HPLC法测定心衰大鼠心肌中ATP、ADP与AMP 的含量

摘 要 目的： 建立大鼠心肌组织ATP、ADP、AMP 的含量测定方法,考察心衰大鼠的ATP、ADP、AMP定量变化。 方法: 色谱柱为Thermo Hypersil C₁₈柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为6.8 g·L^-1磷酸二氢钾和1.164 g·L^-1氢氧化钠溶液;检测波长为254 nm。SD大鼠随机分为对照组和试验组,分别腹腔注射生理盐水和多柔比星,给药6周后取心脏组织制备匀浆,用HPLC法测定大鼠心脏组织中ATP、ADP和AMP的含量。结果:ATP、ADP和AMP在0.625～40μg·ml^-1呈良好的线性(r>0.99),最低检测限和最低定量限为0.625 μg·ml^-1,精密度RSD均<9.50%,回收率为93.20%～108.0%,稳定性RSD 为3.0%～14.0%。多柔比星组ATP的含量均明显低于生理盐水组,而AMP和ADP含量则明显高于生理盐水组（P<0.01）。结论: HPLC法测定心肌组织中ATP、ADP和AMP含量满足生物样本的测定要求,可用于考察蒽环类抗肿瘤药物对心衰大鼠的影响。     

大鼠心肌组织中高能磷酸化物的含量测定

目的 建立了同步测定大鼠心肌组织中5种高能磷酸化物含量的反相离子对高效液相色谱法,并观察异丙肾上腺素致害大鼠心肌损伤模型中能量代谢的变化。方法 色谱柱:Supelco ODS-C₁₈(250mm×4.6mm,5μm);柱温:23℃～25℃;UV检测波长210nm;流动相:220mmol·L^-1磷酸盐缓冲液(含3mmol·L^-1四丁基氢氧化铵和7%甲醇),pH6.5;流速1.2ml·min^-1和1.3ml·min^-1。结果 5种能量代谢物质ATP、ADP、AMP、CrP和Cr达到良好分离,ATP、ADP、CrP在10～100μmol·L^-1,AMP在100～500μmol·L^-1,Cr在100～1000μmol·L^-1浓度范围,峰面积与浓度呈良好线性关系。日内和日间精密度的RSD均<10%,ATP、ADP、AMP、CrP及Cr的提取回收率(%)平均为:97.86、104.38、100.00、97.64和98.8。与生理盐水组相比,ISO致害大鼠心室组织中ATP含量及能荷(EC)显著下降(P<0.05)、ADP呈下降而AMP呈上升趋势，CrP含量显著上升（P<0.01）。结论 本法操作简便、结果准确，可以用于大鼠心肌组织提取液中高能磷酸化物的测定和能量代谢状况的研究。     

大鼠心肌组织中高能磷酸化物的含量测定

目的　建立了同步测定大鼠心肌组织中 5种高能磷酸化物含量的反相离子对高效液相色谱法 ,并观察异丙肾上腺素致害大鼠心肌损伤模型中能量代谢的变化。方法　色谱柱 :SupelcoODS C18(2 5 0mm× 4 6mm ,5 μm) ;柱温 :2 3℃～ 2 5℃ ;UV检测波长 2 10nm ;流动相 :2 2 0mmol·L 1磷酸盐缓冲液 (含 3mmol·L 1四丁基氢氧化铵和 7%甲醇 ) ,pH6 5 ;流速 1 2ml·min 1和1 3ml·min 1。结果　 5种能量代谢物质ATP、ADP、AMP、CrP和Cr达到良好分离 ,ATP、ADP、CrP在 10～ 10 0 μmol·L 1,AMP在 10 0～ 5 0 0 μmol·L 1,Cr在 10 0～ 10 0 0 μmol·L 1浓度范围 ,峰面积与浓度呈良好线性关系。日内和日间精密度的RSD均 <10 % ,ATP、ADP、AMP、CrP及Cr的提取回收率 (% )平均为 :97 86、10 4 38、10 0 0 0、97 6 4和 98 8。与生理盐水组相比 ,ISO致害大鼠心室组织中ATP含量及能荷 (EC)显著下降 (P <0 0 5 )、ADP呈下降而AMP呈上升趋势 ,CrP含量显著上升 (P <0 0 1)。结论　本法操作简便、结果准确 ,可以用于大鼠心肌组织提取液中高能磷酸化物的测定和能量代谢状况的研究     

