7-羟乙基白杨素对PC12细胞的抗氧化作用及机制研究

目的 研究7-羟乙基白杨素对PC12细胞的抗氧化作用,并对其保护机制进行探讨。方法 使用CCK-8试剂盒检测PC12细胞的存活率,筛选出7-羟乙基白杨素作用的最佳浓度进行实验。之后将PC12细胞随机分为4组,分别为对照组、缺氧组、白杨素组和7-羟乙基白杨素组。使用微量酶标法测定细胞培养基中LDH活性,DCFH-DA染色观察细胞内ROS含量,同时使用试剂盒对细胞内MDA、SOD和CAT水平进行测定,提取细胞总蛋白通过Western blotting检测评价Nrf2及其下游蛋白表达量。结果 缺氧后PC12细胞存活率显著下降,经7-羟乙基白杨素预处理后可获得改善;白杨素组和7-羟乙基白杨素组上清液中的LDH和细胞内ROS、MDA含量与缺氧组相比显著降低,SOD和CAT含量与缺氧组相比显著升高,同时发现7-羟乙基白杨素在各个方面的保护作用都明显强于白杨素。缺氧条件会使Nrf2、Keap1、HO-1、NQO1蛋白表达增加,7-羟乙基白杨素干预后可以进一步提高它们的蛋白表达。结论 7-羟乙基白杨素具有比白杨素更好的保护效果,它可以通过激活Nrf2/ARE通路减轻PC12细胞由于缺氧造成的损伤。     

7-羟乙基白杨素对低压缺氧致PC12细胞损伤的改善作用及机制

目的 探讨7-羟乙基白杨素(7-HEC)对低压缺氧致PC12细胞损伤的改善作用及可能机制。方法 以大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系PC12为对象,以低压缺氧(5%CO₂、94%N₂、1%O₂、54 004 Pa)条件培养,考察不同浓度7-HEC(100、10、1、0.1、0.01μmol/L)对低压缺氧细胞存活率的影响;检测7-HEC(1μmol/L)对低压缺氧细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,凋亡率,周期,以及细胞中活化的胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响。结果 与对照组比较,低压缺氧组细胞的存活率显著降低(P<0.01);10、1、0.1μmol/L的7-HEC可逆转低压缺氧导致的细胞存活率降低(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,低压缺氧组细胞上清液中LDH含量、细胞中MDA含量、凋亡率、G₁期细胞比例和细胞中cleaved caspase-...     

黄芩素通过抑制JAK2/STAT1通路减轻Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤

本研究旨在探讨黄芩素对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用及机制.采用20 μmol·L-1 Aβ25-35损伤PC12细胞,通过细胞形态观察、Hoechst 33342染色和炎症因子检测考察黄芩素对Aβ25-35损伤PC12细胞的保护作用,采用Western blotting方法检测凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨...     

曲古抑菌素A对缺糖/缺氧损伤PC12细胞的保护作用

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对PC12大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞缺糖/缺氧损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法建立PC12细胞缺糖/缺氧(oxygen and glucose deprivation,OGD)损伤模型,1-640 nmol.L-1TSA处理细胞,噻唑蓝(MTT)检测对PC12细胞活性的影响,Propidium iodide(PI)和Hoechst33258染色检测细胞凋亡与坏死,荧光显微镜和流式细胞仪检测各组细胞内活性氧(ROS)的含量。结果与模型组相比,80 nmol.L-1TSA可明显提高ODG PC12的细胞存活率,降低细胞内的ROS含量(P<0.05)。结论 TSA对OGD损伤的PC12细胞具有保护作用,其机制可能是通过增加细胞内能量代谢中各种酶的乙酰化水平来应对缺血损伤。     

葛根素对二氯化钴造成PC12细胞缺氧损伤的保护作用

目的研究葛根素对PC12细胞缺氧损伤的影响。方法使用氯化钴对PC12细胞制备缺氧损伤模型,通过测定受损细胞给药后的活力、受损细胞LDH泄漏量和受损细胞SOD活力,研究葛根素对受损细胞的保护作用。结果在5×10-4~2×10-11mg.mL-1范围内,葛根素显著地增加模型受损细胞的活力;降低细胞LDH的泄露量;并增强受损细胞的SOD活性。结论葛根素对二氯化钴造成PC12细胞缺氧损伤具有修复作用。     

