中波紫外线诱导HaCaT细胞凋亡的研究

目的以不同剂量的中波紫外线(UVB)诱导体外培养的人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)凋亡,探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是否参与凋亡过程。方法取对数生长期的HaCaT细胞,分别用10 mJ/cm2,15 J/cm2,20 J/cm2,25 J/cm2,30 J/cm2的UVB照射,并于照射24 h后检测HaCaT细胞的增殖活性,分析HaCaT细胞的凋亡率,测定HaCaT细胞上清液中TNF-α的水平,观察细胞形态及凋亡细胞特征。结果在10~30 mJ/cm2的UVB照射下,随照射剂量的增大,细胞的增殖活性逐渐下降,而细胞的凋亡率逐渐增加,当剂量达30 J/cm2时,细胞凋亡率最大,细胞的增殖活性和凋亡率呈直线负相关;随UVB照射剂量的增大,TNF-α的分泌量增加,细胞上清液中TNF-α的分泌量和凋亡率呈直线正相关;倒置显微镜及透射电镜进一步从形态学上证实了细胞的凋亡改变。结论UVB可诱导细胞凋亡,且呈剂量依赖性;照射产生的TNF-α可能参与了其凋亡过程。     

EGCG对中波紫外线诱导HaCaT细胞p53基因和蛋白表达的实验研究

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对中波紫外线(UVB)照射诱导永生化角质形成细胞株-HaCaT细胞的p53 mRNA和p53蛋白表达的影响。方法:以一定剂量UVB照射HaCaT细胞,并以200μg/mL EGCG处理照射后的HaCaT细胞,分别用RT-PCR法和Western blot方法检测各处理条件下p53 mRNA和/或p53蛋白的表达水平。结果:30 mJ/cm2的UVB照射后HaCaT细胞的p53 mR-NA和p53蛋白表达逐渐增加,4 h达到峰值,4 h后随照射剂量增加而增加,24 h后有所恢复;加入EGCG可下调UVB诱导的表达作用。结论:UVB照射对HaCaT细胞p53 mRNA和p53蛋白的诱导表达有时效性与量效性,EGCG可下调UVB照射的这种诱导作用。     

重组牛碱性成纤维细胞生长因子对光损伤HaCaT细胞修复作用

目的探讨重组牛碱性成纤维细胞生长因子(贝复济)对光损伤的人永生化角质形成(HaCaT)细胞的修复作用。方法体外培养HaCaT细胞,建立光损伤模型,一方面加入贝复济24 h后检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)的活性,细胞上清乳酸脱氢酶(LDH)的含量,过氧化氢(CAT)的含量;另一方面加入贝复济后,通过CCK8检测对角质形成细胞的影响后的增殖活性。结果中波紫外线(UVB)照射后,结果显示随着10 mJ/cm~2、20 mJ/cm~2及30 mJ/cm~2剂量增加,HaCat细胞后增殖活性越越低,而贝复济对HaCat细胞后增殖活性保护作用也越强;随着UVB的剂量增大,UVB对人角质形成细胞损伤增强;与对照组相比,贝复济组的HaCaT细胞SOD活性明显增强,而CAT及LDH含量下降显著。结论本实验发现贝复济对光损伤有良好的修复作用。     

维生素E亚微粒乳液对紫外线损伤角质形成细胞保护作用的研究

目的：研究维生素E亚微粒乳液（VitESME）对中波紫外线损伤永生化角质形成细胞HaCaT株的光保护作用。方法：高压均质法加微乳法制备VitESME,稀释后加入培养基中孵育HaCaT株,高效液相色谱法测定不同时段培养液中VitE含量;中波紫外线（UVB）照射HaCaT株,孵育24h后四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞活性。结果：培养液中VitE含量在孵育8h后即明显下降,24h后已减少90％以上。VitESME孵育24h后细胞增殖较为明显,与对照组相比活性增加了44．22％。与非加药照光组相比,加药照光组孵育24h后细胞增殖活性在30mJ／cm^2,下降17．77％,在90mJ／cm^2下降40．42％。结论：VitE SME对细胞培养体系无毒性作用,且具有优良的释放性能和通透性。VitE SME对UVB照射的保护作用呈时间递增性;预先加入VitE SME可以部分减少紫外线介导的损伤。     

