梓醇对顺铂诱导大鼠卵巢颗粒细胞损伤的保护作用

目的探讨梓醇对顺铂诱导大鼠卵巢颗粒细胞损伤的保护作用及作用机制。方法收集大鼠卵巢颗粒细胞,经原代培养后设为对照组、模型组(顺铂50 nmol/L)和梓醇50、100、200μmol/L组,各组细胞按相应方式进行处理。采用MTT法测定细胞活力;流式细胞术Annexin V/PI双染法考察细胞凋亡情况;免疫组化法观察细胞增殖能力,WB法定量细胞凋亡蛋白的分子水平。结果顺铂可显著抑制卵巢颗粒细胞活力、增殖,诱导细胞凋亡;在给予梓醇进行干预后,大鼠卵巢颗粒细胞活力增强、增殖上调,细胞凋亡减弱;经顺铂进行刺激损伤,卵巢颗粒细胞中caspase-3、caspase-9的活化蛋白表达量显著上升,而不同浓度的梓醇可显著下调细胞中cleaved caspase-3、cleaved caspase-9的蛋白表达量。结论梓醇可以改善大鼠细胞活力、提高细胞增殖和抗凋亡能力,对顺铂诱导的卵巢颗粒细胞损伤产生明显的保护作用。     

补肾活血汤对多囊卵巢大鼠卵巢形态及颗粒细胞凋亡的影响

目的:观察中药补肾活血汤对多囊卵巢大鼠的治疗作用.初步探讨其作用机制.方法:以多囊卵巢大鼠病理模型为研究对象,运用光镜、放射免疫、免疫组化及末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)技术,观察补肾活血汤对多囊卵巢大鼠内分泌、卵巢形态学、卵巢颗粒细胞凋亡的影响.结果:补肾活血汤能明显降低多囊卵巢大鼠血清睾酮水平,降低囊状扩张卵泡比例及卵巢凋亡颗粒细胞数.结论:补肾活血汤明显改善了多囊卵巢大鼠的高雄激素血症及卵巢形态学的异常,抑制多囊卵巢大鼠卵巢颗粒细胞凋亡.     

GnRHa对体外培养的卵巢黄素化颗粒细胞分泌功能的影响

目的:研究促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)对体外培养的卵巢黄素化颗粒细胞分泌功能的影响。方法:对16例接受体外受精患者卵泡液中分离的卵巢黄素化颗粒细胞进行体外培养,利用免疫组化法检测颗粒细胞的卵泡刺激素受体(FSHR)蛋白表达鉴定颗粒细胞的纯度,检测加入GnRHa(实验组)体外培养颗粒细胞分泌雌二醇(E2)、孕酮(P)、睾酮(T)、表皮生长因子(EGF)和胰岛素样生长因子1(IGF-1)的水平并与未加GnRHa(对照组)比较。结果:从卵泡液中分离培养的卵巢黄素化颗粒细胞,75%以上呈FSHR蛋白阳性表达;100ng/L的GnRHa对体外培养颗粒细胞作用24h后上清液中每1000个细胞中E2含量为(0.83±0.46)ng/L,明显低于对照组的(2.60±1.53)ng/L(P<0.05);P,T,IGF-1和EGF的含量与对照组差别无统计学意义。结论:GnRHa减弱了颗粒细胞分泌E2的功能,推测GnRHa对卵泡发育和卵母细胞可能有负面影响。     

人SET基因重组腺病毒载体在小鼠颗粒细胞的表达

目的 以原代培养的小鼠卵巢颗粒细胞为模型,观察人SET基因重组腺病毒载体在卵巢颗粒细胞的感染效率和基因表达效果.方法 分离并培养小鼠颗粒细胞.扩增人SET基因重组腺病毒载体AdCMV-SET和对照重组腺病毒载体AdCMV,感染原代培养的小鼠颗粒细胞,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)检测感染效率;qRT-PCR方法检测SET mRNA表达;Western blot方法检测SET蛋白的表达水平.结果 获得的重组腺病毒载体体外感染小鼠颗粒细胞,24 h观察到GFP表达.与AdCMV感染组相比,AdCMV-SET感染组SET mRNA表达水平显著增高(P＜0.05).与空白对照组(Mock)及感染AdCMV组相比,AdCMV-SET感染组SET蛋白水平显著增高(P＜0.05).结论 构建的人SET基因重组腺病毒载体能高效感染小鼠颗粒细胞、并有效表达,对细胞活率无影响.     

