α7烟碱型胆碱能受体激动剂对体外循环致大鼠脑损伤及核转录因子-κB-p65蛋白表达的影响

目的 观察α7烟碱型胆碱能受体激动剂(α7 nicotinic acetylcholine receptors agonist,α7nAChR)对CPB致大鼠脑损伤及NF-κB-p65蛋白表达的影响.方法 清洁级成年雄性SD大鼠24只,体重350～400 g,采用随机数字法分为4组(每组6只):假手术组(S组)、CPB组(C组)、α7nAChR激动剂组(P组)、α7nAChR拮抗剂组(M组).采用右颈静脉腔房引流,尾动脉灌注建立大鼠CPB模型.S组仅在各部位插管不转流,穿刺后进行机械通气60 min,其余3组进行CPB 60 min.于CPB术后2 h(T2)脊椎脱臼法将大鼠处死,取颈静脉血和海马组织样本.采用ELISA法检测血清IL-6、TNF-α及S100β浓度的变化,采用H-E染色观察大鼠海马损伤情况,Western blot法检测脑组织中NF-κB-p65蛋白含量的表达.结果 与S组比较,C组、P组和M组血清IL-6、TNF-α和S100β浓度均明显增高(P＜0.05),脑组织NF-κB-p65蛋白水平显著增高(S组0.214±0.031、C组0.563±0.093、P组0.674±0.097、M组0.414±0.074,P＜0.05).与C组比较,P组血清上述指标浓度明显降低(P＜0.05),脑组织NF-κB-p65蛋白水平均明显下降(P＜0.05);M组血清上述指标浓度差异无统计学意义(P＞0.05).病理学结果显示S组海马锥体细胞形态正常,C组和M组锥体细胞排列疏松,基线消失,核固缩,大量锥体细胞死亡;P组受损情况较C组明显减轻.结论 α7nAChR激动剂可在一定程度上减少CPB诱发的大鼠脑损伤,其机制可能与抑制NF-κB信号通路的表达、减轻炎症反应有关.     

单唾液酸神经节苷脂对体外循环大鼠炎性反应的影响

目的 评价单唾液酸神经节苷脂(GM1)对体外循环(CPB)大鼠炎性反应的影响.方法 成年雄性SD大鼠24只,体重350 ～ 450 g,4～6月龄,采用随机数字表法,将其分为3组(n=8):假手术组(S组)、CPB组、CPB+ GM1组(G组).G组在预充液中加入GM1 20 mg/kg;C组预充液中加入等容量生理盐水.CPB组和G组于CPB停止后3h时,S组于相应时点,取颈静脉血样,采用ELISA法测定血浆神经元特异性烯醇化酶(NSE)和S-100β蛋白浓度,采用放射免疫分析法测定血浆TNF-α和IL-6浓度;取海马组织,采用Western blot法检测海马基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、IL-10表达及NF-κB活性.结果 与S组比较,CPB组和G组血浆NSE、S-100β蛋白、TNF-α和IL-6浓度升高,海马MMP-9表达上调,NF-κB活性增强,IL-10表达下调(P＜0.05);与CPB组比较,G组血浆NSE、S-100β蛋白、TNF-α和IL-6浓度降低,海马MMP-9表达下调,NF-κB活性减弱,IL-10表达上调(P＜0.05).结论 GM1减轻CPB诱发大鼠脑损伤的机制可能与抑制中枢和全身炎性反应有关.     

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性小体在心肺转流大鼠围术期神经认知障碍中的作用

目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体在心肺转流(CPB)大鼠围术期神经认知障碍(PND)中的作用。方法成年雄性SD大鼠30只,体重350～450 g,进行Morris水迷宫训练5 d后随机分为三组,每组10只:假手术组(S组)、CPB组(C组)和CPB+NLRP3炎性小体抑制剂Ac-YVAD-cmk组(Y组)。S组进行双侧隐动脉、右大隐静脉和右颈内静脉穿刺置管,但不进行CPB;C组穿刺置管后行CPB 60 min;Y组在CPB前30 min给予Ac-YVAD-cmk 8 mg/kg腹腔注射,穿刺置管后行CPB 60 min。术后第3天采用Morris水迷宫实验评估大鼠认知功能,ELISA法检测血浆和海马组织IL-1β和IL-18浓度,Western blot法检测海马组织NLRP3、凋亡相关点样蛋白(ASC)和半胱氨酸蛋白水解酶-1前体(pro-caspase-1)蛋白含量,TUNEL法检测海马组织凋亡情况,计算凋亡指数。结果与S组比较,C组和Y组逃避潜伏期明显延长(P0.05),120 s穿越原平台次数明显减少(P0.05),血浆和海马组织IL-1β和IL-18浓度、NLRP3、ASC和pro-caspase-1蛋白含量以及凋亡指数明显升高(P0.05)。与C组比较,Y组逃避潜伏期明显缩短(P0.05),120 s穿越原平台次数明显增多(P0.05),血浆和海马组织IL-1β和IL-18浓度、NLRP3、ASC和pro-caspase-1蛋白含量以及凋亡指数明显降低(P0.05)。结论 CPB后大鼠PND可能与NLRP3炎性小体的激活有关,使用NLRP3炎性小体抑制剂可减轻大鼠PND的发生。     

