大鼠创伤性脑损伤后Claudin-5表达水平变化的研究

目的：探讨大鼠创伤性脑损伤后不同时间点血脑屏障通透性及Claudin-5表达水平的变化,为进一步研究创伤后脑水肿的机制及治疗时机提供理论依据。方法：大鼠随机分为对照组和脑损伤组,参照Feeney＇s的自由落体致伤法,制作大鼠顶叶局灶皮质挫裂伤模型。应用伊文兰（evansblue）法测定伤后不同时间点损伤灶皮层脑组织中EB含量;应用Westernblot法检测损伤灶脑微血管内皮细胞紧密连接相关蛋白Claudin-5的表达水平。结果：损伤灶皮层中EB含量在伤后1～6h明显增多,高峰期在3h。Westernblot结果显示损伤后1～6h,Claudin-5表达水平较对照组显著降低（P〈0.05）,3h最明显,24h与对照组差异无统计学意义。结论：大鼠顶叶局部脑挫裂伤可能通过下调紧密连接相关蛋白Claudin-5的表达水平,开放紧密连接,增加血脑屏障的通透性。     

咪唑克生对实验性变态反应性脑脊髓炎小鼠血脑屏障紧密连接的影响

目的:观察咪唑克生(idazoxan,IDA)对实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠的血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)紧密连接的影响。方法:选用36只8周的C57BL/6小鼠,随机分为空白对照组、EAE组和IDA干预组各12只,采用MOG35-55诱导经典EAE模型,干预组采用IDA 2mg/kg腹腔注射、每天两次、共15d。观察每组大鼠发病情况并进行神经功能缺损评分,采用HE染色和LFB髓鞘染色方法观察病理改变,采用伊文思蓝荧光定量方法检测BBB通透性的变化,透射电镜观察BBB紧密连接超微结构,并用Western blot检测BBB紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-5、JAM-1的表达。结果:空白对照组动物无一发病,与EAE组比较,IDA干预组神经功能缺损评分明显下降,炎性病灶和脱髓鞘病灶明显减少,BBB通透性明显降低,BBB超微结构的破坏明显减轻,BBB紧密连接相关蛋白ZO-1、Claudin-5的表达明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:IDA可能通过上调血脑屏障紧密连接蛋白ZO-1和Claudin-5的表达从而减轻EAE时的血脑屏障破坏而发挥对EAE小鼠的神经保护作用。     

纳米氧化铝对小鼠血脑屏障通透性的影响

目的探讨纳米氧化铝颗粒对小鼠血脑屏障通透性的影响。方法 3月龄ICR小鼠用滴鼻法染毒,为了比较纳米铝作用的颗粒毒性和化学毒性,将小鼠分为对照组、微米铝组、纳米碳组、纳米铝组和铝离子组;为了比较纳米铝作用的剂量-效应关系,将小鼠分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。每只小鼠每次染毒10μl,3次/d,实验时间为30 d。染毒结束后,用硝酸镧染色法检测血脑屏障通透性;用免疫荧光法检测紧密连接蛋白ZO-1、Occludin蛋白表达;用western blot法检测ZO-1,Claudin-5蛋白表达。结果硝酸镧染色结果表明,对照组的硝酸镧颗粒聚集在毛细血管中央,未见对血管内皮的穿透;微米铝组和纳米碳组有部分高电子密度的硝酸镧颗粒位于毛细血管内壁中央,显示血脑屏障的通透性增高;纳米铝和铝离子组有大量硝酸镧颗粒位于血管内壁中央,形成致密的黑色条带,显示血脑屏障受损和通透性增高。免疫荧光法检测紧密连接蛋白ZO-1、Occludin蛋白表达和western blot法检测ZO-1,Claudin-5蛋白表达结果表明,紧密连接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5蛋白表达在对照组均为高表达,微米铝和纳米碳组表达下调(P<0.0001),纳米铝和铝离子组的表达量最低(P<0.0001)。且这种紧密连接蛋白表达的降低与纳米铝的染毒剂量间有剂量-反应关系(P<0.0001)。结论纳米氧化铝可以降低血脑屏障通透性,这种作用表现为纳米的颗粒作用和铝化学毒性作用的相加。其发生机制与紧密连接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5蛋白表达降低有关。     

