阿霉素肾病小鼠肾组织中p53、p21表达及意义

目的探讨p53、p21在阿霉素肾病小鼠肾组织中的表达及意义。方法将60只6周龄、雄性BALB/c小鼠随机分为阿霉素肾病模型组和对照组。两组分别于尾静脉注射阿霉素及生理盐水后第0、2、4、6周末随机选取6只小鼠处死,并检测24 h尿蛋白定量、血清白蛋白、血肌酐及总胆固醇。肾组织行HE、PAS染色,以半定量计分法计算各组肾小球硬化和肾小管间质损伤程度,免疫组化及RT-PCR法检测p53、p21蛋白及mRNA的表达。并分析p53、p21与其它指标的相关性。结果从第2周开始模型组尿蛋白[(16.19±1.13) mg/24 h vs(2.02±0.47) mg/24 h]、总胆固醇[(7.56±1.10)mmol/L vs(2.17±0.15)mmol/L]明显高于对照组(P均0.05),白蛋白明显低于对照组[(19.63±1.28)g/L vs(36.77±1.81)g/L,P0.05]。模型组肾小球硬化(0.535±0.116 vs 0.020±0.020,P0.05)及肾小管间质损伤程度(1.133±0.136 vs 0.067±0.061,P0.05)显著高于对照组,p53、p21蛋白及mRNA表达水平也显著高于对照组;模型组中p53、p21蛋白及mRNA表达水平分别与肾小球硬化、肾小管间质损伤、尿蛋白及总胆固醇呈正相关(r=0.877,r=0.830,r=0.456,r=0.576,P0.05),与白蛋白呈负相关(r=-0.343,P0.05)。结论 p53、p21在模型组第2周末即表达增加,且与病变程度呈正相关,提示衰老存在于阿霉素肾病,并参与疾病的发生、发展。     

Wip1在肺癌细胞中的作用机制初探

目的: 检测Wip1及相关蛋白在肺癌细胞中的表达情况,探讨Wip1在肺癌发生中的作用机制。方法: Western blotting检测各种细胞(肺腺癌细胞A549、肺鳞癌细胞NCI-1299、大细胞肺癌细胞 NCI-H460和正常支气管上皮细胞HBE)中Wip1、 p53、p-p53、p38 MAPK和p-p38 MAPK蛋白的表达。结果: A549、NCI-1299和H460细胞中Wip1蛋白的表达均高于HBE细胞(P<0.05);各种肺癌细胞间Wip1蛋白的表达无明显差异(P>0.05);p-p53和p-p38 MAPK蛋白在肺癌细胞中的表达低于HBE细胞(P<0.05);肺癌细胞中Wip1表达增加,p-p38 MAPK和p-p53表达降低,存在着Wip1-p38 MAPK-p53信号通路的失衡。结论: 肺癌细胞(A549、NCI-1299、H460)中存在Wip1-p38 MAPK-p53信号通路的失衡。这可能是Wip1在肺癌中的致癌机制之一。     

p21WAF1／CIPI基因导入对p53突变人肺癌细胞系生长特性的影响

目的 探讨含突变ｐ５３基因癌细胞系ｐ２１基因的抗肿瘤作用。方法 构建人ｐ２１表达重组子,导入ｐ５３基因突变的人肺癌ＰＧ细胞每当增产同表达ｐ２１的细胞系;然后观察其形态太生长特性的改变;ＣＤＫ４,ＰＣＮＡ水平;对基因毒性物的反应性。结果 在含ｐ５３基因突变的ＰＧ细胞内导入的性ｐ２１基因,其高表达ｐ２１约是ＰＧ细胞的６倍,转谬为薄等异型性降低;生长速度下降（５０％）,叠落生长不明显;在０．５％血甭条件     

