EGCG联合紫杉醇对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的：研究表没食子儿茶素没食子酸酯［(-)-Epigallocatechingallate,EGCG］及紫杉醇单独使用和联合使用时对肺癌A549细胞的形态、活性、细胞凋亡以及相关信号通路的影响。方法：不同浓度的EGCG、紫杉醇单用及联合应用在不同时间作用于肺癌A549细胞,用细胞集落形成实验检测细胞活力、WST-1法检测细胞增殖能力、Hoechst-33342荧光法检测细胞凋亡的情况、流式细胞仪检测细胞凋亡率、Westernblot检测内质网应激标志蛋白GRP78表达。结果：①EGCG和紫杉醇均能抑制肺癌A549细胞的增殖;EGCG与紫杉醇联合的抑制率高于单用EGCG或紫杉醇组（P＜0.05）。②EGCG和紫杉醇均可诱导细胞凋亡,2种药物联用后,诱导细胞凋亡作用显著增强。③蛋白免疫印迹实验显示EGCG和紫杉醇联合可能是通过内质网应激信号通路发挥作用。结论：EGCG、紫杉醇均可抑制人肺癌A549细胞的增殖、诱导细胞的凋亡,两者联合应用具有协同作用,能显著增强细胞凋亡作用。     

多西紫杉醇对人非小细胞肺癌细胞株A549生长的影响及机制的体外研究

目的:探讨多西紫杉醇诱导肺癌细胞株A549细胞的生长抑制作用及其对凋亡相关基因表达的影响.方法:采用MTT法测定细胞增殖抑制率,在显微镜下观察细胞凋亡的形态特点,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)法测定整合素α5β1,bcl-2,bax等凋亡相关基因mRNA的表达.结果:(1)多西紫杉醇在1.33～108μ/ml浓度范围内可抑制A549细胞增殖,且此作用与药物浓度、作用时间呈明显相关关系(r=0.947、0.979,P=0.014、0.004).(2)4～36μg/ml多西紫杉醇作用12～48 h,A549细胞可见典型的凋亡形态学改变,且A549细胞凋亡率随药物浓度增加而升高,呈浓度依赖性(r=0.999,P=0.034).(3)RT-PCR结果显示,多西紫杉醇可明显抑制A549细胞中表达α5,整合素亚基基因,使其bcl2/bax比值明显降低,差异均有统计意义(t=10.147、4.583,P=0.01、0.044).但多西紫杉醇对A549细胞表达VEGF、bFGF、β1整合素亚基基因无明显影响(P＞0.05).结论:多西紫杉醇可抑制A549细胞增殖,诱导A549细胞凋亡,其机制是通过抑制Bcl-2/Bax表达比例诱导其凋亡,并可能抑制整合素α5β1表达而影响A549细胞的增殖、黏附,以及转移能力.     

阿魏酸抑制A549肺癌移植瘤生长及其机制研究

目的探究阿魏酸对A549裸鼠肺癌移植瘤的抑制作用及其可能机制。方法将40只构建成功的肺癌移植瘤BALB/c裸鼠采用随机数字表法分为模型对照组、阿魏酸25mg/L组、阿魏酸50mg/L组和阿魏酸100mg/L组4组,每组10只,通过腹腔注射给药。通过计算肿瘤的瘤体积,称重瘤体质量,计算各组抑瘤率;qRT-PCR检测移植瘤组织中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的mRNA表达水平,Westernblot法和免疫组化法检测移植瘤组织中mTOR、增殖蛋白Ki-67和凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的蛋白表达水平。结果与模型对照组相比,不同剂量的阿魏酸（25、50和100mg/L）组裸鼠的移植瘤组织生长受到抑制,抑瘤率分别为32.82%、43.75%和62.51%。与模型对照组相比,不同剂量的阿魏酸组mTOR的mRNA和蛋白表达水平均下降（均P＜0.05）,Ki-67蛋白表达水平均下降（均P＜0.05）,Caspase-3蛋白表达水平均升高（均P＜0.05）。结论阿魏酸对A549肺癌移植瘤生长具有显著抑制作用,可能与下调mTOR表达,抑制Ki-67蛋白表达和促进Caspase-3蛋白表达有关。     