氯胺酮对体外循环心脏手术患者血浆S100-β蛋白及炎性因子的影响

目的 观察氯胺酮对体外循环(CPB)心脏手术患者血浆S100-β蛋白及炎性介质肿瘤坏死因子-a(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的影响.方法 择期行二尖瓣置换术患者40例,ASA Ⅱ或Ⅲ级,随机分为氯胺酮组(K组)和对照组(C组),每组20例.常规全麻诱导后,K组以氯胺酮2mg/kg静脉注射,继之以50μg·kg-1·min-1的速度持续泵注至手术结束,C组给予等量生理盐水.分别于麻醉诱导后(氯胺酮注射前,T1)、CPB后20 min(T2)、CPB结束时(T3)、术毕(T4)、术后24 h(T5)时抽取颈静脉球部血,测定各时点血浆S100-β、TNF-α及IL-6浓度,并对S100-β与TNF-α、IL-6之间的相关性进行分析.结果 与T1时比较,T2时两组患者血浆TNF-α、IL-6显著升高,T4达到高峰,T5时明显下降但仍高于T1时(P<0.05).T2～T5时K组TNF-α均显著低于C组(P<0.05).T2～T4时K组IL-6显著低于C组(P<0.05).T2时两组患者血浆S100-β浓度较T1时显著升高;T3时达到高峰,T5时显著下降但仍高于T1时(P<0.05).与C组比较,T2～T5时K组S100-β均显著降低(P<0.05).T2～T5时S100-β与TNF-α有明显的相关性(r-分别为0.815,0.791,0.684,0.572,P<0.05);T2～T4时S100-β与IL-6有明显相关性(r分别为0.785,0.824,0.703,P<0.05).结论 CPB心脏手术期间应用麻醉剂量的氯胺酮可明显降低CPB诱发的TNF-α、IL-6及S100-β蛋白的升高.     

α7nAChR激动剂-缺血后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)激动剂-缺血后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响.方法 成年雄性SD大鼠50只,体重290～320 g,随机分为5组(n=10):假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血后处理组(IP组)、α7nAChR激动剂后处理组(P组)和α7nAChR激动剂-缺血后处理组(PIP组).IR组结扎左冠状动脉前降支30 min、再灌注180 min制备心肌缺血再灌注损伤模型;S组仅穿线不结扎;缺血30 min时IP组再灌注10 s缺血10 s,重复3次,P组腹腔注射PNU282987 2.4 mg/kg,PIP组腹腔注射PNU282987 2.4 mg/kg后行缺血后处理.于再灌注180 min时抽取右颈内静脉血样后处死大鼠,取心脏,采用ELISA法测定血清心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)、TNF-α和高迁移率族蛋白Ⅰ(HMGB1)的浓度,采用伊文蓝和TTC双重染色法测定心肌梗死体积.结果 与S组比较,其余各组心肌梗死体积、IR组血清cTnI、TNF-α和HMGB1浓度升高(P＜0.05);与IR组比较,IP组、P组和PIP组心肌梗死体积、血清cTnI、TNF-α和HMGB1浓度降低(P＜0.05);与[P组比较,PIP组心肌梗死体积、P组和PIP组血清cTnI、TNF-α和HMGB1浓度降低(P＜0.05);与P组比较,PIP组心肌梗死体积、血清TNF-α和HMGB1浓度降低(P＜0.05).结论 α7nAChR激动剂-缺血后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的效应较单独应用时强.     