miR-34a-sirt1-NRF2信号通路对阿霉素心脏损伤的机制研究

目的 探讨mi R-34a-sirt1-NRF2信号通路对阿霉素心脏损伤的影响。方法 构建阿霉素心脏损伤C57BL/6小鼠模型,构建模型前转染mi R-34a调控小鼠体内mi R-34a的水平。比较各组小鼠sirt1、NRF2蛋白表达水平,检测各组小鼠心脏血流动力学指标(+dp/dt_max、-dp/dt_max、LVEF、FS)水平。随后处死小鼠,检测外周血CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺/CD8⁺水平以及血清CK-MB、LDH及心肌组织MDA、SOD水平。生物信息学预测mi R-34a的靶基因并用双荧光素酶报告基因进一步验证,检测心肌细胞（H9C2）mi R-34a过表达或沉默sirt1表达时凋亡蛋白（Bax、Bcl-2）及sirt1、NRF2蛋白的水平。结果 相较于正常对照小鼠,阿霉素干预的小鼠CD8⁺、血清CK-MB、LDH及心肌组织MDA水平显著上升,而CD4⁺、CD4⁺/CD8^...     

APEX1介导Jagged1上调驱动结肠癌进展的机制

目的 探讨APEX1介导Jagged1上调驱动结肠癌进展的机制。方法 APEX1 siRNA转染NCI-H548和DLD1,构建APEX1低表达细胞;SW480和HT29转染APEX1 shRNA,构建APEX1超表达细胞。NCI-H548细胞用于构建APEX1超表达、Jagged1低表达、Jagged1超表达。将构建的NCI-H548-APEX1、NCI-H548-APEX1+Jagged1siRNA,NCI-H548-APEX1+Jagged1细胞注射小鼠体内用于肿瘤生长检测。通过Western blot分析人结肠癌细胞系中APEX1、Jagged1、Notch1和Notch3的蛋白表达。通过MTT试验检测细胞增殖。通过Transwell小室试验检测细胞迁移侵袭。用指定细胞的上清液培养HUVECs成管进行血管生成试验。通过卡尺测量异种移植小鼠肿瘤大小。结果 NCI-H548和DLD1中APEX1、Jagged1、Notch1和Notch3蛋白表达较SW480、HT29升高(P<0.05),在APEX1高表达的NCI-H548和DLD1中,Jagged1和Notch蛋白表达较高...     

薯蓣皂苷通过下调Notch 1信号通路抑制甲状腺癌SW579细胞增殖与侵袭

目的 观察薯蓣皂苷对甲状腺癌细胞SW579细胞的抑制作用并探讨其可能的作用机制.方法 体外常规培养甲状腺癌SW579细胞,将细胞分为对照组、不同浓度薯蓣皂苷组(10、20、30、40、50μM),CCK-8方法检测各组甲状腺癌SW579细胞存活率;随后将细胞分为对照组、薯蓣皂苷(30μM)组、Jagged 1组(5mg...     

阿霉素致足细胞损伤模型的建立

目的：建立一种稳定的小鼠足细胞损伤模型,为进一步研究足细胞的生物特性,以及其相关蛋白与肾性蛋白尿间的关系提供可靠保证。方法应用CCK8检测不同浓度的阿霉素（0．5μg／ml,0．25μg／ml,0．125μg／ml）分别作用24 h,48 h后,足细胞的抑制率;应用流式细胞术检测测定足细胞凋亡情况;应用R?T PCR检测裂孔膜关键因子nephrin, podocin的表达。结果0．25μg／ml的阿霉素作用24 h,抑制率接近50％;流式细胞术及R?T PCR均表明浓度为0．25μg／ml的ADR作用24 h后与正常组存在显著性差异。结论0．25μg／ml的阿霉素作用24 h建立的足细胞模型稳定可靠,可应用于足细胞研究。     