SOCS7通过抑制细胞凋亡促进肺癌A549细胞增殖的机制研究

目的 研究SOCS7对肺癌A549细胞增殖的影响及可能的作用机制。方法 在肺癌A549细胞中分别采取过表达SOCS7和干扰SOCS7的方法,以细胞计数法(CCK-8)检测各实验组细胞的增殖情况;以Transwell方法检测各实验组细胞的迁移能力;以蛋白质印迹法(Western blot)检测各实验组凋亡相关基因的蛋白表达量情况;以ELISA方法检测各实验组免疫相关基因的蛋白表达情况。结果 干扰SOCS7时,转染96 h后,与对照组和转染controlsiRNA组相比,肺癌A549细胞的增殖力明显降低,迁移能力明显降低。Western blot实验结果显示细胞中Bcl-2表达量显著降低,Cleaved Caspase3表达量升高;干扰SOCS7时,转染12 h后,与对照组和转染controlsiRNA组对比,肺癌A549细胞中人肿瘤坏死因子α(Tnf-α)和IL-1表达量显著升高,IL-6无显著性变化,在转染24 h后,与对照组和转染空载体组对比,IL-6表达量显著升高。结论 干扰SOCS7能够抑制肺癌A549细胞的增殖和迁移能力,降低Bcl-2蛋白表达量,提高Caspase-3蛋白表达量,Tnf-α和IL-1表达量也显著升高,SOCS7可能通过炎症反应和Caspase-3途径来调节肺癌A549细胞的生长。     

MicroRNA-429对人肺癌A549细胞生长的影响

目的:探讨microRNA-429(miR-429)对人肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法:定量逆转录聚合酶链反应(qPCR)技术检测A549细胞瞬时转染miR-429mimic或inhibitor后miR-429的表达;通过MTT法和流式细胞术检测转染后细胞增殖能力和凋亡变化。结果:瞬时转染miR-429mimic 24h后,qPCR结果显示miR-429表达显著升高(9.3±0.3比1.0±0.1,P<0.05),而转染miR-429inhibitor可以显著降低miR-429表达(0.3±0.0比1.0±0.1,P<0.05);与对照组相比,过表达miR-429抑制肿瘤细胞增殖(2.8±0.2比5.0±0.3,P<0.05)并诱导凋亡(18.9±1.2比12.3±1.0,P<0.05),而下调miR-429表达促进肿瘤细胞增殖(6.3±0.4比5.0±0.3,P<0.05)并抑制凋亡(7.1±0.6比12.3±1.0,P<0.05)。结论:miR-429在肺癌中可能作为肿瘤抑制因子发挥功能。     

紫杉醇对人肺腺癌细胞系A549生长抑制作用的研究

目的:评价紫杉醇对肺腺癌细胞A549的生长抑制作用,以及诱导凋亡与G2-M期阻滞的关系。方法:紫杉醇不同浓度、不同时间分别处理A549细胞,采用MTT试验和流式细胞术进行检测及分析。结果:紫杉醇对A549的细胞毒性呈时间依赖性(P<0.05),10~1 000 nmol/L的浓度对A549生长的影响差异不显著(P>0.05)。紫杉醇浓度≤100 nmol/L时,G2-M期细胞的比率随浓度增加而增高(P<0.05);凋亡的比例在低浓度范围内(0.1~10 nmol/L)呈浓度依赖性,浓度进一步增加,反而降低。10 nmol/L作用时,凋亡的发生呈时间效应;1 000 nmol/L作用时,G2-M期阻滞表现出时间效应,但不如低浓度诱导凋亡出现的早。紫杉醇诱导的凋亡和G2-M期阻滞无相关性(P>0.05)。结论:紫杉醇对A549的生长抑制作用呈时间依赖性,但在一定浓度范围内剂量效应不明显;低浓度紫杉醇虽然对G2-M期阻滞的影响较小,但却能比高浓度更早诱发凋亡,延长作用时间亦可达到有效抑制肿瘤细胞增殖的目的。     