黄芪甲甙对中波紫外线损伤皮肤角质形成细胞的保护作用

目的 研究传统中药活性成分黄芪甲甙对中波紫外线(UVB)损伤皮肤角质形成细胞的保护作用.方法 采用30、60、90 mJ/cm2的UVB照射培养的人皮肤永生角质形成细胞系HaCaT细胞,加入黄芪甲甙进行干预处理,以MTT法检测细胞活性;ELISA法检测细胞因子肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素(IL)-6的分泌量;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 UVB照射可引起皮肤角质形成细胞损伤,单纯照光组细胞增殖活性可下降23%～43%,而黄芪甲甙预处理组照光后活性仅下降7%～20%;UVB照射后炎性细胞因子TNF-α、IL-6分泌显著增加,A值分别为16.32～91.59及98.6～403.53,而黄芪甲甙预处理后其分泌量显著降低(P<0.05);UVB辐射后在G1期前出现明显的亚二倍体峰(凋亡峰),而经黄芪甲甙处理的UVB组细胞凋亡率则明显下降(P<0.05).结论　黄芪甲甙具有光保护性能,可减轻UVB对皮肤角质形成细胞的损伤作用.     

绿茶提取物及羟氯喹对表皮细胞光保护生物学效应的研究

目的观察羟氯喹及没食子儿茶素没食子酸脂(EGCG)对中波紫外线(UVB)照射引起的人永生化角质形成细胞系HaCaT细胞增殖活性变化及凋亡的影响。方法采用剂量分别为0、30、60、90mJ/cm~2的UVB照射培养的HaCaT细胞并加入羟氯喹及EGCG,共孵育24h后以四甲基偶氮唑蓝还原法(MTT)检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率变化。结果UVB照射后HaCaT细胞出现增殖活性下降,其幅度与辐射强度成正比;加入羟氯喹及EGCG可使细胞活性有一定程度恢复;此外,UVB照射可诱导HaCaT细胞产生凋亡,凋亡率呈UVB剂量依赖方式增加;30mJ/cm~2UVB照射可使HaCaT细胞出现明显S期阻滞,随UVB剂量增大,S期细胞数量相对下降;加入药物处理可抑制上述改变。结论羟氯喹和EGCG可明显抑制UVB引起的HaCaT细胞增殖活性下降、凋亡与细胞周期阻滞。     

