依帕司他对糖尿病大鼠肾脏醛糖还原酶活性、细胞凋亡及超微结构的影响

目的:研究醛糖还原酶(AR)、凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax与糖尿病肾病的关系,探讨醛糖还原酶抑制剂(ARIs)依帕司他对糖尿病肾病的治疗作用。方法:雄性Wistar大鼠30只,随机平均分为3组:正常对照组、糖尿病模型组和依帕司他(10 mg.kg-1.d-1)治疗组,模型组和依帕司他组腹腔注射链脲佐菌素65 mg.kg-1诱发糖尿病。16周后,处死大鼠,分离晶体和肾脏,测定组织AR活性,观察Bcl-2和Bax的表达,取部分肾皮质电镜细胞计量、观察细胞凋亡的形态学变化。结果:与正常对照组相比,糖尿病模型组肾脏皮质AR活性明显升高(P<0.01),依帕司他治疗组AR活性明显较模型组降低(P<0.01),而血糖无明显变化。糖尿病模型组肾脏Bcl-2和Bax蛋白表达增加,依帕司他治疗组的Bcl-2蛋白表达较模型组增多,而Bax蛋白表达较模型组减少。透射电镜下见糖尿病模型组肾脏肾小管上皮细胞呈典型的凋亡形态学改变,依帕司他治疗组大鼠肾组织细胞凋亡改变明显减轻。糖尿病模型组肾小球基底膜增厚,系膜区域扩大,治疗组病变减轻。结论:AR过度激活可能通过促进Bcl-2和Bax蛋白的表达诱导细胞凋亡,而参与DN的发生与发展。依帕司他通过抑制醛糖还原酶活性,调节Bax和Bcl-2的表达抑制细胞凋亡,改善糖尿病大鼠肾脏结构与功能。     

依帕司他对实验性糖尿病大鼠膀胱内醛糖还原酶活性、一氧化氮含量及超微结构的影响

为研究醛糖还原酶(AR)、一氧化氮(NO)与糖尿病膀胱病(DCP)的关系,探讨醛糖还原酶抑制剂(AR Is)依帕司他对DCP的治疗作用,将雄性SD大鼠60只随机平均分为3组:正常对照组、糖尿病模型组和依帕司他治疗组,模型组和依帕司他组腹腔注射链脲佐菌素(STZ)50 mg.kg-1诱发糖尿病。依帕司他组造模后灌胃给药,剂量10 mg.kg-1.d-1,共8周。8周后,麻醉后处死大鼠,分离膀胱,测定组织AR活性、NO含量及一氧化氮合酶(NOS)活性,取部分膀胱全层组织行电镜检查、观察组织细胞的形态学变化。结果表明,与正常对照组相比,模型组膀胱组织内AR活性明显升高(P<0.01),依帕司他组AR活性较模型组明显降低(P<0.01),而血糖变化无统计学意义(P>0.05)。糖尿病模型组膀胱内NO含量增加,NOS活性均明显高于正常鼠(P<0.01),依帕司他组的NO含量和NOS活性明显低于模型组(P>0.05)。电镜下见模型组膀胱逼尿肌细胞出现排列紊乱,膀胱黏膜层增厚,炎细胞浸润明显,细胞器部分呈典型的凋亡形态学改变。依帕司他组大鼠膀胱组织形态学损害明显减轻。结论:AR过度活化可能通过促进NO的含量增高引起膀胱细胞损害,而参与DCP的发生与发展。依帕司他通过抑制AR活性,调节NO含量变化及NOS活性,减轻氧化应激反应,从而抑制细胞凋亡,改善糖尿病大鼠膀胱组织结构与功能。     

