大肠癌前哨淋巴结微转移的检测及其临床意义

为探讨大肠癌前哨淋巴结（SLN）微转移（MM）的检测方法及其临床意义,我们对64例行根治性手术的DukesB期大肠癌患者SLN进行定位;应用常规HE染色联合免疫组化SIP法染色,对定位成功的122枚SLN中细胞角蛋白20（CK20）及端粒酶进行检测,并分析其表达与I临床病理因素的相关性。结果显示：（1）SLN定位成功61例（95．3％）,共获取SLN122枚。（2）定位成功的61例中,有6例9枚SLN常规HE染色阳性;余55例113枚SLNHE染色阴性,其中免疫组化染色CK20阳性15例（27．3％）,端粒酶阳性12例（21．8％）,两者联合检测SLNMM阳性21例（38．2％）。（3）DukesB期大肠癌患者SLNMM（＋）组癌的复发转移率明显高于同期SLNMM（-）组（P〈0．05）,生存率明显降低（P〈0．05）;而与DukesC期复发转移率及生存率比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。（4）SLNMM（-）组患者的复发转移率、生存率与同期DukesC期患者比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。（5）DukesB期大肠癌患者SLNMM的发生与患者年龄、性别及肿瘤侵犯肠管周径、生长方式、生长部位均无显著相关,而与肿瘤分化程度及大小、外周血癌胚抗原（CEA）值显著相关。结果表明,应用免疫组化法联合检测CK20和端粒酶,可提高大肠癌SLNMM的检出率;大肠癌SLNMM的检出能精确大肠癌的Dukes分期,有助于指导术后的辅助治疗和预后判断。     

nm23和c-erbB-2及p53在结直肠癌组织的表达和意义

目的：探讨nm23和c-erbB-2及p53等抑癌基因的表达同大肠癌的浸润和淋巴结转移的相关性。方法：采用免疫组化染色LSAB法研究了nm23和c-erbB-2及p53蛋白在48例大肠癌组织中的表达以及同大肠癌的浸润和淋巴结转移等临床病理因素的关系。结果：nm23表达阳性60．5％,与淋巴结转移呈负相关（P＜0．05）;c-erbB-2表达阳性50％,与淋巴结转移呈正相关（P＜0．05）;p53表达阳性者,与肿瘤浸润程度,Dukes分期和淋巴结转移均呈正相关趋势（P＞0．05）。结论：nm23蛋白的表达同大肠癌淋巴结转移的呈负相关性,c-erbB-2蛋白等表达同大肠癌淋巴结转移的呈正相关性,大肠癌淋巴结转移是各种因素的综合作用。     

大肠癌组织中基质金属蛋白酶-9、基质金属蛋白酶抑制剂-1的表达及对微血管生成和肿瘤转移的影响

目的　探讨基质金属蛋白酶 -9(MMP -9)与基质金属蛋白酶抑制剂 -1(TIMP -1)在大肠癌中的表达及其与血管生成 ,侵袭转移之间的关系。方法　采用免疫组化S -P法 ,检测 46例大肠癌组织中MMP -9,TIMP -1的表达和微血管密度之间的关系。结果　MMP -9的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、Dukes分期及淋巴结转移明显相关 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;TIMP -1的表达与Dukes分期、淋巴结转移明显相关 ( P <0 .0 5或 P <0 .0 1) ;MMP -9表达阳性的大肠癌组织微血管密度 (MVD)值明显高于表达阴性者 (P <0 .0 1)。结论　MMP -9、TIMP -1的表达和微血管生成与大肠癌侵袭转移密切相关     

金属硫蛋白和FasL在大肠癌组织中表达及临床意义的研究

目的探讨金属硫蛋白（MT）和FasL表达与大肠癌淋巴结及肝转移的关系。方法采用免疫组化和定量RT-PCR方法检测93例大肠癌原发灶、正常结肠黏膜、转移淋巴结和肝转移灶MT、FasL表达。结果大肠癌原发灶、正常结肠黏膜、转移淋巴结和肝转移灶中MT表达阳性率分别为：58．1％、32．3％、81．1％、64．3％。FasL表达阳性率分别为：41．9％、19．4％、62．3％、92．9％。癌原发灶、肝转移灶和转移淋巴结中MT、FasL表达阳性率高于正常肠黏膜组织（X^2=35．2421、57．5152,P〈0.01）。转移淋巴结MT表达阳性率高于癌原发灶（X^2=8．0565,P〈0.01）。肝转移灶FasL表达阳性率高于转移淋巴结和癌原发灶（X^2=8．6674、22．4455,P〈0．01）。Dukes′C、D期MT、FasL表达阳性率高于Dukes′A、B期（X^2=18．8871、25．1650,P〈0．01）。低分化腺癌和黏液腺癌MT、FasL表达阳性率高于高分化和中分化腺癌（X^2=11．1546、9．2239,P〈0．05）。转移淋巴结中MT mRNA表达高于FasL mRNA表达。肝转移灶中FasL mRNA表达水平高于MT mRNA表达。结论MT、FasL增强表达与大肠癌淋巴结转移和肝转移有关,检测MT、FasL表达可作为大肠癌预后评价指标。     

