大鼠全脑照射后早期大脑皮质水通道蛋白4表达变化的研究

目的观察单次全脑照射大鼠大脑皮质水通道蛋白4(AQP4)表达的变化,探讨AQP4在早期放射性脑损伤中的作用。方法将雄性SD大鼠100只随机分为2、10、30 Gy单次全脑照射后1d、1周和1个月及对照10个组别,构建放射性脑损伤大鼠脑组织芯片,用免疫组化法检测皮质AQP4蛋白表达变化。结果与对照组比较,2 Gy照射后各时间点皮质AQP4表达水平无明显变化;10、30 Gy照射后1 d皮质AQP4表达迅速降低,照后1周达最低点(P<0.01),1个月时表达水平又明显高于对照组(P<0.05);随着受照剂量增加AQP4表达也明显降低,30 Gy组达最低点(P<0.01)。结论大鼠全脑照射后脑皮质AQP4表达呈时程性和剂量依赖性变化;早期放射性脑损伤中AQP4表达下降是一种保护性反应,具有减轻脑水肿效应。     

丁苯酞对放射性脑损伤大鼠血脑屏障的影响

目的 观察大鼠单次全脑照射后血脑屏障改变和丁苯酞的干预作用,探讨其对放射性脑损伤的防护作用机制。方法 144只SD大鼠随机分为空白对照组、单纯照射组、单纯丁苯酞组、丁苯酞联合照射组。照射采用4 MV X线单次10 Gy全脑照射,丁苯酞分别按0.3、1.0、3.0 mg/kg腹腔注射。测定脑组织依文思蓝(EB)含量,免疫组化法分析脑组织血管内皮生长因子(VEGF)表达,心脏取血计数循环内皮细胞(CEC)数,用MRI观察T₁、T₂加权信号强度以及信号强度增强率。组间比较采用方差分析中的Student-Newman-Keuls检验。结果 与空白对照组比较,单纯照射组大鼠脑组织EB含量、VEGF表达、CEC数明显增高\[2.81∶7.82(P=0.002)、5.83∶10.26(P=0.003)、3.16∶6.14(P=0.002)\],T₁加权信号强度降低(P=0.004~0.018),T₂加权信号强度及信号强度增强率升高(P=0.007~0.036)。与单纯照射组比较,丁苯酞联合照射组大鼠脑组织EB含量、VEGF表达、CEC数均降低\[7.80∶3.86(P=0.007)、10.83∶5.26(P=0.008)、6.36∶3.64(P=0.009)\],T₁、T₂加权信号强度及信号强度增强率改变均降低(P=0.008~0.026、0.006~0.038)。结论 丁苯酞通过降低大鼠全脑照射后脑组织VEGF表达、CEC数来降低血脑屏障通透性。     

水通道蛋白AQP4对乳腺癌细胞增殖的影响及机制

目的:研究AQP4在人乳腺癌细胞中的表达,并进一步探讨AQP4对肿瘤细胞增殖的影响及机制。方法:通过 siRNA干扰技术下调乳腺癌细胞T47D 和 MCF-7 细胞系中水通道蛋白4表达,检测这种下调对乳腺癌细胞增殖的影响并初步探讨其作用机制。结果:AQP4表达下降抑制乳腺癌细胞的增殖,可能通过ERK通路/E-钙黏蛋白实现的。结论:AQP4表达水平与乳腺癌细胞增殖正相关,相应的肿瘤抑制剂可以起到控制肿瘤生长作用。     

前列腺癌中AQP1 2 3的表达和作用

目的：明确水通道蛋白（AQP）1、2及水通道蛋白3在前列腺癌组织中的表达和分布，并探讨其在前列腺癌发病中的意义。方法：取前列腺癌组织20倒及正常前列腺组织15例，应用免疫组织化学技术检测AQP1、2及AQP3在前列腺癌和正常对照组织中的表达及分布。结果：AQP1主要表达于前列腺癌的血管内皮细胞、肿瘤细胞及部分腺体．AQP2于正常前列腺组织和前列腺癌组织中均有散在表达，AQP3主要表达于正常前列腺组织假复层柱状上皮及固有层粘膜腺体，可能参与前列腺液分泌调节。结论：AQP1在前列腺癌组织中表达，主要分布在肿瘤组织血管内皮细胞，增加肿瘤上皮和血管对水的通透性运输，从而促进肿瘤的生长及向周围基质浸润。     