紫杉醇作用于肺癌A549细胞核转录因子荧光素酶值变化的意义

目的?研究紫杉醇作用于肺癌A549细胞核转录因子荧光素酶值变化的意义。方法?于含10%胎牛血清RPMI1640培养基中,在37℃、5% CO₂条件下细胞培养,转染核转录因子κB（NFκB）及环磷酸腺苷（CREB）质粒,单光子仪测定检测荧光素酶值,激光共聚焦显微镜观察NFκB核易位。结果? 紫杉醇组NFκB及CREB荧光素酶均值分别为22387±1805、70403±4446明显高于未加药物的空白对照组1967±539、2607±665 (P<0.01),激光共聚焦显微镜观察到NFκB在紫杉醇作用下由细胞核转出到细胞质内。结论?紫杉醇作用于肺癌A549细胞后,核转录因子NFκB及CREB荧光素酶值升高,提示活性增强,紫杉醇可以使NFκB转入到细胞核。      

抗人stathmin单克隆抗体和紫杉醇对肺癌细胞系QG-56的生长抑制和诱导凋亡作用

目的 探讨抗人stathmin单克隆抗体(McAb)、紫杉醇(PTX)单用或联合应用对肺癌细胞系QG-56的生长抑制及诱导凋亡作用.方法 以不同浓度的抗人stathmin McAb、PTX分别组成McAb组、PTX组和联合用药组,另设不加药的对照组,分别作用于QG-56细胞24、48、72、96 h,观察细胞数量和形态的变化,MTT法检测各组QG-56细胞的增殖抑制情况,采用流式细胞仪检测各组QG-56细胞凋亡率.结果 不同浓度的McAb组、PTX组和联合用药组细胞数量明显减少、形态不规则,部分细胞核固缩和胞质减少,而对照组细胞生长状态良好.抗人stathmin McAb、PTX单用和联合应用均能抑制QG-56细胞增殖,呈剂量-时间依赖效应,联合用药组细胞抑制率较McAb组、PTX组明显增大,差异有统计学意义(P＜0.05),两药联用具有协同效应.抗人stathmin McAb、PTX单用与联用均能诱导QG-56细胞凋亡,联合用药组诱导凋亡作用更明显,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 抗人stathmin McAb、PTX单用与联用均能抑制QG-56细胞增殖,诱导其凋亡,两药联合作用于人肺癌QG-56细胞具有协同作用.     

低浓度紫杉醇抑制SPCA-1细胞增殖的实验研究

目的研究低浓度紫杉醇(PTX)对非小细胞肺癌SPCA-1细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法用不同浓度PTX处理SPCA-1细胞16 h,去除含药培养液继续培养56 h,计数细胞并计算细胞生长抑制率。用0、1.5、3和6 nmol PTX,以及PTX与10μmol/L SP600125联合处理细胞16 h,流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡。结果低浓度PTX可显著抑制SPCA-1细胞增殖,其IC50、IC70和IC90值分别为1.75、3.25和4.50 nmol/L。0、1.5、3和6 nmol/L的PTX分别诱导(0.5±0.36)%、(17.0±0.55)%、(27.0±0.63)%和(21.0±3.02)%细胞发生凋亡,而10μmol/L SP600125使低浓度PTX诱导的细胞凋亡显著下降。低浓度PTX也具有抑制有丝分裂的作用,0、1.5、3和6 nmol/L的PTX分别导致(22.7±1.68)%、(19.4±1.43)%、(26.2±0.97)%和(42.6±3.36)%细胞阻滞于G2/M期。结论低浓度PTX可通过诱导细胞凋亡和有丝分裂阻滞抑制SPCA-1细胞生长,而JNK激酶抑制剂可下调PT...     