美洲大蠊提取物对H2O2诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨美洲大蠊提取物(PAS840)对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞氧化损伤模型的保护作用及机制。方法:采用H₂O₂刺激PC12细胞建立神经细胞氧化损伤模型,实验分为正常组(Con)、模型组(Mod)、PAS840低中高剂量组(20,50,125 μg·mL^-1的PAS840培养基溶液进行处理),采用倒置显微镜观察细胞形态并采用CCK-8法检测各组细胞存活率,生化试剂盒检测各组超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)的水平;DCFH-DA荧光探针检测各组活性氧簇(ROS)的水平;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;JC-1法染色检测各组细胞线粒体膜电位(MMP);RT-qPCR检测各组Nrf2/HO-1通路因子(Nrf2、Keap1、HO-1和NQO1)、凋亡因子(Bcl-2、Bax和Caspase-3)、炎症因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)、乙酰胆碱酯酶(AchE)和过氧化氢酶(CAT) mRNA的表达水平;Western blot法检测各组Nrf2、HO-1、Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达水平。结果:PAS840可显著提高氧化损伤细胞的存活率、MMP及SOD、GSH-Px和GSH的水平,降低LDH、MDA和ROS的水平;显著降低Keap1、TNF-α、IL-1β、IL-6和AchE mRNA表达的同时,显著增加CAT和NQO1 mRNA的表达,显著降低Nrf2、Bax和Caspase-3的mRNA及其蛋白表达,显著增加HO-1和Bcl-2的mRNA及其蛋白表达。结论:PAS840可以抑制H₂O₂诱导的PC12细胞凋亡,减轻炎症,其机制可能与降低ROS、调控Nrf2/HO-1通路因子减轻细胞的氧化损伤程度有关。     

7-羟乙基白杨素对心肌细胞缺氧损伤的保护作用及机制研究

目的 探究7-羟乙基白杨素对心肌细胞缺氧损伤的保护作用及其信号转导机制。方法 将心肌细胞株H9C2传代后随机分为正常对照组(常氧条件培养24 h)、模型组(1%O₂浓度缺氧培养24 h)、白杨素组(1%O₂浓度缺氧培养24 h, 1.0×10^-6 mol·L^-1白杨素处理)、7-羟乙基白杨素组(1%O₂浓度缺氧培养24 h, 1.0×10^-6 mol·L^-1 7-羟乙基白杨素处理)。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖情况;用WST-1法测定超氧化物歧化酶(SOD)含量;用钼酸铵法测定过氧化氢酶(CAT)含量;用蛋白质印迹法检测血红素加氧酶1(HO-1)、过氧化氢酶(CAT)蛋白表达水平。结果 正常对照组、模型组、白杨素组和7-羟乙基白杨素组的细胞存活率分别为(100.00±4.48)%、(61.95±2.14)%、(86.01±3.60)%和(93.16±2.91)%;SOD活力分别为111.43±3.06、196.12...     

α-硫辛酸注射液对过氧化氢致PC12细胞损伤的保护作用

目的 研究α-硫辛酸注射液(抗氧化剂)对H2O2致PC12细胞损伤的保护作用.方法 600 μmol·L-1H2O2与细胞共同孵育4 h,建立PC12细胞氧化应激损伤模型,用MTT法,测定细胞生长抑制率;培养介质中的LDH测定,用紫外分光光度法,用流式细胞术测定细胞凋亡率和线粒体膜电位.结果 与模型组相比,3个剂量(10,1 μmol·L-1)α-硫辛酸注射液能提高H2O2损伤的PC12细胞的存活率,减少LDH的漏出,降低细胞凋亡率,抑制线粒体膜电位的下降(P＜0.05,P＜0.01).结论 α-硫辛酸注射液对H2O2致PC12细胞损伤模型具有较好的保护作用.     

丙泊酚预处理对高温损伤嗜铬细胞瘤细胞的保护作用

［摘要］目的探讨丙泊酚预处理对大鼠嗜铬细胞瘤株(PC12)细胞高温损伤的影响及其可能的机制。方法体外培养PC12细胞，分为4组：正常对照组(C组)，常规(37 ℃)培养；高温损伤组（H组），将细胞置于46 ℃培养箱中2 h，随后恢复常规培养；丙泊酚预处理＋高温损伤Ⅰ组（P1＋H组）和丙泊酚预处理＋高温损伤Ⅱ组（P2＋H组）将细胞分别于高温损伤前置于37 ℃培养箱中以含丙泊酚终浓度25，50 μmol·L-1培养液作用1 h，余同H组处理。处理完毕后四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞活力，乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤，测定细胞内超氧化物歧化酶( SOD)活性和丙二醛(MDA)水平反映抗氧化活性。结果与H组比较，P1＋H组和P2＋H组MTT值升高（P＜0.01，LDH释放量减少（P＜0.01，同时细胞内SOD活性增高，MDA生成量明显减少。P1＋H组和P2＋H组之间比较，各指标差异无显著性（P＞0.05）。结论丙泊酚预处理对PC12细胞高温损伤有保护作用，这一作用可能与其抗氧化作用有关。     