Ca2＋-CaMKⅡ-CREB信号通路在U50488H减轻CPB致大鼠围术期神经认知障碍中的作用

目的评价钙离子-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ-环腺苷酸反应元件结合蛋白(Ca2+-CaMKⅡ-CREB)信号通路在U50488H减轻CPB致大鼠围术期神经认知障碍(PND)中的作用。方法清洁级健康成年雄性SD大鼠40只,体重350～400 g,采用随机数字表法分为4组(n=10):对照组(S组)、CPB组(C组)、CPB+κ受体激动剂U50488H组(U组)和CPB+CaMKⅡ特异性抑制剂KN93+U50488H组(K组)。S组仅进行动静脉穿刺置管,其余各组建立无血预充心脏不停跳CPB模型。U组CPB前30 min时静脉注射U50488H 1.5 mg/kg;K组CPB前60 min时侧脑室注射10 μmol/L KN93 5 μl,CPB前30 min时静脉注射U50488H 1.5 mg/kg。术后第3天采用Morris水迷宫实验测试大鼠认知功能。然后处死大鼠取海马组织,采用Western blot法检测磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)、磷酸化CREB (p-CREB)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达水平,采用RT-PCR法检测CaMKⅡ、CREB、BDNF的mRNA表达水平。...     

氯胺酮对新生大鼠海马区G蛋白偶联受体30表达的影响

目的探讨氯胺酮对新生大鼠海马区G蛋白偶联受体30(G protein-coupled receptor 30, GPR30)表达的影响。方法实验一:随机选取20只健康雄性SD大鼠作为空白对照组(S组,n=20),在饲养1、3、7、14 d时各取出5只处死,采用免疫组化法检测大鼠海马区GPR30阳性细胞数。实验二:10只出生7 d健康雄性SD大鼠随机分为两组,生理盐水组(C组,n=5)和氯胺酮组(K组,n=5)。连续3 d腹腔注射生理盐水0.1 ml(C组)或氯胺酮75 mg/kg(K组),在末次给药后24 h处死,采用免疫组化法检测大鼠海马区cleaved caspase-3阳性细胞数,采用Western blot法检测海马区GPR30蛋白含量。结果与1 d和3 d比较,7 d和14 d S组大鼠海马区GPR30蛋白含量明显升高(P0.05);与7 d比较,14 d时S组大鼠海马区GPR30蛋白含量明显升高(P0.05)。与C组比较,K组海马区cleaved caspase-3阳性细胞数明显增多,GPR30蛋白含量明显降低(P0.05)。结论氯胺酮诱导发育期大鼠海马细胞凋亡可能与GPR30表达下调有关。     

α7nAChR激动剂对体外循环大鼠肠保护的机制：与肠神经胶质细胞活性的关系

目的评价α7烟碱型胆碱能受体(α7nAChR)激动剂对体外循环(CPB)大鼠肠保护的机制与肠神经胶质细胞(EGCs)活性的关系。方法清洁级健康成年雄性SD大鼠72只, 体重400～500 g, 按照随机数字表法分为3组(n=24):假手术组(S组)、CPB组(C组)和α7nAChR激动剂PHA568487+CPB组(P组)。P组腹腔注射PHA568487 0.8 mg/kg, 30 min后建立CPB模型。于CPB开始即刻(T0)、CPB 1 h(T1)和停CPB后2 h(T2)、停CPB后6 h(T3)时处死大鼠, 取肠组织, 观察病理学结果, Western blot法检测ZO-1、occludin及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、钙结合蛋白(S-100β蛋白)的表达;免疫组化法观察T2时GFAP阳性表达情况。结果与S组比较, C组和P组T1-3时GFAP和S-100β蛋白表达上调, ZO-1和occludin表达下调(P<0.05), GFAP表达阳性增加, 肠组织损伤加重;与C组比较, P组T1-3时GFAP、ZO-1、occludin表达上调, S-100β蛋白表达下调(...     