齐墩果酸通过VEGF-Src通路对蛛网膜下腔出血大鼠模型血管内皮紧密连接表达的影响

目的探讨齐墩果酸对蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的保护作用,阐释其可能的机制。方法 54只成年雄性SD大鼠分成3组(假手术组、SAH模型组、齐墩果酸给药组),每组18只。采用颈内动脉穿刺法建立大鼠SAH模型,造模1 h后给药,24 h后进行神经功能损伤评分;检测脑水含量及脑伊文思蓝浸出;并利用Western blot方法检测脑组织Src、VEGF、ZO-1、Claudin-5、Occludin蛋白的表达量。结果齐墩果酸高剂量给药可有效改善神经功能损伤(P<0.01);降低脑组织含水量和脑血管通透性(P<0.01);增加ZO-1、Claudin-5、Occludin蛋白的表达,降低VEGF水平,抑制Src激活(P<0.05)。结论齐墩果酸对SAH后早期脑损伤有显著的保护作用,可改善脑水肿,其作用机制可能与增加脑组织紧密连接蛋白的表达有关。     

黄芪甲苷在多发性硬化症模型动物中的保护作用及机制研究

摘要：目的:研究黄芪甲苷（ASI）对多发性硬化症（MS）模型实验性自身免疫脑脊髓炎（EAE）动物的保护作用及机制研究。方法:将C57BL/6小鼠随机分为4组：正常对照组、模型组、ASI组(20 mg·kg-1)和阳性对照组(甲泼尼龙琥珀酸钠,20 mg·kg-1),每组10只。采用雌性C57BL小鼠建立EAE模型,观察ASI对EAE小鼠神经行为学评分及体质量变化的影响。用LC-MS/MS液质联用法检测小鼠大脑中ASI含量,实时定量PCR检测紧密连接分子闭锁连接蛋白-1（ZO-1）、闭合蛋白（Occludin）、密封蛋白-5（Claudin-5）、封闭蛋白-12（Claudin-12）mRNA表达,Western-blot检测紧密连接分子ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白表达,苏木素-伊红（HE）染色和固蓝（LFB）染色方法对小鼠脊髓组织病理分析。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠神经行为学评分明显升高,体质量明显降低,紧密连接分子ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白表达明显下调,ASI单次入脑量明显增加（P<0.05或P<0.01）,有脊髓组织炎症浸润和脱髓鞘发生,各紧密连接分子mRNA差异无统计学意义（P>0.05）。与模型组比较,ASI组能够抑制EAE小鼠神经行为学评分升高和体质量下降,减少脊髓炎症浸润和脱髓鞘发生,提高皮层紧密连接分子ZO-1、Occludin、Claudin-5 mRNA及蛋白表达（P<0.05或P<0.01）,Claudin-12 mRNA差异无统计学意义（P>0.05）。结论:ASI能够抑制多发性硬化症模型EAE动物疾病进程,其作用可能是透过血脑屏障进入脑组织中ASI含量增加,诱导皮层紧密连接分子ZO-1、Occludin、Claudin-5基因表达上调,降低血脑屏障通透性,对中枢神经系统稳定起到保护作用,从而抑制疾病发展。     

乌司他丁通过上调Claudin-1的表达抑制大鼠肿瘤周围水肿

目的探讨乌司他丁对大鼠肿瘤周围水肿的影响及其分子机制。方法采用大鼠原位胶质瘤模型,将大鼠随机分为2组:对照组和乌司他丁治疗组。于治疗1周后通过核磁共振成像检测肿瘤体积和水肿体积,蛋白印迹法检测细胞紧密连接蛋白Claudin-1的表达变化。结果乌司他丁治疗组肿瘤体积明显减小,水肿体积明显减小,细胞紧密连接蛋白Claudin-1的表达明显上升。结论乌司他丁通过上调Claudin-1的表达抑制肿瘤的生长和肿瘤周围水肿的发生,为其在临床的应用提供理论基础。     