紫杉醇诱导Lewis肺癌细胞凋亡的研究

目的：探讨紫杉醇对Lewis肺癌细胞凋亡的影响。方法：将Lewis肺癌细胞接种于C57BL／6小鼠皮下,将20只小鼠随机分为对照组和紫杉醇组,分离皮下肿瘤结节,利用流式细胞计数仪检测细胞周期和凋亡率。采用免疫组化SP法利用图像分析仪检测bcl-2蛋白,fas蛋白的表达。采用原位DNA末端标记法进行原位细胞凋亡的检测。结果：（1）对照组（Ⅰ组）凋亡率为9．002％,G2／M期细胞为2．654。实验组（Ⅱ组）凋亡率为25．772％,G2／M期为13．834,两者差异均有显著性（P＜0．01）。（2）Ⅰ组雕恨指数为0．;7％,Ⅱ组细胞凋亡指数为9．6％,两者差异有显著性（P＜0．01）。（3）Ⅰ组bcl-2蛋白,fas蛋白的面积／高倍视野分别为173．520和5．164,面密度分别为117．428和3．494,灰度分别为22．139和2．038。Ⅱ组bcl-2蛋白,fas蛋白的面积／高倍视野分别48．33和55．780,面密度分别为32．710和37．750,灰度 分别为9．370和23．140,Ⅰ组与Ⅱ组间bcl-2蛋白,fas蛋白差异均有显著性（P＜0．05）。结论：紫杉醇可明显诱导Lewis肺癌细胞凋亡。     

川芎嗪对肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响及其机制

目的:研究川芎嗪对肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响,并探讨川芎嗪治疗肺癌的作用机制。方法:选用肺癌A549细胞体外培养,在不同浓度川芎嗪作用下,应用MTT法检测肺癌细胞的增殖抑制,应用流式细胞仪检测肺癌细胞的凋亡及细胞周期的分布,采用免疫细胞化学方法检测川芎嗪对肺癌A549细胞Bcl-2及Bax表达的影响。结果:川芎嗪对肺癌A549细胞增殖有明显抑制作用,且呈时间剂量依赖关系;川芎嗪能够使A549细胞G0/G1期、G2/M期细胞增多,与对照组比,差异显著(P<0.01);川芎嗪能够下调肺癌A549细胞Bcl-2的表达,对Bax无明显影响,使Bcl-2/Bax下降。结论:川芎嗪对肺癌A549细胞的增殖有抑制作用,其机制可能与川芎嗪能够改变A549细胞周期分布,下调肺癌A549细胞Bcl-2表达,改变Bcl-2/Bax比例,促进肿瘤细胞凋亡等有关。     