不同浓度七氟醚对新生大鼠性成熟期空间学习记忆功能的影响

目的 探讨新生7d大鼠接受不同浓度七氟醚麻醉后对其性成熟期(出生后55 d～60 d)空间学习记忆能力的影响. 方法 出生7d龄SD大鼠48只,体重12 g～16 g,雌雄各半,采用随机数字表法分为3组(每组16只):3％七氟醚吸入6h组(A组)、1.5％七氟醚吸入6h组(B组)和空白对照组(C组).新生大鼠接受麻醉后次日(8 d)每组各取8只,采用直接断头法处死,取大脑海马CA1区组织,利用比色法测定乙酰胆碱酯酶(acetylcholine esterase,AchE)及胆碱乙酰转移酶(cholineacetyhransferase,ChAT)的活性.剩余大鼠继续生长至性成熟期(55 d～60 d)时,先利用Morris水迷宫实验测试其空间学习记忆能力,实验结束后再测定大脑海马CA1区AchE及ChAT的活性. 结果 ①8d时:A组及B组AchE活性分别为(0.34±0.07) U/mg和(0.33±0.07)U/mg,均较C组增加(P＜0.01);A组及B组ChAT活性分别为(81±22) U/mg和(96±29) U/mg,均较C组降低(P＜0.01).②性成熟期时:Morris水迷宫实验中,A组和B组平均逃避潜伏期、原平台象限活动时间及穿越原平台次数与C组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);60d时,AchE活性、ChAT活性各组间差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 新生7dSD大鼠接受不同浓度七氟醚麻醉后可短暂性升高大脑海马CA1区AchE活性,降低ChAT活性表达,但不影响其发育至性成熟期时的空间学习记忆能力.     

沉默髓系细胞触发受体1基因对神经病理性痛大鼠的影响

目的探讨髓系细胞触发受体1(triggering receptor expressed on myeloid cells 1,TREM1)在大鼠神经病理性痛中的作用及可能机制。方法成年雄性SD大鼠,体重220~300 g,取鞘内置管成功大鼠48只,随机分为四组(n=12):对照组(S组)、神经病理性痛组(CCI组)、TREM1sh RNA组(RNAi组)和阴性慢病毒组(Virus组)。采用慢性坐骨神经压榨性损伤法(CCI)制备神经病理性痛模型。RNAi组于造模前1周鞘内注射p GLVU6/RFP/Puro-sh RNA 30μl(1×109IU/ml);Virus组、CCI组和S组分别鞘内注射等量阴性慢病毒和生理盐水。于造模前1 d和造模后1、3、7、14d测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。于造模后14 d痛阈测定结束后,处死大鼠,取L4-5节段脊髓组织,采用Western blot法测定脊髓TREM1、TLR4、My D88、IκBα和p-NF-κB p65蛋白含量,RT-PCR法测定脊髓IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达量。结果与S组比较,CCI组和Virus组TREM1蛋白含量明显增加(P0.05);与CCI组比较,RNAi组TREM1蛋白含量明显降低(P0.05)。与S组比较,CCI组、RNAi组和Virus组造模后各时点MWT和TWL明显降低(P0.05);脊髓TLR4、My D88和p-NF-κB p65蛋白含量明显增加,IκBα蛋白含量明显降低(P0.05);IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达量明显升高(P0.05)。与CCI组比较,RNAi组大鼠造模后各时点MWT和TWL明显升高(P0.05);脊髓TLR4、My D88和p-NF-κB p65蛋白含量明显降低,IκBα蛋白含量明显增加(P0.05);IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达量明显降低(P0.05)。结论干扰TREM1基因可以缓解大鼠神经病理性痛,其机制可能与抑制TLR4/My D88/NF-κB通路有关。     

神经病理性疼痛致抑郁大鼠海马促炎细胞因子含量的变化

目的观察神经病理性疼痛致抑郁大鼠海马促炎细胞因子含量的变化,并探讨其与抑郁严重程度的关系。方法成年雄性SD大鼠28只,随机分为两组:假手术组(Sham组)和保留性坐骨神经损伤组(SNI组),每组14只。于术前1d及术后7、14、21d测试机械痛阈值(MWT);于术前1~3d测试糖水偏好、强迫游泳实验基础值;术后21~23d进行糖水偏好实验、强迫游泳实验;行为学测试结束后取海马组织,采用ELISA法检测海马中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量,并对其与糖水偏好的相关性进行分析。结果与Sham组比较,SNI组大鼠在术后7、14、21d MWT明显降低(P0.001),术后21d糖水偏好明显降低(P0.01),术后23d强迫游泳不动时间明显延长(P0.05);术后21d海马组织IL-6、TNF-α含量明显升高(P0.05或P0.01),而IL-1β含量差异无统计学意义;SNI组海马组织IL-1β(r2=0.60,P0.01)、IL-6(r2=0.55,P0.01)、TNF-α(r2=0.60,P0.01)含量与糖水偏好呈明显负相关。结论神经病理性疼痛致抑郁大鼠海马促炎细胞因子IL-6、TNF-α含量升高,且与抑郁严重程度呈负相关。     

