氯化钴对体外培养的视网膜色素上皮细胞VEGF表达的影响

目的探讨人视网膜色素上皮（RPE）细胞体外纯化培养方法和观察氯化钴（CoCl2）对RPE细胞VEGF表达的影响。方法采用酶辅助的显微分离法分离培养人RPE细胞并用细胞角蛋白和S-100免疫组织化学鉴定，用100μmol／L CoCl2 10％胎牛血清的DMEM培养RPE 30h，用免疫印迹方法测量其VEGF蛋白表达水平。结果酶辅助的显微分离法可体外纯化培养RPE细胞，用细胞角蛋白和S-100免疫组织化学染色均呈阳性。100μmol／L CoCl2作用30h后RPE细胞VEGF表达水平可提高2倍。结论通过Hu氏酶辅助的显微分离法，获得了RPE细胞的纯化培养；CoCl2可明显诱导RPE细胞VEGF表达上调。     

shRNA抑制人RPE细胞HIF-1 α基因表达对VEGF及PEDF表达的影响

目的利用小发卡环RNA（shRNA）使缺氧培养条件下的人视网膜色素上皮（RPE）细胞缺氧诱导因子1α（HIF-1α）基因沉默，观察对血管内皮生长因子（VEGF）及色素上皮衍生因子（PEDF）的影响。方法体外转录法合成对HIF-1αmRNA序列的两个靶点的shRNA，对缺氧（150μmol／LCoCl2模拟）培养条件下人RPE细胞的HIF-1α进行干扰，使用RT—PCR检测HIF-1α、VEGF和PEDFmRNA的表达及Western印迹分析检测HIF-1α、VEGF和PEDF蛋白水平。结果HIF-1αmRNA的两种shRNA均能有效地抑制RPE细胞在缺氧条件下HIF-1α的表达，同时也有效地抑制VEGFmRNA和蛋白表达，并促进PEDF蛋白表达，但对PEDFmRNA的表达无影响。结论HIF-1αmRNA的shRNA能有效地使缺氧条件下RPE细胞HIF-1α基因沉默，进而有效地抑制缺氧对VEGF的上调作用，同时也促进PEDF表达。揭示了HIF-1与缺氧条件下PEDF翻译后的下调机制有关，是促进视网膜新生血管形成最为关键的细胞因子之一。     

质粒介导RNA干扰抑制视网膜母细胞瘤细胞的血管内皮生长因子表达

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）短发夹RNA（shRNA）表达质粒稳定转染对视网膜母细胞瘤（RB）细胞中VEGF表达的作用。方法构建VEGF shRNA表达质粒p4．1CMV—VEGF shRNA,以脂质体介导其转染两种RB细胞系SO—RB50和HXO—RB44,新霉素筛选结合梯度稀释法获得p4．1CMV—VEGF shRNA阳性RB细胞单克隆,继续培养扩增建立p4．1CMV—VEGF shRNA阳性RB细胞,用荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测RB细胞中VEGF基因的表达,并用酶联免疫吸附（ELISA）法检测RB细胞上清中VEGF蛋白的表达;以与哺乳动物基因组无同源性的shRNA表达质粒p4．1CMV—Neg shRNA作为阴性对照,同时以未做任何处理组作为空白对照。结果成功构建p4．1CMV—VEGF shRNA并获得其表达阳性的RB细胞克隆。阴性对照组和空白对照组SO-RB50细胞的VEGF基因表达量分别为实验组的5．02倍和6．32倍;阴性对照组和空白对照组HXO—RB44细胞分别为实验组的5．70倍和4．86倍。实验组SO—RB50细胞上清中,VEGF蛋白浓度为（187．69±83．89）μg/L,显著低于阴性对照组（822．98±187．98）μg/L和空白对照组（865．76±170．33）μg／L,差异有统计学意义（均P〈0．01）;实验组HXO—RB44细胞上清中,VEGF蛋白浓度为（162．20±66．33）μg／L,与阴性对照组（764．33±164．79）μg／L和空白对照组（828．22±145．94）μg／L比较,差异也有统计学意义（均P〈0．01）。结论VEGF shRNA表达质粒稳定转染可高效抑制RB细胞中VEGF的表达,靶向VEGF的RNA干扰可作为拮抗VEGF并治疗RB的有效手段。（中华服科杂志,2007,43：493-498）     

