miR-7介导加味四君子汤含药血清抑制B16恶性黑色素瘤细胞侵袭和相关蛋白MMP2和MMP9表达的影响

目的:研究miR-7是否介导加味四君子汤含药血清对恶性黑色素瘤细胞B16迁移侵袭及其相关机制的研究。方法:37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养B16恶性黑色素瘤细胞,收集对数期细胞,等效剂量为9.22 g/kg的加味四君子汤终浓度10%的小鼠含药血清,作用24 h。实验分为空白对照组、血清对照组、转染阴性对照组、miR-7模拟物组和miR-7抑制物组,每组含5个样本数,应用Real-time PCR法检测miR-7模拟物和miR-7抑制物的转染效率、应用Transwell实验检测B16细胞侵袭能力,应用Realtime PCR和Western Blot方法检测基质金属蛋白酶(metalloprotease,MMP)2和9基因的mRNA和蛋白的表达。结果:miR-7模拟物和miR-7抑制物成功转染到B16恶性黑色素瘤细胞中,与空白对照组、血清对照组和阴性对照组相比,miR-7模拟物组(Relative Conc值为8.47±0.28)和miR-7抑制物组(Relative Conc值为0.19±0.01)分别显著升高和显著降低miR-7表达;与空白对照组和血清对照组及阴性对照组相比,miR-7模拟物组的细胞的侵袭能力显著降低,miR-7抑制物组的细胞的迁移侵袭能力显著升高;与空白对照组和血清对照组及阴性对照组相比,miR-7模拟物组MMP2和MMP9mRNA和蛋白表达水平显著降低,miR-7抑制物组MMP2和MMP9mRNA和蛋白表达水平显著升高。结论:miR-7介导加味四君子汤含药血清抑制B16恶性黑色素瘤细胞迁移侵袭过程,并且能够显著降低与B16恶性黑色素瘤细胞侵袭相关的蛋白MMP2和MMP9表达,提示miR-7可能是加味四君子汤抗恶性黑色素瘤的重要分子之一。     

加味四君子汤含药血清对B16恶性黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究加味四君子汤含药血清对B16恶性黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法:应用血清药理学方法给药,37℃5％ CO2的恒温培养箱中培养B16恶性黑色素瘤细胞,收集对数期细胞,终浓度10％的小鼠含药血清,分别作用12,24,48 h.实验分为空白对照组、血清对照组、加味四君子汤含药血清组(高、中、低3个剂量组)、顺铂组,每组含5个样本数.分别应用MTT法、流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测加味四君子汤含药血清对B16恶性黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响.结果:加味四君子汤含药血清作用12,24,48 h,与同时间段空白对照组和血清对照组相比,以剂量依赖方式抑制Bt6恶性黑色素细胞增殖,中剂量加味四君子汤含药血清组24,48 h抑制率为50.22％,53.81％,且48 h与24 h相比没有显著性变化;与空白对照组和血清对照组相比,中、高剂量加味四君子汤含药血清组、顺铂组的凋亡率分别为(19.70±0.98)％,(25.21±1.03)％,(21.31±1.00)％,显著促进B16恶性黑色素瘤细胞的凋亡(P＜0.05),但顺铂组凋亡率高于中剂量中药组,低于高剂量中药组.结论:加味四君子汤含药血清抑制B16恶性黑色素瘤细胞增殖;促进B16恶性黑色素瘤细胞的凋亡,这可能是加味四君子汤抗恶性黑色素瘤的机制之一.     