立体定向移植骨髓基质细胞对放射性脑损伤模型大鼠认知功能影响的观察

目的:观察体外培养大鼠骨髓基质细胞(MSCs)立体定向移植入全脑照射损伤模型大鼠海马内是否对其认知功能有修复作用。方法:取2～3周龄SD大鼠6只用于MSCs体外分离、培养和增殖。取成年雄性SD大鼠48只,数字随机分为假照射组、单纯照射组、照射+PBS组和照射+MSCs组,各12只,采用10Gy单次全脑照射模型,假照射组以铅档块屏蔽,照射+MSCs组为制模后1周MSCs用Brdu标记后在立体定向仪下移植入全脑照射模型大鼠海马内,假照射组和照射+PBS组大鼠用同样方法将等量PBS注入。4周后通过Y迷宫法观察大鼠认知功能变化,免疫组织化学法检测海马血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达变化,免疫荧光双染色观察BrdU标记细胞及分化的功能细胞。结果:与假照射组比较,单纯照射组大鼠的学习记忆能力明显受损,F=24.86,P<0.01;海马VEGF蛋白表达明显增高,F=29.19,P<0.01。与单纯照射组比较,照射+MSCs组大鼠认知功能明显改善,F=14.86,P<0.05;海马VEGF表达明显降低,F=23.86,P<0.01。移植点附近见BrdU标记的MSCs存活,部分BrdU阳性细胞表达O4。结论:MSCs移植通过抑制VEGF表达可显著改善放射性脑损伤模型大鼠认知功能;MSCs移植入全脑照射大鼠海马内可存活,部分定向分化为少突胶质谱系细胞,但分化延迟。     

静脉注射骨髓基质干细胞对放射性脑损伤模型大鼠认知障碍的影响

目的观察静脉注射骨髓基质干细胞(MSCs)对放射性脑损伤模型大鼠认知功能的影响。方法离体分离、培养、增殖成年大鼠MSCs。采用6 MV X线对8～10周龄雌性SD大鼠做全脑照射,照射剂量20 Gy。照后1周采用尾静脉注射Hoechst33342荧光标记的MSCs(4×10~6),注射后4、8周观察大鼠认知功能变化,应用免疫荧光技术检测大鼠脑内Hoechst33342标记细胞及分化的功能细胞。结果与正常对照组相比,模型组大鼠的学习记忆能力明显受损(P<0.01),静脉注射后4、8周,照射组大鼠认知功能明显改善(P<0.05)。结论静脉注射MSCs可显著改善全脑照射大鼠认知功能,MSCs可在放射性脑损伤大鼠脑组织中存活和分化。     

痰热清注射液对早期急性放射性肺损伤大鼠肺组织水通道蛋白1表达的影响

 目的　观察痰热清注射液对急性放射性肺损伤大鼠水通道蛋白1（AQP1）表达的影响,探讨痰热清注射液对大鼠急性放射性肺损伤的作用机制。方法　将20只SD大鼠随机分为地塞米松组（5 mg／kg）、痰热清组（0.67 ml／kg）、单纯照射组（0.9 % NaCl溶液0.2 ml）、正常对照组（0.9 % NaCl溶液0.2 ml）,每组5只;肺照射剂量为17 Gy,照射后1 d开始腹腔注射,7 d后处死大鼠。对肺组织行HE染色观察病理变化,行免疫组织化学及反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）观察AQP1的表达。结果　地塞米松组、痰热清组炎症改变较单纯放疗组有所减轻。免疫组织化学显示放疗后AQP1表达减低（P＜0.05）,而地塞米松及痰热清治疗之后AQP1表达升高,与放疗后相比P＜0.05。RT-PCR显示正常对照组AQP1呈高表达（0.8006±0.05846）,放疗后表达降低（0.4938±0.03477）,地塞米松组、痰热清组照射后7 d AQP1表达较单纯放疗组增加（0.6492±0.03477、0.6664±0.03251）,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论　痰热清注射液对放射性肺损伤有一定的治疗作用,其作用机制可能与调节AQP1的表达有关。     