RNAi 结肠癌HOXB7 基因表达对癌细胞增殖及凋亡的机制研究

目的:探讨抑制HOXB7 基因表达对结肠癌细胞增殖凋亡的影响。方法:通LipofectamineTM2000 脂质体介导法将合成的阴性对照siRNA(阴性对照组)及HOXB7-siRNA(HOXB7 转染组)转染人结肠癌SW480 细胞,未经特殊处理的细胞为空白组。收集转染48 h 的细胞,RT-PCR 及Western blot 分别检测细胞中HOXB7 的mRNA 及蛋白表达;分别于转染后的24、48、72、96 h,CCK8 法检测细胞增殖;流式细胞仪检测转染后48 h 细胞的凋亡情况;Western blot 检测凋亡相关蛋白B 细胞淋巴瘤/ 白血病-2(Bc-2)、Bcl-2 相关X 蛋白(Bax)及Notch1 信号通路Notch1、Hes1 的蛋白表达。结果:HOXB7 转染组HOXB7 的mRNA 及蛋白表达均显著低于空白组(P<0.05);转染24 h 后三组细胞的OD 值间差异无统计学意义(P>0.05),48、72、96 h 后,与空白组比较,HOXB7 转染组OD 值均显著降低(P<0.05);与空白组比较,HOXB7 转染组细胞凋亡率显著升高,Bcl-2、Notch1、Hes1 蛋白显著下调表达,Bax 蛋白显著上调表达(P<0.05)。结论:RNAi 结肠癌HOXB7 基因表达可通过抑制Notch1 信号通路降低癌细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。     

肿瘤抑制基因p53和p21WAF1／Cip1／Sdi1的相关性

抑癌基因p53在细胞周期调控、基因组稳定性维持、细胞分化和凋亡中起重要作用。DNA损伤后的细胞反应包括凋亡或细胞周期阻滞 ,它们都需要野生型p53基因转录活化。对此 ,目前研究集中在p53下游靶基因p2 1WAF1 /Cip1 /Sdi1 ,该基因编码一种细胞周期蛋白激酶抑制剂 ,后者在介导p53依赖性的细胞周期阻滞中起重要作用。然而DNA损伤诱发的凋亡需要有转录活性的p53而不是p2 1WAF1 /Cip1 /Sdi1参与。     

TNFAIP8(TIPE)抑制 p53 蛋白乙酰化促进宫颈癌增殖机制研究

目的:TIPE 蛋白在肿瘤发生发展中起重要作用,但目前为止其在宫颈癌中的表达情况及潜在生物学功能还 未见报道,本研究旨在探讨TIPE 在宫颈癌中的表达水平及对宫颈癌细胞生物学功能的影响和可能机制。方法:免疫组化检 测宫颈癌组织及癌旁组织中TIPE 的表达,分析表达水平与患者预后的相关性;细胞实验检测TIPE 对Siha 细胞增殖影响; Western blot 实验初步探讨其可能的分子机制。结果:宫颈癌组织中TIPE 表达水平较癌旁组织明显上调,且与预后负相关;细 胞实验发现其促进宫颈癌细胞系Siha 的增殖;机制研究发现TIPE 抑制p53 乙酰化,从而抑制其下游分子p21 的表达。结论: TIPE 在宫颈癌组织中表达上调,且通过抑制p53 乙酰化促进宫颈癌细胞增殖,提示其参与了宫颈癌的发生发展进程。     

淋巴瘤发病机制中Notch1的作用及研究进展

Notch信号通路是唯一一个通过两个相邻细胞间受体与配体相互作用进行信号传递的信号通路,该通路对哺乳动物体内一些重要发育过程及稳态维持具有重要意义,如细胞生长增殖、上皮细胞分化、血管生成以及免疫系统调节等。研究发现当Notch信号通路发生异常改变,尤其是Notch1受体蛋白表达异常时,可引起一些细胞或器官的肿瘤性改变。该文就Notch1在淋巴造血系统肿瘤中的研究进展作一综述,并展望Notch1可能作为相关疾病的治疗靶点。     

缺氧对滋养细胞Notch信号通路的影响

目的探讨缺氧条件下Notch信号通路在滋养细胞中的表达改变。方法利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测二氯化钴(CoCl2)化学缺氧条件下人早孕绒毛滋养细胞株(the human first-trimester extravillous tropho-blast cell line,TEV-1)中Notch1及Jagged1 mRNA的表达情况。结果 (1)与正常对照组相比,缺氧条件下滋养细胞Notch1 mRNA表达量无明显变化(P>0.05)。(2)随着缺氧时间的延长,滋养细胞Jagged1 mRNA表达量逐渐降低,与正常对照组相比具有统计学意义(P<0.05)。结论缺氧条件下滋养细胞Notch1及Jagged1表达平衡失调,可能参与滋养细胞功能调控。     

