二至天癸方对高龄不孕妇女卵巢反应性的影响

目的探讨补肾益天癸之二至天癸方提高高龄不孕妇女卵巢反应性的临床疗效。方法将66例参加体外受精-胚胎移植（IVF-ET）周期的高龄不孕妇女随机分为中药组（二至天癸方联合超排卵方案治疗,33例）和对照组（单用超排卵方案治疗,33例）,观察临床症状改善情况,促性腺激素（FSH）的用量,不同时期血清激素水平、HCG注射日子宫内膜厚度、子宫和卵巢动脉搏动测定,卵泡数,取卵数,优质卵率,受精率,优质胚胎率,妊娠率,并对治疗后两组患者阴中干涩症状积分与HCG注射日血清E2进行相关性分析。结果中药组患者临床肾气阴两虚症状得到有效改善,与对照组比较差异有显著性（P〈0．05）;中药组FSH总用量及每天FSH用量明显低于对照组,两组比较,差异有显著性（P〈0．05）;在HCG注射日血清E2水平、子宫内膜厚度、取卵数、优质卵率、受精率、优质胚胎率,中药组均明显优于对照组,差异有显著性（P〈0．05）;两组患者治疗后阴中干涩症状积分与HCG注射日血清E2水平均存在弱负相关关系（r=-0．369,r=-0．425）,说明HCG注射日血清E2水平是影响阴中干涩症状的因素,但不是唯一因素。中药组治疗后阴中干涩积分低于对照组,差异有显著性（t=2．422,P〈0．05）。结论二至天癸方配合超排卵方案可明显减少FSH用量,提高卵巢反应,改善卵子质量,提高妊娠率,提示其机理与补肾益天癸之二至天癸方改善卵巢反应性,提高雌激素水平,协调下丘脑-垂体-卵巢轴有关。     

连方主任医师运用二至天癸方经验

本文对连方教授运用自制方二至天癸方的经验进行了总结。连方教授认为肾藏精主生殖,天癸为肾精充盛而产生的生殖之精,故补肾益天癸、养血调冲任为治疗不孕症之根本,并据多年临床经验自制补肾益天癸之二至天癸方,临证另有加减,颇有成效。     

二至天癸方对小鼠卵细胞质量影响的实验研究

目的 观察二至天癸方在体外受精一胚胎移植过程中对卵细胞质量的影响。方法 将80只小鼠随机分为4组：结合组[给二至天癸方加人绝经期促性腺激素(HMG)]、中药组(给二至天癸方)、激素组(给HMG)、对照组(给生理盐水),并进行排卵和卵裂试验,观察中药对卵细胞质量的影响。结果 结合组与激素组在促排卵数量上差异无显著性,但在卵细胞形态学评分及受精率、卵裂率中比较差异均有显著性(P<0．05),以结合组为优。结论 二至天癸方可与西药发挥协同作用,并能提高卵细胞质量。     

二至天癸方对IVF-ET患者颗粒细胞凋亡的影响

目的 观察二至天癸方干预调节PI3K/Akt信号通路关键效应分子p-Akt、PI3K及与通路相关的Bad水平对肾气虚体外受精-胚胎移植（IVF-ET）患者卵细胞质量的影响。方法 选取行IVF-ET的肾气虚不孕症患者80例,按照随机数字表法分为治疗组（二至天癸方结合IVF-ET治疗）,安慰剂组（安慰剂颗粒结合IVF-ET治疗）,每组40例,另选取40名因男方因素行IVF-ET的女性志愿者为健康对照组（安慰剂颗粒结合IVF-ET治疗）。3组患者均于促性腺激素释放激素激动剂（GnRH-a）降调节的前一周期开始加服二至天癸方或安慰剂颗粒至人绒毛膜促性腺激素（HCG）注射日停药。观察3组患者临床妊娠率、颗粒细胞凋亡率。Western blot法检测PI3K/Akt信号转导通路p-Akt、PI3K、Bad 蛋白水平。结果 与健康对照组比较,安慰剂组PI3K、p-Akt蛋白表达量降低,Bad蛋白表达量升高（P＜0.05, P＜0.01）;与安慰剂组比较,治疗组PI3K、p-Akt蛋白表达量升高,Bad蛋白表达量降低（P＜0.05, P＜0.01）。与安慰剂组比较,健康对照组及治疗组卵巢颗粒细胞凋亡率均降低,临床妊娠率增高（P＜0.05, P＜0.01）。结论 二至天癸方可能是通过PI3K/Akt信号转导通路,下调Bad因子表达,抑制颗粒细胞凋亡,从而提高IVF-ET患者卵细胞质量,最终改善肾气虚不孕症患者的IVF-ET结局。     