瞬时受体电位阳离子通道M7在海马神经元损伤中的作用

目的探讨瞬时受体电位阳离子通道M7(TRPM7)在七氟醚预处理缓解缺血缺氧性损伤(OGD)后海马神经元损伤中的作用。方法出生1d的SD大鼠,提取海马神经元,将其随机分为五组:对照组(C组)、七氟醚预处理组(Sev组)、OGD组、七氟醚预处理+OGD组(SD组)和七氟醚预处理+缓激肽(TRPM7特异性激动剂)+OGD(B组)。缺糖缺氧1.5h后复糖复氧,再正常培养24h以制备OGD模型。C组海马神经元仅做正常培养;Sev组海马神经元行2%七氟醚预处理1h;OGD组海马神经元仅制备OGD模型;SD组海马神经元行2%七氟醚预处理1h,24h后制备OGD模型;B组神经元于七氟醚预处理前15 min在培养基中加入缓激肽(TRPM7特异性激动剂,终浓度200μmol/L),之后行2%七氟醚预处理1h,24h后制备OGD模型。正常培养24h后,分别采用MTT法检测神经元相对存活指数,TUNEL凋亡染色法检测神经元凋亡率,Western blot检测TRPM7蛋白含量,实时定量PCR法检测TRPM7 mRNA表达水平,ELISA法测定神经元IL-1β和TNF-α蛋白含量。结果 OGD组海马神经元TRPM7蛋白含量及mRNA表达水平、凋亡率、IL-1β、TNF-αmRNA表达水平及上清蛋白含量明显高于C组(P0.05),而相对存活指数明显降低于C组(P0.05)。SD组海马神经元TRPM7蛋白含量及mRNA表达水平、凋亡率、IL-1β、TNF-αmRNA表达水平及上清蛋白含量明显低于OGD组(P0.05),而相对存活指数明显高于OGD组(P0.05)。B组海马神经元TRPM7蛋白含量及mRNA表达水平、凋亡率、IL-1β、TNF-αmRNA表达水平及上清蛋白含量明显高于SD组(P0.05),而相对存活指数明显低于SD组(P0.05)。结论七氟醚预处理可通过缓解神经元TRPM7过度表达,减轻缺血缺氧性损伤后海马神经元凋亡和炎症反应。     

血源性单核细胞在体外循环诱发大鼠术后认知功能障碍中的作用

目的评价血源性单核细胞在体外循环(CPB)诱发大鼠术后认知功能障碍(POCD)中的作用。方法 SPF级健康雄性SD大鼠40只,体重350～400 g,11～12周龄。采用随机数字表法分为4组(n=10):假手术组(S组)、CPB组(C组)、CPB+PBS脂质体组(P组)和CPB+氯磷酸二钠脂质体组(L组)。C组、P组和L组行CPB 60 min,分别于CPB前48和24 h时,经尾静脉注射等容量生理盐水、PBS脂质体4 μl/g和氯磷酸二钠脂质体4 μl/g。CPB前大隐静脉采血,采用流式细胞术检测血源性单核细胞清除率。CPB后7 d时,采用水迷宫实验测试认知功能;然后腹主静脉采血,采用ELISA测定血清炎症因子(IL-6、TNF-α、和IL-1β)和脑损伤标志物(S100β蛋白和NSE)的水平。结果与S组比较,C组、P组和L组血清IL-1β、IL-6和TNF-α浓度升高,血清S100β蛋白和NSE水平升高,逃避潜伏期延长,穿越平台次数减少(P<0.05);与C组比较,L组血源性单核细胞清除率降低,血清S100β水平升高,逃避潜伏期延长,穿越平台次数减少(P<0.05),P...     

加速康复外科策略对肝切除术患者术后早期认知功能的影响

目的探讨加速康复外科(ERAS)策略对肝切除术患者术后早期认知功能的影响。方法筛选96例原发性肝癌择期行肝部分切除术患者,随机分为两组,每组48例。C组实施常规围术期处理及麻醉方法,ERAS组实施ERAS策略对围术期处理及麻醉方法进行优化。于术前1d(T0)、术后1d(T4)、3d(T5)、7d(T6)应用简易智能量表(MMSE)评估两组患者认知功能,于T0、术后30min(T1)、6h(T2)、12h(T3)、T4取患者静脉血检测血清S100β蛋白、神经元特异性烯醇化酶(NSE)含量和IL-1β、IL-6及TNF-α表达量。结果与C组比较,T4、T5时ERAS组MMSE评分明显升高,T1、T2时S100β蛋白、IL-1β、IL-6明显降低,T2、T3时NSE明显降低,T1~T3时TNF-α明显降低(P0.05)。与T0时比较,T4、T5时C组患者MMSE评分明显降低,T4时ERAS组MMSE评分明显降低(P0.05)。两组T1~T3时S100β蛋白明显升高,T2~T4时NSE含量明显升高,T1~T4时IL-1β、IL-6、TNF-α表达量均明显升高(P0.05)。结论 ERAS策略应用于肝癌肝切除术患者可改善患者术后认知功能,其机制可能与降低患者术后血清中S100β蛋白、NSE、IL-1β、IL-6及TNF-α的含量有关。     

