SHP2过表达抑制人肝星状细胞LX-2凋亡

目的 探讨含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)过表达对人肝星状细胞LX-2凋亡的影响。方法 将表达绿色荧光蛋白（GFP）的空病毒Ad-GFP、表达野生型SHP2及GFP的腺病毒Ad-SHP2转染LX-2细胞。实验分为3组：(1)Control组,以DMEM代替腺病毒转染LX-2细胞;(2)Ad-GFP组,转染空病毒Ad-GFP;(3)Ad-SHP2组,转染重组腺病毒Ad-SHP2。Western blotting检测3组LX-2细胞的SHP2、Bax、Bcl-2蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测3组LX-2细胞的SHP2 mRNA表达;TUNEL及膜联蛋白-V/碘化丙啶双标记流式细胞术检测3组LX-2细胞凋亡情况。结果 Ad-SHP2组LX-2细胞的SHP2蛋白及mRNA相对表达量高于Control组及Ad-GFP组（P <0.05）;Ad-GFP组与Control组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。TUNEL及膜联蛋白-V/碘化丙啶双标记流式细胞术检测结果显示,与Control组LX-2细胞凋亡率（3.08±0.73）%、（9.44±...     

PDTC影响骨肉瘤U-2 OS细胞凋亡的研究

目的:观察在NF-KB抑制剂PDTC诱导骨肉瘤细胞发生凋亡的过程中,NF-KB活性抑制后,Livin和aspase-3表达水平变化.方法:以不同浓度(0、50、100、200、400 μmol/L)PDTC作用于骨肉瘤U-2 OS细胞不同时间(24小时,48小时)后,采用MTT法和流式细胞仪测定U-2 OS细胞凋亡,采用Western Blot检测U-2 OS细胞Livin和caspase-3蛋白表达.结果:①不同浓度PDTC作用24小时、48小时后对U-2 OS细胞生长有明显抑制作用,并呈时间、剂量依赖性.②50、100、200和400μmol/L PDTC作用24小时后的凋亡率与对照组相比差异有显著性,且各浓度组之间差异均有显著性(P＜0.01).③PDTC作用于U-2 OS细胞后可降低Livin蛋白的表达,增加caspase-3蛋白表达,呈现剂量依赖性.结论:PDTC可明显抑制人骨肉瘤U-2 OS细胞,并使细胞周期受到阻滞,进一步诱导肿瘤细胞凋亡,抑制细胞与诱导凋亡呈剂量依赖关系.     

H2O2通过ERK通路抑制绒毛外细胞滋养层细胞的侵袭能力

目的 研究活性氧过氧化氢(H202)对绒毛外细胞滋养层细胞(EVCT)侵袭行为的影响及其信号传导机制.方法 建立EVCT体外培养模型,利用Transwell细胞侵入系统检测EVCT的体外侵袭作用,应用Western blot法评价细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)的活性变化,使用CCK-8测定细胞的生长状况.结果 与对照组比较,15 μmol/LH202和50 μmol/L PD98059均可显著抑制EVCT的侵入指数(分别为43.3±4.7,49.3±7.0)(P＜0.01),同时降低EVCT的ERK1/2磷酸化水平(P＜0.01),但并不影响EVCT的细胞活力(P＞0.05).结论 H202可能通过抑制ERK1/2的激活,进而影响EVCT的侵袭行为,参与子痫前期的发病机制.     

熊果苷拮抗H2O2损伤的研究

目的通过体外细胞学实验观察熊果苷拮抗H2O2的作用.方法体外培养人脐静脉内皮细胞ECV-304,将细胞分为对照组、损伤组和熊果苷组,熊果苷组提前12h加入熊果苷,500μmol/L H2O2诱导细胞氧化应激状态.光镜实验比较各组细胞形态学的变化;MTT实验比较各组细胞增殖活力的改变.结果光镜下可见,对照组细胞结构清晰,呈单层铺路石状紧密排列;损伤组细胞变形、皱缩、排列紊乱、脱落明显,胞浆内出现空泡;熊果苷组细胞形态结构基本清晰,但细胞有轻度肿胀,其它接近于正常对照组;MTT结果显示,与损伤组相比,熊果苷能明显保护ECV-304细胞增殖活力(P<0.05).结论本实验结果提示,熊果苷可以抵御H2O2所致ECV-304细胞氧化应激损伤.     