益艾康胶囊对IFN-γ损伤肠黏膜屏障的紧密连接及相关蛋白Claudin-1、Claudin-5表达的影响

目的：通过研究益艾康胶囊对IFN-γ损伤肠黏膜屏障模型的紧密连接结构及紧密连接蛋白Claudin-1、Claudin-5表达的影响，揭示益艾康胶囊对HIV/AIDS肠黏膜屏障损伤的保护作用机制。方法：利用人结肠癌细胞株Caco-2联合Transwell技术构建肠黏膜屏障模型，IFN-γ刺激肠黏膜屏障模型模拟体内HIV损伤肠黏膜的病理过程。本实验设置空白对照组（空白鼠血清）、模型组（IFN-γ组）、益艾康胶囊组（IFN-γ+益艾康胶囊含药血清）、姜黄素组（IFN-γ+姜黄素），检测24 h、48 h、72 h跨细胞膜电阻抗值、荧光素钠透过率、紧密连接蛋白Claudin-1、Claudin-5mRNA及蛋白的变化情况。结果：与空白对照组相比，模型组的跨膜电阻值，降低明显（P<0.05），随干预时间呈下降趋势。与模型组相比，益艾康胶囊组在不同时间点均能提高Caco-2细胞单层电阻值，且数值高于同等条件下的姜黄素组；在模型组中，荧光素钠的渗漏量随干预时间增加而增加，48 h后明显降低。与模型组相比，益艾康胶囊组与姜黄素组荧光素钠的渗漏量均明显降低（P<0.05），但2组之间不存在统计学差异；与空白对照组相比，IFN-γ诱导Caco-2细胞单层Claudin-1、Claudin-5mRNA及蛋白表达下降（P<0.05），与模型组相比益艾康胶囊组Claudin-1、Claudin-5 mRNA及蛋白的表达上调（P<0.05）。结论：益艾康胶囊能降低IFN-γ引起的肠黏膜屏障的通透性，维持肠黏膜屏障的完整性，其机制与抑制紧密连接蛋白Claudin-1、Claudin-5的表达下降从而维持正常的紧密连接相关。     

槲皮素对缺血性脑卒中大鼠血脑屏障的保护作用

目的探讨槲皮素对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障的保护作用及相关机制的研究。方法 Wistar大鼠90只,随机等分为5组,每组18只,分别为假手术组、模型组、低剂量槲皮素(10 mg·kg~(-1))治疗组、中剂量槲皮素(10 mg·kg~(-1))治疗组、高剂量槲皮素(100 mg·kg~(-1))治疗组。采用TTC染色法检测各组大鼠脑组织梗死体积、干湿重法比较各组大鼠脑组织含水量、分光光度计法检测各组大鼠脑组织伊文氏蓝含量,并使用免疫印记法分别检测各组大鼠脑组织闭合蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白-5(Claudin-5)、闭锁连接蛋白-1(ZO-1)、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白的表达水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠脑梗死体积、含水量、神经功能损伤程度、血脑屏障通透性显著增高(P<0.05);与模型组相比,槲皮素治疗组的脑梗塞体积、神经功能缺损程度、脑含水量、血脑屏障通透性均比对照组明显降低(P<0.05)。免疫印迹结果发现,与假手术组相比,模型组血脑屏障相关蛋白表达显著下降(P<0.05);与模型组相比,槲皮素治疗组的闭合蛋白、紧密连接蛋白-5、ZO-1及HO-1蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论槲皮素能够上调闭合蛋白、紧密连接蛋白-5、ZO-1蛋白的表达,对脑缺血再灌注大鼠的血脑屏障具有保护作用,并且槲皮素可以上调HO-1蛋白的表达,通过氧化应激反应起到保护血脑屏障的作用。     