1,6-二磷酸果糖对肝脏冷缺血-再灌注时肺的保护作用

目的评价1,6-二磷酸果糖(FDP)对大鼠肝脏冷缺血-再灌注时肺的保护作用。方法健康雄性SD大鼠24只,周龄8～10周,体重200～250g,采用随机数字表法将其分为三组,每组8只。O组大鼠仅进行单纯开关腹手术,游离相应血管;K组大鼠采用肝脏冷缺血-再灌注模型手术,不给予任何干预措施;F组大鼠采用肝脏冷缺血-再灌注模型,在切皮时经睾丸静脉给予FDP 250mg/kg。于再灌注后6h收集血清和肺组织标本,利用ELISA和免疫组化检测TNF-α和IL-6表达水平;测定肺组织MDA和SOD含量,光镜下观察肺组织病理学结果。结果与O组比较,K组和F组大鼠血清TNF-α和IL-6浓度及肺组织MDA含量均明显升高(P0.05),肺组织SOD含量明显降低(P0.05);与K组比较,F组血清TNF-α和IL-6浓度及肺组织MDA的含量均明显降低(P0.05),肺组织SOD含量均明显升高(P0.05)。免疫组化染色显示O组TNF-α和IL-6表达较K组和F组明显降低,与K组比较,F组TNF-α和IL-6的表达明显降低。O组肺组织形态结构未见明显异常,K组肺泡腔内渗出明显,大量的炎症细胞浸润,F组肺组织损伤较K组减轻。结论 1,6-二磷酸果糖可明显减轻大鼠肝脏冷缺血-再灌注后的急性肺损伤。     

长链非编码RNAβ分泌酶1反义转录物在七氟醚诱发老年大鼠认知功能下降中的作用

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)β分泌酶1反义转录物(BACE1-AS)在七氟醚诱发老年大鼠认知功能下降中的作用。方法 SPF级健康雄性SD老年大鼠64只,18月龄,体重480～580 g。采用随机数字表法分为四组:对照组(C组)、七氟醚组(S组)、七氟醚+阴性对照质粒组(SN组)和七氟醚+BACE1-AS抑制剂(siRNA-BACE1-AS)组(ST组),每组16只。SN组和ST组分别侧脑室注射阴性对照质粒和siRNA-BACE1-AS,C组和S组注射等体积PBS溶液,注射后1 d C组吸入30%氧气6 h, S组、SN组和ST组吸入3.6%七氟醚与30%氧气的混合气体6 h。气体吸入后1 d,采用水迷宫实验测实验第1～5天逃避潜伏期和实验第6天穿越平台次数。水迷宫实验结束后1 h内处死大鼠,取海马组织,采用ELISA法检测海马组织TNF-α、IL-1β、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)浓度,可见分光光度计法检测海马组织caspase-3活性,Western blot法检测海马组织Bax、Bcl-2和BACE1蛋白含量,RT-qPCR法检测海马组织lncRNA BACE1-AS、miR-124和BACE1 mRNA表达量,TUNEL法测定海马组织神经细胞凋亡百分比,苏木素伊红染色法观察海马组织病理结构。结果与C组比较,S组、SN组和ST组水迷宫实验第3～5天逃避潜伏期明显延长(P0.05),实验第6天穿越平台次数明显减少(P0.05),海马组织TNF-α、IL-1β和MDA浓度、BACE1和Bax蛋白含量、lncRNA BACE1-AS和BACE1 mRNA表达量、凋亡细胞百分比明显升高(P0.05),SOD浓度、Bcl-2蛋白含量、miR-124 mRNA表达量明显降低(P0.05),caspase-3活性明显增强(P0.05)。与S组比较,ST组水迷宫实验第3～5天逃避潜伏期明显缩短(P0.05),实验第6天穿越平台次数明显增多(P0.05),海马组织TNF-α、IL-1β和MDA浓度、BACE1和Bax蛋白含量、lncRNA BACE1-AS和BACE1 mRNA表达量、凋亡细胞百分比明显降低(P0.05),SOD浓度、Bcl-2蛋白含量、miR-124 mRNA表达量明显升高(P0.05),caspase-3活性明显减弱(P0.05)。S组和SN组上述指标差异均无统计学意义。结论长链非编码RNAβ分泌酶1反义转录物参与七氟醚诱导老年大鼠认知功能下降,其机制与神经细胞炎症、氧化应激损伤、调控miR-124和BACE1表达和促进细胞凋亡有关。     

