mTOR信号通路与消化系统肿瘤

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号途径的异常与肿瘤密切相关.经典和新型的mTOR抑制剂在消化系统肿瘤的临床前和临床研究显示了该类药物具有抗肿瘤作用,并且能够增强肿瘤细胞对现有化疗药物的敏感性.     

干扰mTOR表达增强食管鳞癌EC9706细胞对雷帕霉素的敏感性

目的：观察哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR)特异性小干扰RNA（mTOR-siRNA）干扰mTOR表达后,食管鳞癌EC9706细胞对雷帕霉素(rapamycin)敏感性的变化。方法：mTOR-siRNA转染EC9706细胞, RT-PCR检测干扰效果。mTOR-siRNA转染前后的EC9706细胞用雷帕霉素处理,Western blotting检测EC9706细胞中mTOR及其下游p70S6K蛋白的表达;流式细胞术检测EC9706细胞的周期及凋亡,CCK-8试剂盒检测EC9706细胞的增殖。结果：mTOR-siRNA下调EC9706细胞中mTOR mRNA的表达（P<0.05或P<0.01);雷帕霉素抑制EC9706细胞中mTOR和p-p70S6K蛋白的表达（P<0.05),并促进p70S6K蛋白表达(P<0.01),且mTOR-siRNA转染后此作用更明显（P<0.05）。雷帕霉素可诱导EC9706细胞凋亡(P<0.01)、抑制EC9706细胞增殖(P<0.05或P<0.01)、使EC9706细胞阻滞于G1期(P<0.01),且mTOR-siRNA转染后这些作用更强（P<0.05）。结论：mTOR-siRNA能特异性下调食管鳞癌EC9706细胞中mTOR表达,提高EC9706细胞对雷帕霉素的敏感性。     

HIP1影响食管鳞癌Akt/GSK3β信号通路及EMT相关蛋白表达分析

摘 要：［目的］ 探讨亨廷顿蛋白相互作用蛋白1（huntingtin interacting protein 1,HIP1）促进食管鳞癌转移的作用及机制。［方法］采用qRT-PCR及Western blot检测Akt抑制剂处理HIP1高或低表达食管鳞癌细胞系中HIP1、GSK3β及EMT标志性分子E-cadherin和Vimentin的表达。采用IHC检测食管鳞癌组织样本中目的分子的表达,并分析其表达相关性。［结果］ qRT-PCR和Western blot结果显示：与对照组、shRNA-对照组相比,shRNA-HIP1组细胞中Akt、GSK3β及Vimentin基因和蛋白表达显著降低（P<0.001）,E-cadherin基因和蛋白表达显著升高（P<0.001）;与对照组、OE-对照组相比,OE-HIP1组细胞中Akt、GSK3β及Vimentin基因和蛋白表达显著升高（P<0.001）,E-cadherin基因和蛋白表达显著降低（P<0.001）。IHC及相关性分析结果显示,HIP1与GSK3β、Vimentin表达呈正相关（r=0.336,P<0.001;r=0.561,P<0.001）,与E-Cadherin表达呈负相关（r=-0.169,P=0.027）;GSK3β与Vimentin表达呈正相关（r=0.317,P<0.001）,与E-Cadherin表达呈负相关（r=-0.171,P=0.025）。Akt抑制剂处理HIP1高或低表达食管鳞癌细胞系结果显示,Akt抑制剂处理后E-cadherin表达升高,GSK3β及Vimentin表达降低。［结论］HIP1 可能通过激活Akt/GSK3β信号通路促进食管鳞癌EMT的发生。     

TGF-β对EMT的诱导及EMT抑制剂研究进展

上皮-间质转化(EMT)是肿瘤细胞获得侵袭和转移能力的最主要途径。转化生长因子β(TGF-β)是已知诱导肿瘤细胞发生EMT的关键因子。本文系统介绍TGF-β及其诱导肿瘤细胞发生EMT的信号通路,并综述抑制EMT发生的新抑制剂。     

TGF-β与细胞内信号通路的交互作用在肿瘤研究中的进展

转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）信号通路在肿瘤发生发展过程中发挥双向调节作用。TGF-β能够抑制上皮细胞的生长、增殖并诱导其凋亡,发挥抑制肿瘤的作用,因此上皮细胞失去对TGF-β抑制增殖的反应是肿瘤发生过程中的标志性事件。随着肿瘤进展,TGF-β能够促进肿瘤细胞侵袭、转移、耐药以及维持肿瘤干细胞潜能。目前,TGF-β的上述作用转变与其细胞内多条信号通路的交互作用有关,这种交互作用既能减弱或解除TGF-β的增殖抑制和促凋亡作用,又能增强其促进肿瘤进展和恶化的功能。本文主要针对TGF-β在肿瘤进展中与多条细胞内信号通路交互联系的分子机制,以及交互作用对肿瘤发生发展的影响进行综述。      