蒺藜总皂苷对H2O2诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的: 探讨蒺藜总皂苷(GSTT)对过氧化氢(H₂O₂) 诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12) 凋亡的保护作用及其机制。方法：PC12细胞分为对照组、模型组及蒺藜总皂苷高（GSTT₁）、低（GSTT₂）剂量组。用H₂O₂刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞活性,流式细胞仪检测PC12细胞亚二倍体峰比率及线粒体膜电位的变化,免疫组织化学方法检测与凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax。结果：与模型组比较,蒺藜总皂苷组随着剂量的增加PC12细胞存活率提高（P<0.001),凋亡比率下降（P<0.01),线粒体膜电位回升（P<0.01),Bcl-2表达增加(P<0.05),而Bax的表达降低(P<0.05)。结论：蒺藜总皂苷可抑制H₂O₂诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制线粒体途径的细胞凋亡有关。     

重楼提取物对HepG2细胞的毒性作用

目的 研究重楼提取物对肝癌HepG2细胞的毒性作用及其机制。方法 应用锥虫蓝拒染法测定不同浓度重楼提取物作用不同时间后对HepG2细胞存活率的影响。通过倒胃相差显微镜、透射电镜及苏木精-伊红染色后光镜观察重楼提取物对HepG2细胞形态学的影响。通过碘化丙啶染色法及流式细胞术对重楼提取物是否诱导细胞凋亡进行验证。结果 各浓度重楼提取物都对肝癌HepG2细胞有一定的杀伤作用．浓度越高、作用时间越长，其杀伤作用越强；与阳性对照组（FT-207）相比，62．5、125μg／ml重楼提取物对HepG2细胞的杀伤作用较弱（P〈0．01．P〈0．05）．而250、500μg／ml重楼提取物的杀伤作用与其相当（P〉0．05）．1000、2000μg/ml重楼提取物的杀伤作用则明显较高（均P〈0．01）。重楼提取物作用后的HepG2细胞呈现变性坏死的形态学改变。流式细胞仪检测结果显示不同浓度重楼组与阴性对照组凋亡率无明显差异（P〉0．05）。结论 重楼提取物具有细胞毒性作用。重楼提取物可能不是通过诱导细胞凋亡．而是通过导致癌细胞的变性坏死发挥其抗癌作用。     

Apg-2对H_2O_2诱导的BaF3-P210细胞损伤的影响

目的 探讨Apg-2对H2O2诱导的Bcr/Abl阳性BaF3-P210细胞损伤的影响.方法 以H2O2诱导的pMIGR1 空载体感染细胞BaF3-MIGR1和稳定表达Bcr/Abl的BaF3-P210细胞为损伤模型,Western blot和RT-PCR检测H2O2损伤后2组细胞Apg-2表达;建立过表达Apg-2的BaF3-MIGR1细胞(BaF3-MIGR1-Apg2)和BaF3-P210细胞(BaF3-P210-Apg2)H2O2诱导的损伤模型,Western blot检测磷酸化组蛋白(γ-H2AX)的表达,免疫荧光法检测γ-H2AX焦点数.结果 H2O2作用后的BaF3-MIGR1和BaF3-P210细胞的Apg-2蛋白和mRNA水平表达均升高(P<0.05).H2O2作用BaF3-MIGR1和BaF3-MIGR1-Apg2细胞后其γ-H2AX蛋白表达升高,γ-H2AX焦点数亦增加;BaF3-P210和BaF3-P210-Apg2细胞H2O2损伤后γ-H2AX蛋白表达和焦点数均无明显变化.结论 Apg-2可减少H2O2诱导的BaF3-P210细胞γ-H2AX表达,从而可能降低其细胞损伤.     