不同剂量中波紫外线照射对角质形成细胞增殖活力和自噬体表达影响的研究

【摘要】 目的 观察HaCaT细胞和原代角质形成细胞接受不同剂量中波紫外线（UVB）照射后细胞增殖活力和自噬体表达水平的变化,并初步评估增殖活力损伤程度和自噬体表达水平之间的相关性。 方法 两种细胞各分为5组,对照组、5、10、20、40 mJ/cm2 UVB照射组,照射结束后12 h进行MTT实验或单丹（磺）酰戊二胺（MDC）染色,全波长酶标仪下读取各孔A值,倒置荧光显微镜下随机选取视野,计数每视野下自噬体表达阴性细胞和阳性细胞数目。 结果 经不同剂量UVB照射后,HaCaT细胞的增殖活力（A值）较原代角质形成细胞下降更明显,其中HaCaT细胞10、20、40 mJ/cm2照射组（A值分别为1.367 ± 0.035、1.173 ± 0.034、0.873 ± 0.025）两两之间以及与对照组（1.519 ± 0.022）之间差异均有统计学意义（P < 0.01）;原代角质形成细胞仅10、20、40 mJ/cm2 UVB照射组（A值分别为0.782 ± 0.012、0.773 ± 0.021、0.725 ± 0.031）与对照组（0.887 ± 0.035）之间差异有统计学意义（P < 0.05）。5、10、20 mJ/cm2 UVB照射后两种细胞MDC染色,自噬体表达阳性的细胞比率均出现增加,但照射量至40 mJ/cm2时则出现下降,以原代角质形成细胞下降更明显,其中HaCaT细胞10 mJ/cm2和20 mJ/cm2 UVB照射组自噬体表达阳性率（分别为22.69% ± 2.15%、28.10% ± 2.92%）较对照组（10.18% ± 1.50%）有显著上升,而40 mJ/cm2组自噬体表达上升幅度出现下降（趋势卡方检验χ2 = 27.48,P < 0.01）;原代角质形成细胞对照组、5、10、20 mJ/cm2组间自噬体阳性率变化不大,但40 mJ/cm2组表达出现明显抑制（趋势卡方检验χ2 = 6.86,P < 0.01）。 结论 UVB对HaCaT细胞和原代角质形成细胞增殖活力的损伤均有剂量依赖性,原代角质形成细胞更耐受UVB损伤;5、10、20 mJ/cm2 UVB照射能促进HaCaT细胞自噬体表达增加,且有剂量依赖性,而对原代角质形成细胞自噬体表达水平未产生显著影响;40 mJ/cm2 UVB照射后HaCaT细胞自噬体表达有下降趋势,而显著抑制原代角质形成细胞自噬体水平的表达。 【关键词】 角质形成细胞; 自噬体; 紫外线     

表没食子儿茶素没食子酸酯对紫外线诱导的角质形成细胞分泌血管内皮生长因子的影响

目的：研究绿茶中表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对中波紫外线（UVB）诱导角质形成细胞HaCaT株（简称HaCaT细胞）分泌血管内皮生长因子（VEGF）的影响。方法：试验共设立空白对照组、单纯加药组、单纯照光组和加药照光组4组,以15mJ/cm^2 UVB的剂量照射细胞,酶联免疫吸附试验（EUSA）方法检测不同时间细胞上清液中VEGF含量。反转录（RT）-PCR测定VEGFmRNA表达。结果：UVB照射后,HaCaT细胞分泌的VEGF在照光后12h开始明显增加,随时间延长。VEGF水平逐渐增加。EGCG对UVB诱导的VEGF升高有明显抑制作用。在12、18、24h3个时间点．EGCG明显抑制VEGF水平的升高。结论：EGCG可以抑制紫外线诱导的HaCaT细胞分泌VEGF。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对中波紫外浅诱导的人皮肤成纤维细胞基质金属蛋白酶-1表达的影响

目的:研究中波紫外线(UVB)诱导人皮肤成纤维细胞(FB)表达基质金属蛋白酶(MMP)-1和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)及c-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂SP600125对该诱导的保护作用.方法:以30 mJ/cm2 UVB及12.5μg/mL EGCG处理FB.同时以SP600125为对照,照光和(或)加药后于相应时间点提取上清及总RNA,以ELISA法检测MMP-1表达,反转录(RT)-PCR法检测细胞中MMP-1 mRNA含量.结果:30 mJ/cm2 UVB照射FB后24h MMP-1表达为对照组的3.1倍,12h及24h时MMP-1 mRNA表达分别增加至对照组的2.60倍及2.66倍(P均<0.05).UVB照射前、后加EGCG及SP600125组较单纯UVB照射组显著抑制MMP-1的表达,MMP-1 mRNA含量分别为单纯照射组的71.9%及40.4%,MMP-1蛋白表达量分别为单纯照射组的61.8%及48.9%.结论:UVB照射FB后MMP-1 mRNA及MMP-1表达水平均显著增加,EGCG可抑制UVB所致的MMP-1 mRNA及MMP-1高表达.     