二氢杨梅素介导上皮间质转化调控食管鳞癌细胞增殖和凋亡

目的探讨二氢杨梅素(DMY)对食管鳞癌细胞KYSE150和KYSE410增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的影响。方法采用不同浓度(0、25、50、100、150、200 μmol/L)的DMY处理KYSE150和KYSE410细胞24 h, 采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测KYSE150和KYSE410细胞的半数抑制浓度(IC50)值。以0.5‰二甲基亚砜(DMSO)组为对照组、DMY、DMY+转化生长因子β1(DMY+TGF-β1)、转化生长因子β1(TGF-β1)为实验组, 采用克隆形成实验和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况, Transwell侵袭实验和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力, Western blot法检测半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase-9)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)、细胞信号转导分子Smad2/3(Smad2/3)、磷酸化细胞信号转导分子Smad2/3(p-Smad2/3)、波形蛋白(Vimentin)的蛋白表达水平。结果 DMY对KYSE410和KYSE150细胞IC50...     

TGF-β诱导的linc01503促进食管鳞状细胞癌细胞的增殖、侵袭及EMT过程

目的：探讨长链非编码RNA（long noncoding RNA,lncRNA）linc01503 在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell cancer,ESCC）组织和细胞中的表达及其对ESCC 细胞增殖、侵袭及上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响。方法：选取2012 年1 月至2014 年12 月河北医科大学第四医院收治的119 例ESCC患者的癌及癌旁组织标本,应用qPCR法检测ESCC 组织及ESCC 细胞系（Kyse150、Kyse170、Eca109、TE1 和TE13）中linc01503 的表达水平;分别用pGPU6-shRNAlinc01503转染、TGF-β1 处理ESCC 细胞,用qPCR 法检测转染前后EMT相关基因及处理前后linc01503 表达的变化,用MTS及Transwell 小室法检测linc01503 对ESCC细胞增殖及侵袭的影响。结果：linc01503 在ESCC组织和细胞系中高表达（均P<0.05）,ESCC组织中linc01503 高表达与患者淋巴结转移、浸润深度、TNM分期有关联,并与生存期密切相关（均P<0.05）。TGF-β 处理促进ESCC细胞的EMT过程,同时诱导linc01503 表达明显上调。linc01503 敲低明显抑制细胞的增殖及侵袭能力（均P<0.05）,同时明显增加了E-cadherin 的表达而降低了N-cadherin、vimentin 基因的表达（均P<0.05）。结论：linc01503 作为TGF-β 的下游效应基因之一,促进了ESCC细胞的增殖、侵袭及EMT过程。     

雷帕霉素对食管鳞癌细胞系EC9706的mTOR/p70S6K信号通路的影响

目的：观察雷帕霉素（rapamycin，rapa）对食管鳞癌细胞系EC9706的mTOR／p70S6K信号通路的影响。方法：采用免疫细胞化学证实mTOR／p70S6K信号通路的存在，然后通过DNALadder、RT—PCR、Westernblot及流式细胞术分别从DNA、RNA、蛋白及细胞水平研究rapa对细胞凋亡和信号通路的影响。结果：免疫细胞化学结果显示，在细胞核及细胞质中mTOR均呈阳性；rapa处理后有明显DNALadder产生，且mTOR的mRNA水平及蛋白水平下调。但是，mTOR下游的直接靶点p70S6K的mRNA水平及蛋白水平则升高，二者的变化程度均与rapa剂量的相关；流式细胞术检测结果表明，rapa可使细胞停滞于G1期。结论：食管鳞癌细胞系EC9706中存在mTOR／p70S6K信号通路并且处于激活状态，rapa能明显促进细胞凋亡并抑制该通路激活，从而间接抑制翻译的进行。     

TGF-β在肿瘤微环境中多重作用的研究进展

转化生长因子β(Transforming growth factor-β,TGF-β)通路在调节细胞生长、分化和迁移中的显著作用决定了该信号通路在癌细胞的进展过程中也具有至关重要的作用。TGF-β通过经典和非经典的这两类信号转导途径来改变细胞的表型,发挥着肿瘤抑制或肿瘤促进的作用。TGF-β通过诱导上皮-间充质细胞转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)来驱动肿瘤细胞进程,同时在这个过程中上皮细胞获得新的间充质的表型,使肿瘤细胞的转移能力和侵袭能力增强。这证明了TGF-β通路是促进肿瘤发展的因素。然而也有相反的证据表明,癌细胞中TGF-β信号转导途径的缺失与阻断也可以导致肿瘤细胞转移能力的增强。这篇综述回顾TGF-β对肿瘤微环境组成部分的调节和这种调节如何引起肿瘤进展作相关研究。     