二至天癸颗粒对体外受精周期颗粒细胞GDNF、GFRα-1表达的影响

目的：探讨二至天癸颗粒对IVF周期颗粒细胞胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）、家族特异性受体a-1（GFRa-1）的影响,从而改善卵母细胞质量,提高妊娠率的可能机制.方法：将80例因输卵管因素行体外授精-胚胎移植（IVF-ET）患者分为治疗组（IVF治疗周期加用二至天癸颗粒）40例,对照组（IVF治疗周期加用安慰剂颗粒）40例.观察临床肾虚证候积分变化情况,促性腺激素（Gn）用量及用药天数,取卵数、优质卵率、受精率、优质胚胎率、临床妊娠率及颗粒细胞GD-NF、GFRa-l mRNA的表达情况.结果：治疗组患者肾虚症状得到明显改善,治疗组Gn用量及用药天数低于对照组,优质卵率、优质胚胎率及临床妊娠率均高于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）;颗粒细胞GDNF、GFRa-1 mRNA表达都优于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论：二至天癸颗粒可能通过提高颗粒细胞GDNF、GFRa-l mRNA的表达,改善卵母细胞成熟度,提高卵细胞质量,从而提高临床妊娠率.     

二至天癸颗粒对肾气虚不孕患者颗粒细胞Fas通路的影响

目的:探讨补肾益天癸之二至天癸颗粒对肾气虚不孕患者颗粒细胞Fas通路的影响。方法:分析2013年12月—2015年9月就诊于山东中医药大学附属医院生殖与遗传中心,符合病例选择标准的肾气虚不孕症患者72例,随机分为治疗组(二至天癸颗粒+IVF标准长方案)和对照组(安慰剂+IVF标准长方案),取卵日收集卵泡GC,采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测颗粒细胞Fas L、Fas、Caspase8、Caspase3蛋白的含量,实时荧光定量PCR测定mRNA含量,观察组间差异。结果:两组患者GC中均有Fas L、Fas、Caspase8、Caspase3的mRNA和蛋白表达,且在治疗组的表达均低于对照组(P0.05);与未妊娠者相比,妊娠者GCFas L、Fas、Caspase8、Caspase3的mRNA和蛋白表达均较低(P0.05)。结论:二至天癸颗粒可以下调Fas通路四个蛋白的表达。推测这可能是其抑制颗粒细胞凋亡,提高卵细胞质量和胚胎质量从而提高临床妊娠率的机制之一。     

二至天癸颗粒对高龄肾气阴两虚IVF-ET患者Mfn2表达的影响:随机对照研究

目的观察二至天癸颗粒对高龄肾气阴两虚行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)患者卵巢颗粒细胞线粒体融合素蛋白(Mfn2)及线粒体膜电位的调控作用。方法将86例行IVF-ET治疗的高龄肾气阴两虚证患者单盲随机分为中药治疗组和安慰剂组各43例。2组均采用拮抗剂方案(GnRH-ant方案)降调节至人绒毛膜促性腺激素(hCG)注射日。中药治疗组于IVF-ET治疗前3个周期始,自月经第3天起给予二至天癸颗粒。取卵日收集卵泡液并提取颗粒细胞,分析各组患者妊娠结局,检测Mfn2 mRNA表达及蛋白的含量和线粒体膜电位(△Ψm)的变化。结果中药治疗组、安慰剂组的临床妊娠率分别为42.1.%(16/38)、26.3%(10/38),中药治疗组与安慰剂组比较差异无统计学意义(P>0.05),但有升高的趋势。与安慰剂组比较,中药治疗组Mfn2 mRNA的相对表达量升高(P<0.05,P<0.01),Mfn2蛋白表达量及△Ψm荧光强度比值升高(P<0.01)。结论二至天癸颗粒可提高高龄肾气阴两虚型IVF-ET患者卵泡液颗粒细胞中Mfn2及线粒体膜电位的表达,对高龄肾气阴两虚型IVF-ET患者临床妊娠率有升高趋势。     

