野生与栽培秦艽药材HPLC指纹图谱及化学模式识别研究

摘要：目的:建立野生和栽培秦艽药材的HPLC指纹图谱,结合化学模式识别方法对两者进行判别,为不同来源秦艽药材鉴别和质量评价提供依据。方法:利用HPLC法,测定18批不同产地野生与栽培秦艽药材的HPLC指纹图谱,建立指纹图谱共有模式,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012A版）计算相似度,运用聚类分析（HCA）和最小偏二乘法-判别分析（PLS-DA）对其进行模式识别研究。结果:建立了野生与栽培秦艽药材HPLC指纹图谱共有模式,标定了19个共有峰,18批不同产地野生与栽培秦艽药材指纹图谱与对照指纹图谱的相似度均>0.93。HCA、PLS-DA能将野生与栽培秦艽药材明确区分,马钱苷酸、獐牙菜苷、6’-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐牙菜苦苷等7个成分是导致二者差异的主要标记物。结论:建立的秦艽药材指纹图谱特征性强,结合化学模式识别方法可有效评价秦艽药材质量以及区分其野生与栽培品,为秦艽药材的质量控制和化学计量分类提供参考依据。     

川贝母的HPLC指纹图谱研究

目的 比较不同植物来源川贝母成分的指纹特征.方法 采用HPLC-ELSD法检测.结果 对8种植物来源共14个药材样品的HPLC-ELSD图谱进行了分析比较,发现川贝母类生药的指纹特征及与其他贝母类生药成分指纹的区别.结论 川贝母的成分指纹图谱可用于川贝母的理化鉴别和质量控制.     

不同产地桑叶药材UPLC指纹图谱研究

目的 建立不同产地桑叶UPLC指纹图谱.方法 采用ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×50.0 mm,1.7 μm）色谱柱,流动相为甲醇-0.2％磷酸水溶液,梯度洗脱,检测波长为358 nm,流速为0.6 ml/min,柱温40℃,进样体积1μl.结果 建立了桑叶专属性的UPLC指纹图谱,确定了15个共有峰,不同产地桑叶样品具有较好的相似度.结论 UPLC指纹图谱方法重复性好,简便可靠,可用于桑叶的快速鉴别,可以为桑叶的质量控制和市场应用提供依据.     

湖北贝母的HPLC指纹图谱分析

目的建立湖北贝母的指纹图谱分析方法。方法采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法以Hypersil ODS(250 mm×4.6 mm ID，5 μm)为色谱柱；流动相：甲醇(含0.05%三乙胺)-水梯度洗脱；流速：1.0 mL·min^-1；记录时间：60 min；以蒸发光散射检测器(ELSD)检测，检测条件：漂移管温度75 ℃，氮气流速1.9 L·min^-1。结果用梯度洗脱得到的色谱图各色谱峰分离较好，达到指纹图谱要求。结论为更好的控制湖北贝母的内在质量提供了可靠的分析方法。     

黄芪及相关药材HPLC-ELSD色谱指纹图谱研究

目的建立黄芪及相关药材的高效液相一蒸发光散射检测器（HPLC—ELSD）色谱指纹图谱的评价方法。方法确定实验条件并进行方法学考察,色谱条件：依利特HypersilODS2色谱柱（4．6mm×250mm,5μm）;流动相：A相为乙腈,B相为水,梯度洗脱;流速1．Oml／min;柱温为室温;进样量20μl。ELSD检测器：漂移管温度40℃,载气（空气）压力3．5Bar,增益值：7。采用国家药典委员会颁发的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版》软件进行指纹图谱分析。结果黄芪药材HPLC—ELSD色谱指纹图谱具有较好的稳定性、精密度和重复性,相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于5．0％。标定8个共有峰,相似度计算结果均大于0．85,可以同多序岩黄芪和梭果黄芪进行有效区分。结论本研究将有助于加强黄芪药材的质量控制,能够有效的区分黄芪药材同其他相关样品。     

黄芪及相关药材HPLC-ELSD色谱指纹图谱研究

目的建立黄芪及相关药材的高效液相-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)色谱指纹图谱的评价方法。方法确定实验条件并进行方法学考察,色谱条件:依利特HypersilODS2色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:A相为乙腈,B相为水,梯度洗脱;流速1.0ml/min;柱温为室温;进样量20μl。ELSD检测器:漂移管温度40℃,载气(空气)压力3.5Bar,增益值:7。采用国家药典委员会颁发的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版》软件进行指纹图谱分析。结果黄芪药材HPLC-ELSD色谱指纹图谱具有较好的稳定性、精密度和重复性,相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于5.0%,标定8个共有峰,相似度计算结果均大于0.85,可以同多序岩黄芪和梭果黄芪进行有效区分。结论本研究将有助于加强黄芪药材的质量控制,能够有效的区分黄芪药材同其他相关样品。     