shRNA抑制缺氧条件下人视网膜色素上皮细胞低氧诱导因子-1α基因对血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨缺氧条件下人视网膜色素上皮（hRPE）细胞低氧诱导因子-1α（HIF-1α）对血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法利用体外转录法合成针对HIF—1α mRNA序列的靶点之一的小发卡环RNA（shRNA）,以化学低氧诱导剂CoCl2模拟RPE细胞缺氧环境,对缺氧培养条件下hRPE细胞的HIF-1α进行RNA干扰,通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测HIF-1α和VEGF mRNA的表达,免疫印迹法检测HIF—1α和VEGF蛋白水平,以正常组、缺氧组及阴性转染组作为对照,观察其对HIF-1α基因的沉默效果及对VEGF表达的抑制作用。结果转染HIF-1α mRNA的特异性shRNA后,RT-PCR检测结果显示缺氧条件下hRPE细胞HIF-1α基因沉默效果为77．1％,VEGF mRNA的表达水平下降了27．8％;免疫印迹法检测结果显示HIF—1α和VEGF蛋白水平显著降低。结论针对HIF-1α mRNA的shRNA能有效地使HIF-1α基因沉默,进而抑制缺氧对VEGF的上调作用。（中华眼科杂志．2007。43：1022—1027）     

shRNA抑制人RPE细胞中HIF-1α表达下调后IGF-1对VEGF表达的影响

背景 增生性玻璃体视网膜疾病(PVD)是一组眼底视网膜血管性疾病,主要由视网膜色素上皮( RPE)细胞增生所致,胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和血管内皮生长因子(VEGF)与RPE细胞的异常增生和病理性新生血管生成有关,但其信号机制及功能尚不完全明了. 目的 探讨利用小发卡环核糖核酸( shRNA)使人RPE细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)基因沉默后,IGF-1对VEGF表达的影响. 方法 收集健康男性供体眼球4只,分离、收集、培养RPE细胞,用SABC法行抗人角蛋白免疫细胞化学染色进行鉴定.用体外转录法合成针对HIF-1α mRNA序列靶点的shRNA,对3～5代RPE细胞的HIF-1α进行干扰后再经50 μg/L IGF-1处理24 h,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测人RPE细胞中HIF-1α及VEGF mRNA的表达,采用Western blot法检测人RPE细胞中HIF-1α及VEGF蛋白的水平.结果 分离培养的细胞呈扁平不规则多角形,97％的细胞对人角蛋白呈阳性反应.50 μg/L IGF-1作用后,人RPE细胞HIF-1α mRNA表达量(1.49±0.18)与0 μg/L IGF-1组(1.46±0.17)比较差异无统计学意义(t=0.335,P=0.743),而HIF-1α蛋白表达量(1049.86±172.54 vs 0.00±0.00)、VEGF mRNA(0.95±0.15 vs 0.35±0.07)及VEGF蛋白(391.98±56.77 vs 214.36±37.15)表达量均明显增高,差异均有统计学意义(t=16.098、9.935、6.928,P＜0.05).shRNA干扰HIF-1α mRNA表达后,RNAi转染组HIF-1α、VEGF mRNA及其蛋白水平较RNAi空白对照组及RNAi-C转染组明显下降,3个组间各指标的总体比较差异均有统计学意义(F=68.679、89.904、21.770、6.205,P＜0.05). 结论 IGF-1可通过促进人RPE细胞中HIF-1α蛋白的累积诱导VEGF的表达,是导致PVD重要的细胞因子之一.     