Th1/Th2检测及其临床意义

辅助性Ｔ细胞 (ｈｅｌｐｅｒＴｃｅｌｌ,Ｔｈ)对于机体的特异性免疫和非特异性免疫 ,以及对细胞免疫和体液免疫均有重要的调节作用。Ｔｈ1细胞分泌白细胞介素 2 ,γ 干扰素和 β 肿瘤坏死因子 ;Ｔｈ2细胞分泌ＩＬ 4、ＩＬ 5、ＩＬ 6、ＩＬ 10和ＩＬ 13,前一类细胞因子称为Ｔｈ1型细胞因子 ,后一类称为Ｔｈ2型细胞因子。此外 ,Ｔｈ1和Ｔｈ2细胞还分泌共同的细胞因子ＩＬ 3和粒细胞单核细胞集落刺激因子 (ＧＭ ＣＳＦ)。在生物功能方面 ,Ｔｈ1介导细胞免疫 ,细胞毒性Ｔ细胞生长和活化 ,巨噬细胞 (ＭΦ)活化 ,介导迟发型过敏反应。其功能亢进 ,…     

LX-2与HK-2细胞共培养模型的建立及对其细胞转分化的影响

[目的]建立人肝星状细胞(LX-2)与人肾小管上皮细胞(HK-2)共培养体系的理论模型,研究LX-2对HK-2转分化的影响。[方法]以Transwell小室建立体外LX-2细胞和HK-2细胞间接共培养体系。应用细胞免疫组织化学法检测HK-2细胞平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测各组细胞培养液中转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量;逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR法)检测HK-2细胞TβRⅠm RNA、TβRⅡm RNA、Smad2 m RNA、Smad3 m RNA、Smad7 m RNA的表达。[结果]除了空白组,形态学上其他两组均可看到HK-2细胞胞浆染棕黄色,不同数量细胞由立方铺路石样转变为梭形长条状,细胞肥大;HK-2细胞高表达α-SMA(P0.01);HK-2细胞上清液中TGF-β1含量明显高于空白组(P0.01);HK-2细胞TβRⅠ、Smad2、Smad3基因表达明显上调,而TβRⅡ、Smad7基因表达明显下调。[结论]Transwell共培养法可诱导HK-2细胞转分化,其机制可能与TGF-β1/Smad信号通路有关。     

As2O3对HGC-27、HepG2细胞株增殖抑制作用及机制研究

目的探讨三氧化二砷（As2O3）抑制恶性肿瘤细胞生长及诱导凋亡的生物学效应。方法采用光学显微镜进行形态学观察。溴化二甲噻唑二苯四氮唑（MTT）还原法经浓度为1.25μmol/L、2.50μoml/L、5.00μoml/L、10.00μmol/L、20.00μmol/L As2O3处理后,分别培养48 h、72 h、96 h对胃癌细胞（HGC-27）、肝癌细胞（HepG2）生长的影响。用Hoeschst33258染色后在荧光显微镜下观察细胞凋亡形态。流式细胞仪检测不同浓度As2O3对胃癌细胞周期的影响。结果 HGC-27、HepG2细胞株经As2O3作用后,细胞增殖受到明显抑制;且随着药物浓度的升高及作用时间的延长,抑制率显著升高。经As2O3作用后,Hoechst33258染色可见凋亡细胞的核染色质凝聚且边缘化,并呈现DNA荧光碎片。流式细胞仪检测显示G1/G0细胞由正常对照组的68.55%上升到80.30%,而G2/M期细胞则从11.56%下降至2.53%,出现了明显的G1/G0期阻滞（P〈0.05）。结论 As2O3可以明显抑制胃癌细胞的增殖,对肝癌细胞的生长也有一定程度的抑制作用,并有明显的时-效关系和量-效关系,且能将细胞阻滞于G0/G1期;其抗肿瘤的作用机制可能与诱导肝癌细胞和胃癌细胞分化和凋亡、阻滞细胞周期等有关。     