心肌磷酸腺苷的高效液相色谱测定条件的优化

目的：优化心肌样品中的磷酸腺苷的高效液相色谱法测定条件。方法：固定其他色谱条件,改变流动相组成与配比,以分离结果的优劣优化流动相。结果：甲醇－水（2：98）（含0．15mol/L磷酸二氢钠,pH=6.0)为局部最佳流动相条件。结论：本条件可以实现该样品的准确、快速、经济实用的分析。     

HPLC测定陕北大枣和新疆大枣中环磷酸腺苷含量的研究

目的：建立高效液相法测定环磷酸腺苷（cAMP）的含量，对新疆大枣中的cAMP含量进行测定，并与陕北大枣中cAMP含量进行比较。方法：以Agilent XDB—C18（4．6mm&#215;150mm，5μm）色谱柱为固定相，甲醇-0．05mol&#183;L^-1磷酸二氢钾（10：90）为流动相，流速1．0mL&#183;min^-1,检测室温度为35℃，检测波长259nm。结果：采用的条件能将大枣中cAMP与其他组分峰分离，不同产地的大枣中cAMP的含量不同，新疆大枣和陕北大枣中cAMP含量分别为320μg&#183;g^-1和306μg&#183;g^-1.结论：采用高效液相色谱法对大枣中cAMP含量进行测定具有分离效能高、灵敏度高和检测速度快等优点。     

HPLC法测定不同产地灵芝中腺苷的含量

目的 建立灵芝药材中腺苷的高效液相色谱含量测定方法,同时比较不同产地灵芝中腺苷含量的差异.方法 采用HPLC法,色谱柱为AcclaimTM 120-C18柱(4.6×150mm,5μm)、流动相为甲醇-0.01mol·L-1磷酸二氢钾溶液(13∶87)、流速0.8mL·min-1、检测波长260nm、柱温26℃、进样量5μL.HT5"H结果 灵芝中腺苷浓度在0.985～98.5μg·mL-1(r=0.9999)范围内与峰面积积分值具有良好的线性关系;平均加样回收率为99.05％(RSD1.16％);方法精密度和重复性良好,RSD均小于2％.不同产地灵芝中腺苷的含量有较大差异.结论HT6K 本法操作简单、结果准确、重现性好,为灵芝的质量控制提供参考方法.     

高效液相色谱法测定大鼠心肌中腺苷的含量

目的：建立高效液相色谱法测定大鼠心肌组织中腺苷的含量。方法 SD大鼠随机分为心肌缺血再灌注组（ IRI）、106 Treg细胞转输＋IRI组、107Treg细胞转输＋IRI 组和假手术对照组。色谱柱为 VP-ODS C18柱（250mm ×4.6mm,5μm）;流动相为甲醇：10mmol· L-1乙酸铵（10∶90）;流速为1.0mL· min -1;柱温25℃;检测波长260nm;进样量20μL。结果腺苷的标准液与峰面积均呈良好的线性关系（r＝1.000）,平均回收率分别为100.1％。日内和日间精密度分别在4.56％和4.84％以下。结论本法操作简便、准确、快速,可以用于测定大鼠心肌组织中腺苷的含量。     

腺苷及腺苷三磷酸对大鼠离体结肠平滑肌的作用

目的 比较腺苷和腺苷三磷酸对大鼠离体近端结肠纵行平滑肌活动的调节作用.方法 四导生理记录仪记录大鼠近端结肠纵行肌的等长舒张和收缩反应.结果 对于静息状态下的大鼠离体近端结肠纵行肌标本,腺苷无明显影响(P＞0.05).但是,腺苷三磷酸使静息状态下的大鼠离体近端结肠纵行肌产生微弱的舒张反应后续浓度依赖性收缩反应;腺苷三磷酸的上述作用不受神经阻断剂河豚毒素的影响.大鼠离体近端结肠纵行肌标本在五羟色胺或乙酰胆碱预收缩条件下,腺苷和腺苷三磷酸均可产生浓度依赖性舒张反应,但是腺苷引起的舒张反应明显弱于腺苷三磷酸(P＜0.01).结论 在大鼠离体近端结肠纵行肌,腺苷三磷酸可产生舒张反应和收缩反应,而腺苷仅产生舒张反应.     

