞氧化应激及细胞凋亡。      

柚皮苷促进牙周韧带干细胞增殖和分化的研究

目的探讨不同浓度柚皮苷对牙周韧带干细胞增殖和分化的影响。方法分别在含有0.14 mg/mL(低浓度组)和1.4 mg/mL(高浓度组)柚皮苷的细胞培养基上对牙周韧带干细胞进行培养,并与不含柚皮苷的细胞培养基(空白对照组)培养情况进行对比。在培养1 d、4 d、7 d后对牙周韧带干细胞的增殖情况进行测定,在培养7 d、14 d后对牙周韧带干细胞的碱性磷酸酶活性及成骨相关基因[成骨特异性转录因子(Runx2)、骨钙素(OCN)、碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)]的表达进行测定。结果高浓度(1.4 mg/mL)的柚皮苷对牙周韧带干细胞的增殖具有促进作用(P0.05),对牙周韧带干细胞的成骨向分化也具有一定的促进作用,能够显著提高成骨相关基因(ColⅠ、ALP、OCN、Runx2)的表达。结论柚皮苷在一定的浓度和时间下,能促进牙周韧带干细胞的增殖与成骨向分化。     

人牙周膜干细胞的分离培养及鉴定

目的:探讨人牙周膜干细胞的多向分化潜能。方法:体外分离培养人牙周膜细胞,光镜下及HE染色鉴定细胞形态学特征。免疫组化法检测波形蛋白、角蛋白、CD44的表达。成骨诱导法培养人牙周膜干细胞向成骨细胞分化。结果:体外成功分离培养人牙周膜干细胞。角蛋白阴性表达,波形蛋白阳性表达,CD44阳性表达。诱导成骨结果显示人牙周膜干细胞具有潜在的多向分化潜能。结论:人牙周膜干细胞在体外可以诱导分化为成骨样细胞,具有多向分化的潜能。     

牙周膜干细胞膜片复合生物陶瓷纳米载体修复兔牙槽骨缺损

目的探讨PDLSCs细胞膜片与纳米级B-TCP复合叠层三维结构对牙槽骨缺损的相关修复及治疗作用。方法分离及培养牙周膜干细胞,制备牙周膜干细胞生物膜片,构建PDLSCs细胞膜片与纳米级B-TCP复合叠层三维结构模型,将其植入新西兰兔缺损骨模型内,于术后第4周、第8周、第12周处死新西兰兔并分离牙周组织,通过形态学分析评判修复效果。结果 WB结果示,Runx2、ALP蛋白的表达量比对照组分别增加9.2倍和4.3倍;移植后第8周,苏木精-伊红染色示PDLSCs细胞膜片与纳米级B-TCP复合叠层三维复合结构组新骨形成的百分比显著高于对照组及空白对照组(P0.05);免疫组化染色示构建PDLSCs细胞膜片与纳米级B-TCP复合叠层三维复合结构组成骨相关标志物OCN、ALP、Runx2蛋白表达高于对照组及空白对照组(P0.05)。结论牙周膜干细胞膜片与B-TCP三维叠层结构复合结构可促进兔牙槽骨缺损部位的修复及再生,为临床牙槽骨缺损的治疗提供一种新的思路,有广阔的应用前景。     

不同代次诱导多能干细胞增殖及牙周定向分化的能力

目的： 研究不同代次诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSCs）在增殖及向牙周定向分化能力上的区别，为今后深入研究和可能的临床应用提供理论基础。方法：复苏不同代次（P5、P10、P15、P20）人牙龈成纤维细胞来源的iPSCs，观察细胞形态并比较其增殖能力,进一步将各代次细胞形成拟胚体，于含生长分化因子-5（growth/differentiation factor-5, GDF-5）的培养基中诱导分化14 d，同时分别设置未诱导自发分化组为阴性对照，茜素红染色观察矿化结节并半定量分析钙盐沉积量，qRT-PCR及免疫荧光染色分别检测牙周相关基因及蛋白的表达，评价各代次间分化能力的差异。结果：不同代次的iPSCs均具有很强的体外增殖能力，经牙周定向诱导的细胞呈成纤维细胞样生长，茜素红染色可形成“矿化”结节，细胞钙盐沉积量较自发分化组显著增高且差异有统计学意义（P5：t=2.125，P=0.003；P10：t=2.246，P=0.021；P15：t=3.754，P=0.004；P20：t=3.933，P=0.002），但相同诱导条件下不同代次间钙盐沉积量差异无统计学意义（牙周定向诱导组：F=2.365，P = 0.109；自发分化对照组：F=2.901，P=0.067）,此外，相同代次细胞中诱导组牙周相关标记物的表达均高于对照组且差异有统计学意义（P<0.05），但不同代次间的蛋白表达差异无统计学意义（骨涎蛋白：F=0.9267，P=0.450；波形蛋白：F=0.9171，P=0.455；牙骨质蛋白1：F=2.129，P=0.137）。结论：不同代次不会影响iPSCs的增殖及分化能力，体外长期培养的iPSCs易于扩增，较高代次者经诱导仍可高效定向分化，适合作为牙周组织工程的种子细胞。     