血栓心脉宁片的HPLC-ELSD指纹图谱研究

目的:建立血栓心脉宁片的高效液相色谱(HPLC)-蒸发光散射检测器(ELSD)指纹图谱。方法:色谱柱为Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm),柱温为40℃,流动相为乙腈-1%冰醋酸(梯度洗脱),流速为1.0ml/min,采用ELSD进行测定;应用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)进行评价。结果:10批血栓心脉宁片的HPLC-ELSD指纹图谱有17个共有峰,精密度、重复性、稳定性试验中各共有峰的相对峰面积与相对保留时间的RSD均<4%;10批样品的相似度在0.880～1.000之间。结论:本方法简便、准确、重复性好,可用于血栓心脉宁片的质量控制,可为血栓心脉宁片的深入研究提供基础。     

大孔吸附树脂纯化富集伊贝母总生物碱的工艺研究

目的 优选大孔吸附树脂分离纯化伊贝母中总生物碱的工艺条件。方法 以伊贝母总生物碱的比吸附量、比解吸量、总生物碱含量为考察指标,通过静态、动态试验考察12种不同类型大孔吸附树脂对伊贝母总生物碱纯化效果的影响,通过单因素试验优选上样液质量浓度、上样量、洗脱剂种类及用量等工艺参数。结果 HPD-100 型大孔树脂对伊贝母总生物碱有较好的富集纯化性能,最佳工艺条件：径高比为1∶9的树脂柱,上样药液质量浓度为0.25 g·mL^-1,pH 值为11,最大上样量为15 mL,8倍柱体积水洗除杂,9倍柱体积的70%乙醇洗脱总生物碱,洗脱流速1 mL·min^-1。按照此工艺条件纯化的伊贝母总生物碱含量达到70.50%,收率达到4.30%。结论 纯化工艺简便、稳定,适合伊贝母总生物碱的纯化。     

对历版《中国药典》所载川贝品种的探讨

目的:探讨历版《中国药典》所载川贝药材的商品分类。方法:先用显微镜镜检松贝、青贝粉末,再分析川贝4个来源的化学成分和各来源的市场价格。结果:从显微镜镜检结果来看,松贝、青贝的区别比较明显;从化学成分分析结果来看,川贝4个品种的区别亦很明显,提示其药效存在差异;从市场需求角度来看,松贝、炉贝的价格悬殊。结论:川贝母不应当只指一种药材,而应是"一类"药材,宜将"川贝母"一分为四:分别以卷叶贝母、暗紫贝母(松贝)、甘肃贝母(岷贝)、炉贝母各列专条。     

平贝母和给药平贝母后大鼠尿液内化学成分LC—MSn分析

目的建立平贝母化学成分的液质联用分析方法,并以此快速指认大鼠给药平贝母后尿液内化学成分。方法运用LC—MSn联用技术得到贝母水煎液内各化合物的总离子流图和多级质谱图,结合同种类化合物标准品质谱裂解规律,从而对各色谱峰进行鉴定,并以此指认尿液内药源成分。结果从平贝母水煎液中鉴定出11个化合物,从大鼠给药平贝母尿液中鉴定出8种化合物。结论HPLC—MSn法可用于平贝母中异甾体类生物碱的结构分析,并可用于快速推断给药平贝母后尿液内异甾体类生物碱成分,为建立准确的质量评价方法和生物样品快速指认提供了参考。     

酸性染料比色法测定川贝母中贝母素甲的含量

建立川贝母中贝母素甲含量测定的方法。利用贝母素甲在酸性条件下与溴甲酚绿定量结合,在411nm波长处有最大吸收。贝母素甲在14．78μg·ml~(-1)～133．02μg·ml~(-1)范围内线性关系良好,平均回收率为99．2%,RSD为1．79%。该方法快速、准确,可用于川贝母中贝母素甲的含量测定。     

聚酰胺薄膜色谱鉴别栽培的川贝母

目的建立栽培川贝母的薄层鉴别方法。方法将样品的70%甲醇提取物水解并进一步精制后,在聚酰胺薄膜上展开,置365 nm荧光下观察。结果聚酰胺薄膜色谱上可得到栽培川贝母特有的荧光斑点。结论该鉴别栽培川贝母专属性较强,可区别栽培川贝母和其他贝母。     