Atg2基因敲除对人骨肉瘤U2OS细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨自噬相关基因2(Autophagy-related gene 2,Atg2)对人骨肉瘤U2OS细胞增殖和迁移的影响。方法 蛋白质免疫印迹法鉴定两组细胞，即腺病毒介导CRISPR/Cas9系统靶向剪切AAVS1位点的基因未敲除组(AAVS1细胞)和Atg2ab基因双敲除组(Atg2ab DKO细胞);细胞划痕实验和Transwell小室法检测两组细胞的迁移能力；CCK-8法和细胞平板克隆形成实验检测两组细胞的增殖能力。结果 Atg2ab DKO细胞在24、48及72 h的光密度值(OD值)均较对照AAVS1细胞有所降低，但在72 h时，两种细胞的OD值差异有统计学意义(P<0.01)。Atg2ab DKO细胞形成的克隆数量少于对照组AAVS1细胞(6.33±2.31 vs15.00±1.00),差异有统计学意义(P<0.01)。Atg2ab DKO细胞创面愈合率(0.22±0.05)%显著低于对照组AAVS1细胞(0.82±0.05)%,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组AAVS1细胞相比，Atg2ab DKO细胞穿过Transwell小室的细胞数量显...     

EB1089对肝癌HepG2细胞的抑制作用

目的:探讨EB1089对体外培养的肝癌HepG2细胞增殖的影响.方法:以1,10,100nmol/LEB1089分别作用2,4,6和8d,采用平板克隆形成实验、细胞计数法及MTT法测定EB1089对HepG2细胞生长增殖的抑制作用,并绘制生长曲线.流式细胞仪检测细胞周期的改变及凋亡.结果:平板克隆形成试验及MTT提示,EB1089对HepG2细胞的增殖有显著抑制作用,抑制率为16.9%～74.3%,EB1089的IC50为8.2nmol/L;细胞计数法的结果提示与平板克隆形成试验结果一致.流式细胞仪检测结果显示,10nmol/LEB1089处理HepG2细胞4d,G1期细胞占71.0%,对照组G1期细胞为63.2%,呈降低趋势;处理组与对照组S期及G2期分别占28.9%和36.8%,呈增加趋势,且处理组有凋亡峰出现,凋亡细胞占21.4%.结论:EB1089能够显著抑制肝癌HepG2细胞的增殖,其机制可能与诱导细胞周期阻滞及细胞凋亡有关.     

H2O2诱导PC12细胞凋亡中MicroRNA表达及bcl-w调控机制

[目的]构建体外H2O2诱导PC12细胞模拟神经细胞凋亡模型[1],研究microRNA(miRNA或微小RNA)在凋亡中表达和bcl-W调控机制,从microRNA角度探讨颅脑损伤后(如缺血再灌注损伤、脑挫伤)凋亡的机制.[方法]体外H2O2诱导PC12细胞凋亡模型,用基因芯片技术筛选变化显著的microRNA,并对其实验验证后,根据现有microRNA数据库提供的靶标的预测分析结果,搜寻其相关的靶标,通过检测细胞凋亡、Western blot、实时荧光定量PCR技术来验证相关microRNA的作用靶点.[结果]成功构建了体外模拟体内神经细胞凋亡模型,通过基因芯片技术筛选出6个显著下调microRNA[2],其中mi-422a与bcl-w蛋白表达量呈负相关.[结论]通过miR-422a可以调控bcl-w蛋白的表达,且存在负性相关关系.通过调节mi-422a的表达可调控bcl-W蛋白的表达量,证实bcl-w上的基因位点有mi-422a的作用位点存在.     

DC-CIK细胞对人肝癌HEPG2细胞周期、凋亡的影响

目的 探讨细胞因子从肝癌患者外周血贴壁单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)诱导的树突状细胞( dendritic cells,DCs)与杀伤细胞(cytokine induced killer,CIK)对人肝癌HEPG2细胞系周期、凋亡的影响.方法 用肝癌患者肝...     