miR-7介导加味四君子汤含药血清抑制B16恶性黑色素瘤细胞增殖和促进凋亡的研究

目的:研究miR-7是否介导加味四君子汤含药血清抑制B16恶性黑色素瘤细胞增殖和促进B16恶性黑色素瘤细胞凋亡的过程。方法:应用血清药理学方法给药,37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养B16恶性黑色素瘤细胞,收集对数期细胞,终浓度10%的小鼠含药血清,作用24 h。实验分为空白对照组、血清对照组、4.61 g/kg、9.22 g/kg和18.44 g/kg加味四君子汤含药血清组,每组含5个样本数,应用Real-time PCR法检测miR-7的内源性表达;分别转染miR-7模拟物和miR-7抑制物到B16恶性黑色素瘤细胞,应用Real-time PCR法检测miR-7模拟物和miR-7抑制物的转染效率、应用MTT法、流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测miR-7对B16恶性黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响。结果:加味四君子汤含药血清作用24h,与空白对照组和血清对照组相比,9.22g/kg和18.44 g/kg加味四君子汤含药血清组B16恶性黑色素瘤细胞中miR-7表达升高;miR-7模拟物和miR-7抑制物成功转染到B16恶性黑色素瘤细胞中,其Relative Conc值分别是(6.47±0.18)和(0.20±0.01),与空白对照组、血清对照组和阴性对照组相比分别显著升高和显著降低;与空白对照组和血清对照组及阴性对照组相比,miR-7模拟物组的抑制率显著升高(53.61±2.11)%,miR-7抑制物组抑制率显著降低(6.76±0.48)%;与空白对照组和血清对照组及阴性对照组相比,miR-7模拟物组的凋亡率显著升高(34.30±2.13)%,miR-7抑制物组凋亡率显著降低(5.80±0.78)%。结论:miR-7介导加味四君子汤含药血清抑制B16恶性黑色素瘤细胞增殖和促进B16恶性黑色素瘤细胞凋亡的过程,miR-7可能是加味四君子汤抗恶性黑色素瘤的重要分子之一。     

加味四君子汤含药血清对肝癌Hep-G2细胞的影响

目的:探讨加味四君子汤含药血清对肝癌Hep-G2细胞增殖、凋亡、周期的影响及其作用机制。方法:不同浓度加味四君子汤含药血清处理Hep-G2细胞后,采用细胞活性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖;Annexin V/碘化丙啶(PI)流式细胞术检测细胞凋亡率和周期;hoechst33342荧光染色观察细胞凋亡形态;免疫印迹法(Western blot)检测细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路相关蛋白表达水平。结果:加味四君子汤含药血清呈浓度依赖性抑制肝癌Hep-G2细胞的增殖,诱导Hep-G2细胞凋亡,阻滞细胞于G0/G1期。hoechst33342染色后,随着含药血清浓度的增加,Hep-G2细胞核显著呈碎块状致密浓染。同时,加味四君子汤含药血清能够抑制Hep-G2细胞Akt,m TOR,核糖体S6蛋白激酶(S6),真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)的磷酸化,从而上调Bcl-2相关X蛋白(Bax)和下调细胞周期蛋白(Cyclin D1),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达。加味四君子汤含药血清与300 nmol·L-1的PI3K/m TOR双重抑制剂VS-5584联合使用具有协同作用,含药血清能增强PI3K/m TOR双重抑制剂VS-5584对Hep-G2细胞中PI3K/Akt/m TOR信号通路靶点Akt和m TOR磷酸化的抑制作用。结论:加味四君子汤含药血清能抑制Hep-G2细胞的增殖,诱导其凋亡,阻滞其于G0/G1期,其机制可能通过阻断PI3K/Akt/m TOR信号通路而实现。     

蜂王浆冻干粉含药血清对小鼠B16BL6黑色素瘤细胞增殖的影响

目的:观察蜂王浆冻干粉含药血清对小鼠B16BL6黑色素瘤细胞增殖的影响。方法:蜂王浆冻干粉大鼠灌胃1d、3d10d的含药血清与小鼠B16BL6黑色素瘤细胞体外培养,MTT比色法观察对细胞增殖的影响。结果:给药10d组血清能显著抑制B16BL6细胞的增殖,不灭活血清作用强于灭活血清,其抑制效应呈剂量依赖性,40%浓度作用最强。而给药1d、3d组血清抑制效应不明显。结论:蜂王浆冻干粉含药血清能抑制B16BL6细胞的增殖,其效应随大鼠给药时间的延长而增强,提示蜂王浆刺激机体产生自体活性物质在其抑瘤效应中发挥重要作用。     

血清药理学方法研究蛇葡萄素抗B16黑色素瘤的作用

目的：研究蛇葡萄素对黑色素瘤的抑制作用。方法：以血清药理学方法考察不同剂量的蛇葡萄素含药血清对B16黑色素瘤细胞的抑制作用，分别用MTT法及流式细胞术进行评价。结果：0．420mmol／kg、0．560mmol／kg剂量组的C57BL／6小鼠含药血清能有效抑制黑色素瘤B16细胞，与空白血清中加入浓度相当的蛇葡萄素的抑制率相同；两个剂量组的含药血清使肿瘤细胞的分裂增殖指数分别降低了19．1％、21．7％。结论：蛇葡萄素在血药浓度达峰期对小鼠黑色素瘤B16细胞的抑制可能以原型物形式起作用，抑制细胞的DNA合成。     