转化生长因子β1信号传导通路在口腔鳞癌中的功能意义

目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)及其信号通路分子在口腔鳞癌中的表达及与口腔鳞癌发生和转移的关系.方法 采用免疫组织化学SP方法,检测TGF-β1及其受体Ⅰ(TβR Ⅰ)、Ⅱ(TβRⅡ)和该信号内下游关键分子Smad4在10例正常口腔组织和108例口腔鳞癌组织中的表达情况,分析其与口腔鳞癌发生和转移的关系.结果 TβR Ⅱ和Smad4在口腔鳞癌组织中的阳性表达率分别为34.3%和38.9%,在正常口腔上皮组织中的阳性表达率分别为80.0%和100.0%,差异有统计学意义(P<0.05);而TGF-β1、TβR Ⅰ的阳性表达在口腔鳞癌组织和正常口腔上皮组织间的差异无统计学意义(P>0.05).TGF-β1、Smad4、TβR Ⅰ和TβR Ⅱ的阳性表达率均与临床分期呈负相关(P<0.01),其中TGF-β1表达与临床分期、组织分化、肿瘤发生部位有关(P<0.05);Smad4表达与组织分化、淋巴结转移旱负相关(P<0.05);虽然TβR Ⅱ表达与淋巴结转移无关(P>0.05),但淋巴结转移组的TβR Ⅱ表达明显低于无淋巴结转移组.结论 Smad4介导的TGF-β1(TGF-β1/Smad4)信号通路异常与口腔鳞癌的发生和发展密切相关,TβRⅡ、Smad4低表达可促进口腔鳞癌的转移.     

姜黄素通过PI3K/AKT/mTOR通路抑制TGF-β1诱导的肺癌细胞上皮间质转化

摘 要：［目的］ 探讨姜黄素对TGF-β诱导的肺癌A549细胞上皮间质转化、侵袭转移的影响及其可能的机制。［方法］ 通过转化生长因子TGF-β1诱导肺癌细胞株A549发生上皮间质转化;利用不同浓度姜黄素干预由TGF-β1诱导的肺癌 A549细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化,细胞划痕实验、Transwell 侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力变化,Western blot法检测上皮表型标记蛋白E-cadherin和间质表型标记蛋白N-cadherin、Vimentin的表达及PI3K/AKT/mTOR信号通路中AKT、mTOR磷酸化的情况,并利用PI3K抑制剂LY290004、mTOR抑制剂Rapamycin通过上述方法对姜黄素的作用进行印证。［结果］ 与对照组相比,姜黄素显著增加A549细胞E-cadherin的表达,抑制N-cadherin和Vimentin蛋白及TGF-β1刺激p-AKT和p-mTOR的表达,且呈明显的剂量—时间依赖关系;同时抑制TGF-β诱导的侵袭迁移。［结论］ 姜黄素可通过PI3K/AKT/mTOR通路明显抑制TGF-β1诱导的肺癌A549细胞上皮间质转化,降低其侵袭迁移能力。     

mTOR通路对神经母细胞瘤SH-SY5 Y细胞自噬作用的影响

目的：研究雷帕霉素靶蛋白（ mammalian target of rapamycin,mTOR）通路对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自体吞噬作用的影响。方法：应用不同浓度的雷帕霉素作用于神经母细胞瘤细胞,采用实时荧光定量PCR检测雷帕霉素作用前后神经母细胞瘤细胞株的mTOR、LC3及Beclin 1 mRNA表达情况。结果：雷帕霉素能抑制mTOR表达且呈现量效依赖关系,不同浓度的雷帕霉素分别对SH-SY5Y细胞作用72h后,mTOR mR-NA的表达随浓度增加逐渐下降。而LC3及Beclin 1 mRNA的表达随浓度增加逐渐上升,神经母细胞瘤中mTOR与LC3及Beclin 1的表达呈负相关。结论：雷帕霉素通过抑制mTOR信号通路促进神经母细胞瘤的自体吞噬作用,动态观察mTOR可作为神经母细胞瘤治疗效果监测的指标之一。     