益母草和枸杞对UVB损伤角质形成细胞的保护作用

目的探讨中草药益母草、枸杞对中波紫外线损伤角质形成细胞的保护作用及作用机制。方法用益母草和枸杞对HaCaT细胞进行预处理24h,采用30mJ/cm2、40mJ/cm2、50mJ/cm2剂量的UVB照射细胞,以MTT法检测细胞生存率,以酶联免疫吸附实验检测细胞上清液中TNF-α的分泌量,以Annexin-V凋亡试剂盒检测细胞凋亡率。结果经UVB照射后,细胞损伤程度与UVB照射剂量有关,益母草和枸杞均可提高UVB照射后角质形成细胞的生存率,减少细胞因子TNF-α的分泌。UVB照射后早期细胞损伤以凋亡为主,晚期以死亡为主,UVB照射8h后益母草和枸杞预处理的HaCaT细胞凋亡率明显减少(P<0.05)。结论UVB对角质形成细胞有损伤作用,且与照射剂量相关,益母草和枸杞对角质形成细胞具有光保护作用。抑制TNF-α的释放和减少细胞凋亡可能是其保护作用机制之一。     

白介素1受体拮抗剂对紫外线辐射的成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶1的影响

目的探讨白介素1受体拮抗剂(IL—1Ra)对紫外线(UV)辐射的成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶1(MMP-1)的影响。方法模拟环境中UV对人体皮肤的作用方式,UVA辐射的人成纤维细胞换以UVB辐射的HaCaT培养上清继续培养。用ELISA方法检测不同处理后成纤维细胞培养上清中的 MMP-1;用实时荧光定量RT-PCR方法(荧光染料掺入法)检测IL—1Ra处理后成纤维细胞C-Jun、C-Fos 及内参照GAPDH的mRNA表达变化。结果UVA(10 J／cm2)辐射的成纤维细胞在加入不同剂量UVB(0、 1、5、10、15 mJ／cm2)辐射HaCaT的培养上清液后,其MMP—1的分泌呈增高趋势。与UVB 0 mJ/cm2比较, 于15 mJ／cm2时差异有统计学意义(t=8．413,P=0．014)。而IL—1Ra以剂量依赖方式抑制成纤维细胞的 MMP-1分泌。统计C—Jun和C—Fos的初始拷贝数以及其与GAPDH初始拷贝数的比值,结果显示IL—1Ra 以剂量依赖方式抑制成纤维细胞C—Jun的mRNA表达,对C—Fos的mRNA表达则无显著性影响。本实验应用实时荧光定量RT—PCR,其标准曲线均有良好相关性,熔解曲线证实扩增产物是特异的。结论UVB 辐射的HaCaT培养上清液能促进UVA辐射的成纤维细胞分泌MMP-1。IL—1Ra通过抑制C-Jun的 mRNA表达降低成纤维细胞的MMP—1分泌。     

中波紫外线通过EGFR/PI3K/AKT途径上调HaCaT细胞转铁蛋白受体的表达

目的 探讨中波紫外线辐射对HaCaT转铁蛋白受体表达的影响及其信号途径。方法 流式细胞仪检测HaCaT细胞转铁蛋白受体的表达。实时PCR检测转铁蛋白受体mRNA表达。结果 UVB辐射可上调HaCaT细胞转铁蛋白受体mRNA及其蛋白的表达，并在一定范围内（10 mJ/cm2 ~ 30 mJ/cm2）呈剂量依赖性。表皮生长因子受体（EGFR）抑制因子PD153035、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制因子LY294002和渥曼青霉素（wortmannin）均可显著抑制UVB辐射对转铁蛋白受体的上调作用（P < 0.01）。结论 紫外线可通过EGFR/PI3K/AKT途径上调HaCaT 细胞转铁蛋白受体的表达。     

