IFN—α和IL—2联合激活的脐血对K562细胞的杀伤和净化作用研究

目的 探讨体外干扰素α（ＩＦＮ－α）联合白细胞介素２（ＩＬ－２）激活的脐血对慢性髓性白血病细胞株Ｋ５６２细胞的杀伤和净化作用。方法 采用细胞培养法和反转录聚合酶链反应法进行研究。结果 ＩＬ－２激活３ｄ的脐血对Ｋ５６２细胞具有显著的杀伤和净化作用,加用ＩＦＮ－α后这种作用得到明显增强。ＩＬ－２单用或与ＩＦＮ－α联合对脐血ＣＦＵ－ＧＭ未见明显抑制作用。结论 ＩＦＮ－α可增强ＩＬ－２激活脐血对Ｋ５６２的     

IL-2活化脐血细胞抗白血病效应的实验研究

探讨ＩＬ┐２活化脐血细胞的抗白血病效应。方法利用ＩＬ┐２作用于脐血细胞，以使其活化，然后再与带有标志基因ＮｅｏＲ和ＬａｃＺ的ＨＬ┐６０及Ｋ５６２细胞共培养，应用Ｘ┐ｇａｌ组化染色法观察其对白血病细胞系的抑制和杀伤作用。结果活化脐血细胞在生长、集落形成方面与未活化脐血细胞无显著性差异（Ｐ＜０．０５）。在采用经ＩＬ┐２活化的脐血细胞与基因标记ＨＬ┐６０及Ｋ５６２培养体系中，经３天的共培养，携带基因标记的白血病细胞系明显受到抑制和杀伤作用，蓝染细胞率显著下降（ＨＬ┐６０培养前后分别为３４．６７±５．０１，１９．８３±３．３１，Ｋ５６２分别为３４．１７±３．７６，２０．５±３．７３）。结论ＩＬ┐２活化脐血细胞具有一定的抗白血病效应     

TIL与脐血LAK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用

肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL）和脐血淋巴因子激活杀伤（LAK）细胞在含重组白细胞介素2（rlL－2）的完全培养基中可大量扩增培养，体外培养肿瘤组织的TIL及癌性腹水的淋巴细胞对自体瘤细胞（黑色素瘤，卵巢囊腺癌，大网膜转移性腺癌及癌性腹水）有明显的杀伤作用，胎儿脐血中分离培养的LAK细胞对肿瘤细胞也有较强的杀伤作用，在效靶比例分别为20：1和40：1时，对肿瘤细胞的杀伤作用后者均明显高于前者（P=0.025和P=0．01），且TIL对自体瘤细胞的杀伤作用明显高于脐血LAK细胞（P＜0．01），为临床应用TIL和脐血细胞提供实验依据。     

α-干扰素联合高温对 HL-60细胞体外杀伤作用的研究

目的：观察42℃高温联合α-干扰素（α-interferon,α-IFN)体外杀伤HL－60细胞的效果。方法：HL－60细胞经42℃高温处理后加入不同浓度α-IFN体外培养,计算清除率。结果：42℃高温或100u/mlα-IFN单独应用60min,体外净化骨髓时分别能清除大约89％或62％的白血病细胞。42℃高温联合α-IFN能协同灭活HL－60细胞,可清除98％以上的白血病细胞。两者联用的最适条件是42℃加α-IFN100u/ml作用60min。对粒单系集落形成单位（colony forming unit-granulocyte/macrophage,CFU-GM)的形成却没有协同抑制作用,且减轻了高温对CFU－GM的抑制作用,CFU－GM的抑制率下降为31．3％,与单独高温净化时的47．8％相比有显著差异。结论：42℃高温联合α-IFN可以协同杀灭体外的HL－60细胞。     

白细胞介素-2联合干扰素-α对与K562细胞互培养的白血病缓解期外周血淋巴细胞免疫表型的影响

目的：体外观察白介素-2和干扰素-α单独或联合作用于与K562细胞互培养的白血病缓解期外周血的淋巴细胞免疫表型的影响。方法：采用4h标准^51Cr释放试验测定12例激活的白血病缓解期外周血淋巴细胞的细胞毒作用以及应用流式细胞仪检测淋巴细胞表面单抗的表达。结果：经过培养后的外周血的淋巴细胞1d和3d,CD4^ 、CD8^ 双表达的淋巴细胞比例高达30％以上,CD8^ 和CD56^ 淋巴细胞比例明显增高,淋巴细胞表面激活分子和黏附因子的表达也明显升高。结论：干扰素-α对淋巴细胞有免疫调节作用,与白细胞介素-2联合能增加白介素-2诱导的细胞抗肿瘤效应,增加免疫细胞的活性,从而发挥杀伤靶细胞的作用。     