狼毒提取液对小鼠恶性黑色素瘤B16细胞体内转移能力的影响

目的:探讨狼毒提取液对小鼠恶性黑色素瘤B16细胞转移能力的影响。方法:分别以荷B16小鼠模型和小鼠恶性黑色素瘤B16细胞实验转移为模型,C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、狼毒15.0,20.0 g·kg-1组及环磷酰胺组,检测ip狼毒提取液(EFE)对小鼠B16细胞移植瘤生长和肺转移的影响。免疫组化法分析狼毒提取液对荷B16小鼠移植瘤中抑癌转移因子人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)及促转移因子蛋白激酶B(p-Akt)表达水平的影响。结果:狼毒提取液明显抑制B16细胞的生长,并能显著抑制其肺转移。ip狼毒提取液15.0,20.0 g·kg-1给药14 d,对B16生长的抑制率分别为52.9%,63.6%(环磷酰胺的抑制率为59.5%);对B16细胞肺转移的抑制率分别为37.4%,63.5%(环磷酰胺的抑制率为56.8%)。免疫组织化学法检测结果显示,狼毒提取液组胞质中p-Akt褐黄色颗粒较空白对照组少见,而PTEN胞浆着黄色则较空白对照组多见。结论:狼毒提取液的抗癌转移效果可能部分与其下调促转移因子p-Akt,上调抑癌转移因子PTEN的表达有关。     

山豆根对小鼠黑色素瘤细胞B16-BL6生长、增殖的影响

目的研究山豆根对小鼠黑色素瘤细胞B16-BL6生长、增殖的影响。方法培养小鼠黑色素瘤细胞B16-BL6并随机分为对照组和处理组,对照组用不含药物的RMPI1640培养基进行处理,处理组分别采用含有400μg/ml、500μg/ml、600μg/ml、700μg/ml、800μg/ml山豆根提取物的RMPI1640培养基进行处理。采用细胞增殖抑制实验、黏附实验、侵袭重组基底膜实验、趋化性运动实验观察山豆根提取物对黑色素瘤细胞B16-BL6增殖、黏附、侵袭和转移的影响。结果山豆根提取物终浓度为700、800μg/ml时,B16-BL6细胞增殖生长OD值明显低于对照组(t=2.526,4.371,P0.05);山豆根提取物终浓度为500、600、700、800μg/ml时,黏附能力OD值明显低于对照组(t=4.856,8.515,8.926,12.357,P0.05),侵袭细胞数明显低于对照组(t=4.661,9.824,12.460,16.300,P0.05),趋化性运动细胞数明显低于对照组(t=2.698,3.906,6.012,7.974,P0.05)。结论山豆根具有抑制小鼠黑色素瘤细胞B16-BL6增殖、黏附、侵袭和转移的能力,且与药物剂量呈依赖性关系。     

青蒿素类药联合紫杉醇对小鼠黑色素瘤B16细胞的增殖抑制作用

目的观察青蒿琥酯(ATS)、双氢青蒿素(DHA)和紫杉醇(Taxol)及ATS联合Taxol对小鼠黑色素瘤B16细胞的增殖抑制作用,评价各组药物对小鼠黑色素瘤B16细胞的杀伤作用,初步探讨ATS与Taxol联合给药对小鼠黑色素瘤B16细胞是否有协同增效作用。方法采用CCK-8法检测ATS、DHA和Taxol单药对小鼠黑色素瘤B16细胞作用24 h和48 h的抑制作用,并计算半数抑制浓度(IC_(50))值;检测ATS联合Taxol不同配比AT(1∶1)、AT(3∶2)和AT(7∶3)对小鼠黑色素瘤B16细胞作用48 h的抑制作用。运用质量作用中效定理和药物合并指数定理分析两药联合是否具有协同增效作用。结果 ATS、DHA和Taxol单药作用于小鼠黑色素瘤B16细胞的IC_(50)值,在24 h时,分别为126.56,86.09,3.27μmol·L~(-1);在48 h时,分别为1.36,15.11,0.97μmol·L~(-1)。ATS联合Taxol 3个浓度组AT(1∶1)、AT(3∶2)和AT(7∶3)对小鼠黑色素瘤B16细胞作用48 h,联合用药合并指数(CI)均小于1。结论 ATS、DHA和Taxol单药对小鼠黑色素瘤B16细胞的增殖抑制作用随着药物浓度和时间的增加而明显增加,呈剂量和时间依赖性。青蒿琥酯联合紫杉醇抑制小鼠黑色素瘤B16细胞增殖,有良好的协同增效作用。     