不同剂量中波紫外线对HaCaT细胞p62及自噬体形成关键基因Beclin-1、Atg12和Atg3的调控效应研究

【摘要】 目的 探讨不同剂量中波紫外线（UVB）照射培养的HaCaT细胞后不同时间点对p62、Beclin-1、Atg12和Atg3蛋白表达水平的调控效应。 方法 使用4.5、10和50 mJ/cm2 UVB照射HaCaT细胞,照射后加入新鲜培养基继续培养4 h和12 h,同时设相同处理但不照射UVB的细胞为对照细胞。另设观察组,在照射后立即（包括对照细胞）,使用含蛋白酶抑制剂E64D（10 μg/L）和胃酶抑素（10 μg/L）的培养基孵育4 h和12 h,以阻断对p62的降解。使用Western印迹法测定HaCaT细胞p62、Beclin-1、Atg12和Atg3蛋白的表达水平。 结果 50 mJ/cm2 UVB照射HaCaT细胞后4 h,p62表达水平（p62与内参的比值为0.473 ± 0.022）较对照细胞（0.246 ± 0.038）升高（t = 15.27,P < 0.05）;阻断溶酶体后,细胞新生p62的水平（0.445 ± 0.035）与阻断溶酶体的对照（0.244 ± 0.016）相比,仍为上调（t = 7.62,P < 0.05）。在4.5 mJ/cm2 UVB照射细胞后12 h,与对照（0.254 ± 0.035）相比,HaCaT细胞p62表达上调（0.497 ± 0.047,t = 22.89,P < 0.05）;阻断溶酶体后,与阻断溶酶体的对照（0.257 ± 0.025）相比,p62表达水平仍然上调（0.548 ± 0.051,t = 17.42,P < 0.05）。4.5 mJ/cm2和50 mJ/cm2 UVB照射后4 h和12 h,对照细胞和照射细胞间的Beclin-1、Atg12和Atg3的表达差异均无统计学意义（P > 0.05）,阻止溶酶体对自噬体内容物的降解也未能发现Beclin-1、Atg12和Atg3的表达差异（P > 0.05）。 结论 p62表达在不同剂量UVB照射和照射后不同时间存在差异调控,并且这种调控效应与自噬体形成可能没有生物学联系。     

窄谱中波紫外线对角质形成细胞角蛋白17表达的影响

【摘要】 目的 探讨窄谱中波紫外线（NB-UVB）对角质形成细胞角蛋白17（K17）表达的影响。 方法 不同剂量NB-UVB照射角质形成细胞后,培养6、12、24 h,分别用CCK8法检测细胞增殖情况,实时PCR、Western印迹检测K17 mRNA和蛋白表达以及Erk1/2、磷酸化Erk1/2的表达水平。 结果 低剂量（50、100 mJ/cm2）NB-UVB照射可刺激角质形成细胞增殖和K17表达,而较高剂量（200、400 mJ/cm2）NB-UVB照射则抑制细胞增殖和K17表达,其差异有统计学意义（P < 0.05或0.01）。通过对NB-UVB照射后相关信号通路进行筛查,发现100 mJ/cm2 NB-UVB照射可以上调角质形成细胞Erk1/2的磷酸化水平,而400 mJ/cm2 NB-UVB照射后Erk1/2的磷酸化水平明显下降,阻断这一信号通路可以抑制低剂量NB-UVB对K17的上调。 结论 NB-UVB对K17表达的影响受Erk1/2通路的调控。     

人参皂苷Rg1对UVB损伤PG12及成纤维细胞的保护作用

目的研究人参皂苷Rg1对中波紫外线（UVB）损伤皮肤成纤维细胞以及作为皮肤神经细胞模型的PC12细胞的保护作用。方法实验分为UVB模型组、UVB＋Rg1三个不同浓度保护组、对照组,分别以60mJ／cm^2、100mJ／cm^2强度UVB造成培养的皮肤成纤维细胞、皮肤神经细胞模型PC12（神经元化）细胞损伤,用MTT法检测细胞增殖活性,酶生化法检测光损伤前后细胞培养上清SOD活性、MDA含量。结果强度为60mJ／cm^2、100mJ／cm^2的中波紫外线分别可以造成体外培养的人皮肤成纤维细胞、神经元化PC12细胞增殖活性降低,细胞培养上清SOD活性降低,MDA含量升高,与UVB模型组相比均P〈0．05。给定浓度范围的Rg1能增加细胞的增殖活性,增加细胞培养上清SOD活性、降低MDA含量。结论紫外线可以造成体外培养的人皮肤成纤维细胞及PC12细胞氧化损伤,人参皂苷Rg1对损伤的细胞具有一定保护作用,其机制可能与它的抗氧化、增强细胞活力有关     