依帕司他的合成

对醛搪还原酶抑制剂依帕司他的合成工艺作了改进，使中间体绕丹宁乙酸的收率提高到７６．４％。     

阿托伐他汀与依帕司他联用抑制大鼠血管再狭窄

目的 评价醛糖还原酶(AR)在大鼠再狭窄血管中的表达,探讨AR表达与损伤血管内膜增生之间的关系,并进一步探索阿托伐他汀和依帕司他联用对再狭窄血管中AR及核转录因子(NF)-κB表达及内膜增生的抑制作用.方法 40只健康雄性SD大鼠随机分为手术未干预组、假手术组、阿托伐他汀组、依帕司他组和阿托伐他汀+依帕司他组.除假手术组外均以通气-干燥法损伤右侧颈总动脉,并以左侧颈总动脉为对照.行苏木素-伊红(HE)染色观察左、右颈总动脉内、中膜增生情况,计算内、中膜面积及其比值,以荧光原位杂交及免疫组化检测AR及NF-κB的表达.结果 损伤血管术后1周内膜增生明显,术后2周进一步加重;AR及NF-κB表达强于对照组.与手术未干预组相比,阿托伐他汀组、依帕司他组、阿托伐他汀+依帕司他组血管内膜面积、血管内膜与中膜面积比值均明显降低(P<0.01),AR及NF-κB表达也显著降低(P<0.01),且均以阿托伐他汀+依帕司他组最为显著.结论 阿托伐他汀和依帕司他联用可抑制AR和NF-κB表达,抑制血管内膜的增生及冉狭窄形成.     

依帕司他片对糖尿病性周围神经病的影响

为了研究醛糖还原酶抑制剂依帕司他对糖尿病性周围神经病变的影响,我院自2011年1月至2012年12月,对52例糖尿病并发周围神经病变的患者予以依帕司他片50mg,3次/d口服,12周为一疗程,治疗前后测定神经传导速度的变化,选择正中神经,尺神经、腓总神经为测定神经,结果显示总有效率达92.65%。     

依帕司他与槲皮素对3-脱氧葡萄糖醛酮还原酶活性的影响

目的观察依帕司他与槲皮素对3 脱氧葡萄糖醛酮（3 DG）还原酶活性的影响。方法采用体外3 DG还原酶反应体系,应用紫外分光光度计（λ＝530 nm）检测底物3 DG剩余量反映酶活性。结果反应组与空白对照组比较,3 DG剩余量明显减少（P＜0.01）。依帕司他组与空白对照组比较,差异无显著性;与反应组比较,3 DG剩余量明显增多（P＜0.01）。槲皮素组与空白对照组比较,3 DG剩余量明显减少（P＜0.05）;与反应组比较,剩余量明显增多（P＜0.01）。结论依帕司他可完全抑制3 DG还原酶活性,槲皮素可部分抑制其活性。     

依帕司他对糖尿病性胃轻瘫和自主神经病变的影响

目的:观察依帕司他对糖尿病性胃轻瘫(DGP)和自主神经病变的影响。方法:16例DGP病人,其中男性10例,女性6例,年龄(51±s 13)a,糖尿病病程(12±5)a。均给予依帕司他50 mg, po,tid,共12 wk。观察服药前后胃电图(EGG)和心率变异性(HRV)的变化,并记录病人症状的积分情况。结果:依帕司他治疗后,胃电主频率比(PDF)增加(0．8±0．8)cpm,胃电主功率比(PDP)增强(83±32)μV,HRV各指标中低频范围内的功率(LF)降低(38±16)ms2,LF／高频范围内的功率降低1．8±0．4,余指标均增高(均P<0．01)。病人大多数自觉症状减轻或消失,不良反应轻微。结论:依帕司他具有促胃动力和改善交感、迷走神经平衡失调的作用,是治疗DGP安全、有效的药物。     

依帕司他的合成工艺研究

以甘氨酸和二硫化碳为起始原料,经加成、取代、环合、缩合四步反应合成了依帕司他。在加成反应中采用相转移催化法,使3－羟甲基绕丹宁收率提高到85．3％,合成总收率达到55．8％。该合成工艺操作简便,收率较高,在加成反应中避免使用有机溶剂。     

依帕司他对早期2型糖尿病肾病的影响

糖尿病肾病是糖尿病患者重要的微血管并发症之一,也是造成2型糖尿病终末期肾功能衰竭的常见原因之一,早期表现为尿微量白蛋白（mALB）排泄增多,继之出现临床蛋白尿,最后进展为慢性肾功能不全。目前,尿白蛋白排泄率（UAE）是诊断早期2型糖尿病肾病的敏感指标。UAE的增加是2型糖尿病肾病加重的有力依据。减轻蛋白尿是治疗的关键,尤其在肾脏损伤可逆性阶段（糖尿病肾病早期）,     