针灸对体外受精促排卵周期中卵泡发育及优质胚胎的影响

目的:探讨针灸对促排卵期间卵泡发育及优质胚胎率的影响。方法:将99例受试者随机分成安神补肾针灸组、常规针灸组和对照组三组,在促排卵期间采用不同方案针灸治疗及单纯促排卵方案刺激,经阴道B超观察促排当日、人体绒膜促性腺激素(HCG)注射前7 d及HCG注射日三个时间点中卵泡数及卵泡大小,并最终比较三组的取卵数、受精率、优质胚胎率。结果:HCG注射前7 d及HCG注射当日,两个针灸组平均卵泡直径均大于对照组,但前两者组间比较差异无统计学意义。卵泡个数方面三组间比较无统计学差异,但安神补肾针灸组受试者在HCG注射当日,直径大于14 mm的卵泡个数占优(P<0.05)。优质胚胎个数仍以安神补肾针灸组最高,常规针灸组次之,与对照组之间比较差异无统计学意义。但优质胚胎率的比较中,安神补肾针灸组、常规针灸组与对照组存在统计学差异(P<0.05)。结论:针灸可以促进促排卵期卵泡发育,使同批卵泡的大小更为均衡,提高受精率和优势胚胎率,为顺利移植奠定基础。     

二至天癸颗粒联合体外受精-胚胎移植治疗不孕症61例临床研究

目的：观察二至天癸颗粒对不孕症患者肾气阴两虚证候的疗效,评定其对卵细胞质量,优质卵、受精卵、优质胚数目及妊娠率的影响.方法：治疗组为超促排卵方案加服二至天癸颗粒,对照组单用超排.观察两组治疗前后肾气阴两虚证候改变、取卵数、优质卵率、受精率、优质胚胎率、妊娠率,统计促性腺激素（Gn）用药情况,并做相关性分析.结果：肾气阴两虚证候改善、优质卵率、受精率、优质胚胎率等方面两组比较差异有显著性;治疗组Gn剂量明显少于对照组;肾气阴两虚证候改善程度与优质卵率呈正相关.结论：二至天癸颗粒可明显改善肾气阴两虚证候,在不减少卵细胞数目的情况下,增加优质卵、优质胚数目,提高临床妊娠率.     

二至天癸颗粒对体外受精-胚胎移植周期人卵泡液白血病抑制因子和卵细胞质量的影响

目的探讨二至天癸颗粒对体外受精一胚胎移植（IVF-ET）周期人卵泡液中白血病抑制因子（LIF）和卵细胞质量的影响。方法入选患者随机分为两组,分别用二至天癸颗粒合西药（治疗组,42例）和单用西药（对照组,38例）治疗,观察患者取卵日肾虚证候较垂体降调节后的改善情况,比较两组获卵数、优质卵率、受精率、卵裂率、优质胚胎率、妊娠率和卵泡液LIF水平的差异;对卵泡液LIF水平与优质卵率、优质胚胎率的关系分别进行相关性检验。结果与对照组比较,治疗组肾虚证候改善程度、优质卵率、受精率、卵裂率、优质胚胎率及临床妊娠率均显著提高;卵泡液LIF水平明显高于对照组;卵泡液中LIF水平与优质卵率、优质胚胎率及妊娠结局均呈正相关。结论二至天癸颗粒能显著提高卵细胞数、胚胎质量和IVF-ET成功率,其机理与增加卵泡液LIF水平、激活卵泡微环境LIF活性充分表达有关。     

