白藜芦醇对Gc-1 spg细胞氧化应激损伤的作用研究

目的 观察白藜芦醇（RES）对过氧化氢H₂O₂诱导的小鼠精原细胞（Gc-1 spg）氧化应激损伤的作用。方法 H₂O₂复制Gc-1 spg细胞氧化应激损伤模型,设置空白组、H₂O₂组（800 μmol/L）、H₂O₂ +5 μmol/L RES组、H₂O₂ +10 μmol/L RES组和H₂O₂+15 μmol/L RES组。检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平,CCK-8法检测细胞活力,JC-1试剂盒检测线粒体膜电位,Mito Tracker^?? Green FM试剂盒检测活细胞线粒体水平,Hoechst 33342染色检测细胞核凋亡率,Western blotting检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3表达。结果 浓度为800 μmol/L H₂O₂处理Gc-1 spg细胞6 h时达到实验要求（P <0.05）。与空白组比较,各H₂O₂组细胞活力降低（P <0.05）,与H₂O₂组比较,H₂O₂ +5 μmol/L RES组、H₂O₂+10 μmol/L RES组、H₂O₂ +15 μmol/L RES组细胞活力升高（P <0.05）。与空白组比较,各H₂O₂组的GSH-Px和SOD水平降低（P <0.05）,LDH和MDA水平升高（P <0.05）;与H₂O₂组比较,H₂O₂ +5 μmol/L RES组、H₂O₂+10 μmol/L RES组、H₂O₂ +15 μmol/L RES组GSH-PX和SOD水平降低（P <0.05）,LDH和MDA水平升高（P <0.05）。与空白组比较,H₂O₂组细胞的红/绿荧光比值降低,提示线粒体膜电位降低（P <0.05）;与H₂O₂组比较,H₂O₂+5 μmol/L RES组、H₂O₂ +10 μmol/L RES组、H₂O₂ +15 μmol/L RES组JC-1红/绿荧光比值升高（P <0.05）。与空白组比较,H₂O₂组细胞线粒体数明显减少（P <0.05）;与H₂O₂组比较,H₂O₂ +5 μmol/L RES组、H₂O₂+10 μmol/L RES组、H₂O₂ +15 μmol/L RES组细胞荧光强度升高（P <0.05）。与空白组比较,H₂O₂组大量细胞核皱缩、碎裂,染色程度明显增强,细胞凋亡严重;与H₂O₂组比较,H₂O₂ +5 μmol/L RES组、H₂O₂+10 μmol/L RES组、H₂O₂ +15 μmol/L RES组细胞凋亡率降低（P <0.05）。与空白组比较,H₂O₂组凋亡蛋白Bax和Caspase-3相对表达量增加（P <0.05）,Bcl-2相对表达量减少（P <0.05）;与H₂O₂组比较,H₂O₂ +5 μmol/L RES组、H₂O₂ +10 μmol/L RES组、H₂O₂ +15 μmol/L RES组Bax和Caspase-3相对表达量降低（P <0.05）,Bcl-2相对表达量增加（P <0.05）。结论 RES对H₂O₂诱导的Gc-1 spg细胞氧化应激损伤具有保护作用,这种保护作用与RES浓度有关。     

白藜芦醇诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡的作用机制

研究白藜芦醇诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡的作用机制。采用MTT检测细胞增殖情况,活性氧试剂盒分析细胞内ROS水平;流式细胞术观察细胞凋亡和细胞周期的变化。Western blot检测凋亡相关蛋白以及相关通路蛋白表达。结果表明,经不同药物浓度处理,白藜芦醇可以诱导DU145细胞发生凋亡,使细胞周期阻滞于G₀/G₁期,提高细胞内ROS水平,降低细胞内线粒体膜电位水平,并呈剂量依赖性。白藜芦醇通过上调Bax蛋白的表达和抑制Bcl-2蛋白表达,促使Bax/Bcl-2比值升高,激活Caspase级联反应从而诱导细胞发生凋亡。进一步研究发现白藜芦醇可以升高细胞内ROS水平,降低线粒体膜电位水平,从而通过线粒体途径诱导DU145细胞发生凋亡。因此,白藜芦醇可能通过ROS-线粒体途径诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡。     

白藜芦醇诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的作用及机制

目的 探讨白藜芦醇(RES)对人肝癌细胞HepG2凋亡的作用及其影响机制.方法 选取对数生长期人肝癌细胞HepG2,分为对照组(DMSO)和RES组(40μmol/L),通过MTT检测RES对HepG2细胞增殖的影响;应用JC-1染色观察RES对HepG2细胞线粒体膜电位的影响;使用Western blot检测RES对...     