葛根素改善慢性肺心病大鼠肺血管重建机制探讨

目的探讨葛根素对慢性低氧高二氧化碳大鼠肺血管重建的作用。方法图像分析、氯胺T法、免疫组化、组织原位杂交技术等方法观察葛根素对慢性低氧高二氧化碳大鼠肺组织羟脯氨酸含量、肺小血管显微结构、肺动脉管壁MMP-2、MMP-9及其基因的影响。结果①光镜下葛根素组内弹力板扭曲、中膜平滑肌细胞增生及管腔狭窄程度均明显轻于低O2高CO2组。②血浆NO含量低O2高CO2组低于正常对照组（P〈0．01）,葛根素组高于低O2高CO2组（P〈0．01）。③氯胺T法发现肺组织羟脯氨酸含量低O2高CO2组高于正常对照组（P〈0．01）,葛根素组低于低O2高CO2组（P〈0．01）。④肺组织匀浆MMP-2、MMP-9含量低O2高CO2组高于正常对照组（P〈0．01）。葛根素组肺组织匀浆MMP-2、MMP-9含量皆低于低O2高CO2组（P〈0．01）。⑤免疫组化、原位杂交法发现肺细小动脉MMP-2、MMP-9和MMP-2mRNA、MMP-9mRNA平均吸光度值低O2高CO2组均高于正常对照组（P〈0．01）,葛根素组均低于低O2高CO2组（P〈0．01）。结论葛根素改善慢性低氧高二氧化碳大鼠肺血管重建,与其调节MMPs表达、抑制肺动脉管壁胶原的沉积有关。     

舍曲林和氟西汀对慢性肺动脉高压模型大鼠的保护作用研究

目的:研究选择性5-羟色胺重吸收抑制剂(SSRI)舍曲林和氟西汀对野百合碱(MCT)诱导的慢性肺动脉高压(PAH)大鼠的保护作用。方法:40只大鼠随机分为对照组、MCT组、MCT+舍曲林(MCT+Ser)组和MCT+氟西汀(MCT+Flu)组,后3组大鼠腹腔注射MCT造模。MCT+Ser组和MCT+Flu组大鼠每天分别给予Ser和Flu,MCT组和对照组大鼠给予相应溶剂。各组大鼠常规饲养3周后检测肺动脉压、右心指数;HE染色法测定并计算非肌型动脉、部分肌型动脉及肌型动脉所占比例,比较各组肺动脉肌化程度;逆转录-聚合酶链反应法测定5-羟色胺转运体(SERT)mRNA表达变化。结果:与对照组比较,MCT组肺动脉压、右心指数、动脉肌化程度及SERTmRNA表达升高;与MCT组比较,MCT+Ser组和MCT+Flu组上述各指标均降低(P<0.05或P<0.01)。结论:Ser和Flu对MCT诱导的PAH具有抑制作用,作用机制可能与抑制SERTmRNA表达有关。     

血府逐瘀汤通过PI3K/AKT/mTOR信号通路影响低氧性肺动脉高压大鼠肺血管重构的研究

目的 探讨血府逐瘀汤对低氧性肺动脉高压（hypoxic pulmonary hypertension,HPH）大鼠肺血管重构的影响及其相关机制。方法 40只♂ SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、血府逐瘀汤组、NVP-BEZ235组、药物联合组,每组8只。采用低压低氧法建立大鼠HPH模型。HE染色观察大鼠肺小动脉病理改变,Masson染色观察肺小动脉胶原纤维含量,免疫组化检测肺小动脉增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）的表达,Western blotting测定肺组织p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR和PCNA的表达。结果 与正常对照组比较,模型组大鼠肺小动脉血管壁增厚、管腔变窄,胶原纤维含量显著增加（P<0.01）,PCNA、p-AKT、p-mTOR表达增加（P<0.05或P<0.01）;与模型组比较,各药物治疗组大鼠肺小动脉病理改变不同程度减轻,胶原纤维含量显著减少（P<0.01）,PCNA、p-AKT、p-mTOR表达降低（P<0.05或P<0.01）;药物联合组与血府逐瘀汤组相比,胶原纤维含量减少（P<0.05）,PCNA、p-AKT、p-mTOR表达降低（P<0.01）。结论 血府逐瘀汤能有效减轻HPH大鼠肺血管重构,减少血管壁胶原纤维含量以及PCNA的表达,其机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路活化相关。     