缺氧对人视网膜色素上皮细胞G蛋白信号转导调节子5表达的影响及其可能机制

目的探讨缺氧环境下人视网膜色素上皮（RPE）细胞中G蛋白信号转导调节子5（RGS5）表达的可能机制。方法实验研究。在正常培养的人RPE细胞培养基中加入终浓度为200／μmol／L的CoCl：建立细胞化学缺氧模型。按缺氧时间分为0、1、3、6、12和24h6组,观察RGS5和血管内皮生长因子（VEGF）表达的变化;另选取12和24h作观察点,按处理因素分为缺氧对照组和VEGF抑制剂Bevacizumab处理组,Bevacizumab包括25、100和250肛咖l3种浓度,观察特异性抑制VEGF表达对RGS5表达产生的影响。应用免疫荧光染色法、Western blot和RT-PCR分别检测RGS5及其mRNA和VEGF蛋白及其mRNA的表达。采用Student’s t检验进行统计学分析。结果正常条件下,RGS5主要在人RPE细胞胞浆中表达。与VEGF存在相同表达区域。随着缺氧时间的延长,RPE细胞中RGS5蛋白及其mRNA表达逐渐上调,24h时达高峰（0．932±0．104,t=3．106,P=-0．01l;0．742±0．083,t=2．852,P=-0．017）;VEGF蛋白及其mRNA表达12h达高峰（1．022±0．141,t=4．144,P=0．002;0．491_＋0．063,t=5．707,P〈0．01）,24h时有所下降,但仍高于无缺氧的RPE细胞（0．942±0．125,t=3．306,P=0．008;0．425±0．080,t=3．239,P=0．011）。浓度为100和250μg／ml的Bevacizumab有效抑制VEGF蛋白（￡=2．794,P=0．019;t=3．396,P=0．007）和其mRNA（t=2．823,P=0．018;t=9．584,P〈0．01）表达后,RGS5蛋白（t=2．953,P=0．014;t=2．913,P=0．015）和其mRNA（t=3．009,P=-O．013;t=4．243,P=-0．002）表达也随之受到抑制。结论缺氧条件下人RPE细胞RGS5表达上调,并与VEGF表达具有时相关系;抑制VEGF表达后,RGS5表达随之降低。提示RGS5位于VEGF信号通路下游,可能参与缺血缺氧性RPE相关眼病发生的调控。     

反义RNA抑制人视网膜色素上皮细胞VEGF分泌的研究

目的　探索应用血管内皮生长因子 (VEGF12 1)的反义RNA抑制人视网膜色素上皮细胞 (RPE)VEGF表达的可行性。方法　构建编码反义hVEGF12 1真核表达质粒 ,转入人RPE细胞。将稳定表达外源基因的细胞分别置于大气氧环境 ( 2 1%O2 )或缺氧环境 ( 1%O2 )中培养 ,以空白细胞为对照 ,18h后收集上清液 ,ELISA测定其中VEGF的浓度 ,将此上清液加入人脐静脉血管内皮细胞 (HUVEC) ,观察其对细胞生长的影响。结果　反义VEGF转染能使RPE细胞VEGF的分泌量降低 62 7%。缺氧条件下 ,RPE细胞大量分泌VEGF ,18h时细胞培养上清液能刺激HUVEC细胞增殖 18 4% (P <0 0 1)。同样状态下 ,转染反义VEGF的RPE细胞培养上清液则无明显促内皮细胞生长作用 (P >0 0 1)。结论　本实验构建的反义VEGF12 1质粒能通过下调RPE细胞VEGF的蛋白分泌水平 ,有效抑制缺氧情况下该细胞上清液对血管内皮细胞的生长刺激作用     

缺氧对培养的人视网膜色素上皮细胞中血管生成素-2表达的影响

背景脉络膜新生血管（CNV）是导致一些眼底疾病视力丧失的主要原因,而血管生成素2（Ang-2）与血管生成的关系较为密切。目前在缺氧条件下人视网膜色素上皮（RPE）细胞上Ang-2的表达情况与CNV发病的关系研究较少。目的观察缺氧对体外培养的人RPE细胞中Ang．2表达的影响,探讨Ang-2在CNV形成中的可能作用。方法人RPE细胞经培养和传代,取第4～7代细胞以5×10^7个／L密度接种于培养皿,常氧对照组不加CoCl2,缺氧组换以含终浓度为200μmol／LCoCl2的培养基5ml建立RPE细胞化学缺氧模型,分别于加药导致缺氧后0．5、1、2、4、6、12和24h终止缺氧。采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测缺氧不同时间对体外培养的人RPE细胞Ang-2mRNA表达的影响;采用酶联免疫吸附反应（ELISA）法检测缺氧不同时间对体外培养的人RPE细胞上清液中Ang-2蛋白质量浓度的影响。结果人RPE细胞复苏后存活率达90％,第4代传代细胞中色素很少,细胞形态多为梭形。不同培养条件组人RPE细胞中Ang-2mRNA／β-actin mRNA值的总体比较差异有统计学意义（F=1086．30,P=0．00）;缺氧条件下培养0．5h后人RPE细胞中Ang-2mRNA／β-actin mRNA值开始明显增加,至缺氧培养后4～6h达高峰,与常氧对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）;缺氧培养24h后Ang-2mRNA／β-actin mRNA值接近常氧对照组。ELISA分析结果表明,不同培养条件下人RPE细胞培养基上清液中Ang-2蛋白的总体比较差异有统计学意义（F=1034．00,P=0．00）,缺氧条件下培养0．5h后人RPE细胞中Ang-2蛋白的质量浓度开始明显升高,6h达到高峰,与常氧对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0．05）;缺氧培养24h后Ang-2蛋白的质量浓度接近常氧对照组。结论缺氧可显著上调体外培养的人RPE细胞中Ang-2的表达,Ang-2于缺氧早期呈高表达,提示Ang-2参与了CNV的形成,可能在CNV形成过程的早期阶段发挥作用。     