Expansive effects of aorta-gonad-mesonephros-derived stromal cells on hematopoietic stem cells from embryonic stem cells

Background Hematopoietic stem cells (HSCs) give rise to all blood and immune cells and are used in clinical transplantation protocols to treat a wide variety of refractory diseases, but the amplification of HSCs has been difficult to achieve in vitro. In the present study, the expansive effects of aorta-gonad-mesonephros (AGM) region derived stromal cells on HSCs were explored, attempting to improve the efficiency of HSC transplantation in clinical practice.Methods The murine stromal cells were isolated from the AGM region of 12 days postcoitum (dpc) murine embryos and bone marrow（BM）of 6 weeks old mice, respectively. After identification with flow cytometry and immunocytochemistry, the stromal cells were co-cultured with ESCs-derived, cytokines-induced HSCs. The maintenance and expansion of ESCs-derived HSCs were evaluated by detecting the population of CD34+ and CD34+Sca-1+cells with flow cytometry and the blast colony-forming cells (BL-CFCs), high proliferative potential colony-forming cells (HPP-CFCs) by using semi-solid medium colonial culture. Finally, the homing and hematopoietic reconstruction abilities of HSCs were evaluated using a murine model of HSC transplantation in vivo.Results AGM and BM-derived stromal cells were morphologically and phenotypically similar, and had the features of stromal cells. When co-cultured with AGM or BM stromal cells, more primitive progenitor cells (HPP-CFCs ) could be detected in ESCs derived hematopoietic precursor cells, but BL-CFC’s expansion could be detected only when co-cultured with AGM-derived stromal cells. The population of CD34+ hematopoietic stem/progenitor cells were expanded 3 times,but no significant expansion in the population of CD34+Sca-1+ cells was noted when co-cultured with BM stromal cells. While both CD34+ hematopoietic stem/progenitor cells and CD34+Sca-1+ cells were expanded 4 to 5 times respectively when co-cultured with AGM stromal cells. AGM region-derived stromal cells, like BM-derived stromal cells, could promote hematopoietic reconstruction and HSCs’ homing to BM in vivo.Conclusions AGM-derived stromal cells in comparison with the BM-derived stromal cells could not only support the expansion of HSCs but also maintain the self-renewal and multi-lineage differentiation more effectively. They are promising in HSC transplantation. Chin Med J 2005; 118(23):1979-1986     