Bcl-2短发夹状RNA对BEL-7402、Caco2细胞的生长抑制作用

目的:研究Bcl-2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列的表达载体对肝癌细胞系BEL-7402和结肠癌细胞系Caco2生长的抑制作用.方法:将Bcl-2 shRNA序列克隆到携带绿色荧光蛋白基因的质粒Pgenesil-1载体,采用脂质体介导的转染方法将构建的Bcl-2shRNA表达质粒转入BEL-7402、Caco2细胞,同时设立阴性shRNA组、空载体组、脂质体组、空白组作为对照.通过倒置荧光显微镜和流式细胞仪观察细胞的转染效率,Western印迹法检测Bcl-2蛋白表达水平,MTT法测定细胞增殖情况.结果:Bcl-2 shRNA转染组、阴性shRNA组、空载体组的转染效率无显著差异.转染Bcl-2 shRNA后BEL-7402、Caco2细胞Bcl-2蛋白表达水平与转染阴性shRNA、空载体组、脂质体组和空白组相比均显著降低(P＜0.05),且Bcl-2 shRNA抑制Caco2细胞Bcl-2蛋白表达比BEL-7402细胞更为明显(P＜0.05).MTT测定显示转染Bcl-2 shRNA载体入BEL-7402、Caco2细胞在72、96 h细胞生长明显受到抑制,分别与转染阴性shRNA、空载体组、脂质体组和空白组比较,差异有显著性(P＜0.05).结论:Bcl-2 shRNA可特异性地抑制BEL-7402、Caco2细胞生长.     

Th1/Th2细胞亚群与妊娠

自ＣＤ4+Ｔ细胞中分出的Ｔｈｌ和Ｔｈ2细胞亚群是近年来免疫学研究的热点之一。Ｔｈ1细胞能分泌白细胞介素 2(ＩＬ 2 )、γ干扰素 (ＩＦＮγ)及肿瘤坏死因子 β (ＴＮＦβ) ,主要负责细胞免疫应答、迟发型超敏反应、辅助Ｂ细胞产生与吞噬作用有关的抗体 (ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ)但不产生ＩｇＥ ,在抗胞内微生物感染、抗肿瘤及同种异体移植排斥反应等方面起重要作用 ;Ｔｈ2细胞能分泌白细胞介素 4(ＩＬ 4)、 5(ＩＬ 5 )、 10 (ＩＬ 10 )及 13 (ＩＬ 13 ) ,可辅助Ｂ细胞合成ＩｇＥ ,主要负责非吞噬作用的宿主防御功能 ,在抗寄生虫感染及引发…     

抑制SLP-2对宫颈癌细胞迁移及侵袭能力的影响

【摘要】 目的 探讨抑制stomatin样蛋白2（SLP-2）对宫颈癌细胞的迁移及侵袭能力的影响。 方法 将人宫颈腺癌Hela细胞和鳞癌Siha细胞分别分为siRNA阴性对照组（siRNA-CON）和SLP2-siRNA组。采用western blot检测转染后各组细胞SLP-2蛋白表达水平;Transwell小室试验检测细胞侵袭能力;细胞划痕试验检测细胞迁移能力;western blot检测侵袭相关蛋白Rac1、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和MMP-9表达水平。采用独立样本t检验进行统计学分析。结果 Western blot检测结果显示,SLP2-siRNA组Hela细胞和Siha细胞中SLP-2蛋白水平均低于siRNA-CON组,差异有统计学意义（P＜0.05）。Transwell小室试验结果显示,SLP2-siRNA组Hela细胞和Siha细胞侵袭能力低于siRNA-CON组,差异有统计学意义（P＜0.05）。细胞划痕试验结果显示,SLP2-siRNA组Hela细胞和Siha细胞24h和36h迁移能力低于siRNA-CON组,差异有统计学意义（P＜0.05）。Western blot检测结果显示,SLP2-siRNA组Hela细胞和Siha细胞中Rac1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平均低于siRNA-CON组,差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论 干扰SLP-2表达后宫颈腺癌Hela细胞和鳞癌Siha细胞的侵袭能力和迁移能力明显下降,提示SLP-2在宫颈癌进展中有着重要作用,可能是潜在的转移预测标志物和治疗靶点。     

人类辅助性T细胞TH1和TH2亚群

1986年Mosmann和他的同事根据细胞因子产生的形式不同,提出了小鼠CD_4~ 辅助性T细胞(TH)克隆的一个主要再分亚群。T_H1亚群的T细胞克隆合成和分泌白细胞介素2(IL—2)和r—干扰素(WN—r),而不合成和分泌IL—4和IL—5。反之,T_H2亚群的T细胞克隆则能合成和分泌IL—4和IL—5,而不合成和分泌IL—2和IFN—r。