二至天癸颗粒对体外受精-胚胎移植患者卵泡液代谢组学及Ca~(2+)浓度的影响

目的从人卵泡液代谢组学及Ca~(2+)浓度,探讨二至天癸颗粒提高卵细胞质量的机制。探讨体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)周期人卵泡液代谢组学及钙离子(Ca~(2+))浓度、胆碱脂酶(ChE)、肌酐(Cr)对卵细胞质量及妊娠结局的影响。方法57例IVF-ET患者随机分为试验组(二至天癸颗粒加IVF-ET常规用药组,27例)和对照组(六味地黄颗粒合IVF-ET常规用药组,30例)。观察患者取卵日肾阴虚证候较垂体降调节后的改善情况,比较两组患者卵泡液Ca~(2+)浓度、胆碱脂酶、肌酐的差异及两组卵泡液代谢组学的变化,取卵数、受精率、卵裂率、优质胚胎率和妊娠率的差异。结果试验组治疗后肾阴虚证候积分为8.30±1.46,受精率0.82±0.09,卵裂率0.97±0.07,优质胚胎率0.51±0.18,对照组分别为9.16±1.15,0.74±0.18,0.91±0.10,0.41±0.09,试验组优于对照组(P0.05)。主成分分析法分析两组卵泡液代谢组学,试验组主要分布在Ⅰ区;对照组主要分布在Ⅱ区。两组卵泡液代谢组学有明显差异。妊娠组卵泡液主要分布在Ⅰ区。试验组Ca~(2+)浓度显著高于对照组(P0.05)。ChE、Cr高于对照组,但差异无统计学意义。结论在调节卵泡液代谢组学和Ca~(2+)浓度,提高卵细胞、胚胎质量,提高IVF-ET妊娠率方面,二至天癸颗粒优于六味地黄颗粒。     

复方二至天癸颗粒对IVF准备周期子宫内膜Galectin-3的影响研究

目的:观察复方二至天癸颗粒对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)准备周期子宫内膜半乳糖凝集素-3(Galectin-3)表达的影响,从而改善子宫内膜容受性,提高妊娠率的可能机制。方法:按随机数字表法将进入体外受精-胚胎移植(IVF-ET)准备周期的不孕患者分为2组,治疗组31例,对照组31例,分别予复方二至天癸颗粒、复方六味地黄颗粒预处理2个周期,并在第二周期月经第21天,吸取内膜组织少许,检测Galectin-3;同时分别对2组患者肾气阴两虚证候积分变化、临床妊娠率进行评定。结果:2组患者肾虚症候均有改善,治疗组改善更加明显(PO.05);2组子宫内膜Galectin-3表达比较,治疗组大于对照组(PO.05);临床妊娠率比较,治疗组大于对照组(P0.05)。结论:复方二至天癸颗粒提高IVF周期患者临床妊娠率,可能与提高Galectin-3在子宫内膜中的表达,抑制子宫内膜免疫及改善其容受性有关。     

基于AKT-GLUT4通路探讨二至天癸合启宫丸方对多囊卵巢综合征患者IVF-ET的影响

目的探讨二至天癸合启宫丸方对多囊卵巢综合征(PCOS)不孕患者卵巢局部AKT-GLUT4胰岛素代谢通路干预作用及其对妊娠结局的影响。方法选取因输卵管因素行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的PCOS肾虚痰湿不孕患者66例,随机分为二至天癸方合启宫丸方(中药)组和安慰剂组,各组33例。两组患者皆采用GnRHa+达英-35双降方案,中药组患者于服用达英-35同时给予二至天癸方合启宫丸方,直至人体绒膜促性腺激素(HCG)注射日。安慰剂组患者给予安慰剂颗粒。观察PCOS患者治疗前后肾虚痰湿证候积分和胰岛素抵抗指标HOMA-IR变化;促性腺激素(Gn)用量和天数;获卵数、受精率、2PN卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率以及取卵日卵巢颗粒细胞胰岛素代谢通路中AKT、p-AKT、GLUT4蛋白水平的表达。结果中药组治疗后证候积分、HOMA-IR显著降低(P0.01);与安慰剂组比较,中药组获卵数、受精率、优胚率、临床妊娠率增加(P0.05,P0.01),p-AKT、GLUT4蛋白表达升高(P0.05);两组Gn用量、Gn天数及AKT蛋白表达比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论二至天癸合启宫丸方可能通过上调卵巢颗粒细胞p-AKT和GLUT4蛋白表达,改善PCOS患者卵巢胰岛素抵抗,提升卵母细胞发育潜能,进而改善PCOS患者的IVF-ET结局。     