黄芪甲苷对HaCaT细胞的光保护效能及其机制

目的 观察黄芪甲苷对于中波紫外线（UVB）损伤的人表皮细胞的保护作用,探讨其相关机制。方法 将培养的永生化人皮肤角质形成细胞（HaCaT细胞）分为对照组、UVB组、黄芪甲苷组和UVB + 黄芪甲苷组,其中UVB组和UVB + 黄芪甲苷组细胞接受50 mJ/cm2 UVB照射,加药组加入不同浓度的黄芪甲苷（10、20、50、100、200 mg/L）进行干预,24 h后CCK8法检测细胞活性。根据CCK8法检测结果选择最佳药物浓度（20 mg/L）进行后继实验。照光后继续培养24 h,流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）水平,Western印迹法检测HaCaT细胞中p53、p38、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和高迁移率族蛋白A1（HMGA-1）的表达。 结果 与对照组相比,10 mg/L和20 mg/L黄芪甲苷组对HaCaT细胞的增殖活性无明显影响（F = 1.32,P > 0.05）,50、100和200 mg/L黄芪甲苷对细胞增殖活性有一定抑制作用（F = 20.20,P < 0.05）;UVB组与对照组比较,HaCaT细胞增殖活性显著下降（F = 99.00,P < 0.01）。与UVB组相比,UVB + 黄芪甲苷（10 ~ 200 mg/L）组HaCaT细胞增殖活性不同程度升高（F = 19.08,P < 0.01）,其中UVB + 20 mg/L黄芪甲苷组升高程度最高。进一步实验表明,与UVB组相比,UVB + 20 mg/L黄芪甲苷组ROS产生受到明显抑制（t = 21.12,P < 0.01）。Western印迹结果表明,与对照组比较,UVB组p53、p38、MMP-9和HMGA-1蛋白的表达升高（均P < 0.01）,而UVB + 20 mg/L黄芪甲苷组细胞内p53、p38、MMP-9和HMGA-1蛋白的表达水平较UVB组显著降低（P < 0.01）。 结论 黄芪甲苷可有效抑制UVB引起的表皮细胞光损伤。     

安石榴苷对中波紫外线诱导HaCaT细胞光损伤的预防作用研究

目的 探讨安石榴苷对中波紫外线（UVB）诱导角质形成细胞损伤的保护机制。 方法 培养的HaCaT细胞分为空白对照组、安石榴苷组、UVB组、安石榴苷 + UVB组。噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖能力,Hoechst/碘化丙锭（PI）染色和流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法测定金属基质蛋白酶1（MMP1）及其组织抑制因子1（TIMP1） mRNA表达水平,Western印迹检测丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路相关蛋白P38、JNK、ERK的磷酸化水平变化。 结果 MTT试验示,10 ～ 40 μmol/L安石榴苷对UVB诱导的HaCaT细胞损伤有较佳的预保护作用。UVB组HaCaT细胞强Hoechst和强PI双染细胞较空白对照组增多,安石榴苷 + UVB组较UVB组减少。流式细胞仪分析,UVB组凋亡细胞百分率（9.82% ± 0.11%）高于空白对照（1.24% ± 0.91%,P < 0.01）,而安石榴苷（10、20、40 μmol/L） + UVB组凋亡细胞百分率（分别为6.38% ± 0.14%、5.24% ± 0.17%、3.77% ± 0.11%）较UVB组低,差异有统计学意义（均P < 0.01）。UVB组MMP1 mRNA相对表达量（12.376 ± 0.602）高于空白对照组（1.007 ± 0.147,P < 0.01）,而TIMP1 mRNA相对表达量（0.103 ± 0.006）低于空白对照组（1.006 ± 0.139,P < 0.01）,安石榴苷组MMP1及TIMP1 mRNA与空白对照组比较,差异无统计学意义（均P > 0.05）。安石榴苷预处理的HaCaT细胞经30 mJ/cm2 UVB照射后MMP1 mRNA相对表达量较UVB组降低（均P < 0.01）,而TIMP1 mRNA较UVB组升高（均P < 0.01）。Western印迹示,经UVB照射后,HaCaT细胞p-ERK、p-JNK及p-p38表达升高（均P < 0.01）。安石榴苷组HaCaT细胞p-ERK、p-JNK及p-p38表达没有明显改变（P > 0.05）,而安石榴苷 + UVB组有不同程度下降（均P < 0.01）。 结论 安石榴苷对UVB引起HaCaT细胞损伤有一定的预防作用。     