基质金属蛋白酶－9、细胞金属蛋白酶抑制因子－1在胃癌中的表达

目的：探讨基质金属蛋白酶－9（MMP－9）,组织金属蛋白酶抑制因子－1（TIMP－1）在胃癌中表达的意义。方法：采用免疫组化S－P法对47例胃癌组织进行MMP－9及TIMP－1的检测。结果：MMP－9,TIMP－1主要表达于癌周基质细胞,癌细胞少量表达,MMP－9,TIMP－1表达与胃癌患淋巴结转移（P＜0．01）,浆膜浸润相关（P＜0．01）;TIMP－1的表达与胃癌TNM分期相关（P＜0．05）,而MMP－9的表达与胃癌TNM分期无相关性（P＞0．05）。结论：MMP－9及TIMP－1可作为判断胃癌恶性行为的重要生物学标记物。     

壶腹癌MMP-9、TIMP-1的表达及其与淋巴结转移的相关性研究

目的：探讨基质金属蛋白酶9（MMP－9）、组织金属蛋白酶抑制因子－1在壶腹癌中表达的意义。方法：采用免疫组化S－P法对32例壶腹癌组织进行MMP－9、TIMP－1的检测。结果：MMP－9、TIMP－1在壶腹癌组织中阳性表达率分别为65．6％（21／32），46．9％（15／32），MMP－9的表达与壶腹癌患者淋巴结转移呈正相关（P＜0．05），而TIMP－1的表达则相反，MMP－9和TIMP－1的表达呈负相关（P＜0．01）。结论：MMP－9可作为判断壶腹癌恶性生物学行为的标记物。人工诱导TIMP－1的表达可能抑制肿瘤的浸润和转移，为肿瘤治疗提供了新的方向。     

联合检测大肠癌组织中血管内皮生长因子与门静脉血细胞角蛋白20mRNA的临床意义

目的探讨大肠癌病人肿瘤组织血管内皮生长因子（VEGF）蛋白和门静脉血细胞角蛋白20（cytokeratin,CK20）mRNA作为血行播散标志物的临床意义。方法RT-PCR技术检测63例大肠癌病人门静脉血CK20mRNA表达阳性率,免疫组织化学方法检测肿瘤标本VEGF蛋白的表达。结果随着病情由Dukes A、B期向Dukes C、D期进展,门静脉血CK20 mRNA表达的阳性率由64．9％升高到96．2％（P〈0．01）。高、中分化肿瘤组织VEGF蛋白阳性率为50．0％,低、未分化时升高到92．3％（P〈0．01）。CK20 mRNA与VEGF作为单项指标测定时,阳性率分别为77．8％和58．7％,联合检测时阳性率显著升高（92．1％）。结论大肠癌病人门静脉血中CK20 mRNA和肿瘤组织VEGF作为衡量大肠癌浸润能力的指标,二者表达分别与Dukes分期和肿瘤恶性程度的关系密切。联合检测二者时,敏感性显著提高,可弥补单项指标检测的不足,值得在临床上推广。     

RAB5A、基质金属蛋白酶-9在大肠癌中的表达及其关系

目的检测RAB5A、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在大肠癌组织中不同部位的表达及两者之间的相互关系。方法应用免疫组织化学SP法对46例大肠癌组织、距癌灶3cm的癌旁组织和23例非肿瘤患者大肠组织中RAB5A和MMP-9进行检测。结果46例大肠癌组织中。RAB5A蛋白的表达阳性率为100％（46／46），阳性表达位于胞质和胞膜；MMP-9的表达阳性率73．91％（34／46），阳性表达位于胞质。RAB5A和MMP-9表达在有淋巴结转移、Dukes分期晚及分化程度低的患者中表达程度高（P〈0．05），MMP-9的表达还在大肠癌浸润度深的患者中表达程度高（P〈0．05）。RAB5A和MMP-9的表达与性别、年龄、肿瘤部位均无关（P〉0．05）。RAB5A和MMP-9的表达存在正相关（P〈0．05，r=0．434）。结论RAB5A和MMP-9的表达有可能作为判断大肠癌恶性程度、转移的参考指标。     