HPLC法测定平贝母中腺苷的含量

目的：建立HPLC法测定平贝母中腺苷含量。方法：色谱柱：Inertsil ODS—SP（250mm×4．6mm,5μm）;流动相：水-乙腈（93：7）;流速：1．0ml·min^-1;柱温：室温;检测波长：260nm。结果：腺苷在0．04～0．24μg与峰面积线性关系良好（r=0．9999）,平均加样回收率为96．32％,RSD=1．15％（n=5）。结论：本方法简便、准确、重复性好,可用于平贝母的质量控制。     

HPLC法测定北冬虫夏草和常见食用菌中腺苷和虫草素

目的 建立一种HPLC法快速测定北冬虫夏草和几种常见食用菌中腺苷和虫草素的方法.方法Welch Material XB-C18色谱柱(250mm×4.6mn,5μm),以水-甲醇(85∶15)为流动相,体积流量1.0mL/min,检测波长258 nm,柱温40℃.结果腺苷在0.023 2～0.464 0μg、虫草素在0...     

大鼠血浆中棉酚的检测简

目的：建立大鼠血浆中棉酚含量的高效液相色谱测定方法。方法：采用ODS—C18色谱柱（4．6mm×200mm,5μm）,柱温25℃,流动相为甲醇-1％磷酸溶液（85：15）,流速1．0ml／min,检测波长：235nm。结果：在0．33～3．30μg/ml范围内峰面积与浓度呈现良好的线性关系（r=0．9994）,检测限为0．04μg/ml;平均回收率为94．7％～97．3％;给药组大鼠血浆中棉酚的含量为0．68～2．14μg／ml。结论：该方法可用于棉酚生物样品分析。     

HPLC法测定大鼠血浆中胺碘酮的含量

目的建立HPLC法测定大鼠血浆中胺碘酮的含量。方法采用AgilentHC—C18柱,以2％三乙胺溶液（磷酸调pH至4．0）-甲醇（19：81,V／V）为流动相,检测波长为240nm。血浆样品经乙腈沉淀蛋白,离心后取上清液氮气吹干,按外标法定量。结果胺碘酮线性范围为0．14～2．8mg·L^-1（r=0．9990）,线性关系良好,定量下限为0．098mg·L^-1.日内精密度（RSD）为1．71％～2．25％,日间RSD为4．75％～6．88％,提取回收率〉90％。结论本法简便、灵敏、准确,重现性好,可用于大鼠体内的药动学研究,也同样满足临床血药浓度监测和人体药动学试验。     

高效液相色谱法测定大鼠血浆中吴茱萸次碱浓度

建立大鼠血浆中吴茱萸次碱的反相高效液相色谱法。以乙腈 水 (5 8∶4 2 )为流动相 ,地西泮为内标 ,在波长 3 4 5nm处检测。吴茱萸次碱浓度在 0 0 2～ 1 6μg/mL呈线性 ,相关系数为 0 999,高中低 3种浓度平均萃取回收率均大于 80 0 %     

高效液相色谱法测定大鼠脑组织中川陈皮素含量

目的建立大鼠脑组织中川陈皮素含量的高效液相色谱紫外检测法。方法脑组织匀浆液经乙腈蛋白沉淀,再采用乙酸乙酯和正己烷进行萃取,吸取有机相,N2气流吹干后,流动相复溶,离心,取上清液待测。采用Kro—masilC18柱（4．6mm×150mm,5μm）,流动相为甲醇-水（65：35,v／v）,流速0．8mL·min^-1,柱温为40℃,检测波长335nm,以尼莫地平为内标进样分析。结果川陈皮素、内标和内源性杂质分离良好,线性范围6．25～1200ng·g^-1（r=0．9992）,定量下限为6．25ng·g^-1,萃取回收率〉59％,方法回收率〉99％,批内、批间RSD均〈15％。结论本方法灵敏度高、专属性强,适合于大鼠脑组织中川陈皮素含量测定。     

高效液相色谱法测定大鼠血清中视黄醇和视黄酸

目的 建立高效液相色谱法测定大鼠血清中视黄醇和视黄酸浓度的方法。方法 色谱柱为Phenomenex Luna C₁₈柱（150 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相为甲醇-10 mmol/L乙酸铵缓冲盐（90：10,乙酸调整水相pH值至4）;体积流量为1.0 mL/min;检测波长为340 nm;柱温为40℃;进样量为20 μL。结果 大鼠血清样品中视黄醇和视黄酸均分离良好,视黄醇和视黄酸质量浓度在31.25～1 000 ng/mL（r=0.999 9）与峰面积均呈良好的线性关系。平均回收率大于90%,RSD值均小于10%。结论 本法操作简便、准确、灵敏、专属性强,为建立无干扰的测定大鼠血清中视黄醇和视黄酸的方法及其在大鼠体内药动学研究提供参考。     