乙酰肝素酶抑制剂对体外培养视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的：探讨乙酰肝素酶（heparanase-1, HPA-1）抑制剂应用对体外培养的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial, RPE)细胞增殖的影响。方法：采用DMEM培养基(Dulbecco's modified eagles medium, DMEM)体外培养人RPE细胞,选择第5代细胞用于实验。倒置显微镜下直接观察不同质量浓度硫代磷酸甘露醇戊糖（phosphomannopentaose sulfate, PI-88）对人RPE细胞体外生长的干预效果,应用四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-dipheny1 tetrazolium bromide, MTT]比色法检测RPE细胞A₅₇₀值;免疫组织化学方法检测人RPE细胞角蛋白和HPA-1表达。 结果：体外增生的RPE细胞胞浆和细胞核HPA-1呈强阳性表达,以细胞浆内表达为主,PI-88干预后细胞浆表达减弱。PI-88对体外RPE细胞的增生有明显的时效和量效抑制关系,药物干预72h细胞A₅₇₀值随质量浓度不同表现明显下降趋势（P<0.05）;而同一质量浓度,药物质量浓度达到100mg/L及以上时,48~72h才表现A₅₇₀值减小的趋势。结论: HPA-1抑制剂可抑制体外培养RPE细胞的增生,并呈现剂量和时间依赖关系。     

HTRA1 shRNA慢病毒表达载体的构建及感染RPE细胞株的鉴定

 目的 构建HTRA1基因的shRNA慢病毒表达载体,并鉴定HTRA1 shRNA慢病毒感染RPE细胞株的效果。设计 实验研究。研究对象 HTRA1 shRNA慢病毒载体和RPE细胞。方法 设计靶向HTRA1 mRNA的寡核苷酸序列,构建HTRA1 shRNA表达质粒,测序鉴定其序列的正确性。通过载体质粒pGC-LV与辅助质粒pHelper 1.0、pHelper 2.0共转染293T细胞包装慢病毒,收集病毒上清,测定滴度。将包装好的HTRA1 shRNA慢病毒感染RPE细胞,设阴性对照和空白对照,采用实时PCR（RT-PCR）和蛋白印迹法（Western Blot）方法检测HTRA1基因的mRNA水平和蛋白质表达水平的变化。主要指标  HTRA1基因的mRNA和蛋白质表达量。结果 DNA测序证实HTRA1 shRNA表达质粒包装了正确的RNA干扰序列。慢病毒滴度测定为8×108 TU/ml。HTRA1 shRNA慢病毒感染RPE细胞后,HTRA1基因的mRNA水平和蛋白质表达水平较空白对照组和阴性对照组均明显下降,差异均有统计学意义。结论 成功构建了HTRA1 shRNA的慢病毒表达载体,该shRNA慢病毒能够有效地抑制RPE细胞株HTRA1基因的表达。     

雌激素对缺氧损伤的人视网膜色素上皮细胞表达血管内皮细胞生长因子的影响

目的:观察雌激素17β 雌二醇（17β E2）对实验性缺氧损伤 的人视网膜色素上皮（ RPE）细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达和乳酸脱氢酶（LDH）释放率的影响。 方法：用17β E2和17β E2拮抗剂三苯氧胺(Tamxifen, TAM)预处理RPE细胞 后，氯化钴（CoCl2）制备RPE细胞缺氧损伤 模型，分别采用比色法、细胞免疫化学法、逆转录聚合酶链式反应(RT PCR)法检测定正常 对照组、缺氧损伤组、17β E2预处理组及17β E2和TAM预处理组LDH 释放率 、VEGF蛋白表达、VEGF mRNA表达情况。 结果:缺氧损伤组RPE细胞较正 常对照组LDH释放率增加，VE GF mRNA及蛋白表达增多（P＜005）。17β E2预处理组与缺氧损伤组比较，VEGF 的表达和LDH释放率明显降低（P＜005）；17β E2作用被TAM阻断后，VEGF表达 和LDH释放率 增加，与缺氧损伤组比较差差无统计学意义（P＞005）。 结论：V EGF在缺氧损伤的人RPE细 胞中表达增强；17β E2可以抑制缺氧损伤后RPE细胞VEGF的表达，降低其LDH释放率，该 作用可以为其拮抗剂TAM所阻断。      