七叶灵方对紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol增殖和凋亡的影响

目的:观察七叶灵方对紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol增殖和凋亡的影响。方法:将10只SD大鼠随机分为中药组和空白组,每组5只。中药组大鼠灌胃给予18 g/kg七叶灵方药液,每日2次,连续给药3 d。空白组大鼠灌胃给予等体积0.9%NaCl溶液。分别制备含药血清和空白血清。采用浓度梯度诱导法构建紫杉醇耐药肺癌细胞株A549/Taxol。①将细胞分为空白组及不同浓度(5%、10%、20%)含药血清组,各组分别给予空白血清和相应浓度含药血清干预。药物干预前及细胞培养24、48 h后,CCK8法检测各组细胞增殖情况,筛选含药血清干预的最佳浓度。②将细胞分为空白组(常规培养基)、含药血清组(筛选的最佳浓度含药血清)、紫杉醇组(2 mg/L紫杉醇)、含药血清+紫杉醇组(最佳浓度含药血清+2 mg/L紫杉醇),各组予以相应干预。干预前及细胞培养24、48 h后,CCK8法检测各组细胞增殖情况。细胞培养48 h后,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、剪切型Caspase-3(cleaved Caspase-3)、聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)、剪切型PARP (cleaved PARP)的蛋白表达。结果:①与干预前相比,各浓度含药血清作用24、48 h后,A549/Taxol细胞的增殖抑制率显著升高(P0.05,P0.01),具有浓度/时间依赖性。选取20%含药血清进行后续实验。②细胞培养48 h后,紫杉醇组的细胞增殖抑制率明显高于含药血清组(P0.05),含药血清+紫杉醇组对耐药细胞的生长抑制作用明显强于紫杉醇组(P0.01);与空白组相比,含药血清组、紫杉醇组及含药血清+紫杉醇组的细胞凋亡率均明显升高(P0.01),且含药血清+紫杉醇组的细胞凋亡率高于紫杉醇组(P0.01)。③与空白组相比,紫杉醇组、含药血清组和含药血清+紫杉醇组细胞Bcl-2、Caspase-3、PARP的蛋白表达量显著降低(P0.01),Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP的蛋白表达量显著上调(P0.01)。与紫杉醇组相比,含药血清+紫杉醇组细胞Bcl-2、Caspase-3、PARP的蛋白表达量明显下降(P0.01),Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP的蛋白表达量显著增加(P0.05,P0.01)。结论:七叶灵方含药血清可抑制紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol的增殖,诱导细胞凋亡,且与紫杉醇联合应用具有一定的协同效应,其机制可能与调控Bcl-2/Caspase-3/PARP通路有关。     

肺癌A549细胞条件培养基经Akt1途径抑制血管内皮细胞凋亡

目的研究肺癌A549细胞条件培养基对血管内皮细胞凋亡的影响及机制。方法以5%胎牛血清（fetal bovine serum,FBS）为对照,用人肺癌A549细胞株条件培养基孵育脐静脉内皮细胞（human umbilical veins endothelial cells,HUVECs）,Annexin V-FITC试剂盒染色,流式细胞仪进行细胞凋亡定量。设计针对蛋白激酶B（protein kinase B,Akt1）基因mRNA的siRNA（siAkt1）和非特异性对照序列（siSCR）转染HUVECs,用RT-PCR技术检测Akt亚型mRNA的表达,用Western blotting技术检测Akt总蛋白表达,并观察细胞凋亡的变化。结果 A549条件培养基明显抑制了HUVECs的凋亡（凋亡率3.03%,显著低于对照组的12.69%,P〈0.05）。筛选出的si Akt1能显著抑制HUVECs的Akt1 mRNA和Akt总蛋白表达（分别下调81%和62%）,转染si Akt1后的HUVECs再用A549条件培养基孵育凋亡明显增强（与siSCR组相比P〈0.01）。结论肺癌A549细胞条件培养基经Akt1途径抑制血管内皮细胞凋亡,这将为肺癌血管生成的机制研究和干预治疗提供新的分子靶点。     

不同菱角壳提取物抑制肺癌A549细胞生长的研究

目的 研究不同菱壳水和乙醇提取物的抗癌活性.方法 采用Folin比色法测定不同品种菱壳提取物中多酚的含量,通过MTT法测定二角菱壳、四角菱壳的水提取物、醇提取物对肺癌A549细胞生长抑制作用.结果 四角菱壳多酚含量高于二角菱壳,醇提物多酚含量高于水提物;二角菱壳醇提取物对肺癌A549细胞的抑制率高于水提物,差异具有统计学意义(P＜0.01);四角菱壳水提物对抑制率高于二角菱壳水提物肺癌A549细胞的生长,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 菱角壳提取物对肺癌A549细胞生长具有较强的抑制作用,且菱角壳的醇提取物优于水提取物,四菱角壳优于二角菱壳.     