MTX和IFN-α-2b诱导K562细胞凋亡及p73基因表达的研究

目的 :研究甲氨蝶呤 (MTX)和干扰素 α 2b(IFN α 2b)诱导人慢性粒细胞白血病急变细胞株 (K5 62 )凋亡的作用及凋亡相关基因p73mRNA在凋亡前后表达的变化。方法 :采用形态学观察法、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测K5 62细胞凋亡 ,采用半定量逆转录PCR方法 (RT PCR)检测p73mRNA的表达。结果 :4μg/mLMTX和60 0IU/mLIFN α 2b分别作用于K5 62细胞 6、12和 2 4h ,通过Wright’s Giemsa染色可见部分细胞染色质明显固缩。DNA琼脂糖凝胶电泳可见清晰的梯形条带。流式细胞仪检测 ,MTX作用细胞6、12和 2 4h ,细胞凋亡率 (AR)分别为 5 15 %、14 70 %和 3 5 49% ;而IFN α 2b作用 6、12和 2 4h ,AR分别为 2 3 3 %、11 90 %和 3 5 15 %。对照组AR分别为 0 93 %和 1 0 9%。半定量RT PCR测定表明 ,IFN α 2b作用 2 4h组p73mRNA表达较对照组下调 ( 0 43± 0 0 5vs 0 66± 0 11,P <0 0 5 ) ,其余各组无明显变化。结论 :MTX、IFN α 2b可诱导K5 62细胞凋亡 ;在MTX、IFN α 2b诱导K5 62细胞凋亡的早期 ,p73mRNA表达无明显变化 ;IFN α 2b作用 2 4h ,p73mRNA表达下调。     

小剂量IL-2和IFNα与TNFα联合治疗恶性肿瘤的免疫学与临床研究

目的:研究小剂量细胞因子在恶性肿瘤免疫治疗中的意义。方法:全身应用小剂量重组干扰素(ＩＦＮα２ｂ)、白细胞介素－２(ＩＬ－２)和肿瘤坏死因子(α－ＴＮＦ)联合治疗多种恶性肿瘤６０例。应用ＡＰＡＡＰ法和免疫单向扩散法(ＲＩＤ)分析了治疗前后患者外周血中Ｔ、Ｂ淋巳细胞、ＮＫ细胞、免疫球蛋白(Ｉｇ)和补体Ｃ３活性。结果:治疗１个疗程后外周血中ＣＤ４＋的Ｔ淋巴细胞和ＣＤ２３＋的Ｂ淋巴细胞显著的高于治疗前水平(Ｐ＜０．０５);ＣＤ４＋/ＣＤ８＋比值也明显增高(Ｐ＜０．０１)。免疫球蛋白(ＩｇＭ)活性亦显著的高于治疗前水平(Ｐ＜０．０５)。ＫＰＳ积分较治疗前明显增高(Ｐ＜０．００１)。治疗后细胞因子加化疗组的ＫＰＳ积分平均增高２８．５分(Ｐ＜０．００１);ＣＲ ２６例(６５．０%);ＰＲ １１例(２７．５%),总有效率８２．５%。单纯细胞因子治疗组的ＫＰＳ积分平均增高２３分(Ｐ＜０．００１);ＰＲ １３例(６５．０%),总有效率６５．０%。结论:本方案可以显著的提高多种恶性肿瘤患者的细胞免疫和体液免疫。有可能提高肿瘤的化疗效果和患者的生存质量,延长生存期。     

紫杉醇联合INF-α-2b对K562细胞的诱导凋亡作用

目的 研究紫杉醇联合INF-α-2b对K562细胞的诱导凋亡作用。方法 应用体外培养的K562细胞株，经不同浓度的紫杉醇及INF-α-2b培养48h后，采用MTT法检测细胞杀伤活性变化，应用流式细胞仪(FCM)检测凋亡细胞DNA，采用Annexin—V法检测凋亡细胞，并设立对照组。结果 经紫杉醇联合INF-α-2b处理后的K562细胞生长抑制率及凋亡率，较单用紫杉醇或单用INF-α-2b处理的K562细胞明显增高。结论 紫杉醇联合INF—α-2b后诱导K562细胞凋亡的作用明显增强。     

脐血来源的DC增强NK和NKT细胞对白血病细胞的杀伤作用

目的:探讨脐血来源的树突状细胞(DC)增强自然杀伤(NK)细胞和自然杀伤性T(NKT)细胞对白血病细胞杀伤作用的影响机制.方法:提取脐带血单个核细胞(PBMC),体外诱导培养DC、NK和NKT淋巴细胞.以人髓性白血病K-562细胞作为靶细胞,检测NK、NKT、NK+DC和NKT+DC对靶细胞的杀伤效应.检测共培养上清液...     