七氟醚麻醉对大鼠海马α7烟碱型乙酰胆碱受体、胆碱酯酶和胆碱乙酰移位酶蛋白含量的影响

目的研究七氟醚麻醉对大鼠海马α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAchR)、胆碱酯酶(AChE)、胆碱乙酰移位酶(ChaT)蛋白含量的影响。方法健康SD新生大鼠120只,雌雄不拘,1周龄,随机分为五组:空白组、空氧组、七氟醚组(SEV组)、α7nAchR激动剂组(PNU组)和α7nAchR拮抗剂组(MLA组),每组24只。空白组自由喂养;空氧组吸入60%的氧气即运载气体(1 L/min O_2+1 L/min空气)2 h;SEV组吸入3.4%七氟醚+运载气体2 h;PNU组单次腹腔注射α7nAchR激动剂PNU-282987,24 h后吸入3.4%七氟醚+运载气体2 h;MLA组单次腹腔注射α7nAchR拮抗剂甲基牛扁亭,24 h后吸入3.4%七氟醚+运载气体2 h。麻醉清醒后2 h、1周、4周取海马组织,采用Western blot法测定α7nAchR、AChE、ChaT蛋白含量。结果麻醉清醒后2 h SEV组、PNU组、MLA组α7nAchR蛋白含量明显低于空氧组(P0.05);PNU组、MLA组AChE蛋白含量明显高于空氧组(P0.05);SEV组、PNU组、MLA组ChaT蛋白含量明显低于空氧组(P0.05)。麻醉清醒后1周空白组、SEV组、PNU组海马中α7nAchR蛋白含量明显高于空氧组(P0.05),MLA组α7nAchR蛋白含量明显低于空氧组(P0.05);空白组、PNU组AChE蛋白含量明显高于空氧组(P0.05);空白组ChaT蛋白含量明显高于空氧组,SEV组ChaT蛋白含量明显低于空氧组(P0.05)。麻醉清醒后4周五组AChE蛋白含量差异无统计学意义;SEV组α7nAchR蛋白含量明显高于空白组,PUN组和MLA组明显低于空白组(P0.05);空白组、SEV组和PNU组ChaT蛋白含量明显低于空氧组,MLA组明显高于空氧组(P0.05)。结论吸入七氟醚后能抑制ChaT、α7nAChR;对AChE并无直接作用;α7nAChR激动剂能有效缓解吸入七氟醚对α7nAChR、ChaT抑制作用,并在1周左右达到高峰;氧浓度在60%左右能增加α7nAChR蛋白含量,一定程度对抗七氟醚抑制作用。     