水通道蛋白-4在小鼠肾脏发育中的表达

目的观察水通道蛋白-4(AQP-4)在小鼠肾脏发育中的表达,探讨其与肾脏发生发育的关系及作用。方法用免疫组织化学(SABC法)显色观察AQP-4从胚龄12 d胎鼠到生后42 d小鼠肾脏的表达部位,用体视学对AQP-4在小鼠肾脏不同发育阶段中的表达进行定量检测。结果AQP-4在胚龄14 d的胎鼠肾脏可见微弱表达,其后随胚(日)龄的增长而增加,到生后1 d达最高,以后无明显变化。AQP-4的表达部位在胚龄14 d、16 d的小鼠为输尿管芽细胞的侧膜和基底膜(侧基底膜),在集合管出现以后则还表达在集合管细胞的侧基底膜。结论AQP-4在生前小鼠水平衡的调节作用比较重要,对生后小鼠主要起辅助作用。     

水通道蛋白AQP1、3、8在宫颈鳞状上皮组织癌变中的表达及其与预后的关系

目的揭示水通道蛋白1.3.8在维吾尔族妇女宫颈癌发生、浸润过程中的表达及其与宫颈癌预后的关系。方法在慢性宫颈炎和宫颈癌组织中采用实时荧光定量RT-PCR方法检测AQP1,AQP3和AQP8的mRNA表达,使用免疫组织化学技术研究在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变Ⅲ级和浸润癌组织中的定位表达。结果 AQP1、AQP3和AQP8mRNA在慢性宫颈炎组织、早期宫颈癌及晚期宫颈癌均有表达,表达量之间差异无统计学意义(P>0.05)。AQP1、AQP3和AQP8蛋白在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤样病变Ⅲ级(CINⅢ级)和浸润癌组织中均表达,表达于细胞膜,阳性率的差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌的临床分期、肿瘤直径和淋巴结转移可作为判断患者预后的独立因素。AQP1、3、8可能通过局部肿瘤体积生长影响患者预后。结论 AQP1、3、8在宫颈癌发生、侵袭过程中可能发挥重要的作用。     

安多霖对微波辐射致大鼠脑损伤的防治作用

目的探讨安多霖对微波辐射致大鼠脑损伤的防治作用。方法采用30 mW/cm^2的微波辐射102只雄性SD大鼠,并于辐射前后给予12 g/kg/d的安多霖每日1次,连续7 d或14 d。在停药后3 d、4 d、5 d、6 d采用Morris水迷宫检测大鼠学习与记忆能力,于辐射后3 d、7 d、14 d和21 d采用光镜和电镜观察脑组织结构的变化,采用图像分析方法对突触间隙宽度、突触后致密物（posts-ynaptic density,PSD）厚度和致密物长度进行定量检测。结果30 mW/cm^2微波辐射后大鼠学习记忆能力下降,长期药物治疗组与正常对照组相比无明显差异; 30 mW/cm^2微波辐射后大脑皮层和海马组织结构和超微结构损伤,表现为神经元固缩,核染色质浓缩、边集,血管周组织间隙增宽,线粒体肿胀、空化,突触间隙不清,穿孔,后膜致密物增厚。药物预防组大鼠脑组织损伤较辐射组为轻,而药物治疗组脑组织损伤明显较辐射组轻。结论30 mW/cm^2微波辐射后可损伤大鼠学习记忆能力和脑组织结构,给予12 g/kg/d安多霖对微波辐射所致的上述损伤有一定的保护作用,且治疗性给药保护效果优于预防性给药。     

大鼠全脑照射后早期大脑NG2和O4表达变化

目的 探讨大鼠全脑照射后早期大脑少突胶质前体细胞的放射性反应。方法 SD大鼠单次全脑照射后用免疫荧光组织化学法分别检测早期大脑皮质和海马CA1区NG2和04阳性细胞数量。结果 和对照组相比，10Gy照射后各时间点大鼠脑皮质和海马CA1区NG2和04阳性细胞数都有不等程度的增加，其中照射后7d和14d的NG2和04阳性细胞增加最明显；照射后28d的NG2和04阳性细胞数较之7d和14d时减少。结论 大鼠全脑照射后早期大脑NG2和04表达增加，少突胶质前体细胞增多，并且和观测时间相关。     

Effects of electron-beam irradiation on whole genome amplification.