黄芪菟箭合剂对高糖诱导的足细胞损伤及凋亡的影响

目的 探讨黄芪菟箭合剂(HTD)对高糖诱导足细胞损伤及凋亡的影响.方法 体外培养永生化的肾小球足细胞,待足细胞分化完全后,用不同浓度HTD(0.25,0.5,0.75,1,1.25,1.5 mg/ml)刺激足细胞24 h,用乳酸脱氢酶释放法(LDH法)判断细胞的损伤程度,进而筛选HTD的最佳浓度,并观察其对足细胞形态的...     

白藜芦醇对心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察白藜芦醇预处理对心肌缺血/再灌注损伤的保护作用。方法:40只雄性SD大鼠随机分成4组,每组10只,即生理盐水灌胃28天进行假手术组、白藜芦醇75 mg/(kg·d)灌胃28 d进行假手术组、生理盐水灌胃28 d进行手术组、75 mg/(kg·d)白藜芦醇灌胃28 d进行手术组。生理盐水或者75 mg/(kg·d)白藜芦醇灌胃结束手术组大鼠通过结扎冠状动脉左前降肢进行心肌缺血再灌注,缺血时间为40 min,再灌注时间为150 min。假手术组大鼠只插管不结扎。再灌注结束检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)含量,心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)以及凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax的表达。结果:心肌缺血再灌注可使LDH、MDA水平升高(P﹤0.01),NO、SOD含量降低(P﹤0.01)。白藜芦醇能够降低缺血再灌注损伤中LDH以及MDA的水平(P﹤0.05),增加SOD和NO含量(P﹤0.05),并能在缺血再灌注损伤中上调Bcl-2、下调Bax表达。结论:白藜芦醇能够抑制心肌缺血再灌注损伤中的氧化应激和细胞凋亡,从而起到保护心血管的作用。     

姜黄素对高糖诱导的L6细胞线粒体功能障碍的改善作用

考察姜黄素对高糖诱导的L6细胞线粒体功能障碍的改善作用。采用40 mmol/L葡萄糖处理24 h,建立L6细胞线粒体功能障碍模型,姜黄素受试浓度分别为10、20、40 μmol/L。结果显示,高糖培养可引起L6细胞线粒体功能出现明显障碍,主要表现为明显的线粒体膜电位降低、活性氧增多、ATP含量减少,线粒体生物合成(mtDNA数量)部分下降,同时UCP2 、PGC-1α和Sirt3 mRNA和蛋白表达下调。姜黄素对于高糖所致线粒体功能障碍(膜电位下降,活性氧增多、ATP含量减少)具有明显的改善作用,同时升高UCP2的mRNA和蛋白表达,对于线粒体生物合成(mtDNA数量)未见明显影响。本研究提示姜黄素可能是通过多种途径的抗氧化作用而发挥线粒体保护作用。     

褪黑素对糖尿病大鼠氧化应激及足细胞凋亡的影响及作用机制

目的探讨褪黑素对糖尿病大鼠氧化应激反应和足细胞凋亡信号传导的影响及作用机制。方法 21只雄性Wistar大鼠随机分为3组:正常对照组(N组,n=7),糖尿病组(D组,n=7),褪黑素治疗组(M组,n=7只)。腹腔注射链尿佐菌素制造糖尿病模型。8周末生化检测24h尿白蛋白排泄率、血肌酐、血糖水平;比色法检测肾组织MDA和T-OC的水平;免疫组化检测肾组织Nephrin表达水平;TUNEL法检测足细胞凋亡水平;HE、PAS、Masson染色观察肾小球病理改变;透射电镜观测肾小球超微结构变化。结果 8周末,与N组相比D组尿白蛋白排泄率显著增加(P<0.05),血肌酐升高,差异无统计学意义(P> 0.05);而与D组相比,M组尿白蛋白排泄率显著降低(P<0.05),血肌酐降低但差异无统计学意义(P> 0.05);与N组相比,D组肾组织MDA显著升高(P<0.05)、T-OC的水平显著降低(P<0.05);与D组相比,M组肾组织MDA显著升高(P<0.05)、T-OC的水平显著降低(P<0.05)。8周末与N组相比,D组免疫组化检测肾组织Nephr... 更多     