当归对黑色素瘤细胞粘附、侵袭、运动和转移能力的影响

目的:研究中药当归对小鼠黑色素瘤高转移细胞B16-BL6生长、粘附、侵袭、运动、转移能力的影响,并初步探讨其作用机制。方法:采用MTT法测定当归对B16-BL6细胞增殖能力的影响,采用细胞粘附实验、重组基底膜侵袭实验、趋化性运动能力实验以及小鼠黑色素瘤自发性转移模型,观察当归对B16-BL6细胞生长、粘附、侵袭、运动及转移能力的影响。结果:当归水提液能显著抑制B16-BL6细胞的增殖;对B16-BL6细胞与基底膜成分LN的粘附有双向调节的作用;对B16-BL6细胞穿越基底膜的运动能力有显著抑制作用但对B16-BL6细胞侵袭基底膜能力没有显著影响。低剂量当归能明显减少小鼠肺转移结节数目,减轻肺转移程度。结论:当归提取液能够抑制黑色素瘤高转移细胞株B16-BL6的转移,作用可能与其能够抑制B16-BL6细胞外基质的粘附以及降低B16-BL6的运动能力有关。     

莲房原花青素对黑色素瘤B16细胞的抑制作用

 目的研究莲房原花青素(procyanidins from the seedpod of the lotus,LSPC)对体外培养的黑色素瘤B16细胞活性的影响。方法以MTT法和细胞平板集落形成实验测定LSPC的抗肿瘤活性;电镜观察LSPC对瘤细胞形态学的影响;流式细胞仪检测LSPC对瘤细胞凋亡和细胞周期的影响;激光扫描共聚焦显微镜检测LSPC对瘤细胞内Ca²⁺浓度的影响。结果LSPC对B16细胞生长的抑制作用与作用时间和浓度呈时效和量效关系,并可诱导瘤凋亡效应,最大抑制率达84.5%,使瘤细胞阻滞于S期;瘤细胞内Ca²⁺浓度显著升高;细胞有典型的凋亡形态。结论LSPC是以诱导凋亡的方式抑制黑色素瘤B16细胞增殖,其凋亡作用可能与细胞被阻断于S期和Ca²⁺浓度升高有关。     

丹参对小鼠黑色素瘤细胞株B16-BL6侵袭和转移能力的影响

目的研究活血化瘀中药丹参对小鼠黑色素瘤高转移细胞株B16-BL6生长、粘附、侵袭、运动、转移能力的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用MTT法测定丹参对B16-BL6细胞增殖能力的影响;采用细胞粘附实验、重组基底膜侵袭实验、趋化性运动能力实验以及小鼠黑色素瘤自发性转移模型,观察丹参对B16-BL6细胞生长、粘附、侵袭、运动及转移能力的影响。结果丹参水提液对B16-BL6细胞的增殖具有双向调节作用;能显著促进B16-BL6细胞与基底膜成分纤维粘连蛋白粘附,显著抑制B16-BL6细胞侵袭基底膜能力及趋化性运动能力;能显著减小肺转移结节体积,但对结节数目没有明显作用。结论丹参提取液能够显著减轻小鼠黑色素瘤高转移细胞株B16-BL6的肺转移程度,可能与其能够抑制B16-BL6细胞对基底膜的侵袭能力以及降低B16-BL6的运动能力有关。     