CH03对脑缺血再灌大鼠BBB的保护作用及其机制的初步研究

目的探讨CH03对MCAO模型大鼠BBB的保护作用及其机制,以期寻找有效的治疗中风的药物及相关靶点。方法采用大脑中动脉内线栓法建立MCAO脑缺血模型,通过伊文氏蓝渗漏法观察BBB通透性、利用电镜观察神经血管单元的超微结构,从形态学和结构上考察了CH03对缺血后BBB损伤的保护作用;采用WB,RT-PCR和免疫组化对BBB组成中内皮细胞间的紧密连接、星形胶质细胞和基膜进行检测;并采用ELISA试剂盒对脑缺血后炎症级联反应及继发的自由基进行检测。结果 EB渗漏实验结果表明,模型组BBB通透性显著增加,CH03各剂量组明显逆转这一作用(P<0.01);电镜观察皮层神经血管单元的超微结构表明,CH03中、高剂量组能够显著减轻神经元固缩,胞质、胞核电子密度显著降低,星形胶质细胞足突的肿胀、内皮细胞的反应性增大及毛细血管变形减轻;染色结果显示,CH03中、高剂量组显著降低水通道蛋白-4(AQP4)、增加闭锁小带蛋白(ZO-1)和咬合蛋白的表达(P<0.01);RT-PCR和免疫荧光技术观察到CH03各剂量组均可逆转脑缺血再灌引起的基质金属蛋白酶-9(MMP9)的表达增加,并且MMP9与神经元特异性核蛋白(NeuN)共定位。ELISA检测炎性因子结果表明,CH03各剂量组可明显降低TNF-α、增加IL-10的表达;增加组织总谷胱甘肽过氧化物酶、总超氧化物歧化酶和总过氧化物酶活性,降低丙二醛(MDA)的含量。提示CH03对BBB结构具有保护作用。讨论 CH03显著改善MCAO模型大鼠BBB的通透性并可以改善细胞毒性脑水肿;保护BBB与增加紧密连接相关蛋白的表达、降低AQP4表达而减轻脑水肿、降低MMP9的表达而减小对细胞外基底膜的降解作用等有关;CH03也可通过增加抗氧化酶活性、减少神经炎症损伤而保护BBB完整性。     

白芷香豆素成分对葛根素跨血脑屏障体内外转运的影响

构建原代大鼠脑微血管内皮细胞(rat brain microvascular endothelial cells, BMEC)和大鼠星状胶质细胞(rat astrocytes, AS)共培养模型以研究葛根素-白芷香豆素成分联用后对葛根素在大鼠体外血脑屏障(blood-brain barrier, BBB)模型中转运及大鼠脑组织分布的影响。通过测定模型跨内皮电阻值、苯酚红通透性、BBB相关蛋白表达评价模型屏障功能。通透性实验和Western blot法分别研究了白芷香豆素成分对BMEC、大鼠脑组织通透性及BBB相关蛋白表达的影响。本研究中动物实验方案均获得西安交通大学医学部生物医学伦理委员会的批准(动物伦理号:2021-1329)。结果表明,构建的BMEC/AS共培养模型可用于药物体外跨BBB研究;与白芷香豆素成分联用后,葛根素在体外共培养模型及大鼠脑组织上的转运量显著提升;白芷香豆素成分可以增加BBB通透性,抑制P糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)、紧密连接重要蛋白闭锁连接蛋白-1 (zonula occludens-1, ZO-1)和闭合蛋白(occludin)的表达...     