Notch1在前列腺癌细胞PC3中对其配体Jagged1表达的调控

目的探讨在前列腺癌细胞PC3中,Notch1和Jagged1对细胞生长的影响,及Notch1对其配体Jagged1表达的调控作用。方法通过siRNA干扰的方法分别抑制Notch1和Jagged1蛋白的表达,用MTT法检测PC3细胞的生长;分别通过siRNA干扰和转染质粒的方法,抑制和促进PC3细胞中Notch1蛋白的表达,用Western blot检测Jagged1蛋白水平,用Real-timePCR检测Jagged1 mRNA水平。结果抑制Notch1和Jagged1蛋白的表达后,PC3细胞的生长减慢;抑制Notch1的表达引起Jagged1的蛋白水平下降而过表达Notch1引起Jagged1的蛋白水平上升,同时,Jagged1蛋白水平与mRNA水平的变化不一致。结论Notch1和Jagged1对前列腺癌细胞PC3的生长有重要影响。Notch1可以调控其配体Jagged1的表达。     

肝细胞癌p53基因与p21WAF1／CIP1基因的相关性分析

近年来，癌基因、抑癌基因在肿瘤发生发展中的作用日益受到人们的关注，不少学者进行了ｐ５３基因与肝细胞肝癌（ＨＣＣ）发生的相关性研究。有作者报道，野生型ｐ５３基因抑制细胞增殖的功能是通过ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１基因介导的〔１〕。本文检测７２例ＨＣＣ组织中...     

白豆蔻对阿霉素肾病所致大鼠肾损伤和肾纤维化的保护作用及机制

目的 探究白豆蔻对阿霉素肾病所致大鼠肾损伤和肾纤维化的保护作用及可能机制。方法30只SD大鼠随机分成对照组（Control组）、阿霉素肾病组（AN组）和白豆蔻组（AK组）,每组10只。HE染色观察肾组织形态学变化;Masson染色观察肾组织纤维化;ELISA方法检测大鼠血清血肌酐和尿素氮水平及肾组织匀浆MDA和SOD水平;Western blot检测肾组织凋亡相关蛋白和Sirt1/PGC-1α信号通路相关蛋白表达。结果 白豆蔻能改善大鼠肾组织形态,降低组织纤维化,降低血清血肌酐和尿素氮水平,抑制肾组织氧化应激反应,降低肾组织细胞凋亡,激活Sirt1/PGC-1α信号通路。结论 白豆蔻改善阿霉素肾病所致大鼠肾损伤和肾纤维化,其作用机制可能与调控Sirt1/PGC-1α信号通路有关。     

人恶性畸胎瘤PA-1细胞染色体特性及其影响因素的探讨

目的:探讨人类恶性畸胎瘤PA-1细胞株染色体特性及其影响因素。方法:采用G带核型分析、DNA碱基序列分析及Western blot(蛋白印迹分析)等方法对经20余年407-445继代培养的PA-1细胞株染色体核型及p 53 基因状态进行了研究。结果:PA-1细胞株80%以上仍然保持近乎二倍体的核型,30代以后的细胞由于第15号染色体与20号染色体间的相互易位形成了M1及M2标识染色体。RT-PCR产物DNA定向序列分析显示具有野生及突变两个带(p53密码子239突变),Western blot 未检测出突变的p53基因蛋白,而p21蛋白的表达水平比正常成纤维细胞低。结论:人卵巢恶性畸胎瘤PA-1细胞株经20年的继代培养后,一个p53 等位基因发生错义突变,另一个仍然是野生型的。仅一个p53 等位基因发生突变,不足以引起细胞的染色体不稳定性。     