伊贝母中活性生物碱的HPLC—ELSD分析

目的:建立贝母类生物碱及生物碱苷的高效液相色谱-蒸发光散射检测分析方法,为贝母类药材的质量控制提供准确而简捷的方法。方法:以 Nova-Pak C_(18)柱(15mm×3.9 mm,10μm)为分析柱。流动相:梯度洗脱,0～8 min,乙腈-水-二乙胺(60:40:0.3);8～25 min,线性梯度,乙腈的浓度从60％线性提升至90％;25～30 min,流动相的组成保持乙腈-水-二乙胺(90:10:0.3)不变。流速1.O mL·min~(-1)。以蒸发光散射检测器(ELSD)检测,ELSD的检测条件:气化温度,75℃,氮气压力210 kPa,对伊贝母中的主要生物碱及生物碱苷进行梯度洗脱和检测。结果:在此色谱条件下各生物碱及生物碱苷均同时达到了最佳的基线分离,平均回收率均在95％～105％之间,本法成功地分析了伊贝母中的生物碱成分。结论:本法重复性好、准确性高,适宜于贝母药材及制剂的质量控制,为贝母的内在质量评价又增添了一个可供选择的方法;通过分析,首次发现伊贝母中生物碱苷类的含量明显高于非苷类生物碱的含量。     

HPLC测定贝母中尿嘧啶和3种核苷的含量及其在品种鉴定中的应用

目的建立测定浙贝、川贝、平贝和新疆贝母中尿嘧啶、尿苷、乌苷、腺苷含量和鉴定该4种药材品种的高效液相色谱法。方法色谱柱为Alltima C18（4．6mm×250mm,5μm）;流动相为甲醇-水溶液;梯度洗脱,洗脱条件为0．0min→5．0min→10．0min→20．0min→30．0min→40．0min,甲醇：1％→1％→5％→12％→24％→31％;流速为0．8mL·min^-1;检测波长为260nm;柱温为25℃。进样体积为20μL。结果尿嘧啶和3种核苷均达到基线分离,线性良好,4种贝母中指标成分含量差异明显。结论该方法快速、准确、重复性好,可作为贝母类药材的核苷类成分的含量测定方法,同时亦可用于准确、可靠的鉴定该4种贝母药材。     

平贝母药材质量控制中适宜测定指标的研究

目的:通过对平贝母中平贝碱甲、贝母素甲、贝母素乙3个单体生物碱成分以及总生物碱测定结果的比较研究,确定可控制平贝母质量的合理测定指标。方法:采用 HPLC—MS 法,色谱柱为 Alltima C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.03%二乙胺(30∶70),流速:1 mL·min~(-1);质谱离子源为 ESI;检出模式为正离子检测;电离电压为3.2 kV;电喷雾接口干煤气(N_2)流速为300 L·h~(-1),离子源温度为105℃,锥孔电压为30 V;脱溶剂温度为150℃。选择离子质量数:464.7(平贝碱甲)、432.7(贝母素甲)、430.7(贝母素乙)。测定平贝母中平贝碱甲、贝母素甲、贝母素乙的含量。另以三氯甲烷-甲醇(4∶1)混合溶剂提取总生物碱,以溴麝香草酚蓝比色法在 pH 4.2,紫外吸收波长413 nm 下测定平贝母中总生物碱的含量,结果:LC—MS 法测定平贝母中平贝碱甲、贝母素甲、贝母素乙的含量分别为5～19,1～3,2～3μg·g~(-1);溴麝香草酚蓝比色法测定总生物碱含量以贝母素乙计为600～1000 μg·g~(-1)。结论:平贝母中单-生物碱成分含量太低,不宜作为平贝母药材的质量控制指标,以溴麝香草酚蓝比色法测定总生物碱含量可更客观反映平贝母药用物质情况,更适用于平贝母药材的质量控制。     

Quality assessment of Fritillariae Thunbergii Bulbus sold in Taiwan markets using a validated HPLC-UV method combined with hierarchical clustering analysis

The present paper describes the development of a high performance liquid chromatography-ultraviolet (HPLC-UV) detection method for quantitative determination of peimine and peiminine in Fritillariae Thunbergii Bulbus (FTB). Separation was achieved using a conventional XBridge™Shield RP 18 column (250 mm × 4.6 mm, internal diameter 3.5 μm) with photodiode array detection at 190–400 nm for UV spectra and 220 nm for quantification. The mobile phase consisted of (A) 0.03% diethylamine aqueous solution and (B) acetonitrile eluted by an isocratic procedure at 45:55 (A:B) over 25 minutes. The method was validated for linearity, limits of detection (LOD) and quantification (LOQ), inter- and intra-day precisions, repeatability, stability, and recovery. All the validation results were satisfactory. The developed method was then applied to assay the contents of the two chemical markers in all the FTB samples collected. Based on the contents of the two analytes, hierarchical clustering analysis (HCA) was performed to reveal the similarities and differences of the samples.     

不同产地浙贝母多糖含量的比较

目的 测定磐安、宁波和江苏海门3个产地的浙贝母中的多糖含量,对比分析不同产地浙贝母中多糖的相关性。方法 采用可见光分光光度法测定不同产地浙贝母多糖含量。结果 磐安浙贝母的多糖含量为0.90%,宁波产地的多糖含量为0.78%,江苏海门的多糖含量为0.85%。结论 磐安浙贝母的多糖含量最高,宁波产地的浙贝母鳞茎多糖含量最低。本实验为浙贝母多糖的利用提供实验依据。