血脑屏障氧糖剥夺再灌体外模型小鼠脑内皮细胞 bEnd.3中微小 RNA-290b-3p的作用及机制研究

目的 探讨氧糖剥夺再灌(OGD/R)条件下,小鼠脑内皮细胞bEnd.3中微小RNA-290b-3p(miR-290b-3p)在体外血脑屏障模型的作用与机制.方法 培养小鼠脑内皮细胞bEnd.3,建立OGD/R模型与体外血脑屏障模型,Transwell法检测氧糖剥夺后体外血脑屏障模型通透性的变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(real time-PCR,RT-PCR)检测OGD/R后miR-290b-3p表达水平;Targetscan网站预测miR-290b-3p与紧密连接蛋白5(Claudin-5)结合;荧光素酶报告实验验证miR-290b-3p与Claudin-5结合;转染bEnd.3细胞miR-290b-3p抑制剂,应用蛋白质印迹法(Western Blot)检测Claudin-5的表达,Transwell法检测抑制miR-290b-3p后氧糖剥夺后体外血脑屏障模型通透性变化.结果 OGD/R后体外血脑屏障破坏,1、2、3、4、6 h荧光素异硫氰酸酯(FITC)-葡聚糖扩散速率分别为(0.04±0.00)、(0.04±0.01)、(0.05±0.01)、(0.07±0.01)、(0.12±0.01)pmol·mm-2·min-1,通透性增加;miR-290b-3p在OGD/R后1、2、3、4、6 h表达量分别为(1.18±0.12)、(1.27±0.12)、(1.55±0.18)、(2.13±0.18)、(2.53±0.15),表达增加;miR-290b-3p与Claudin-5结合;抑制miR-290b-3p可以缓解OGD/R后Claudin-5的降低,减轻血脑屏障的损伤.结论 氧糖剥夺后bEnd3细胞中miR-290b-3p表达增加抑制miR-290b-3p可通过调节Claudin-5表达减轻氧糖剥夺模型中血脑屏障的损伤.     

丹酚酸A与阿司匹林预防给药对血脑屏障保护作用的比较

目的比较丹酚酸A与阿司匹林预防给药对自身电凝血栓移位脑缺血模型血脑屏障的保护作用。方法雄性SD大鼠,随机分为空白对照组、模型组、阿司匹林组和丹酚酸A组。连续5 d分别灌胃给予0.5%羧甲基纤维素钠,阿司匹林100 mg·kg~(-1)和丹酚酸A 10 mg·kg~(-1),早晚各1次,第6天制备自身电凝血栓移位脑缺血模型。脑缺血24 h后,m NSS评分检测神经功能,TTC染色检测脑梗死,Evans blue渗漏实验评价血脑屏障(BBB)完整性,Western印迹检测血脑屏障相关蛋白ZO-1,Occludin和Claudin-5蛋白的变化。结果脑缺血24 h,丹酚酸A组与模型组比较,显著降低mNSS评分,阿司匹林组无显著差异。TTC染色结果显示,模型组引起较大区域的脑梗死,ASP组与模型组相比无显著性差异,丹酚酸A组则可以显著降低脑梗死体积。EB渗漏实验显示,缺血24 h后,脑组织中EB含量增加,表明BBB受到破坏,丹酚酸A使EB含量较模型组降低14.9%,阿司匹林无明显作用,表明丹酚酸A对血脑屏障有保护作用。Western印迹检查结果显示,血脑屏障相关蛋白ZO-1,Occludin,Claudin-5表达与正常组相比显著下降,与模型组相比,给予丹酚酸A显著增加紧密连接相关蛋白的表达,而阿司匹林无明显作用。结论丹酚酸A(10 mg·kg~(-1))预防给药对于大鼠自身电凝血栓移位脑缺血模型血脑屏障具有保护作用且作用优于阿司匹林(100 mg·kg~(-1))预防给药。     

冰片配伍黄芪甲苷与三七总皂苷对脑缺血/再灌注后血脑屏障通透性的影响

目的探讨冰片、黄芪甲苷(ASTⅣ)和三七总皂苷(PNS)配伍对脑缺血/再灌注后血脑屏障(BBB)的影响。方法脑缺血/再灌注大鼠灌胃给药,观察神经功能缺损症状,测定脑组织含水量和BBB通透性、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、ZO-2、咬合蛋白(Occludin)及闭合蛋白5(Claudin-5)表达。结果脑缺血/再灌注后,大鼠出现神经功能缺损症状,神经功能评分和脑含水量增加,BBB破坏。各药物能不同程度减轻上述病理改变,冰片+ASTⅣ+PNS效应最强,优于药物单用及ASTⅣ+PNS。脑缺血/再灌注后,ZO-1、ZO-2、Occludin、Claudin-5表达减少。各药物使ZO-1增加,除ASTⅣ外,上调Occludin表达;冰片+ASTⅣ+PNS还明显上调ZO-2,且上调ZO-1、ZO-2、Occludin的效应优于药物单用及ASTⅣ+PNS。结论冰片、ASTⅣ和PNS能不同程度降低脑缺血/再灌注后BBB通透性的增加,减轻脑水肿,对抗脑组织损伤,三药合用有增强效应,机制可能与协同抑制缺血后ZO-1、ZO-2、Occludin表达下调,保护BBB有关。     