基质金属蛋白酶和组织金属蛋白酶抑制剂在大肠癌中的表达

目的　研究基质金属蛋白酶 (MMPs)及组织金属蛋白酶抑制剂 (TIMPs)在大肠癌中的表达特点 ,与肿瘤发生发展的关系 ,以及在肿瘤治疗中的应用前景。　方法　采用RT PCR方法测定 2 8例大肠癌患者肿瘤组织和周围正常粘膜的基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )、膜型 1 基质金属蛋白酶 (MT1 MMP)、基质溶素 (MMP 7)、组织金属蛋白酶抑制剂 2 (TIMP 2 )、组织金属蛋白酶抑制剂 3(TIMP 3)的mRNA表达状况 ,并将其结果与临床及病理学资料进行统计学分析。　结果　 (1) 2 7例患者肿瘤组织中MMP 7mRNA表达阳性 ,MMP 2、MT1 MMP、TIMP 2和TIMP 3在肿瘤组织和正常粘膜中均有高表达 ;(2 )肿瘤组织中MMP 7mRNA的表达水平与大肠癌患者的Dukes′分期相关 (P <0 0 1) ;(3)淋巴结阳性患者的肿瘤组织TIMP 2表达水平为 (1 2 5± 0 46 )明显高于淋巴结阴性患者的 (0 75± 0 41) ,差异有显著性意义 (P <0 0 1) ;(4)大肠癌患者癌周正常粘膜TIMP 3mRNA表达随患者Duke′s分期的进展和肿瘤浸润深度的增加而降低 (P <0 0 1) ;(5 )TIMPs与MMPs之间无明显相关关系 (P >0 1)。　结论　MMP 7可望成为诊断大肠癌的敏感指标 ;人工诱导TIMP 2、TIMP 3或阻断MMP 7、MMP 2、MT1 MMP的表达可能抑制肿瘤的浸润和转移 ,成为肿瘤治疗的新途径。     

细胞角蛋白20及端粒酶的表达在大肠癌微转移中的意义

目的 探讨大肠癌前哨淋巴结(sentinel lymph node,SLN)微转移(micrometastasis,MM)的检测方法及其临床意义.方法 前瞻性研究2004年9月至2005年7月在甘肃省人民医院64例行根治性手术的DukesB期大肠癌病人,对其中61例定位成功的122枚SLN应用常规HE染色联合免疫组化SP法检测其前哨淋巴结中细胞角蛋白20(CK20)及端粒酶的表达,随访满3年,记录病人的临床病理参数和生存资料,分析其相关性.结果 (1)61例中6例病人9枚SLN经常规HE检测阳性.(2)免疫组化法有27.3%05/55)病人其SLN存在CK20阳性,21.8%(12/55)的病人SLN存在端粒酶阳性表达.(3)两者联合检测微转移检出率为38.2%(21/55).(4)DukesB期SLN MM(+)病人癌复发转移率明显高于同期SLN MM(-)组(P<0.05),存活率则降低(P<0.05),与DukesC期对比差异无统计学意义;SLNMM(-)组的复发转移率、存活率与同期DukesC期病人对比,差异有统计学意义(P<0.05).结论 免疫组化法联合检测端粒酶和CK20可提高DukesB期大肠癌SLNMM的检出率.并且对于明确大肠癌病人Dukes分期,指导术后合理的辅助治疗和预后判断有重要的临床意义.     

转移抑制基因nm23-H1在结直肠癌中的表达及其与临床病理因素的关系

目的 探讨人结直肠癌组织中nm23-H1表达及其与临床病理因素的关系。方法 应用逆转录PCR及免疫组织化学(免疫组化)方法,分别测定30例结直肠癌手术切除标本及癌旁2、5cm组织和远端正常对照组织的nm23-H1 mRNA以及蛋白表达水平,分析nm23-H1与结直肠癌临床病理因素的关系。结果 结直肠癌中nm23-H1 mRNA的低表达与淋巴结转移及Dukes分期明显相关(P<0.05)。nm23-H1蛋白表达水平与结直肠癌中淋巴结转移、分化程度、Dukes分期呈明显的负相关(P<0.05),并同基因转录水平一致。结论 nm23-H1的降表达是结直肠癌转移中的重要的分子生物学事件,检测结直肠癌中nm23-H1的表达情况对评估患者的预后可能具有意义。     