阿胶对围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响

目的：探讨阿胶对围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞凋亡及其相关基因Bcl-2和Bax表达的影响。方法：选用4月龄雌性大鼠为正常对照组,14月龄阴道细胞学表现为动情期延长的雌性大鼠为衰老大鼠模型。模型动物随机分别给阿胶或戊酸雌二醇片治疗。采用原位末端核苷酸标记法（TUNEL）检测卵巢细胞凋亡,免疫组化法检测细胞凋亡相关因子Bcl-2,Bax。结果：阿胶高、中、低剂量组卵巢细胞凋亡阳性表达与模型组比较有显著性差异,同时可使卵巢凋亡基因Blc-2表达增强,促凋亡基因Bax表达减弱,Bcl-2/Bax比例增加。结论：阿胶通过抑制Bax蛋白的表达,上调Bcl-2蛋白表达,抑制卵巢颗粒细胞凋亡,进而改善卵巢功能。     

复方更年康对老年雌鼠性激素及骨雌激素受体表达的影响

目的比较用复方更年康和雌激素替代两种方法治疗老年雌性骨质疏松症大鼠,分析性激素及雌激素受体在老年骨质疏松发病中的作用,以寻找治疗该病的理想方法。方法选择有骨质疏松的老年雌性大鼠作为研究对象,分为复方更年康组、尼尔雌醇组和对照组。采用3'末端原位标记法(TUNEL)检测卵巢颗粒细胞凋亡,放射免疫法(RIA)检测血清雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组大鼠骨组织雌激素受体(ER)表达水平,双能X线吸收技术(DEXA)检测骨密度。观察复方更年康治疗该病的疗效。结果老年骨质疏松大鼠骨密度减少,血清E2水平下降,FSH、LH水平上升,下肢骨雌激素受体mRNA表达水平下降;复方更年康能提高骨质疏松大鼠的骨密度、骨组织雌激素受体mRNA表达水平,血清E2水平升高不明显,而使FSH、LH水平下降,同时抑制卵巢颗粒细胞的凋亡。结论复方更年康对老年雌性骨质疏松大鼠的作用,是通过抑制卵巢颗粒细胞凋亡,抑制性腺功能的进一步衰竭,调节内分泌紊乱,提高骨组织雌激素受体,增加骨密度。     

瘦素对绝经后骨质疏松大鼠骨髓基质细胞生物学活性影响的实验研究

目的 观察人瘦素(hLEP)对去卵巢大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)生物学活性的影响.方法 将3月龄雌性SD大鼠双侧卵巢去除后构建绝经后骨质疏松模型.术后12周检测大鼠股骨骨密度以确定建模成功.以全骨髓法培养BMSCs,添加hELP (100 ng/mL)予以刺激,并与对照组比较.观察体外hLEP对去卵巢大鼠BMSCs细胞形态、生长情况以及碱性磷酸酶(ALP)变化的影响.结果 成功构建SD大鼠骨质疏松模型.成功分离培养了去卵巢大鼠BMSCs.经hLEP刺激7d后的BMSCs形态无明显改变,相对于对照组,实验组细胞保持较好的增殖能力,其ALP活性的表达有显著提高(P＜0.05).结论 去卵巢大鼠BMSCs经hLEP刺激后其成骨分化能力有显著增强.     

天癸更年软胶囊对老年大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响

目的通过对老年大鼠卵巢颗粒细胞凋亡及相关基因bc l-2、fas表达的观察,探讨天癸更年软胶囊所含沙棘脂肪酸对围绝经期女性卵巢功能的调节作用,推测沙棘脂肪酸治疗围绝经期综合征的作用机制。方法采用22个月龄的SD♀大鼠,随机分为老年对照组、雌激素组、沙棘脂肪酸大、中、小剂量组,另设青年大鼠对照组。用TUNEL法研究各组大鼠卵巢颗粒细胞凋亡情况,采用免疫组化法观察bc l-2及fas蛋白表达情况和原位杂交方法检测bc l-2 mRNA及fas mR-NA表达情况,用Q55OCW图像分析系统进行灰度分析。结果大中小剂量组均可不同程度抑制卵巢颗粒细胞凋亡,增强bc l-2蛋白及mRNA表达,减弱fas蛋白及mRNA表达。结论沙棘脂肪酸通过调整bc l-2和fas表达,抑制卵巢颗粒细胞凋亡,从而实现调节雌激素水平,改善围绝经期症状。     

芍药苷对多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响机制

目的 分析芍药苷调节单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶/沉默信息调节因子2相关酶1/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活物1-α(AMPK/SIRT1/PGC-1α)通路对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠颗粒细胞增殖和凋亡的影响。方法 10只雌性大鼠挑选5只作为对照组,剩余5只大鼠按照6 mg/100 g皮下注射脱氢表雄酮(DHEA)构造PCOS模型,提取卵巢颗粒细胞,分为对照组、PCOS组、芍药苷低浓度组(200μg/ml)、芍药苷高浓度组(800μg/ml)、芍药苷高浓度+Compound C(AMPK抑制剂)组(800μg/ml+20μmol/L)、芍药苷高浓度+EX527(SIRT1抑制剂)组(800μg/ml+100μmol/L),对照组卵巢颗粒细胞来源于对照组,其余组卵巢颗粒细胞均来自PCOS大鼠。放射免疫法测定细胞培养液雌二醇(E₂)和孕酮(P)含量,CCK8法以及克隆形成实验测定卵巢颗粒细胞增殖能力,流式细胞仪法测定卵巢颗粒细胞凋亡能力,Western blot法测定卵巢颗粒细胞AMPK/SIRT1/PGC-1α通路蛋白表达情况。结果 随着培养时间延长,卵巢颗粒...     