孕酮对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠血脑屏障通透性及脑水肿的影响

目的研究孕酮(PROG)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠血脑屏障(BBB)通透性和脑水肿的作用,并进一步探讨其潜在的机制。方法 7 d龄SD大鼠96只,随机分成4组:正常组、假手术组、缺氧缺血(HI)组和PROG组。建立HIBD动物模型,HI后24 h,伊文思蓝示踪剂检测BBB;干/湿法测定脑含水量;免疫组织化学法观察大脑皮质水孔通道蛋白4(AQP4)表达。结果正常组和假手术组BBB通透性、脑含水量和脑皮质AQP4的表达差异无显著性(P>0.05);HI组BBB通透性、脑含水量和脑皮质AQP4的表达明显高于假手术组(P<0.01);PROG组BBB通透性、脑含水量和脑皮质AQP4的表达明显低于HI组(P<0.05)。结论 PROG通过减轻BBB破坏和脑水肿对HIBD新生大鼠起脑保护作用,PROG的脑保护作用可能与下调新生大鼠脑皮质AQP4的表达有关。     

钙敏感受体及紧密连接蛋白-14在草酸钙结石大鼠肾组织中的表达及意义

【摘要】目的 初步探讨钙敏感受体（CaSR）和紧密连接蛋白（Claudin）-14在肾草酸钙结石大鼠肾组织中的表达及意义。方法 30只雄性SD大鼠随机分为对照组和结石组各15只,采用1%乙二醇和2%氯化铵每日2mL灌胃诱导制作大鼠肾草酸钙结石模型。免疫组织化学检测CaSR蛋白表达;RT-PCR检测Claudin-14mRNA表达;West? ern-Blotting分别检测CaSR和Claudin-14蛋白表达;全自动生化分析仪检测2组大鼠肾功能、血及尿生化指标。结果 光镜下结石组有大量结石结晶形成,血清肌肝（Cr）、尿素氮（BUN）、24h尿钙及尿量较对照组升高（P＜0.01）,2 组间血钙、尿pH差异无统计学意义。结石组Claudin-14mRNA及CaSR蛋白表达较对照组升高（P＜0.01）,Claudin- 14蛋白在结石组大鼠肾组织中呈特异性高表达,对照组未检测到Claudin-14蛋白表达;结石组大鼠肾组织中CaSR 和Claudin-14蛋白表达呈正相关,同时,CaSR、Claudin-14蛋白表达与24h尿钙排泄量也呈正相关。结论 CaSR和 Claudin-14表达增高可通过增加尿钙排泄量,进而参与结石的形成。     