Electron-beam (E-beam) irradiation, currently being used to sterilize mail addressed to selected ZIP codes in the United States, has significant negative effects on the genomic integrity of DNA extracted from buccal-cell washes. We investigated the yield, composition, and genotyping performance of whole genome amplified DNA (wgaDNA) derived from 24 matched samples of E-beam-irradiated and nonirradiated genomic DNA (gDNA) as a model for the effects of degraded gDNA on the performance of whole genome amplification. gDNA was amplified using the Multiple Displacement Amplification method. Three methods of DNA quantification analysis were used to estimate the yield and composition of wgaDNA, and 65 short tandem repeat and single nucleotide polymorphism genotyping assays were used to evaluate the genotyping performance of irradiated and nonirradiated gDNA and wgaDNA. Compared with wgaDNA derived from nonirradiated gDNA, wgaDNA derived from irradiated gDNA exhibited a significantly reduced yield of wgaDNA and significantly reduced short tandem repeat and single nucleotide polymorphism genotyping completion and concordance rates (P < 0.0001). Increasing the amount of irradiated gDNA input into whole genome amplification improved genotyping performance of wgaDNA but not to the level of wgaDNA derived from nonirradiated gDNA. Multiple Displacement Amplification wgaDNA derived from E-beam-irradiated gDNA is not suitable for genotyping analysis.     

大鼠WBI后海马区NFATc4/3信号通路相关因子改变的研究

目的 探讨SD大鼠WBI后海马区NFATc4/3信号通路相关因子的改变。方法 将120只1个月龄雄性SD大鼠随机分为5个组,采用4 MeV电子线进行0、2、10、20 Gy单次WBI,在照射后6 h、12 h、1 d、3 d、1周、2周,用蛋白印迹法和RT-PCR方法检测海马区CaN、NFATc4/3、p-NFATc4/3、GSK-3β表达量变化。结果 照射后6、12 hNFATc4/3、p-NFATc4/3表达无变化,照射后1 d随照射剂量增加p-NFATc4/3表达水平与0 Gy相比明显升高(2 GyP=0.014、10 GyP=0.011、20 GyP=0.000),而NFATc4/3的表达水平无变化;照射后3 d、1周和2周NFATc4/3表达水平与0 Gy相比显著下降(3 d 2 GyP=0.040、10 GyP=0.000、20 GyP=0.000、1周2 GyP=0.692、10 GyP=0.032、20 GyP=0.021、2周2 GyP=0.001、10 GyP=0.000、20 GyP=0.000),而p-NFATc4/3表达均无变化。各剂量组间CaN、GSK-3β的表达未随照射时间、剂量变化而变化。结论 电离辐射对海马NFATc4/3信号通路有抑制作用,推测放射性认知功能障碍可能与NFATc4/3信号通路相关。     

Aquaporin-4 upregulated expression in glioma tissue is a reaction to glioma-associated edema induced by vascular endothelial growth factor

Glioma-associated edema contributes significantly to morbidity and death in patients with glioma. It has been suggested that vascular endothelial growth factor (VEGF) and aquaporin-4 (AQP4) play important roles in glioma-associated edema. However, the effect of VEGF on AQP4 expression is not clear. In this study, AQP4 expression was assayed in cultured glioma cells that express different amounts of VEGF, and AQP4 expression, vessel permeability and water content were assayed in glioma xenografts that express different amounts of VEGF. No difference in AQP4 expression was found between glioma cells expressing different VEGF amounts in?vitro. However, AQP4 expression was increased in glioma tissue with increased VEGF, vessel permeability and water content. In conclusion, VEGF does not directly affect AQP-4 expression. The redistribution of AQP4 in glioblastoma cells is a reaction to vasogenic edema induced by VEGF for the purpose of facilitating reabsorption of excess fluid. The pattern of AQP4 expression in glioma provides new insights into the molecular changes occurring in glioma-associated edema and may help plan future therapeutic strategies.     