外源性胆绿素对中波紫外线诱导的HaCaT细胞光损伤的保护作用

目的 探讨外源性胆绿素对中波紫外线（UVB）照射的HaCaT细胞的保护作用及其机制。方法 将培养的HaCaT细胞分为对照组（不加胆绿素,不照射UVB）、UVB组（30 mJ/cm2 UVB照射）和100 nmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L胆绿素 + UVB组（分别于30 mJ/cm2 UVB照射前1 h加入相应浓度胆绿素）,处理完成后继续培养24 h,观察HaCaT细胞形态变化,CCK8法检测各实验组细胞生存率。Western 印迹检测抗氧化信号分子Nrf?2蛋白及光损伤信号分子基质金属蛋白酶1（MMP?1）和MMP?3蛋白表达。结果 CCK8法结果显示,UVB组HaCaT细胞活力低于对照组（P < 0.05）,在加入100 nmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L 胆绿素预处理后,细胞生存率逐渐升高,与UVB组比较,差异有统计学意义（均P < 0.05）。Western印迹显示,UVB组MMP?1（1.150 ± 0.187）、MMP?3（0.979 ± 0.054）蛋白表达较对照组（0.116 ± 0.018、0.636 ± 0.035）升高（均P < 0.01）,而100 nmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L胆绿素 + UVB组MMP?1（0.825 ± 0.139、0.313 ± 0.047和0.286 ± 0.036）、MMP?3（0.888 ± 0.017、0.672 ± 0.042和0.569 ± 0.037）蛋白表达较UVB组降低（均P < 0.05）。UVB组Nrf?2蛋白（0.906 ± 0.034）较对照组（1.242 ± 0.141）表达降低（P < 0.05）,100 nmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L胆绿素 + UVB组Nrf?2蛋白表达（1.556 ± 0.112、1.897 ± 0.234和2.035 ± 0.274）较UVB组升高（均P < 0.01）。结论 外源性胆绿素对UVB诱导的HaCaT细胞损伤起保护作用,该作用可能与Nrf?2抗氧化信号通路有关。     

Ultraviolet irradiation induces cyclooxygenase-2 expression in keratinocytes

We examined the effect of ultraviolet (UV) irradiation on the expression of cyclooxygenases in cultured HaCaT keratinocytes and in human skin in vivo. UVB irradiation (10 and 50 mJ/cm2) and hydrogen peroxide (200 micromol/L) increased cyclooxygenase-2 mRNA expression in HaCaT keratinocytes. No clear expression of cyclooxygenase-1 mRNA was detected in either control or stimulated HaCaT cells. Genistein, a tyrosine kinase inhibitor, suppressed both the basal and stimulated expression of cyclooxygenase-2 in HaCaT cells. UVB-induced cyclooxygenase-2 mRNA expression was partly inhibited by the antioxidant N-acetylcysteine and by H-7, a non-specific inhibitor of protein kinase C. Solar-simulated irradiation (40 mJ/cm2) was found to induce in vivo both cyclooxygenase-2 mRNA and protein expression in human skin, whereas the expression of cyclooxygenase-1 mRNA remained at the basal level. Our results show that cyclooxygenase-2 expression is induced by UV irradiation and suggest that tyrosine kinases and reactive oxygen intermediates are involved in this induction of cyclooxygenase-2.