桑黄酮 G对缺血性中风大鼠血脑屏障的保护作用

目的 探讨桑黄酮G(kuwanon G,KG)对缺血性中风大鼠脑水肿和血脑屏障(BBB)的影响.方法 2018年10月至2019年9月选取45只250～300 g SPF级雄性SD大鼠,采用随机数字表法分为假手术组、缺血性中风模型组(模型组)和治疗组,利用单侧大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAo)模型,术前3 d假手术组、模型组给予无菌水灌服,治疗组给予KG灌服,术后连续灌服7 d,通过神经功能评分检测各组大鼠的脑损伤程度,利用检测大脑含水量评估各组大鼠脑水肿程度,利用蛋白质印迹法(western blotting)检测各组大鼠脑组织中胞质紧密粘连蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)、闭合蛋白(oc?cludin)、紧密连接蛋白(claudin-5)和基质金属蛋白-9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)蛋白的表达.结果 与假手术组相比[6 h(0.30±0.48)、1 d(0.30±0.48)、3 d(0.30±0.48)、7 d(0.30±0.48),模型组(6 h(15.20±1.14)、1 d(14.60±1.17)、3 d(15.50±0.85)、7 d(15.60±1.08)]神经功能明显受损;治疗组[6 h(14.80±1.03)、1 d(13.20±1.03)、3 d(12.10±1.2)、7 d(9.40±1.27)]神经功能虽受损,但经桑黄酮G治疗后神经功能显著恢复,在第7天尤为显著(P<0.001).与假手术组[1 d(73.83±0.91)％、2 d(73.89±0.82)％、3 d(73.89±0.82)％、7 d(74.97±0.38)％]相比,模型组[1 d(81.71±1.12)％、2 d(84.98±0.39)％、3 d(83.54±0.84)％、7 d(80.84±1.22)％]脑水肿明显,在术后2天脑水肿最严重;治疗组[1 d(76.85±2.41)％、2 d(77.81±1.69)％、3 d(76.87±1.97)％、7 d(76.55±1.27)％]脑水肿亦明显,但经治疗后脑水肿明显减轻(P<0.001).相比假手术组ZO-1(0.52±0.15)、Occludin(0.52±0.15)、Claudin-5(0.89±0.06)、MMP-9(0.42±0.02),模型组ZO-1(0.21±0.05)、Occludin(0.38±0.07)、Claudin-5(0.41±0.07)蛋白的表达明显下降,MMP-9(0.86±0.14)显著上升;经桑黄酮G治疗后ZO-1(0.51±0.10)、Occludin(0.89±0.04)、Claudin-5(0.75±0.04)的表达明显上升,而MMP-9(0.28±0.06)的表达显著减少(P<0.001).结论 KG通过调节MCAo大鼠紧密连接蛋白和基质金属蛋白的表达,保护BBB完整性,从而发挥神经保护作用.     

表皮生长因子对脑缺血血脑屏障的保护作用

目的血脑屏障(BBB)破坏是缺血再灌注损伤的重要标志,而表皮生长因子(EGF)具有增强紧密连接功能。本研究考察EGF对脑缺血BBB的保护作用。方法建立bEnd3的单细胞BBB模型,通过荧光黄渗透系数测定及紧密连接蛋白claudin-5和ZO-1免疫染色法评价BBB模型的紧密连接性;通过bEnd3细胞建立4 h糖氧剥夺模型,检测claudin-5和ZO-1的m RNA和蛋白表达水平、荧光黄渗透系数及细胞凋亡,考察EGF(250μg·L-1)对BBB的保护作用。结果 bEnd3细胞显著阻碍荧光黄的通透,其渗透系数为(1.3±0.13)×10-3cm·min-1,claudin-5和ZO-1免疫染色呈阳性,EGF可显著抑制糖氧剥夺引起的claudin-5和ZO-1表达减少和荧光黄通透性增加,此外对细胞活性无显著影响。结论本研究建立了一种基于bEnd3细胞的BBB体外模型,发现EGF对脑缺血BBB具有保护作用,可为缺血性脑卒中治疗提供新的潜在靶点和思路。     

EMAP-Ⅱ通过LKB1/AMPK/mTOR信号通路增加BTB的通透性

目的研究内皮-单核细胞激活多肽(EMAP-Ⅱ)对体外血肿瘤屏障(BTB)通透性的影响及可能机制。方法建立体外BTB模型,EMAP-Ⅱ处理后,millipore电阻测量系统检测跨内皮细胞阻抗(TEER)值,采用Western blot方法检测p LKB1/LKB1、p AMPK/MAPK和p-m TORC1/m TORC1的蛋白表达水平;分别应用LKB1抑制剂radicicol、AMPK抑制剂compound C和m TORC1激活剂IGF1进行预处理后再给予EMAPⅡ,检测体外BTB模型的TEER值,Western blot方法检测紧密连接相关蛋白ZO-1和occludin的蛋白表达水平。结果与EMAP-Ⅱ0 h组相比,EMAP-Ⅱ可明显降低体外BTB模型的TEER值,增加p-LKB1/LKB1和p-AMPK/AMPK的表达水平,降低p-m TORC1/m TORC1的表达水平,以上指标在EMAP-Ⅱ作用1 h时效果最明显;radicicol、compound C和IGF1预处理能够部分阻断EMAP-Ⅱ的作用,使体外BTB模型的TEER值及紧密连接相关蛋白ZO-1和occludin的表达水平明显增加。结论 EMAP-Ⅱ能明显增加体外BTB模型通透性,其机制可能与激活LKB1/AMPK/m TOR信号通路相关。     