二至天癸颗粒含药血清对初老小鼠卵巢颗粒细胞分泌功能的影响

目的观察二至天癸颗粒含药血清对初老小鼠卵巢颗粒细胞体外分泌功能的影响。方法采用血清药理学方法，以不同含药量的初老小鼠血清，与体外培养的颗粒细胞共同培养48h，观察二至天癸颗粒含药血清对初老小鼠卵巢颗粒细胞雌激素（E2）、孕酮（P）分泌量（化学发光免疫测定法）以及抑制素B（INHB）分泌量（ELISA法）的影响。结果二至天癸颗粒含药血清可明显增加颗粒细胞E2、P、INHB的分泌量。结论二至天癸颗粒可通过调节颗粒细胞的分泌功能进而改善初老小鼠卵巢功能。     

二至天癸颗粒对黄体功能不健性不孕症患者子宫内膜容受性的影响

目的 探讨二至天癸颗粒对黄体功能不健所致不孕症患者的治疗作用及机理.方法 将60例黄体功能不健性不孕症患者随机分为二至天癸颗粒组(试验组)30例和六味地黄颗粒组(对照组)30例,观察两组治疗后中医证候改善情况,黄体中期血清雌二醇(E2)、孕酮(P)水平,黄体中期子宫内膜白血病抑制因子(LIF)表达,以及两组患者的妊娠率.结果 治疗后试验组患者中医证候改善程度优于对照组(P<0.05).试验组黄体中期血清P水平及子宫内膜LIF表达量均明显高于对照组(P<0.05);两组血清E2虽较治疗前有所降低,但差异均无统计学意义(P>0.05).试验组妊娠率亦高于对照组(P<0.05).结论 二至天癸颗粒治疗黄体功能不健性不孕症可能与其提高子宫内膜LIF的表达从而影响子宫内膜容受性有关.     

二至天癸颗粒提高卵细胞质量与小鼠卵巢内IGF-1R mRNA表达量关系的研究

目的探讨二至天癸颗粒提高卵细胞质量的机理.方法90只小鼠分为6组,实验1组与对照1组观察排卵后优质卵数目.实验2组与对照2组观察鼠胚卵裂率.用原位杂交的方法对实验3组与对照3组鼠卵颗粒细胞IGF-1R mRNA表达量进行检验.结果实验组与对照组优质卵率分别为[（78±8）%、（71±5）%],卵裂率分别为[（88±3）%、（83±5）%]及颗粒细胞IGF-1R mRNA表达量分别为[（0.4890±0.0454）、（0.4439±0.0283）],两组比较差异有显著性（P＜0.05）.优质卵率与颗粒细胞IGF-1R mRNA表达量呈正相关.结论二至天癸颗粒提高卵细胞质量的机理可能与提高颗粒细胞IGF-1R mRNA的表达量有关.     

中药天癸方治疗多囊卵巢综合征中高雄激素高胰岛素血症的研究

目的 :探讨中药天癸方治疗多囊卵巢综合征 (PCOS)中高雄激素高胰岛素血症的疗效及作用机理。方法 :观察 2 2例克罗米芬治疗无效的PCOS患者应用天癸方 (10例 )和二甲双胍 (12例 )治疗 3个月前后血黄体生成素 (LH)、卵泡刺激素 (FSH)、血睾酮 (T)、雌二醇 (E2 )浓度和口服糖耐量试验 (OGTT)试验中血胰岛素 (Ins)浓度 ,腰臀比值 (WHR)、体重指数 (BMI)的变化。结果 :服用“天癸方”患者血Ins水平、WHR、BMI均有所降低 ,logT/E2 降低明显 ,6例患者恢复规律月经伴双向型基础体温。口服二甲双胍患者血Ins水平降低明显 ,WHR、BMI无明显变化 ,logT/E2 降低明显 ,4例恢复规律月经者 2例伴双向型基础体温。结论 :天癸方促排卵效果优于二甲双胍 ,后者降Ins效果更显著。     