蛇葡萄素体内外对小鼠B16黑色素瘤侵袭和转移的抑制作用

目的 :研究蛇葡萄素对B16小鼠黑色素瘤体内外抗侵袭和转移的作用。方法 :B16细胞由尾静脉注入C5 7BL/ 6小鼠体内建立实验性肺转移模型 ,蛇葡萄素以 3个剂量从接种瘤细胞前一天腹腔给药 ,连续 18d ,于停药后第 2天观察肺转移瘤灶数。B16细胞经蛇葡萄素处理 3d ,用具有聚碳酸酯和重建基底膜 (Matrigel)的Tran swell小室侵袭模型 ,研究药物处理后细胞侵袭、趋化运动、粘附能力的改变。结果 :剂量为 15 0 ,200 ,250mg·kg^-1的蛇葡萄素可抑制小鼠肺转移瘤灶形成 ,与溶剂对照组比 ,抑制率分别为 30.97% ,40.58% ,61.16% (P<0.0 5)。经 20,40,80μmol·L^-1各浓度蛇葡萄素处理后 ,对B16细胞侵袭人工基底膜的抑制率分别为 36.06% ,59.58% ,79.09% (P<0 .01) ;对细胞的趋化运动抑制率分别为 51.59% ,56.51% ,66.75% (P<0.01) ;显著降低B16细胞与基质成分层粘连蛋白、纤维粘连蛋白及Matrigel的粘附作用。 结论 :蛇葡萄素具有抑制黑色素瘤的侵袭和转移的作用。     

加味四君子汤含药血清对胃癌细胞SGC-7901凋亡相关因子表达的影响

目的:研究加味四君子汤含药血清对胃癌细胞SGC-7901凋亡相关因子表达的影响,进一步探讨其具体抗肿瘤作用机制。方法:40只SD大鼠随机分为加味四君子汤低、中、高剂量组(0.213,0.426,0.853 g·kg~(-1)),空白组,每组10只,空白组给予等体积的生理盐水灌胃,各组连续灌胃10 d,末次给药1.5 h后,水合氯醛腹腔麻醉,心脏采血,分离血清,56℃灭菌,0.22μm过滤,制备加味四君子汤高、中、低剂量组含药血清,各剂量组含药血清孵育胃癌细胞SGC-7901,运用流式细胞仪检测细胞早期和晚期凋亡情况,运用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)技术检测肿瘤抑制基因p53,c-核蛋白类基因(c-Myc),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),凋亡相关基因B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)mRNA的表达,运用细胞免疫荧光技术检测p53,c-Myc,Caspase-3,Bcl-2蛋白的相对表达量情况。结果:与空白组比较,加味四君子汤含药血清高剂量组细胞凋亡比率显著升高(P0.01),且可使胃癌细胞SGC-7901早期+晚期凋亡率达到22.58%(P0.01)。Real-time PCR结果显示加味四君子汤中剂量组能显著促进Caspase-3 mRNA表达(P0.01),加味四君子汤高剂量组能显著上调p53及c-Myc mRNA表达量(P0.01),加味四君子汤高剂量组显著抑制Bcl-2 mRNA表达(P0.01)。免疫荧光结果显示加味加味四君子汤高剂量组能使c-Myc,Caspase-3,p53蛋白表达水平显著升高(P0.01),而Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论:加味四君子汤含药血清能抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进凋亡相关分子p53,c-Myc,Caspase-3的表达,发挥抗肿瘤作用。     

知母皂苷AⅢ对黑色素瘤B16细胞生长和Bax,Bcl-2 mRNA的影响

目的观察知母皂苷AⅢ对体外培养黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养B16细胞,分别以浓度为1,2,4,8,16μmol·L-1的知母皂苷AⅢ作用24 h,通过MTT比色法检测对细胞生长的影响;倒置显微镜观察对细胞形态的影响;Annexin V-FITC/PI双染流式检测对细胞凋亡的影响;逆转录PCR检测对细胞凋亡相关基因Bax,Bcl-2的影响。结果 8,16μmol·L-1的知母皂苷AⅢ明显抑制细胞增殖,24 h的半数抑制浓度(IC50)为10.16μmol·L-1;细胞形态显示16μmol·L-1的知母皂苷AⅢ使细胞体积缩小变圆,细胞减少。与对照组比较,10μmol·L-1知母皂苷AⅢ细胞凋亡率为(4.83±0.25)%(P0.01),而Bax/Bcl-2比值升高(P0.05)。结论体外实验显示知母皂苷AⅢ能明显抑制B16细胞生长,并能诱导部分细胞发生凋亡。由于诱导细胞凋亡率与24 h的IC50有一定差距,因此知母皂苷AⅢ对B16细胞生长的影响可能不仅仅与激活凋亡信号通路有关,还与其他细胞生长信号通路有关。     