转化生长因子β_1在食管鳞癌中的表达及临床意义

目的　研究TGF β1在食管鳞癌中的表达及临床意义。方法　采用免疫组化SABC法检测 85例食管鳞癌组织TGF β1的表达 ,分析其与临床病理的相关性。结果　在 85例食管鳞癌中TGF β1阳性6 2例 ,阳性率 72 9%。其表达与患者病理分级、临床分期以及肿瘤远处转移无关 (P >0 .0 5 ) ;与肿瘤局部浸润深度 ,淋巴转移以及生存时间有关 (P <0 .0 5 )。结论　TGF β1高表达是食管鳞癌早期浸润和淋巴转移的危险信号 ,并是影响预后的重要因素。     

雷帕霉素靶蛋白信号通路在食管癌细胞系中激活状态的研究

[目的]研究雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号传导通路在食管鳞癌细胞系EC9706和Eca109中的激活状态。[方法]采用细胞免疫组化检测mTOR及其下游靶分子（p70S6K）在两细胞系中的表达．并采用RT-PCR和Western blot方法分别从mRNA水平及蛋白水平测定此通路的活性。[结果]mTOR在两种细胞系中均有表达，且在EC9706中的表达水平明显高于Eca109，mTOR下游靶点（p706S6K）的磷酸化水平也是EC9706明显高。[结论]mTOR信号通路在两种细胞系中都是特异性激活。激活状态与细胞的分化程度有关，细胞分化程度越低，通路的激活水平越高。     

TGF-β信号通路介导胃癌EMT的研究进展

胃癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一,由于缺乏早期典型症状,很多患者确诊时已经处于进展期,胃癌的主要治疗手段还是手术及化疗,五年生存率较低,大约处于20%~30%。胃癌又是一种异质性很强的恶性肿瘤,在种族、地域以至于个体之间,甚至于同一个体内的不同空间(如原发灶和转移灶)和时间节点(如初发病灶和复发病灶)在分子基因学以及肿瘤微环境等方面也不尽相同。探究胃癌发生、发展机制对胃癌治疗具有重要意义。上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）是一种复杂的分子程序,多项研究表明EMT的异常活化与肿瘤的发生、侵袭、转移密切相关。转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）被认为是促进EMT的发生和肿瘤转移不可缺少的诱导因子,靶向TGF-β信号通路及其调节因子可能是预防和治疗胃癌的潜在策略。本文就TGF-β信号通路介导胃癌EMT的研究进展及作用于TGF-β信号通路的诱导剂及抑制剂作一综述。     

Gli-1信号通路对TGF-β1诱导的人胃癌细胞上皮间质转化和侵袭的影响

目的:探讨核转录因子神经胶质瘤关联癌基因同源物1（glioma associated oncogene homolog 1,Gli-1）对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的作用机制。方法:体外采用10 ng/ml TGF-β1对胃癌SGC-7901细胞进行处理,使用倒置显微镜观察细胞形态变化,RT-PCR和Western blot检测EMT上皮表型蛋白E-cadherin和间质表型蛋白Vimentin的表达水平;Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力变化,检测TGF-β1 对SGC-7901细胞发生EMT 的影响;同时采用RT-PCR和Western blot检测Gli-1的mRNA和蛋白表达水平。随后进一步采用Gli-1基因特异性阻断剂GANT 61阻断Gli-1表达,并使用TGF-β1（10 ng/ml）对SGC-7901细胞进行处理,RT-PCR 和Western blot检测Gli-1、E-cadherin和Vimentin mRNA 及其蛋白表达水平的改变,并使用Transwell细胞侵袭实验检测阻断Gli-1对SGC-7901细胞侵袭能力的影响。结果:TGF-β1可以诱导人胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化并促进细胞侵袭。TGF-β1可以在mRNA和蛋白水平下调上皮表型蛋白E-cadherin的表达、提高Gli-1和间质表型蛋白Vimentin的表达。TGF-β1可以明显提高SGC-7901细胞侵袭,而阻断Gli-1后可以抑制TGF-β1诱导的人胃癌SGC-7901细胞上皮间质转化和细胞侵袭。结论:胃癌SGC-7901细胞中Gli-1 可能参与TGF-β1 介导的EMT 的发生,Gli-1 可能作为胃癌基因治疗中的有效靶点发挥作用。     

TGF-β/Smad信号通路与食管癌上皮间质转化的研究进展

国内外的多项研究显示,在消化系统肿瘤中普遍存在上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)现象,并与浸润转移及预后差密切相关。已有研究发现转化生长因子-β(TGF-β)在诱发EMT过程中起重要作用,而Smads蛋白是TGF-β下游关键的信号蛋白分子,是将TGF-β信号从细胞外转导到细胞核内的关键因子。本文就食管癌上皮-间质转化与TGF-β/Smad信号通路关系的研究进展作一综述。     