环氧合酶-2基因敲低对足细胞凋亡及nephrin蛋白表达的影响

目的观察足细胞环氧合酶-2（COX-2）基因敲低对足细胞凋亡及nephrin蛋白表达的影响。方法（1）以条件永生性小鼠足细胞株为研究对象：分为正常对照组、5μl的siRNA组、10μl的siRNA组、15μl的siRNA组。经诱导分化成熟,在干扰48h后用半定量RT-PCR和Westernbolt分别检测COX-2mRNA及蛋白表达水平,用流式细胞仪检测足细胞凋亡水平。（2）以10μl的siRNA组作为研究对象,分别设立足细胞正常对照组、足细胞COX-2基因敲低组和足细胞阴性转染对照组,用Westernboh检测nephrin蛋白、BAX蛋白及BCL-X1蛋白的表达水平。结果（1）与正常对照组比较,随着干扰浓度的增加,COX-2mRNA及蛋白表达逐渐减少,而足细胞的凋亡率逐渐升高,15μ1的siRNA组凋亡率明显增高。（2）lμlCOX-2siRNA转染组nephrin蛋白表达显著低于阴性转染组（P〈0．05）。（3）与阴性转染组相比,10IxlCOX-2siRNA转染组Bax蛋白表达显著上调,而Bcl-xl蛋白表达稍有下调。结论敲低COX-2的基因表达可以导致足细胞凋亡,并随着干扰浓度的增加,足细胞凋亡率逐渐增加;在干扰浓度为10μl时,足细胞nephrin蛋白的表达下调;BAX蛋白上调及BCL-X1蛋白下调参与了足细胞的凋亡。     

白藜芦醇对抗氧化型低密度脂蛋白诱导的内皮细胞损伤及其机制

目的探讨白藜芦醇对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的内皮细胞损伤的保护作用及其机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,并随机分为对照组、ox-LDL组、不同浓度(10μmol/L、50μmol/L)白藜芦醇保护组,通过检测细胞活力、超氧化物歧化酶(SOD)水平、丙二醛(MDA)含量评价内皮细胞损伤程度。RT-PCR及Western blot法检测单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)RNA和蛋白表达。结果与对照组比较,ox-LDL组细胞活力、SOD水平降低[(0.33±0.01)比(0.45±0.010),(12.8±0.31)U/m L比(15.5±0.150U/m L,P0.05],MDA含量增加[(2.10±0.51)nmol/mgprot比(1.05±0.06)nmol/mgprot,P0.05],MCP-1、ICAM-1 RNA表达明显升高(1.56±0.06比0.67±0.09,3.62±0.32比1.35±0.21,P0.05);与ox-LDL组相比,白藜芦醇(10、50μmol/L)保护组细胞活力升高(0.38±0.02、0.39±0.02比0.33±0.01,P0.05)、SOD水平升高[(14.4±0.61)U/m L、(14.8±0.57)U/m L比(12.8±0.31)U/m L,P0.05],MDA含量减少[(1.41±0.15)nmol/mgprot、(1.37±0.05)nmol/mgprot比(2.10±0.51)nmol/mgprot,P0.05],MCP-1、ICAM-1 RNA和蛋白表达明显降低(1.03±0.05、0.92±0.08比1.56±0.06,1.88±0.25、1.67±0.16比3.62±0.32,P0.05)。结论白藜芦醇对oxLDL诱导的血管内皮细胞损伤有保护作用。     