IL-15对树突状细胞激活的T淋巴细胞免疫反应的作用观察

  目的  观察IL-15和IL-2对树突状细胞疫苗(dendritic cells, DC)激活的淋巴细胞免疫反应的作用。  方法  取健康小鼠的脾淋巴细胞, 在体外采用肿瘤抗原负载的DC疫苗与脾淋巴细胞混合后, 分别加入IL-15或IL-2培养7d。采用流式细胞术检测淋巴细胞免疫表型的变化; 使用酶联免疫斑点实验(ELISPOT)检测分泌干扰素(interferon, IFN)-γ的细胞数量; 利用51Cr释放法检测淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。  结果  IL-15联合DC疫苗增强了T细胞反应, 包括淋巴细胞免疫表型和功能的改变。  结论  与IL-2相比, IL-15能更好的增强DC疫苗诱发的免疫反应, 为IL-15与DC疫苗的联合应用提供了一定的依据。      

IFN-α对CML树突状细胞表型及功能的影响

临床观察表明IFN-α治疗早期慢性期CML患者有效,并且IFN-α治疗CML达到部分细胞遗传学缓解以上的患者较之IFN-α治疗无效者其生存期明显延长.IFN-α治疗CML有效的机制尚不清楚,可能与其增强DC的表型及功能有关.DC是体内唯一能激活初始型T细胞的抗原递呈细胞,在机体免疫系统中处于中心地位.我们采用CML患者骨髓单个核细胞,体外有血清培养体系中观察IFN-α对CML-DCs的分化及其功能的影响.     

克隆化自体LAK细胞,rIL2—联合化疗治疗难治性急性白血病

克隆化自体ＬＡＫ细胞、ｒＩＬ＿２——联合化疗治疗难治性急性白血病刘启发，周淑芸，罗荣城，宣文兰，平宝红，丁雪梅广州第一军医大学南方医院（广州·５１０５１５）淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）联合重组白细胞介素—２（ｒＩＬ２）等生物反应因子治疗恶性肿...     

rhTNF-α联合IL-2体外净化急性髓细胞性白血病骨髓的实验研究

目的 :探讨重组人肿瘤坏死因子 α(rh TNF- α)联合白细胞介素 2 (IL- 2 )体外净化 AML 骨髓方案的可行性及其作用机制。方法　联合 rh TNF- α(1× 10 6 U/ L)和 IL- 2 (5× 10 5 U/ L) ,对 17例 AML 患者骨髓体外净培养1天～ 3天 ,采用半固体培养法测定粒—巨噬细胞集落 (CFU- GM)、白血病祖细胞集落 (CFU- L)形成 ,MTT细胞毒性测定及免疫组化法测定 bcl- 2阳性率的变化。结果　 1rh TNF- α与 IL- 2联合后 ,对 CFU- L 有选择性抑制作用 ,而对 CFU- GM无明显影响 ;2 rh TNF- α和 IL- 2对白血病细胞有协同杀伤作用 ,净化培养 3天后 ,bcl- 2阳性率明显降低。结论　联合 rh TNF- α和 IL- 2净化效果好 ;介导细胞毒性 ,下调 bcl- 2表达 ,诱导白血病细胞凋亡 ,可能是其净化骨髓的机制之一。     