香港远志黄酮类成分对H_2O_2诱导PC12细胞损伤的保护作用研究

目的:研究香港远志黄酮类成分对H2O2损伤PC12细胞的保护作用。方法:应用现代分离鉴定技术分离香港远志中黄酮类成分;96孔板培养PC12细胞24h加入100μmol的受试样品(以维生素C为对照),培养24h后加入400μmolH2O2作用2h。使用MTT法检测各组细胞活性,用自动酶标仪在570nm波长下测定各孔吸光度。结果:香港远志中黄酮类成分山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷、芒果苷、香港远志黄酮A、香港远志黄酮B具有一定的对H2O2损伤PC12细胞保护作用的活性。结论:本实验可为防治阿尔茨海默病新药的研发提供理论基础。     

天麻多糖对皮质酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究天麻多糖(polysaccharides from gastrodia elata blume,GEP)对皮质酮(corticosterone,CORT)诱导的PC12细胞损伤的保护作用.方法:采用水提醇沉法提取,经Sevag法脱蛋白及透析处理制得GEP.将培养好的细胞分为正常对照组、模型组(200 μmol·L-1 CORT)和GEP高(1 000 μg·ml-1)、中(500 μg·ml-1)、低(250 μg·ml-1)剂量组.GEP与CORT共孵PC12细胞48 h后,采用MTT比色法判断细胞损伤的程度;化学比色法测定乳酸脱氢酶的释放量;倒置显微镜和DAPI荧光染色法观察PC12细胞凋亡形态.结果:与正常对照组相比,模型组细胞存活率显著降低(P<0.01),LDH释放量增加,且凋亡细胞增多.当给予GEP后,各剂量组均能显著降低LDH释放量,细胞存活率增加,凋亡细胞显著减少(P<0.01).结论:GEP对皮质酮诱导PC12细胞损伤具有一定的保护作用,为GEP的临床应用提供试验依据.     

天麻多糖对皮质酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用

摘 要 目的:研究天麻多糖（polysaccharides from gastrodia elata blume,GEP）对皮质酮(corticosterone, CORT)诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法: 采用水提醇沉法提取,经Sevag法脱蛋白及透析处理制得GEP。将培养好的细胞分为正常对照组、模型组（200 μmol·L^-1 CORT）和GEP高（1 000 μg·ml^-1）、中（500 μg·ml^-1）、低（250 μg·ml^-1）剂量组。GEP与CORT共孵PC12细胞48 h后,采用MTT比色法判断细胞损伤的程度;化学比色法测定乳酸脱氢酶的释放量;倒置显微镜和DAPI荧光染色法观察PC12细胞凋亡形态。结果:与正常对照组相比,模型组细胞存活率显著降低(P<0.01),LDH释放量增加,且凋亡细胞增多。当给予GEP后,各剂量组均能显著降低LDH释放量,细胞存活率增加,凋亡细胞显著减少(P<0.01)。结论:GEP对皮质酮诱导PC12细胞损伤具有一定的保护作用,为GEP的临床应用提供试验依据。     

溴莫尼定对低氧诱导的 PC12细胞神经损伤的保护作用

目的探讨溴莫尼定对缺氧诱导的 PC12细胞神经损伤的保护作用及其机制。方法 实验于 2018年 5月至 2019年 8月进行,建立缺氧诱导的大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤 PC12细胞损伤模型,实验分为对照组、缺氧组(缺氧损伤)、缺氧 +0.25 μmol/L溴莫尼定组、缺氧 +0.5 μmol/L溴莫尼定组、缺氧 +1 μmol/L溴莫尼定组。采用 MTT法检测各组细胞活力;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;根据检测试剂盒测定乳酸脱氢酶( LDH)、丙二醛、超氧化物歧化酶( SOD)含量;蛋白质印迹法检测细胞中 B细胞淋巴瘤 -2( Bcl-2)、 Bcl-2相关 X蛋白( Bax)及蛋白激酶 B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白( mTOR)/信号转导及转录活化因子 3(STAT3)信号通路相关蛋白表达。结果缺氧处理后,细胞活力较对照组降低［(0.35±0.04)比( 0.69±0.08)］(P<0.05)溴莫尼定不同剂量组细胞活力较 Hypoxia组升高［(0.37±0.05)、(0.40±0.06)、(0.44±0.05)、(0.53±0.07)、(0.60±0.09)比( 0.35±0.04),］(P<0.05); Hypoxia组细胞凋亡率增加［(32.89±3.46)%比( 3.58±0.34)%］(P<0.05),溴莫尼定干预后细胞凋亡率降低［(7.41±0.75)%比( 32.89±3.46)%］(P<0.05)Bax蛋白表达量降低［( 1.48±0.16比 3.76±0.31)］(P<0.05)而 Bcl-2蛋白表达量升高［( 0.89±0.12)比( 0.29±0.04)］(P<0.05);Hypoxia组细胞 SOD含量较对照组降低［( 50.43±5.36)U/mg比(173.39±18.21)U/mg］(P<0.05),溴莫尼定干预后可提高缺氧诱导的细胞 SOD含量降低［( 143.28±15.43)U/mg比( 50.43±5.36)U/mg］(P<0.05); Hypoxia组细胞 LDH［(62.31±6.82)U/mL比( 19.07±1.65)U/mL］、丙二醛含量［(4.29±0.43)μmol/g比( 1.35±0.12)μmol/g］较对照组增高(P<0.05)溴莫尼定处理后可降低缺氧引起的 LDH［( 31.35±3.21)U/mL比( 62.31±6.82)U/mL］、丙二醛含量［( 1.76±0.19)μmol/g比( 4.29±0.43μmol/g］增加(P<0.05); Hypoxia组细胞 Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、STAT3、p-STAT3表达降低( P<0.05)溴莫尼定处理后可提高细胞 Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、STAT3、p-STAT3的表达( P<0.05);抑制 Akt/mTOR/STAT3信号通路转溴莫尼定对缺氧诱导的 PC12细胞增殖、凋亡及 LDH、丙二醛、 SOD水平的影响。结论溴莫尼定可通过激活 Akt/mTOR/STAT3信号通路促进缺氧诱导的 PC12细胞增殖、抑制细胞凋亡及增强其抗氧化能力进而对缺氧诱导的神经细胞损伤发挥保护作用。     