白藜芦醇对UVA致HaCaT细胞氧化损伤的保护作用

目的：探讨白藜芦醇对UVA照射后HaCaT细胞的光保护作用及其可能机制。方法：采用5J／cm^2 UVA照射HaCaT细胞后,分别加入0．01mmol／L和0．1mmol／L的白藜芦醇进行干预．同时设正常对照组与UVA照射组,分别用MTT法检测细胞增殖能力,用羟胺法、比色法、TBA法检测细胞超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及丙二醛（MDA）含量,电镜观察细胞超微结构的改变。结果：白藜芦醇能提高UVA照射后HaCaT细胞增殖能力、细胞SOD和GSH—Px活性,降低MDA含量,且呈剂量依赖性增加或降低（P〈0．05）。电镜结果显示白藜芦醇能减轻UVA对HaCaT细胞超微结构的损伤。结论：白藜芦醇能减轻UVA对HaCaT细胞增殖的抑制作用、超微结构和氧化功能的损伤,并有随剂量依赖性增加的保护作用,其机制可能与白藜芦醇提高氧化酶活性、清除自由基有关。     

白藜芦醇对过氧化氢诱导人动脉平滑肌细胞的影响及其机制

目的：探讨白藜芦醇（Res）对过氧化氢（H2O2）诱导的人动脉平滑肌细胞的影响及其可能机制。方法：在人动脉平滑肌细胞中加入不同浓度（20、100、500umol／L）H2O2处理24h,建立动脉平滑肌细胞氧化损伤模型。不同终浓度（2、10、50umol／L）的Res单纯作用或分别与100umol／LH202共同作用于动脉平滑肌细胞24h。应用MTT比色法检测细胞存活率,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶（SODl的活力,硫代巴比妥酸比色法检测丙二醛（MDA）含量,2,7-二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH—DA）染色荧光显微镜照相检测细胞内的活性氧簇（ROS）水平,流式细胞术检测细胞凋亡百分率。结果：20、100、500umol／LH2O2处理人动脉平滑肌细胞24h后,动脉平滑肌细胞存活率和培养基上清液SOD活力均呈剂量依赖性地下降,细胞蛋白裂解液MDA含量活性则呈剂量依赖性地升高（P〈0．05）。2、10和50txmol／LRes与100umol／LH2O2共同作用动脉平滑肌细胞24h后,可呈剂量依赖性地抑制H2O2诱导的细胞存活率、SOD活力的下降以及MDA含量的升高,其中10和50umol／LRes＋100umol／LH202处理组与100umol／LH2O2模型组比较,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。10和50umol／LRes＋100Ixmol／LH202处理组DCF荧光强度均显著低于100txmol／LH2O2模型组（P均〈0．05）。10和50btmol／LRes＋100umol／LH2O2处理组人动脉平滑肌细胞的凋亡率分别为（20．7±3．0）％和（13．2±1．5）％,均显著低于100umol／LH2O2模型组的（27．2±3．6）％（均P〈0．05）。结论：Res可对抗H2O2诱导的动脉平滑肌细胞氧化损伤,其机制可能与其减少ROS生成以及降低动脉平滑肌细胞凋亡率有关。     

白藜芦醇抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖及诱导其凋亡的实验研究

目的研究白藜芦醇对人脑胶质瘤细胞U251细胞生长抑制及诱导细胞凋亡的作用。方法采用MTT法检测白藜芦醇对U251细胞的增殖活性的影响,采用流式细胞仪检测白藜芦醇对U251细胞早期、晚期凋亡率的影响,用倒置显微镜观察不同浓度的白藜芦醇作用后U251细胞的形态学改变。结果白藜芦醇对U251脑胶质瘤生长有抑制作用,且具时间及剂量依赖性;白藜芦醇能诱导U251细胞早、晚期凋亡,且具时间及剂量依赖性。结论白藜芦醇能抑制U251脑胶质瘤的增殖并能诱导细胞凋亡。     

白藜芦醇对过氧化氢诱导鼠晶状体上皮细胞凋亡保护作用的实验研究

目的 探讨白藜芦醇对过氧化氢(H2O2)诱导鼠晶状体上皮细胞凋亡损伤的保护作用.方法 取健康SD大鼠透明晶状体60只,随机分为5组,每组12只,分别给予高、中、低剂量(5、10、20μmol/L)的白藜芦醇和100 μmol/L H2O2,利用透射电镜观察超微结构变化并测定凋亡因子caspase-3及caspase-9的表达.结果 伴随白藜芦醇给药浓度的增加,透射电镜下鼠晶状体上皮细胞损伤的程度减轻,此外,白藜芦醇对caspase-3及caspase-9的表达具有抑制作用.结论 白藜芦醇可以抑制H2O2诱导的晶状体上皮细胞的凋亡,对氧化损伤性白内障具有预防作用,为寻求有效防治白内障药物提供了可靠的实验依据.     