氯沙坦对肾性高血压大鼠肠系膜动脉血管重构的影响

目的:观察氯沙坦对两肾一夹高血压大鼠(2K1C)肠系膜动脉血管重构的影响.方法:建立2K1C高血压大鼠模型.夹尾法测定大鼠血压.在实验结束时,使用磷酸盐缓冲溶液对大鼠进行灌注,再用4％多聚甲醛在体灌注,取肠系膜动脉,10％福尔马林保存进行形态学分析.结果:肾动脉狭窄大鼠较假手术大鼠血压明显升高(P＜0.01),在10周末给予氯沙坦干预,能剂量依赖性地显著降低血压(P＜0.01).给予氯沙坦干预4周,大鼠肠系膜动脉血管重构参数,即中膜面积/管腔面积比值和中膜厚度/管腔直径比值显著降低.结论:氯沙坦能够逆转肾性高血压大鼠肠系膜动脉血管重构.     

雷洛昔芬对慢性低氧大鼠肺动脉血管重构的作用

目的 探讨雷洛昔芬对慢性低氧大鼠肺动脉结构重构的调节作用。方法 选取体质量180~200 g的健康SD大鼠40只,♂,随机分为常氧组、低氧组、低氧+17β-雌二醇组、常氧+雷洛昔芬组、低氧+雷洛昔芬组;原代培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMC)分组同上。采用间断常压低氧法建立慢性低氧大鼠和细胞模型,采用免疫组织化学法检测肺动脉平滑肌的增殖情况,以蛋白免疫印迹法检测PASMC小窝蛋白(Caveolin-1,Cav-1)的表达,采用荧光探针法检测PASMC活性氧(ROS)的含量。结果 与常氧组相比,低氧组大鼠肺小动脉平滑肌增殖、中膜厚度及肌化程度明显增加(P<0.01),雷洛昔芬可显著抑制低氧诱导的肺动脉改变(P<0.05)。低氧组大鼠PASMC中ROS浓度增加(P<0.01),给予低氧组大鼠雷洛昔芬治疗,可下调ROS浓度(P<0.05)。低氧组大鼠PASMC中Cav-1表达显著降低(P<0.01),雷洛昔芬可改善其低表达(P<0.05)。雷洛昔芬的缓解肺动脉重构、上调Cav-1的表达、减少ROS的产生、抑制PASMC增殖的效果类似于17β-雌二醇。结论 雷洛昔芬可上调PASMC中Cav-1的表达,减少ROS的产生,抑制PASMC增殖,在缓解慢性低氧大鼠的肺动脉重构中发挥重要作用。     

激肽原酶对低氧高二氧化碳模型大鼠肺动脉高压的影响

目的观察激肽原酶对低氧（O2）高二氧化碳（CO2）模型大鼠肺动脉高压的影响。方法将30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组（Nc组）,低O2高CO24周＋0．9％氯化钠溶液（HH组）,低O2高CO24周＋激肽原酶组（HC组）,每组10只。HH组与HC组饲养于氧舱中,舱内O2浓度为9％～11％,CO2为5％～6％,q8h,每周6d,共4周,其余时间饲养条件与Nc组相同。自第4周开始,进氧舱前：Hc组经尾静脉注射激肽原酶,每次剂量为1．6&#215;10^-2PNA&#183;kg^-1：HH组注射0．9％氯化钠溶液1mL;共6d。第4周末,经颈外静脉插管测量3组肺动脉压;免疫组化、逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测肺组织eNOS和eNOSmRNA的表达。结果与NC组比较：HH和HC组的mPAP升高（P〈0．01）;HH组的右心室与左心室＋室间隔质量之比[RV／（LV＋S）]升高（P〈0．01）;HH和HC组的肺小动脉苫壁面积／管腔总面积比值（WA／TA）、肺小动脉中膜厚度（PAMT）增高（P〈0．01）;肺小动脉及支气管eNOS表达降低;肺组织eNOSmRNA表达降低（P〈0．01）。与HH组比较：HC组mPAP降低（P〈0．01）;RV／（LV＋S）降低（P〈0．01）;WA／TA和PAMT降低（P〈0．01）;肺小动脉及支气管eNOS表达增高;肺组织eNOSmRNA表达增高（P〈0．01）。结论激肽原酶上调肺组织eNOSmRNA表达,改善肺血管的重构,降低慢性低O2高CO2模型的大鼠肺动脉高压。     