去甲斑蝥素对荷瘤裸鼠胆囊癌移植瘤的抗癌作用机制

目的 探讨去甲斑蝥素（NCTD）对荷瘤裸鼠胆囊癌移植瘤的抗癌作用机制。方法 在建立裸鼠胆囊癌移植瘤动物模型的基础上进行肿瘤增殖、侵袭、转移体内干预实验,实验分空白对照、氟尿嘧啶、NCTD、NCTD＋氟尿嘧啶4组。6周末应用链霉素亲和生物素复合物（SABC）法检测移植瘤增殖细胞核抗原（PCNA）、Ki-67、细胞周期素D1（cyclin D1）、p27、Bcl-2蛋白,逆转录PCR（RT-PCR）检测PCNA、cyclin D1、p27、Bcl-2、Bax、存活素（Survivin）基因mRNA。HE染色观察瘤周癌细胞浸润、侵袭,解剖显微镜下观察肺组织转移瘤结节,并采用SABC和RT-PCR检测nm23、金属蛋白酶2（MMP2）及其组织抑制剂（TIMP2）蛋白和mRNA。结果 NCTD组增殖相关PCNA、Ki-67、cyclin D1蛋白表达下降,p27蛋白表达上升;PCNA mRNA、cyclin D1 mRNA表达下降,p27 mRNA表达增高。NCTD组凋亡相关Bcl-2蛋白表达下降;Bcl-2 mRNA、Survivin mRNA表达下降,Bax mRNA表达增高。NCTD显著减少荷瘤鼠移植瘤的瘤周癌细胞浸润和肺转移结节（P〈0．01）;NCTD组转移相关MMP2蛋白表达下降,nm23、TIMP2蛋白表达上升;nm23-H,mRNA、TIMP2 mRNA表达增高。结论 NCTD抑制荷瘤裸鼠胆囊癌移植瘤增殖、侵袭和转移的机制可能与NCTD干扰胆囊癌移植瘤细胞周期,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,阻止细胞迁移运动,以及影响细胞增殖、细胞周期调控、细胞凋亡、细胞基质溶解和转移相关基因蛋白表达有关。     

结直肠癌中抑癌基因ING1的表达研究

目的探讨抑癌基因ING1及其蛋白p33/ING1在结直肠癌中的表达。方法用RT-PCR检测35例散发性结直肠癌中ING1mRNA的表达水平,并应用S-P法检测60例散发性结直肠癌及正常黏膜组织中p33/ING1蛋白的表达。结果结直肠癌组织、正常黏膜组织中p33/ING1蛋白阳性表达率分别为43.3%(26/60)、100%(60/60),两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。p33/ING1在无淋巴结转移组及淋巴结转移组中的阳性表达率分别为57.6%(19/33)、25.9%(7/27),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。在DukesA、B期和DukesC、D期患者癌组织中p33/ING1的阳性表达率分别为56.7%(17/30)、30.0%(9/30),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论ING1及p33/ING1蛋白的低表达与散发性结直肠癌发生、发展密切相关,临床分期越差者表达水平越低。     

大肠癌中CD44V6、CD44s表达与nm23-H1表达相关性及临床意义

目的　了解CD4 4V6 、CD4 4s、nm2 3-H1 在结直肠癌组织、移行粘膜及正常粘膜间的表达 ,探讨它们与结直肠癌侵袭与转移的关系。方法　运用免疫组化SABC法测定CD4 4V6 、CD4 4s、nm2 3-H1 在癌组织、癌远端 3cm处的移行组织及正常结直肠组织中的表达 ,同时记录有关的临床病理指标。结果　CD4 4V6 、、CD4 4s、nm2 3-H1 阳性表达率分别在癌组织中为 70 .18%、4 2 .11%及 5 4 .39%与移行组织中 12 .0 2 %、89.4 7%、91.2 %及正常结直肠组织中 0、10 0 %、94 .74 % ,其差别有显著性 (P <0 .0 5 )。CD4 4V6 表达与肿瘤侵袭深度、Dukes分期及淋巴结转移正相关 ,nm2 3-H1 表达与Dukes分期、淋巴结转移呈负相关 (P <0 .0 5 )。CD4 4s在移行粘膜与正常组织表达有显著差别 (P <0 .0 5 )。结论　结直肠癌组织CD4 4V6 表达增多 ,CD4 4s及nm2 3-H1 表达降低。CD4 4V6 及nm2 3-H1 与结直肠癌的侵袭与转移有关 ,CD4 4V6 变化较nm2 3-H1 在前。直肠癌手术时癌远端至少应切除 3cm长的肠管     