低氧诱导人视网膜血管内皮细胞中乙酰肝素酶和血管内皮生长因子相关性研究

目的 观察人视网膜血管内皮细胞（HREC）低氧模型中乙酰肝素酶（Hpa）、血管内皮生长因子(VEGF)和RNA 聚合酶-Ⅱ (Pol-Ⅱ)的表达变化,探讨低氧性视网膜新生血管形成中Hpa和VEGF的相关性及可能机制。方法 使用低氧模拟剂氯化钴（CoCl2）造成HREC低氧模型,分为4组,分别为正常对照组、低氧诱导组、磷酸甘露戊糖硫酸盐（PI-88）组和空白对照组。低氧诱导组为含CoCl2 100 μmol/ml的培养液培养48 h;PI-88组为含CoCl2 100 μmol/L和Hpa竞争性抑制剂PI 88 5 μg/ml的培养液干预48 h;空白对照组为等量PBS干预HREC 48 h。免疫荧光染色法观察正常对照组和低氧诱导组HREC中Hpa、VEGF以及Pol Ⅱ的表达。蛋白质免疫印迹（Western blot）检测各组间Hpa和VEGF蛋白表达变化。 结果免疫荧光染色结果显示,低氧诱导组HREC细胞质内Hpa荧光和VEGF荧光均较正常对照组增强;PI-88组细胞质内VEGF荧光较低氧诱导组减弱。低氧诱导组细胞核内Hpa较正常对照组明显增强,且分布与Pol-Ⅱ相吻合。Western blot检测结果显示,与正常对照组比较,低氧诱导组Hpa蛋白和VEGF蛋白表达均明显升高,差异有统计学意义（Hpa：F=-4.005,P＜0.05;VEGF：F=-4.063,P＜0.05）;PI-88组VEGF蛋白表达较低氧诱导组VEGF蛋白表达降低,差异有统计学意义（F=5.963,P＜0.05）。结论 低氧诱导的HREC中,Hpa的表达增高,导致VEGF的增加,促进了视网膜新生血管形成。     

缺氧及血管内皮生长因子对视网膜色素上皮细胞Opticin蛋白表达的影响

目的 探讨缺氧及血管内皮生长因子(VEGF)对视网膜色素上皮(RPE)细胞Opticin 蛋白表达的影响及其内在机制.方法 实验研究.原代培养人眼RPE细胞,取生长良好的第3～6代细胞,接种于含DMEM培养液的6孔板中,于缺氧条件下或加入不同浓度(1、10、50及100 μg/L)VEGF进行培养.逆转录聚合酶链反应(PCR)检测缺氧后RPE细胞中VEGF mRNA的表达.蛋白印迹法检测细胞内和细胞培养液中Opticin蛋白含量.明胶酶谱法检测细胞培养液中明胶酶活性.组间检测数据比较采用单因素方差分析.结果 蛋白印迹法检测,显示缺氧组RPE细胞内Opticin蛋白含量无明显变化;而RPE细胞培养液中,缺氧组Opticin蛋白含量明显下降.逆转录PCR检测,缺氧组12、24 h VEGF mRNA表达灰度值分别为0.81 ±0.04、0.67±0.07,均较正常对照组VEGF mRNA表达灰度值(0.21±0.03)明显升高,差异有统计学意义(F =483.60,P＜0.05).添加不同浓度的外源性VEGF后,RPE细胞内Opticin蛋白表达无明显变化;添加1、10、50及100μg/L的外源性VEGF后,RPE细胞培养液中,Opticin蛋白表达灰度值分别为0.65 ±0.02、0.52±0.04、0.23±0.03、0.30±0.03,均较正常对照组Opticin蛋白表达灰度值(0.73 ±0.04)明显下降(F=141.38,P＜0.05).明胶酶谱法分析,显示与基质金属蛋白酶-2相对应的位置出现明显的消化条带,且酶的活性随VEGF浓度的增加而递增.低浓度的乙二胺四乙酸可抑制由VEGF引起的RPE细胞培养液中Opticin蛋白含量减少.结论 缺氧及VEGF作用可影响RPE细胞培养液中Opticin蛋白分泌,可能与增多的基质金属蛋白酶-2对Opticin蛋白的酶解作用有关.     