7-羟乙基白杨素对低压低氧致脑组织损伤的保护作用

目的 研究7-羟乙基白杨素（7-HEC）对低压低氧诱导大鼠脑组织损伤的保护作用。方法 将52只健康♂ Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、乙酰唑胺组、7-HEC组,每组13只。连续灌胃给药5 d,末次给药后,除正常组,将其余3组置于低压低氧动物实验舱,升至8 000 m海拔缺氧处理24 h。HE染色观察脑组织病理改变,酶标法检测脑组织中过氧化氢（H₂O₂）和丙二醛（MDA）水平,以及超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和ATP酶的活力;Western blotting检测蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白抗体（Bax）及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（caspase-3）的表达。结果 与正常组相比,低压低氧导致大鼠脑组织出现明显损伤,H₂O₂和MDA水平显著升高,抗氧化酶SOD、CAT和GSH-Px以及Na⁺-K⁺-ATPase和Ca²⁺-Mg²⁺-ATPase的活力显著降低。7-HEC预处理能够逆转这些变化。此外,低压低氧能够显著升高脑组织中促凋亡蛋白Bax和cleaved caspase-3表达,降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,而7-HEC能够下调Bax和cleaved caspase-3表达,上调Bcl-2的表达。结论 7-HEC对低压低氧致脑组织损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与其缓解氧化应激,抑制细胞凋亡,改善能量代谢有关。     

银杏叶标准提取物对H2O2诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的：探讨银杏叶标准提取物EGB761对过氧化氢（H2O2）诱导大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤细胞（PC12细胞）凋亡的保护作用及可能的机制。方法：PC12细胞常规培养生长至对数期,进行如下分组试验：正常对照组（NS）,H2O2组（H2O2,200μmol/LH2O2）,低剂量EGB761组（GL,10μg/mlEGB761＋H2O2）,中剂量EGB761组（GM,20μg/mlEGB761＋H2O2）,高剂量EGB761组（GH,50μg/mlEGB761＋H2O2）。用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定PC12细胞活力;流式细胞仪测定PC12细胞凋亡率;分光光度计测定过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总超氧化物岐化酶（T-SOD）活力和抗氧化能力（T-AOC）以及丙二醛（MDA）含量;Western blot法测定胞浆内Bcl-2、Bax以及Caspase-3的表达。结果：与正常对照组比较,H2O2组的PC12细胞的活力明显降低,细胞凋亡率显著增加（P〈0.05）。与H2O2组比较,EGB761低、中、高组的PC12细胞活力显著增强,且呈剂量依赖关系（P〈0.05）;GM组和GH组CAT,GSH-Px,T-SOD和活性和T-AOC均显著提高（P〈0.05）,MDA含量显著下降（P〈0.05）,GL组T-SOD活力和T-AOC水平升高以及MDA含量下降（P〈0.05）,而CAT和GSH-Px活力无显著变化（P〈0.05）。与H2O2组比较,EGB761低、中、高组PC12细胞的Bcl-2的表达量增加,Bax的表达量下降,Bcl-2/Bax的比值显著增加（P〈0.05）,Caspase-3的表达显著降低（P〈0.05）。结论：H2O2可诱导PC12细胞凋亡,EGB761能显著抑制H2O2诱导PC12细胞凋亡并对细胞有保护作用;EGB761有较强的抗氧化能力,通过其抗氧化作用改善H2O2诱导的氧化应激状态,并能显著提高Bcl-2/Bax的比值,抑制Caspase-3的活化,发挥保护作用。