TRIM28siRNA抑制非小细胞肺癌A549裸鼠移植瘤生长以及促进凋亡的研究

目的 建立非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549细胞裸鼠移植瘤模型,探讨TRIM28小干扰RNA(siRNA)对NSCLC裸鼠移植瘤生长和细胞凋亡的影响.方法 将NSCLC细胞A549皮下注射Balb/c裸鼠建立移植瘤模型.比较皮下注射A549/TRIM28siRNA细...     

5-氟尿嘧啶对肺腺癌A549细胞生长抑制作用机制的研究

目的研究5-氟尿嘧啶抑制人肺腺癌细胞生长的作用方式。方法用不同浓度的5．氟尿嘧啶处理体外培养的人肺癌A549细胞,应用MTT法、倒置相差显微镜和吖啶橙染色法分析检测A549细胞存活率的变化及细胞形态结构的变化。结果不同浓度的5-氟尿嘧啶处理A549细胞,随着药物浓度的增加和处理时间的延长,细胞存活率明显下降;且低浓度使细胞呈铺展状态,细胞质内空泡增多,吖啶橙染色显示酸性膜泡增多,高浓度使细胞变圆,出现凋亡状态。结论5-氟尿嘧啶能明显抑制A549细胞的生长,低浓度诱导细胞发生自噬,高浓度引起细胞凋亡。     

多西紫杉醇对A549细胞的放射增敏作用

肺癌是世界范围内最为常见的恶性肿瘤之一,国内肺癌的发病率和病死率占城市恶性肿瘤之首.在非小细胞肺癌(NSCLC)的治疗中,64.3%的病例需要接受放射治疗[1].目前,单纯的放射治疗效果仍不能满意,原因与肿瘤细胞的放射敏感性有关.放射增敏剂因能够提高肿瘤细胞对放射线的敏感性而受到关注.多两紫杉醇是一种半合成的紫杉醇衍生物,抗瘤谱广,体外实验<'[2-4]>表明其可诱导多种肿瘤细胞凋亡,影响细胞周期分布.作者观察了多两紫杉醇对A549细胞株的体外放射增敏性,为临床应用提供实验依据.     

紫杉醇对Lewis肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨紫杉醇对Lewis肺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法：利用图像分析仪对Lewis肺癌细胞核形态、DNA含量及AgNORs计数进行测量，并有免疫组化SP法对bcl-2,fas蛋白表达进行检测。结果：用药后核面积、周长、平均直径、积分光密度、AgNORs计数显减小（P＜0．05），bcl-2蛋白的面积／HP、面密度、灰度值降低，而fas蛋白的面积／HP、面密度、灰度值增加（P＜0．05）。结论：紫杉醇能抑制Lewis肺癌细胞增殖，促进其凋亡。     

芹菜素诱导肺癌A549细胞凋亡及其机制研究

目的 研究芹菜素诱导肺癌A549细胞凋亡效应及其机制。方法 常规培养肺癌A549细胞,分别用10、20、40、80 μmol/L芹菜素作用于A549细胞;MTT法检测A549细胞增殖率;Western blotting检测聚二磷酸腺苷核糖聚合酶（PARP）、Bcl-2的蛋白表达水平;RT-PCR检测bcl-2 mRNA的表达;Annexin V/PI双染法检测A549细胞凋亡率。结果 随着芹菜素浓度的增高,A549细胞的增殖抑制率明显增高,具有统计学意义（P＜0.05）;Western blotting显示PARP的剪切带逐渐增加,Bcl-2表达呈减少趋势;RT-PCR结果显示bcl-2 mRNA转录减少;0、10、20、40、80 μmol/L芹菜素对A549细胞凋亡率分别为（2.41±0.072）%、（10.56±0.054）%、（15.32±0.071）%、（28.98±0.012）%、（78.24±0.064）%,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 芹菜素通过抑制Bcl-2的表达有效地诱导肺癌A549细胞凋亡。