Notch/JNK信号在低氧致大鼠皮层神经元损伤中的作用研究

目的:探讨Notch1/JNK信号通路在缺氧引起的神经元损伤中的作用。方法:原代培养新生SD大鼠皮层神经元,利用低氧条件培养建立缺氧模型。利用CCK-8实验检测在低氧诱导的不同时间,神经元的活性及siRNA干扰后神经元的活性;利用RT-q PCR与Western Blot检测对照组与低氧组神经元中NICD,p-JNK,Caspase-3mRNA与蛋白的表达情况;利用siRNA转染技术转染Notch1 siRNA或JNK siRNA至神经元中后,利用Western Blot检测低氧组与转染组神经元中NICD,p-JNK,Caspase-3蛋白的表达情况。结果:缺氧情况下神经元活性较低,具有时间依赖性;缺氧情况下,神经元的NICD,p-JNK,Caspase-3 mRNA及蛋白的表达均显著升高。抑制神经元中Notch1的活性,可进一步抑制JNK,Caspase-3的表达,改善神经元活性。结论:缺氧导致神经元Notch1信号被激活,Notch信号调节JNK的磷酸化,磷酸化的JNK进一步促进Caspase-3的激活,从而降低神经细胞的活性或促进神经细胞的死亡。     

傅山风湿外治方对CIA大鼠Notch1/Jagged1通路表达的影响

目的:研究傅山风湿外治方(FS-med)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠Notch1/Jagged1通路表达的影响.方法:本实验建立雌性Wistar大鼠CIA模型,通过FS-med外敷治疗,ELISA检测血清中IFN-γ、IL-4和IL-6的表达,qRT-PCR和Western blot分别检测大鼠关节中Notch1、...     

下调SLP-2基因表达抑制脑胶质瘤细胞增殖及诱导凋亡的机制研究

目的：探讨下调人Stomatin like protein 2(SLP-2)基因表达对脑胶质瘤细胞增殖凋亡的影响。方法：SLP-2的靶向siRNA序列转染人脑胶质瘤U251细胞（SLP-2敲低组）,另设空白组（细胞未做任何处理）和阴性对照组（细胞转染无义siRNA序列）,转染48 h后Western blot检测各组细胞中SLP-2、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Notch1、Hes1的蛋白表达;CCK8检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：阴性对照组SLP-2的蛋白表达与空白组差异无统计学意义（P>0.05）,而SLP-2敲低组SLP-2的蛋白表达显著低于空白组（P<0.05）;阴性对照组细胞存活率、细胞凋亡率、IL-6和TNF-α的mRNA表达及Bcl-2、Bax、Notch1、Hes1蛋白表达与空白组差异无统计学意义（P>0.05）,而SLP-2敲低组细胞存活率、IL-6和TNF-α的mRNA表达及Bcl-2、Notch1、Hes1的蛋白表达显著低于空白组,细胞凋亡率及Bax蛋白表达显著高于空白组（P>0.05）。结论：下调SLP-2基因表达可显著抑制脑胶质瘤细胞增殖及诱导细胞的凋亡,下调炎症细胞因子IL-6和TNF-α的表达,其机制与抑制Notch1信号通路有关。     

外源性野生型p53基因在两个肺腺癌细胞系中表达及对p16和p21基因的调控

目的 探讨p53基因在肺癌细胞周期中的作用机制，以及裸鼠体内基因治疗的作用。方法 用以腺病毒为载体的野生型p53基因pAdCMV-p53(Ad-p53)感染高转移肺腺癌95D细胞系和高浸润肺腺癌L-18系，对感染前后各细胞系的细胞生长曲线、p53、p16和p21基因的表达以及调亡进行分析。此外，用Ad-p53对两细胞系进行了裸鼠体内感染实验。结果 体外实验中，导入p53基因细胞系的生长均得到抑制，并且最终都出现凋亡，感染后的细胞中p53和p21基因的mRNA表达量明显增高，p16基因的mRNA表达量则无明显变化。p53基因治疗后的裸鼠，其中95D细胞系的肿瘤全部消失；L-18细胞系的腹腔注射组肿瘤全部消失，而皮下注射组无明显变化。结论 p53基因是一个有效的肿瘤抑制基因，其诱导细胞凋亡的途径与p16基因不同。腺病毒介导的野生型p53基因可以有效地控制肺癌细胞的发展和转移。