糖尿病对大鼠胫骨前肌烟碱型乙酰胆碱受体的影响

目的 探讨糖尿病对大鼠胫骨前肌烟碱型乙酰胆碱受体（nAChR）表达和功能的影响。方法SPF级成年雄性SD大鼠48只,6～8周龄,体重200～250g。采用随机数字表法将大鼠分为四组：正常对照组（NC组）、糖尿病2周组（D2组）、糖尿病4周组（D4组）和糖尿病8周组（D8组）,每组12只。取大鼠胫骨前肌,采用Western blot法检测ε-nAChR、γ-nAChR及α7-nAChR蛋白含量,RT-PCR法检测ε-nAChR、γ-nAChR及α7-nAChR mRNA表达量。采用I125-α-银环蛇毒素对运动终板nAChR进行放射性标记,根据放射性强度值计算运动终板nAChR的数目、密度和终板面积（ESA）。检测罗库溴铵预处理的胫骨前肌运动终板,记录运动终板nAChR与罗库溴铵浓度为2.5、5.0、7.5、10.0 μg/ml时的结合力。
结果 与NC组比较,D2组γ-nAchR和α7-nAchR mRNA表达量明显升高,ESA明显增大（P<0.05）;D4组γ-nAchR、α7-nAchR蛋白含量明显升高,ε-nAchRh、γ-nAchR和α7-nAchR mRNA表达量均明显升高,ESA明显增大,罗库溴铵浓度为2.5、5.0 μg/ml时nAChR与罗库溴铵结合力均明显降低（P<0.05）;D8组ε-nAchR、γ-nAchR、α7-nAchR蛋白含量和mRNA表达量均明显升高,胫骨前肌运动终板nAChR数目明显增多、密度明显增大、ESA明显增大,罗库溴铵浓度为2.5、5.0、7.5、10.0 μg/ml时nAChR与罗库溴铵结合力均明显降低（P<0.05）。与D2组比较,D4组ε-nAchR和γ-nAchR蛋白含量均明显升高,ε-nAchR和α7-nAchR mRNA表达量明显升高,nAChR数目明显增多、ESA明显增大,罗库溴铵浓度为5.0 μg/ml时nAChR与罗库溴铵结合力均明显降低（P<0.05）;D8组ε-nAchR、γ-nAchR、α7-nAchR蛋白含量和mRNA表达量均明显升高,nAChR数目明显增多、密度明显增大、ESA明显增大,罗库溴铵浓度为2.5、5.0、7.5、10.0 μg/ml时nAChR与罗库溴铵结合力均明显降低（P<0.05）。与D4组比较,D8组ε-nAch、γ-nAchR蛋白含量和mRNA表达量均明显升高,nAChR数目明显增多、密度明显增大,罗库溴铵浓度为7.5 μg/ml时nAChR与罗库溴铵结合力明显降低（P<0.05）。
结论 糖尿病可影响nAChR的表达和功能,使胫骨前肌γ-nAChR和α7-nAChR蛋白含量升高,ε-nAChR蛋白含量先降低后逐渐升高,ε-nAChR、γ-nAChR和α7-nAChR mRNA表达量升高,运动终板nAChR数目增多、密度增大、与罗库溴铵结合力降低。     

毒扁豆碱对异氟醚麻醉大鼠炎性反应和认知功能的影响

目的探讨毒扁豆碱对异氟醚麻醉大鼠认知功能的影响及其机制。方法 2月龄SD大鼠80只,随机分为四组,每组20只。对照组(C组)吸入含有30%氧气的空氧混合气体6h;异氟醚组(I组)吸入1.4%的异氟醚6h;毒扁豆碱+异氟醚组(PI组)与毒扁豆碱组(P组)腹腔注射毒扁豆碱100μg/kg,每8小时一次,共3次。首次给药后,PI组吸入1.4%异氟醚6h;P组吸入同浓度载气6h。麻醉结束行动脉血气分析,12h后取海马组织,ELISA法检测TNF-α、IL-1β、IL-6含量,RTPCR法检测capase-3mRNA的表达。光镜下观察海马CA1区锥体细胞形态学变化。麻醉后第2~7天评估认知功能。结果四组大鼠动脉血气指标、血糖和海马TNF-α含量差异均无统计学意义。与C组和P组比较,I组和PI组大鼠海马IL-1β、IL-6含量、capase-3mRNA明显升高,第4~6天逃避潜伏期明显延长,探索时间明显缩短(P0.05)。与I组比较,PI组大鼠海马IL-1β、IL-6含量、caspase-3mRNA表达明显降低,第4~6天逃避潜伏期明显缩短,探索时间明显延长(P0.05)。结论毒扁豆碱改善了异氟醚麻醉引起的大鼠认知功能损害,其机制可能与抑制海马炎性反应及神经元凋亡有关。     

七氟醚对心脏瓣膜置换术患者NF-κB和TNF-α表达的影响

目的 观察七氟醚对心脏瓣膜置换术患者核因子κB(NFκB)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响,探讨其心脏保护作用的可能机制.方法 30例拟行心脏瓣膜置换术患者,随机均分为七氟醚组(S组)和对照组(C组).用流式细胞仪检测围术期血NF-κB活性,用酶联免疫法(ELISA)检测围术期血浆TNF-α浓度.结果 心肺转流(CPB)后两组NF-κB活性和TNF-α水平均较CPB前显著增加(P＜0.05).CPB后各时点NF-κB和TNF-α水平,C组显著高于S组(P＜0.05).结论 七氟醚可能通过抑制NF-κB的表达与活性,进而降低TNF α浓度,减轻了CPB时的全身炎症反应而发挥心脏保护作用.