抗血管生成作用的VEGFxxxb在缺氧视网膜色素上皮细胞中的表达

背景 缺氧可诱导视网膜色素上皮（RPE）细胞分泌血管内皮生长因子A（VEGF-A）,从而促进脉络膜新生血管（CNV）形成.VEGF-A依选择性剪接方式的不同,可形成具有促血管生成作用的VEGFxxx和具有抗血管生成作用的VEGFxxxb,但后者在常氧和缺氧状态下在人RPE细胞中的表达变化及其作用尚不清楚.目的 从mRNA水平和蛋白水平检测模拟缺氧状态培养的RPE细胞中VEGFmb的表达,研究VEGFxxxb在常氧和缺氧培养的RPE细胞中的表达变化.方法 以人RPE细胞系ARPE-19为研究对象,将150 μmol/L化学诱导剂CoC12加入细胞培养液制备缺氧细胞模型,分别于0h（常氧培养）及缺氧培养3、6、12和24 h收获细胞或细胞上清液,采用逆转录PCR（RT-PCR）法检测细胞内VEGFxxxmRNA和VEGFxxxb mRNA的表达;采用Western blot法检测细胞内总VEGF-A蛋白和VEGFxxxb蛋白的表达;采用ELISA法检测细胞上清中总VEGF-A蛋白和VEGFxxxb蛋白的含量.结果 在常氧及诱导缺氧后,ARPE-19细胞中均可检测到VEGFxxxmRNA和VEGFxxxb mRNA的表达,检测出的VEGFxxxmRNA中同时出现VEGF121、VEGF165和极微弱的VEGF189条带;检出的VEGFxxxb mRNA中可见VEGF165b条带.缺氧培养的细胞中随着缺氧时间的延长,VEGFxxxmRNA显示出表达逐渐增加的趋势,而VEGFxxxb mRNA则显示出表达逐渐减少的趋势.Western blot法可检测到细胞中VEGFxxxb蛋白的表达,尤以VEGF165b表达最强,随缺氧培养时间的延长,VEGF165b蛋白表达逐渐减少.培养的细胞上清中VEGFxxxb蛋白质量浓度由常氧培养时的（166.82±2.55） pg/ml下降至缺氧培养24 h的（125.35±2.10）pg/ml,而总VEGF-A蛋白则由（294.27±11.97） pg/ml上升至（582.26±12.98） pg/ml.细胞中VEGFxxxbb蛋白占总VEGF-A蛋白的比例随缺氧培养时间的延长,由常氧培养条件下的（56.71±1.02）％逐渐下降至缺氧培养24 h的（21.53±0.08）％.结论 ARPE-19细胞在常氧和缺氧培养条件下均可检测到VEGFxxxbb mRNA和蛋白的?     

Genistein suppressed upregulation of vascular endothelial growth factor expression by cobalt chloride and hypoxia in rabbit retinal pigment epithelium cells.

The time course changes of vascular endothelial growth factor (VEGF) protein expression induced by cobalt chloride (CoCl(2)) and hypoxia and the effects of genistein on CoCl(2)- and hypoxia-induced VEGF expression in rabbit retinal pigment epithelium (RPE) cells were studied. Judged by relative fluorescence using a confocal scanning laser microscope coupled to a computer, VEGF protein expression exposed for different periods to CoCl(2) or hypoxia was investigated. CoCl(2) was found to significantly elevate VEGF protein expression. At 4 h after CoCl(2) treatment, the expression of VEGF protein was about three times as much as that at the start of treatment. Genistein (50, 100 and 200 microM) inhibited VEGF protein expression elicited by CoCl(2) in a concentration-dependent manner. Hypoxia (5% CO(2)/95% N(2)) could markedly increase VEGF protein expression. The elevation of VEGF protein expression was gradual and time-dependently. At 6 h, the highest expression of VEGF protein was observed, it was about three times as much as that at the start of treatment. After preincubation with 50, 100, and 200 microM genistein respectively, the hypoxia-evoked VEGF expression was concentration-dependently suppressed. These results indicated that genistein could be an effective agent in the prevention and treatment of intraretinal and subretinal neovascularization.