VEGF和CK20mRNA联合检测在大肠癌病人中的意义

目的探讨大肠癌病人外周血细胞角蛋白(CK20 mRNA)和肿瘤组织VEGF蛋白作为大肠癌肿瘤细胞血行播散标志的临床意义。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和免疫组织化学方法检测63例大肠癌术中抽取的外周血CK20 mRNA和手术切除肿瘤组织中VEGF蛋白的表达,并对所测结果进行分析和比较。结果高、中分化和低、未分化大肠癌病人的CK20 mRNA和VEGF的阳性率分别为30.0%、50.0%和84.6%、92.3%,均有非常显著性差异(P<0.01)。DukesA、B期和C、D期大肠癌病人CK20 mRNA和VEGF的阳性率分别为32.4%、56.8%和53.8%、61.6%,无显著性差异(P>0.05)。CK20 mRNA与VEGF作为单项指标测定的阳性率分别为41.3%和58.3%,联合检测时阳性率升至69.8%,有非常显著性差异(P<0.01)。结论大肠癌病人外周血CK20 mRNA和肿瘤组织VEGF可作为衡量术后复发转移的有效指标;两者联合检测时,敏感性显著提高。     

ANALYSIS OF nm23 GENE EXPRESSIONS IN HUMAN BLADDER AND RENAL CANCERS

We measured nm23-H1 and nm23-H2 mRNA levels in tissues from 22 human bladder cancers and 16 renal cell carcinomas, and in 7 bladder cancer and 6 renal cancer cell lines by Northern blot and slot blot hybridization analyses. Differences in mRNA levels were evaluated in primary tumor tissues and in paired normal tissues and cell lines. Moreover, nrh23 gene expression in primary tumor tissues was compared with clinicopathological features. High nm23-H1 and nm23-H2 expression was observed in cancerous areas of human bladder tissue ( nm23-H1 : p = 0.001, nm23-H2 : p = 0.001) and bladder cancer cell lines ( nm23-H1: p = 0.001, nm23-H2: p< 0.001) compared with that in normal bladder mucosa. However, mRNA levels of both nm23 genes were not associated with histological grade, pathological stage, tumor metastasis or prognosis. On the other hand, in human renal cell carcinomas, levels of both nm23 mRNAs in tumor tissues were similar to those in paired normal kidneys, but elevated in cultured cell lines ( nm23-H1: p= 0.002, nm23-H2: p = 0.014). Moreover, there was a tendency towards high nm23 gene expression in grade 2 tumors compared with grade 1 (grade 1 vs grade 2, nm23-H1: p = 0.107, nm23-H2: p = 0.008; no grade 3 tumors in this study) and in high stage renal cancers (stage II vs stage III, nm23-H1: p = 0.023, nm23-H2: p = 0.005). From these results, we suggest that reduced nm23 mRNA levels are not associated with metastasis of either bladder or renal cancers and there may be some tissue-specific differences in the expression patterns of nm23-H1 and nm23-H2 in human cancers.     

VEGF、EGFR、CD44V6、Cath-D及nm23-H_1在结直肠癌组织中的表达及意义

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子受体(EGFR)、CD44V6、Cath-D、nm23-H1在结直肠癌组织中的表达及临床意义.方法 选择2000年1月至2001年12月行根治性手术的131例结直肠癌病例,应用免疫组化SP法检测肿瘤组织中VEGF、EGFR、CD44V6、Cath-D及nm23-H1的表达情况,分析其与术后复发转移的关系.结果 全组术后复发转移率为31.3%(41/131),VEGF、EGFR、CD44V6、Cath-D、nm23-H1阳性率分别为62.6%(82/131)、58.0%(76/131)、52.7%(69/131)、55.0%(72/131)、72.5%(95/131),VEGF阳性组、EGFR阳性组、CD44V6阳性组、Cath-D阳性组、nm23-H1阴性组术后复发转移率较高(P值均<0.05).根据VEGF、EGFR、CD44V6、Cath-D、nm23-H1的表达情况对患者进行评分再分成3组,3组间的术后复发转移率两两间存在统计学差异(P值均<0.05).结论 VEGF、EGFR、CD44V6、Cath-D、nm23-H1 与结直肠癌术后复发转移有关,合并这些不良预后因素越多,患者的预后越差.