虾青素对氧化应激诱导内皮祖细胞凋亡的保护作用

目的：探讨虾青素对体外氧化应激诱导的人外周血内皮祖细胞凋亡的影响及机制。方法体外培养人外周血单核细胞源的内皮祖细胞,分为对照组、模型组（叔丁基过氧化氢100μmol/L ）、虾青素＋叔丁基过氧化氢组[虾青素0．10、1．00、10．00 nmol/L预处理24 h后,分别使用叔丁基过氧化氢溶液（100μmol/L）连续培养6 h]。细胞存活率采用MTT法检测;细胞凋亡率采用DAPI染细胞检测;DCFH-DA法检测细胞内活性氧（reactive oxygen species ,ROS）水平;JC-1法测定线粒体膜电位。结果与对照组比较,叔丁基过氧化氢（100μmol/L）能明显的造成内皮祖细胞的凋亡（P＜0．05）。虾青素可降低叔丁基过氧化氢引起的内皮祖细胞凋亡,表现为细胞凋亡率减少（P＜0．05）,线粒体膜电位增加。结论虾青素对叔丁基过氧化氢诱导的内皮祖细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与保护线粒体功能有关。     

白藜芦醇对冠脉结扎诱发大鼠急性心肌缺血的保护作用的研究

目的研究白藜芦醇(resveratrol)对大鼠急性心肌缺血的保护作用,并进一步阐明其机制.方法建立急性心肌缺血模型,持续观察标准Ⅱ导联心电图30min,6h后进行心肌TTC染色测量心肌梗死面积,测定血清肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)活力,确定心肌损伤程度.心肌细胞凋亡的检测采用原位末端标记法(TUNEL),免疫组化法检测凋亡相关基因Fas、Bax及Bcl-2的蛋白表达.结果白藜芦醇能够剂量依赖性地降低大鼠心肌冠脉结扎后ST段抬高,降低CK、LDH活力,缩小心肌梗死面积,降低心肌细胞凋亡指数,抑制Fas、Bax的表达,增强Bcl-2的表达.结论白藜芦醇对冠脉结扎诱发的大鼠急性心肌缺血有保护作用,其机制可能与上调Bcl-2蛋白表达,下调Fas、Bax蛋白表达,抑制心肌细胞凋亡有关.     

白藜芦醇对BGC-823细胞人程序化死亡分子5表达及凋亡的影响

目的：探讨白藜芦醇对胃癌BGC-823细胞中凋亡相关基因人程序化死亡分子5（PDCD5）表达的影响,并观察白藜芦醇诱导BGC-823细胞凋亡的效应。方法：分别用25、50、100和200μmol/L的白藜芦醇处理BGC-823细胞24、48和72h后,采用免疫细胞化学和原位杂交方法检测PDCD5表达的变化;运用流式细胞仪和TUNEL法检测细胞凋亡情况。另设空白对照组和溶剂对照组。结果：同一时间点,6组PDCD5蛋白及mRNA的表达差异均有统计学意义（F蛋白=211.881、242.438和184.866,P均〈0.001;FmRNA=207.366、148.411和158.661,P均〈0.001）;同一浓度,24、48和72h时点各组比较,PDCD5蛋白及mRNA的表达差异均无统计学意义（F蛋白=0.950、1.870、2.218和2.232,P均〉0.05;FmRNA=1.267、2.376、1.221和2.292,P均〉0.05）。各组BGC-823细胞凋亡指数比较,差异有统计学意义（F=230.069,P〈0.001）。结论：凋亡相关基因PDCD5可能在白藜芦醇诱导胃癌BGC-823细胞凋亡过程中发挥重要作用。