TGF-β1诱导上皮间质转化过程中线粒体合成与功能的改变

目的：研究在转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导上皮间质转化过程中线粒体合成与功能的改变。方法：体外培养人肺癌A549细胞,经不同浓度（0、2.5、5、10、20、40 ng/mL） TGF-β1处理24和48 h后观察其形态变化;采用CCK-8法检测经TGF-β1处理48 h后A549细胞的活力;流式细胞术检测细胞凋亡、活性氧（ROS）、线粒体活性氧及线粒体膜电位的变化;酶标仪检测ATP含量;Western blot分别检测细胞中上皮间质转化（EMT）相关标记物（E-cadherin和α-SMA）及线粒体合成相关蛋白（NRF-1及mt-TFA）的表达水平。结果：与对照组相比,随着TGF-β1浓度增加,A549细胞活力逐步上升,呈剂量-效应关系（r=0.941,P < 0.05）;5~20 ng/mL TGF-β1处理组凋亡率明显升高（P均 < 0.05）;不同浓度TGF-β1处理A549细胞48 h后大部分细胞呈现明显的间质细胞形态,出现上皮间质转化;Western blot结果显示,与对照组比较,经TGF-β1处理48 h后上皮标记物E-cadherin蛋白表达水平逐渐降低（P < 0.05）,间质标记物α-SMA表达水平逐渐升高（P < 0.05）;流式细胞术检测结果显示,5~20 ng/mL TGF-β1处理后细胞内ROS含量上升（P < 0.05）,线粒体活性氧上升（P < 0.05）,线粒体膜电位荧光强度下降（P < 0.05）,ATP含量降低（P < 0.05）,线粒体合成相关蛋白NRF-1和mt-TFA表达水平均下调（P均 < 0.05）。结论：TGF-β1诱导细胞发生上皮间质转化过程中线粒体的合成与功能受到影响,并由此促进了EMT的发生。     

TGFβ1信号通路蛋白在横纹肌肉瘤中的表达

目的探讨转化生长因子β1(TGF β1)信号转导通路中TGF β1、受体(TβRⅠ、TβRⅡ)及胞内转导分子(Smad2、Smad4)在横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma,RMS)中的表达,及其在肿瘤发生发展中可能的作用机制.方法应用免疫组织化学技术(S-P法)及TR-PCR分别检测石蜡包埋人体横纹肌肉瘤组织及横纹肌肉瘤细胞株RD中TGF β1信号转导通路中各成分的蛋白及mRNA表达水平,与正常骨骼肌组织和成肌细胞(Myoblasts,Mb)比较.结果在横纹肌肉瘤石蜡组织中TGFβ1、Smad2和Smad4的高表达率分别为58.6%(41/70)、70%(49/70)和75.7%(53/70),对应正常骨骼肌组织的高表达率分别为28%(7/25)、24%(6/25)和28%(7/25),两组间都有明显差异(P＜0.01).TβRⅠ、TβRⅡ在RMS及正常骨骼肌组织中普遍表达,两组无明显差异(P＞0.05).TGF β1、TGF βRⅠ、TGF βRⅡ、Smad2和Smad4 mRNA水平在RD细胞株中都明显高于正常成肌细胞.结论RMS中存在TGF β1自分泌现象,Smad2、Smad4介导了TGF β1信号从细胞表面受体到细胞核内的转导,TGF β1信号转导途径可能参与了横纹肌肉瘤的发生与发展.     

LncRNA PTENP1在TGF-β诱导的食管鳞状细胞癌上皮间质转化中的作用

目的 探讨lncRNA PTENP1在转化生长因子-β (TGF-β)诱导的食管鳞状细胞癌（ESCC）上皮间质转化（EMT）中的作用。方法 用TGF-β1处理ESCC Eca109和TE-1细胞,采用qRT-PCR检测细胞处理前后PTENP1表达的变化。在Eca109和TE-1细胞中构建PTENP1 3’UTR稳定过表达细胞株,Transwell小室实验、CCK-8实验、Western blot法检测过表达PTENP1对TGF-β1诱导的Eca109和TE-1细胞迁移、增殖及EMT相关蛋白表达的影响。结果 TGF-β1处理后,Eca109和TE-1细胞中PTENP1的表达明显下降（P<0.05）。过表达PTENP1后,Eca109和TE-1细胞的迁移能力显著降低（P<0.05）,Eca109和TE-1细胞的增殖能力受到显著抑制（P<0.05）,EMT标志物E-cadherin表达显著增加,而N-cadherin和Vimentin的表达明显下降（P<0.05）,TGF-β1对Eca109和TE-1细胞迁移能力受到削弱,并部分逆转TGF-β1诱导的EMT过程（P&l...