板蓝根颗粒中腺苷的HPLC分析

目的建立板蓝根颗粒的HPLC定量分析方法.方法以0DS C18柱(150 mm×4.6 mm,10μm)为分析柱,乙腈-水(6:94)为流动相,260 nm为测定波长,测定了板蓝根颗粒中腺苷的含量.结果在此色谱条件下腺苷同其它成分达到了最佳的基线分离,平均回收率为98%;运用该法测定了不同厂家的板蓝根颗粒中腺苷的含量.结论首次建立了板蓝根颗粒中核苷的HPLC分析方法,该法重复性好、准确性高,适宜于板蓝根颗粒的质量控制,为板蓝根颗粒的内在质量评价提供了一个准确的定量方法;通过分析,发现不同厂家的板蓝根颗粒中腺苷的含量差异较大.     

HPLC测定蓝菊抗病毒口服液中腺苷的含量

目的：建立蓝菊抗病毒口服液中腺苷的含量测定方法。方法：采用HPLC法,色谱柱Agilent Hypersil ODS柱（4.6 mm×150 mm,5μm）;流动相为乙腈-水（5∶95）;流速为1.0 ml/min;检测波长为260 nm;柱温：25℃。结果：腺苷在0.008 3-0.083 0μg范围内具有良好的线性关性（r=0.999 7）,平均加样回收率为96.72%,RSD%为1.6%。结论：该方法简便、准确,能排除其他成分的干扰,可用于蓝菊抗病毒口服液的质量控制和评价。     

HPLC法测定头孢硫脒大鼠体内分布浓度及其药动学研究

目的建立大鼠体内头孢硫脒血药浓度和分布浓度的测定方法及进行药动学研究。方法采用高效液相色谱技术测定不同剂量(200.92m g/kg,100.46m g/kg)头孢硫脒大鼠体内不同时间的血药浓度和药物分布浓度。C18反相色谱柱(Hypersil,250nm×4.0nm,5μm),流动相为乙腈∶磷酸盐缓冲液(20∶80)。结果在0.20~50μg/m l范围内呈良好线性关系,r>0.997,定量限为0.20μg/m l,回收率在95.91%~103.1%。大鼠静注头孢硫脒后,体内分布以膀胱、甲状腺、关节腔、皮肤、前列腺、肾上腺、胃、十二指肠、肾、子宫、淋巴结、眼球、卵巢、肺等脏器的浓度较高,脑、睾丸、脂肪、脾等脏器的浓度较低,主要经尿排泄,约占给药量的95%;体内药动学呈开放二室模型,主要药动学参数如下:t1/2α0.2950,0.2711h;t1/2β1.345,1.327h;CL 4.284、4.254L/h;V c0.5540、0.4901L/kg;V 2.077、2.035L/kg;AUC 23.62和46.92(m g.h)/L。头孢硫脒高、低剂量药动学参数值非常相近,表明在高、低剂量范围内药物呈线性动力学特征。结论本方法适用于药动学研究,测定结果为临床合理用药提供了依据。     

HPLC测定凉山虫草中的腺苷

目的 测定凉山虫草中腺苷的含量.方法 采用HPLC法,Diamonsil C_(18)色谱柱为(200 mm×4.6 mm,5μm),以磷酸盐缓冲液(pH6.5)-甲醇(80:20)为流动相,流速0.6 mL·min~(-1),柱温30℃;检测波长260 nm.结果 腺苷1～40μg·mL~(-1)与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9994);平均回收率为101.89%,RSD=3.11%(n=9).测定了10批样品中腺苷的含量,含量范围为0.0367～0.0590 mg·g~(-1).结论 所建方法准确、快速、简便,适用于凉山虫草中腺苷的测定.     

板蓝根颗粒中腺苷的HPLC分析

目的 建立板蓝根颗粒的HPLC定量分析方法。方法 以ODS C18柱(150 mm×4.6 mm。10 μm)为分析柱,乙腈-水(6:94)为流动相,260 nm为测定波长,测定了板蓝根颗粒中腺苷的含量。结果 在此色谱条件下腺苷同其它成分达到了最佳的基线分离,平均回收率为98％;运用该法测定了不同厂家的板蓝根颗粒中腺苷的含量。结论 首次建立了板蓝根颗粒中核苷的HPLC分析方法,该法重复性好、准确性高,适宜于板蓝根颗粒的质量控制,为板蓝根颗粒的内在质量评价提供了一个准确的定量方法;通过分析,发现不同厂家的板蓝根颗粒中腺苷的含量差异较大。