亚高原地区野百合碱诱导大鼠肺动脉高压模型的剂量研究

目的 探讨亚高原地区野百合碱（monocrotaline,MCT）诱导大鼠肺动脉高压模型的最佳剂量。方法 将从平原地区购买85只♂SD大鼠随机分为对照组、MCT-20 mg·kg^-1组、MCT-30 mg·kg^-1组、MCT-40 mg·kg^-1组、MCT-50 mg·kg^-1组、MCT-60 mg·kg^-1组。除对照组外,所有大鼠于同日接受单次不同浓度MCT皮下注射,随后置于亚高原地区饲养,MCT注射第28天末采用右心导管术检测大鼠平均肺动脉压力,并计算大鼠右心室肥厚指数以评估右心肥厚程度,取大鼠肺组织行HE染色以评价肺血管重构情况,同时将大鼠的一般情况、生存率、体质量变化、脏器系数、血液学指标和模型成功率作为辅助评价指标。结果 与对照组比较,单次皮下注射MCT-30,40,50,60 mg·kg^-1均可引起大鼠平均肺动脉压力增高、右心室肥厚和血管重构（P<0.05）,模型符合肺动脉高压诊断标准。结论 30 mg·kg^-1是亚高原地区MCT诱导大鼠肺动脉高压模型的最佳剂量。     

小春花治疗肺心病模型大鼠肺动脉高压的研究

目的 观察小春花对肺心病模型大鼠肺动脉高压（pulmonary arterial hypertension,PAH）的影响。方法 120只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、西地那非组和小春花提取物高、中、低剂量组,每组20只。采用野百合碱（60 mg.kg 1）皮下注射建立大鼠肺心病PAH模型;连续灌胃给药21 d。采用右心导管法测定平均右心室压（mean right ventricularpressure,mRVP）、平均肺动脉压（mean pulmonary arterial pressure,mPAP）和最大右心室压（max right ventricular pressure,max RVP）,处死动物测定称取肺湿重（lung wet weight,WW）、右心室游离壁（right ventricu tar free wall mass,RV）、左心室加心室间隔（left ventricular pus septal,LV＋S）重量,计算肺指数（lung index,LI）和右心肥厚指数（right ventricularhypertrophy index,RVHI）。结果 模型组大鼠mRVP、mPAP和max RVP显著高于正常对照组（P〈0.001）;与模型组比较,小春花高、中剂量组大鼠mPAP、mRVP和max RVP均显著降低（P〈0.001-0.05）;小春花高剂量组大鼠RV、LV＋S、WW、LI均显著低于模型组（P〈0.001-0.01）。结论 小春花对野百合碱诱导的大鼠肺心病PAH有一定的干预作用。     

益气活血通络法对COPD大鼠肺血管重构的影响

目的 观察益气活血通络法对慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary diseases,COPD）大鼠肺血管重构IL-6/JAK/STAT信号转导通路的影响。方法 SD大鼠50只,随机均分为正常对照组、模型组、中药组、西药组和中西医结合组。采用气道滴注脂多糖联合香烟烟雾暴露的方法制备大鼠COPD肺血管重构模型。药物干预后各组大鼠右下肺叶行HE染色观察肺血管病理形态学变化,并采用ELISA法检测血清IL-6含量变化; Western blot测定肺组织p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平;免疫组化技术检测肺动脉增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）蛋白表达。结果 与模型组比较,各药物组大鼠血清IL-6含量及肺动脉PCNA表达显著减少（P<0.05或<0.01）,p-JAK2和p-STAT3表达显著降低（P均<0.01）;中西医结合组较中药组及西药组p-JAK2表达均显著下降（P均<0.01）。结论 中医益气活血通络法能有效减轻COPD大鼠肺血管重构,其机制可能与抑制IL-6/JAK/STAT信号转导通路进而调节肺小动脉PCNA表达有关。