黄芪多糖对小鼠慢性肾功能衰竭保护作用的机制研究

目的　探讨黄芪多糖（APS）对慢性肾功能衰竭小鼠的保护作用及其潜在分子机制。方法　雄性Balb/c小鼠采用5/6肾切除建立慢性肾功能衰竭模型,随机分为模型组和黄芪多糖干预组（APS组）,另设假手术组,每组10只。术后正常喂养7周,APS组给予黄芪多糖100 mg/（kg·d）灌胃,余组均给予等体积生理盐水。4周后收集粪便、尿、血液、肾脏与结肠组织样本,测定血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、24 h尿蛋白定量;组织固定包埋切片后予以HE、天狼星红染色进行病理分析;Western blot、免疫组织化学染色检测紧密连接蛋白-1家族（Claudin-1、Occludin-1、ZO-1）及p-NF-κB表达水平;酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血清中白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的浓度;实时荧光定量PCR检测长链非编RNA（lncRNA）Arid2-IR及IL-1β、IL-6、TNF-α的表达变化以及各组小鼠粪便的菌群变化。结果　APS组小鼠血Scr、BUN、24 h尿蛋白较模型组下降;HE染色显示APS组肾脏、结肠组织病理损伤均较模型组改善;天狼星红染色可见APS组纤维化程度明显改善;Western blot、免疫组织化学染色结果可见APS组结肠组织紧密连接蛋白-1家族表达量升高及肾组织p-NF-κB蛋白表达量较模型组明显下降;ELISA结果显示APS组血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平较模型组明显下降;实时荧光定量PCR结果可见APS组肾组织中lncRNA Arid2-IR、IL-1β、IL-6和TNF-α的相对表达水平较模型组明显下降,同时APS组乳酸杆菌、双歧杆菌的表达量较模型组增高,而大肠杆菌的表达量较其下降。结论　黄芪多糖可能通过调控lncRNA Arid2-IR/NF-κB信号轴调节小鼠肠道菌群,从而修复肠道屏障损伤,维持正常肠道生理环境,改善慢性肾功能衰竭。     

黄芪皂苷对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的干预作用

目的探讨黄芪皂苷对多发性硬化症(MS)的治疗作用。方法本研究在MS的模型实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠中研究黄芪皂苷的干预作用,分别应用Evan’sblue渗入法、DCFH-DA法、生化反应法、LFB染色法、荧光免疫组织化学法、Western blotting和ELISA法研究黄芪皂苷对EAE小鼠BBB通透性、在体ROS水平、抗ROS相关酶表达、脱髓鞘及单核细胞渗入、中枢神经系统炎症细胞激活、中枢神经系统损伤以及炎症因子表达的影响。结果和模型组比较,黄芪皂苷显著降低EAE小鼠的神经行为学评分,CNS的BBB通透性及ROS水平,显著增加了SOD以及GSH-Px的活性,抑制了iNOS活性,减少了MDA的生成。进一步的研究表明,黄芪皂苷处理显著降低了EAE小鼠髓鞘脱失,减少了单核细胞的渗入。免疫组织化学结果表明,皂苷处理使海马区域的星形胶质细胞以及小胶质细胞的激活显著降低。同时,处理组CNS的炎症因子IL6,TNFα以及IFNγ表达显著降低。Western blotting结果表明,黄芪皂苷可以调节Bcl-2,Bax,p53以及胱天蛋白酶3等蛋白的相对表达,显著减少了tau蛋白的磷酸化。结论黄芪皂苷对EAE小鼠的发病有抑制作用,而这种作用可能是通过抑制神经炎症,减少ROS产生,从而降低了中枢神经系统的损伤机制而进行。