榄香烯诱导小鼠黑色素瘤B16细胞凋亡的实验研究

目的:观察榄香烯对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度榄香烯体外处理小鼠黑色素瘤B16细胞,采用MTT比色法、流式细胞仪分析技术及荧光染色等方法,检测榄香烯对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响。结果:榄香烯能抑制B16细胞增殖,使细胞停滞于G0/G1期,S期细胞明显减少,其作用呈明显浓度依赖性。形态学及流式细胞术分析结果均提示:在本实验条件下,榄香烯可诱导B16细胞凋亡,其诱导作用亦显示明显的浓度依赖关系。在此基础上,进一步分析发现:榄香烯可诱导B16细胞原癌基因bcl-2表达降低,抑癌基因p53表达增强。结论:榄香烯在体外通过干扰细胞周期、诱导细胞凋亡明显抑制B16细胞增殖,其作用机制可能与其诱导癌基因bcl-2表达减少、p53表达增加有关。     

黄芪和天花粉对小鼠恶性黑色素瘤B16细胞增殖和迁移及E-cadherin、N-cadherin蛋白表达的影响

目的观察黄芪、天花粉及其配伍对小鼠恶性黑色素瘤B16细胞增殖和迁移的影响,探讨其作用机制。方法 MTT法检测B16细胞增殖,根据结果计算细胞生长抑制率为0%时对应的各药物浓度(IC0)、为25%时对应的各药物浓度(IC25)、为50%时对应的各药物浓度(IC50)。设空白组、配伍组(黄芪注射液IC0+天花粉水煎剂IC0、黄芪注射液IC0+天花粉水煎剂IC25、黄芪注射液IC0+天花粉水煎剂IC50、黄芪注射液IC25+天花粉水煎剂IC0、黄芪注射液IC25+天花粉水煎剂IC25)。细胞划痕实验检测B16细胞迁移,Westernblot检测B16细胞迁移相关蛋白E-cadherin、N-cadherin表达。结果 MTT检测结果表明,不同剂量黄芪和天花粉均可抑制B16细胞增殖,具有浓度依赖性;细胞划痕实验结果显示,黄芪和天花粉均影响B16细胞划痕愈合,抑制细胞迁移,具有浓度依赖性;两药不同比例配伍的细胞增殖抑制率明显高于单味中药,差异有统计学意义(P<0.05);Westernblot检测结果显示,黄芪和天花粉均增加E-cadherin蛋白的表达,降低N-cadherin蛋白的表达。结论黄芪、天花粉及其配伍均可抑制小鼠恶性黑色素瘤B16细胞增殖及迁移,且两药配伍效果优于单味中药,黄芪和天花粉抑制细胞迁移的机制与E-cadherin和N-cadherin蛋白的表达相关。     

冬虫夏草繁育品对恶性黑色素瘤B16细胞增殖及迁移能力的影响

目的探讨冬虫夏草Cordyceps sinensis繁育品对恶性黑色素瘤B16细胞增殖及迁移能力的影响。方法通过MTT法、平板克隆实验检测冬虫夏草繁育品对B16细胞增殖能力的影响;采用划痕实验、transwell小室实验检测其对B16细胞迁移能力的影响;通过黏附实验检测其对B16细胞黏附能力的影响;采用流式细胞仪检测其对B16细胞周期分布的影响;采用Western blotting法检测其对B16细胞中MMP-2、MMP-9、Bax、Bcl-2、Cyclin D1、CDK2、CDK4、P21及p-Akt蛋白表达的影响。结果冬虫夏草繁育品能够将B16细胞阻滞在G1/S期,从而显著抑制B16细胞的增殖,并显著降低B16细胞的迁移能力。同时可导致B16细胞MMP-9、MMP-2、Bcl-2、Cyclin D1、CDK2、CDK4、p-Akt蛋白表达减少和Bax、P21蛋白表达增加。结论冬虫夏草繁育品能显著抑制B16细胞的增殖及迁移能力,其作用机制可能与调控细胞周期相关蛋白、MMPs家族蛋白及p-Akt蛋白的表达有关。