二至调经颗粒对多囊卵巢综合征不孕患者卵泡质量的影响

目的探讨二至调经颗粒对多囊卵巢综合征(PCO S)不孕患者卵泡质量的影响。方法将60例PCO S不孕患者随机分为两组,每组30例。两组患者均以炔雌醇环丙孕酮预处理3个周期,第4个周期开始对照组予克罗米酚+注射用尿促性素,治疗组在此基础上口服二至调经颗粒。观察两组患者肾虚证候的改善情况;比较两组治疗后妊娠率、卵巢基质血流、雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)的差异以及血清中血小板活化因子(PAF)含量的差异,观察其与卵泡质量的相关性。结果治疗组妊娠率36.7%,对照组26.7%,两组妊娠率比较无统计学差异(P>0.05)。治疗组肾虚证候的改善明显优于对照组(P<0.05);治疗组在改善卵巢基质血流方面,提高E2、PAF水平均显著优于对照组(P<0.05)。对LH改善两组无统计学差异(P>0.05)。结论二至调经颗粒合西药在提高肾虚型PCO S不孕患者的卵泡质量及妊娠率方面有良好的疗效,其机理与改善内分泌水平及卵巢基质血流情况有关,同时与影响血清PAF的产生有一定内在联系。     

天癸方对多囊卵巢综合征大鼠性激素及胰岛素抵抗的影响

目的探讨天癸方对多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠性激素及胰岛素抵抗影响性。方法选择健康雌性大鼠50只,分成5组,每组均为10只,分别为正常对照组、模型组、中药治疗组、西药治疗组、中西医结合治疗组,正常对照组仅正常饲养,余4组采用硫酸普拉睾酮钠配合高脂饮食建立胰岛素抵抗的PCOS大鼠模型,分别予生理盐水、天癸方、二甲双胍、天癸方+二甲双胍治疗,抽取大鼠静脉血,观察在血清睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、空腹血糖(FBG)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感指数(ISI)水平变化情况。结果中药组、西药组、中西医结合治疗组在T、LH、LH/FSH、IGF-1、E2上较模型组显著下降,FSH则显著升高,组间比较差异有统计学意义(P0.05),而中西医结合治疗组较中药组、西药组在以上指标上改善更加显著,差异有统计学意义(P0.05);模型组在FBG、FINS、HOMA-IR水平上最高,ISI水平最低,和其他组别比较差异有统计学意义(P0.05),中药组和西药组在FBG、FINS、ISI、HOMA-IR水平比较差异无统计学意义(P0.05),而中西医结合治疗组在FBG、FINS、ISI、HOMA-IR水平上改善最显著,差异有统计学意义(P0.05)。结论天癸方能调节胰岛素抵抗的PCOS大鼠糖代谢紊乱,能改善高胰岛素血症和高雄激素血症。     

中药天癸方对雄激素致不孕大鼠促性腺激素释放激素的影响

目的探讨中药天癸方对雄激素致不孕大鼠(ASR)下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)及雄激素受体(AR)mRNA 的影响。方法新生9日龄 SD 雌性大鼠一次性皮下注射丙酸睾丸酮,建立 ASR 模型,免疫组织化学法检测下丘脑视前区 GnRH 含量,RT-PCR 法测定下丘脑 AR mRNA 表达水平,并观察中药治疗前后上述两种物质的变化。结果 ASR 模型下丘脑视前区 GnRH 含量显著低于对照组(P<0.01),下丘脑 ARmRNA 表达水平显著升高(P<0.05),中药天癸方治疗后,下丘脑视前区 GnRH 含量上升至正常大鼠水平(P>0.05),AR mRNA 表达水平显著下降(P<0.001)。结论 ASR 模型下丘脑 AR mRNA 过度表达,视前区GnRH 含量降低,是引起该模型低促性腺激素和无排卵的原因之一,中药天癸方可使 AR mRNA 表达下降,改善低促性腺激素状态而产生促排卵作用。