Effects of single doses of irradiation on the expression of resistance-related proteins in murine NIH 3T3 and human lung carcinoma cells

In this report the effects of single doses of ionizing radiationon the mRNA expression of several proteins involved in multipledrug resistance were analyzed. Murine NIH 3T3 cells treatedwith single doses of 5, 10 and 20 Gy during the time intervalfrom 1.5 to 72 h after irradiation were compared with theircorresponding controls at the same points of time. The glutathioneS-transferase- (GST) level was elevated in cells treated with10 or 20 Gy from 24 to 72 h after irradiation compared withthe control. Topoisomerase II and thymidylate synthase weredecreased in irradiated cells 24–72 h after exposure.These down-regulations were associated with cellular proliferation,determined by mRNA expression of the proliferation marker histone3. Irradiated cells exhibited no alteration in the P-glycoproteinor glutathione peroxidase mRNA content. The finding that GSTmRNA was overexpressed after irradiation was validated by investigationson a human lung carcinoma cell line (LXF 289) on the mRNA andprotein level. Thus, our results indicate that irradiation altersthe expression of proteins involved in multidrug resistanceand may, therefore, play a role in clinical drug response.     

全脑常规分割外照射对大鼠血脑屏障药物通透性的影响

目的 探讨放射线全脑常规外照射后对血脑屏障通透性的影响,为临床颅内肿瘤放化疗的序贯性和最佳化疗时机提供理论基础.方法 100只正常成熟Sprague-Dawley大鼠被随机分为0、10、20、30、40Gy组,每组20只.采用60^Co γ线进行全脑常规分割外照射,2 Gy/次,1个野/d,5次/周.各组完成计划照射剂量后16 h经尾静脉注射氨甲蝶呤（MTX）25mg/kg,2 h后采集静脉血及脑脊液,用RP-HPLC法监测其中的MTX浓度.结果 对照组、10、20、30、40Gy组脑脊液中MTX平均浓度分别为0.07、0.08、0.12、0.24、0.23mg/L.经秩变换检验方差分析,10Gy组与对照组、30Gy与40Gy组脑脊液中MTX浓度比较差异无统计学意义（P＞0.05）,其余各组间两两比较差异均有统计学意义（P值均＜0.05）.血液中MTX平均浓度各组比较均无统计学意义（P＞0.05）结论 放射线具有降低血脑屏障功能的作用,照射20～30Gy其通透性明显增加,故20～30Gy时为化疗最佳时机.     

X射线对人肺癌细胞Pokemon表达影响

目的 研究不同剂量X射线照射及照射后不同时间点对体外培养的人肺癌A₅₄₉细胞系Pokemon基因和蛋白表达的影响。方法 用X射线2、4、6、8 Gy吸收剂量照射体外培养的A₅₄₉细胞系,分别采用荧光实时定量PCR技术和蛋白印记法检测A₅₄₉细胞照射后2、4、8、12、24、48 h的Pokemon mRNA和蛋白表达水平,以未照射组为对照。采用二苯基四氮唑溴盐法分别检测2 Gy照射1、2、3、4、5 d后A₅₄₉细胞增殖能力变化,以未照射组为对照。结果 Pokemon mRNA的表达在2、4、6、8 Gy照射后早期呈降低趋势,但晚期呈升高趋势,大部分时间点差异有统计学意义(t=3.40~154.76,P=0.000~0.041);Pokemon 蛋白的表达较对照组均升高,且各剂量组均在照射后8 h达峰值,在大部分时间点实验组与对照组差异有统计学意义(t=4.18~89.64,P=0.000~0.039)。照射组细胞接种后第3~5天细胞增殖能力显著低于对照组(t=2.34~18.19,P=0.000~0.040)。结论 一定剂量X射线在特定条件下可诱导人肺癌A₅₄₉细胞Pokemon mRNA和蛋白表达升高,可能与A₅₄₉细胞辐射抗性有关。