苦参碱诱导自然杀伤细胞对白血病K562细胞杀伤的实验研究

目的 探讨中药苦参碱对人自然杀伤（NK）细胞体外杀伤白血病细胞的作用及可能的分子机制.方法 以人慢性粒细胞白血病K562细胞为靶细胞,采用CFSE/PI双染色法流式细胞术检测不同质量浓度（02、0.5、0.8 mg/ml）苦参碱处理后,人NK细胞在不同效靶比下对K562细胞的体外杀伤活性.流式细胞术分析不同浓度苦参碱处理24 h对NK细胞主要活化性受体NKG2D和抑制性受体CD158a、CD158b表达的影响及K562细胞膜上NKG2D配体MICA/B、ULBP1、ULBP 2、ULBP 3表达的改变.结果 效靶比为5∶1时,NK细胞对0.2、0.5和0.8 mg/ml苦参碱处理后的K562细胞杀伤率分别为32.8％、38.1％和40.5％,较处理前均有不同程度增高（29.2％）;但进一步增加效靶比（10：1）后,NK细胞杀伤活性改变差异无统计学意义（P＞0.05）.苦参碱处理24 h,NK细胞抑制性受体CD158a、CD158b的表达均较处理前降低,而活化受体NKG2D的表达则增高.K562细胞表面NKG2D配体ULBP1和ULBP2分子的表达也较处理前增高（平均荧光强度分别为174.33±39.93比275.67±32.88,517.6±47.97比1368.6±49.43,P＜0.05）.结论 苦参碱可增强NK细胞对白血病K562细胞的体外杀伤活性,其机制可能与NK细胞受体及配体表达调节作用有关.     

联合应用IL-2和IL-7对T细胞体外增殖及功能的增强效应

本文研究了联合应用IL-2和IL-7在体外T细胞培养系统中对小鼠T细胞生长及功能的调节作用。结果表明:单独使用IL-2或IL-7均能增强T细胞对ConA或特异性抗原刺激诱导的增殖反应,但联合使用IL-2和IL-7具有更加显著的协同刺激作用。C57BL/6小鼠抗FBL-3肿瘤特异性T细胞系在IL-2与IL-7联合培养系统中,不但T细胞数量明显增加,且能在保持特异性功能的同时,延长T细胞体外抗原刺激周期。此外,这一细胞因子的组合方案,可大大降低IL-2的应用剂量,避免大剂量IL-2临床应用时所产生的副作用。     

Exosomes致敏的脐血树突细胞介导的抗K562细胞作用

目的分离K562细胞释放的exosomes,致敏脐血树突细胞(dendritic cell,DCs),观察其对细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic Tlymphocytes,CTLs)的激活效应。方法离心超滤和蔗糖密度梯度离心法分离K562细胞释放的exosomes,固相免疫电镜法(SPIEM)制备exosomes的HSP70、ICAM-1及ABL免疫电镜标本。常规方法从脐血单个核细胞诱导DCs并分离T细胞,将K562细胞来源的exosomes冲击或未冲击的DCs与T细胞共培养。MTT比色法检测体外细胞毒活性。结果K562细胞分泌的exosomes为直径50~100nm的膜性微囊。Exosomes致敏的脐血DCs激活CTLs的能力显著高于肿瘤冻融抗原致敏的DCs组,在效靶比为501时,两组CTLs对K562细胞的杀伤率为(68.4%vs35.3%,P<0.05)。结论K562细胞分泌的exosomes负载脐血DCs后活化CTLs,有抗肿瘤活性。     

LiCl协同IL—2对脐血有核细胞增殖,凋亡及NK活性的影响

目的 探讨ＬｉＣｌ、ＩＬ－２对脐血有核细胞（ＣＢＮＣ）的细胞周期、增殖、凋亡及ＮＫ生的影响,为临床应用提供依据。方法 （１）＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定ＬｉＣｌ、ＩＬ－２、ＬｉＣｌ＋ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＣＳＦ对ＣＢＮＣ细胞增殖作用的影响。（２）用流式细胞仪测定ＬｉＣｌ、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ对ＣＢＮＣ细胞周期及凋亡的影响。（３）测定ＬｉＣｌ、ＩＬ－２、ＬｉＣｌ＋ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ对ＣＢＮＣ的     

链式CIK细胞对白血病K562细胞的体外杀伤活性

目的： 研究细胞因子诱导的体外细胞经过链式激活后获得的链式CIK细胞对白血病K562细胞的杀伤效应。 方法: 采用血细胞单采机从外周血分离单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell, PBMC）,经过细胞因子诱导、扩增、培养得到链式CIK细胞,以CIK细胞作对照,检测链式CIK细胞的增殖能力, LDH释放法测定其对K562细胞的杀伤活性。 结果: 链式CIK细胞组在培养第5、第14天的细胞数低于CIK细胞组（P<0.01）;链式CIK细胞对K562细胞的杀伤活性在效靶比40 ∶1和20 ∶1时分别为（56.1±2.24）%、（34.4±3.56）%,均低于CIK细胞（均P<0.01）。 结论: 链式CIK细胞是一种培养周期短、对白血病K562杀伤活性较弱的免疫细胞。