降钙素促进人牙周膜干细胞的胶原合成和成骨作用

目的 考察降钙素（CT）促进人牙周膜干细胞（hPDLSC）的胶原合成和成骨作用。方法 将50名成人受试者分为慢性牙周炎（CP）组（n=25）和对照组（n=25）。CP组中,选择探诊深度≥5 mm的上颌前部和有骨丢失影像学证据的部位,从每例患者的6个上颌位点收集龈沟液（GCF）样本。对照组中,对没有炎症的多个部位（每名受试者10～12个）进行取样以确保收集足够量的GCF。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测GCF中CT、转化生长因子β1（TGF-β1）和骨形态发生蛋白（BMP）2/4/7的表达,通过Spearman相关分析考察CT表达与临床参数牙周袋探诊深度（PD）、临床附着丧失（CAL）和牙龈指数（GI）及上述指标的相关性。用携带CT基因的重组腺病毒（Ad.CT）感染hPDLSC,并通过实时定量PCR和蛋白质印迹法分别检测TGF-β1、BMP2/4/7、碱性磷酸酶（ALP）、骨钙蛋白（OCN）和Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白（ColⅠ/Ⅲ）的mRNA和蛋白质表达。结果 CP组患者GCF中CT表达水平高于对照组[（32.62±1.46）ng/mL vs（17.70±0.76）ng/mL,P<0.01）]。CP组患者CT表达与临床参数PD、CAL、GI呈负相关（P<0.01、P<0.05）。CP组患者GCF中BMP2/4/7和TGF-β1的表达水平均高于对照组[BMP2：（138.67±4.04）ng/mL vs（103.96±2.78）ng/mL;BMP4：（155.53±3.55）ng/mL vs（133.15±2.92）ng/mL;BMP7：（106.59±2.85）ng/mL vs（90.22±1.56）ng/mL;TGF-β1：（105.92±3.40）ng/mL vs（89.85±2.42）ng/mL;P均<0.01],且CP患者上述指标均与CT表达呈正相关（P<0.01、P<0.05）。腺病毒感染的CT过表达使hPDLSC中TGF-β1、ColⅠ/Ⅲ及成骨细胞标志物BMP2/4、ALP和OCN表达增加（P均<0.01）。与Ad.CT和空载腺病毒共同感染的细胞相比,用Ad.CT和特异性阻断TGF-β1小干扰RNA（siRNA）的重组腺病毒（Ad.TGF-β1 siRNA）共同感染的细胞胶原蛋白表达水平更低（ColⅠ：0.16±0.02 vs 0.22±0.03;ColⅢ：0.11±0.01 vs 0.15±0.02;P均<0.01）。与Ad.CT感染的细胞相比,Ad.CT和头蛋白共处理细胞中ALP和OCN的蛋白质表达水平更低（ALP：0.19±0.02 vs 0.25±0.03;OCN：0.13±0.01 vs 0.19±0.02;P均<0.01）。结论 CT通过TGF-β1和BMP信号转导途径促进hPDLSC的胶原合成和成骨作用。     

体外诱导人胚胎干细胞定向分化为神经干细胞

目的:探讨体外定向诱导人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)生成高纯度神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的方法.方法:模拟体内神经细胞分化发育的不同阶段及微环境,分三阶段诱导hESCs定向生成NSCs.形态学观察结合免疫荧光细胞化学、流式细胞术和RT-PCR检测胚胎干细胞标志和神经干细胞标志;NSCs分化实验对所诱导的NSCs的分化潜能进行检测.结果:体外培养的hESCs在胚胎成纤维细胞饲养层上连续传代培养50代,仍保持SSEA-4,TRA-1-81阳性,表达Nanog基因,流式细胞术检测SSEA-4阳性表达率为83.44%;经三步法最终可诱导形成纯度高达90%以上的nestin阳性细胞,表达nestin基因,流式细胞术检测nestin阳性表达率为89.38%;诱导生成的细胞反复传代,仍表现为nestin阳性,并可进一步分化为神经元、星形神经胶质细胞和少突胶质细胞.结论:模拟体内神经分化过程的三步诱导法,可诱导hESCs生成较高纯度的NSCs,并能较好维持其干细胞特性和具有进一步分化的能力.     

骨髓间充质干细胞培养液对牙周组织再生的影响

目的 观察大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMMSCs）培养液对牙周组织再生的影响。方法 原代培养SD大鼠BMMSCs,取细胞培养液（conditioned media, CM）。采用ELISA检测培养液里与成骨相关的IGF-1、VEGF、PDGF-BB、BMP-2的含量;利用BMMSCs培养液对牙周膜细胞（periodontal ligament cells, PDLCs）进行培养后,RT-PCR法检测PDLCs矿化相关基因核心结合因子2（Runx2）、骨桥素（OPN）、骨钙素（OCN）的变化;Western印迹法检测Runx2、OPN、OCN蛋白的表达变化。将BMMSCs培养液及种子细胞分别制备成凝胶,在大鼠左下第一磨牙颊侧及根分叉处制备牙周缺损,放入制备好的凝胶。分别在术后第4、8周,处死大鼠,取出左侧下颌骨,进行Micro-CT扫描及组织学分析。结果 BMMSCs培养液中含有大量IGF-1和VEGF;RT-PCR和Western印迹法均能检测到牙周膜细胞OPN、OCN、Runx2的表达,且利用BMMSCs培养液培养的PDLCs表达高于常规培养的PDLCs(P＜0.05)。8周时,BMMSCs培养液凝胶组相比于对照组生成了更多的牙槽骨(P＜0.05)。结论 同等条件下,BMMSCs培养液比种子细胞能更好地修复缺失的牙周组织。     

Reprogramming of adult human neural stem cells into induced pluripotent stem cells

Background Since an effective method for generating induced pluripotent stem cells (iPSCs) from human neural stem cells (hNSCs) can offer us a promising tool for studying brain diseases,here we reporte...