逍遥丸对调节雄激素致排卵障碍模型大鼠卵巢氧化损伤和颗粒细胞凋亡的研究

目的 观察逍遥丸对雄激素致排卵障碍模型大鼠卵巢氧化损伤和颗粒细胞凋亡的影响.方法 60只9日龄SD雌性大鼠随机选取20只为正常组,余40只皮下注射丙酸睾丸酮建立雄激素致排卵障碍模型大鼠模型,造模成功后,随机分为模型组和逍遥丸治疗组,每组20只,给药5周,于动情前期断头取血,比色法测定3组大鼠血清和卵巢T-AOC水平,硫代巴比妥法测定3组大鼠血清和卵巢MDA水平;免疫组化SP法检测3组大鼠卵巢组织中Caspase-3蛋白的表达.结果 与正常组比较,模型组大鼠血清和卵巢中T-AOC水平显著降低,MDA水平显著升高(P<0.05),模型组卵巢颗粒细胞Caspase-3蛋白表达明显高于正常组(P<0.01).与模型组比较,逍遥丸治疗组大鼠血清和卵巢中T-AOC水平升高,MDA水平降低(P<0.05),逍遥丸治疗组大鼠卵巢颗粒细胞Caspase-3蛋白表达值显著低于模型组(P<0.05).结论 逍遥丸能够改善排卵障碍疾病.     

低剂量毒死蜱重复染毒诱发雄性大鼠生殖毒性及其机制

目的探讨毒死蜱(CPF)低剂量重复染毒对雄性大鼠生殖功能的影响及其可能作用机制。方法健康雄性Wistar大鼠ig给予CPF 1,5和10 mg.kg-1,每日1次。连续染毒12周后取大鼠附睾和睾丸称重计算脏器系数,进行组织病理学、精子数量以及活力及畸形率等检查,测定睾丸碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性;TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化及Western印迹法检测胱天蛋白酶和Fas,FasL蛋白的表达。结果与正常对照组相比,CPF染毒大鼠睾丸脏器系数显著升高,精子数及精子活力降低,精子畸形率显著升高(P<0.05),睾丸AKP和γ-GT活性抑制明显。组织病理检查显示,睾丸曲细精管疏松和生精细胞减少。CPF染毒组生精细胞凋亡增加(P<0.05)。Fas/FasL蛋白表达量升高。结论 CPF低剂量重复染毒能够诱导雄性大鼠生殖毒性,其作用机制可能与激活Fas/FasL受体途径而引起睾丸生精细胞凋亡有关。     

顺铂对人卵巢黄素化颗粒细胞的毒性及凋亡的影响

目的研究顺铂(cisplatin,CDDP)对人卵巢黄素化颗粒细胞的毒性及凋亡的影响。方法收集体外受精—胚胎移植(IVF-ET)时的人黄素化颗粒细胞进行体外培养,采用MTT法检测不同浓度的CDDP(0、0.5、1、2.5、5mg.L-1)对人黄素化颗粒细胞生长的抑制作用;采用Hochest33258荧光染色检测细胞凋亡,流式细胞仪(flowcytometry,FCM)检测bcl-2和bax基因蛋白的表达。结果CDDP浓度≥1mg.L-1可抑制颗粒细胞的生长;1、2.5、5mg.L-1CDPP处理人黄素化颗粒细胞24h后,荧光染色可观察到明显的核浓缩、核碎裂形态。FCM检测bcl-2蛋白表达逐渐减少(P<0.05),各组间比较差别有统计学意义;bax蛋白表达逐渐增加(P<0.05),各组间比较差别有统计学意义。结论CD-DP可抑制人黄素化颗粒细胞生长,促进凋亡,其作用机制可能是通过上调bax和下调bcl-2基因表达实现的。     

雄激素对卵巢颗粒细胞乳酸生成的作用

目的观察雄激素对小鼠卵巢颗粒细胞乳酸生成的作用,探讨多囊卵巢综合征高雄激素状态下的卵巢病理生理变化及其机制。方法体外培养小鼠颗粒细胞,分别用10-10、10-8、10-7和10-6 mol/L的睾酮刺激24h,测量培养上清液的乳酸含量。然后,加入10-8 mol/L胰岛素作用30min,检测胰岛素刺激后的乳酸生成量。结果 10-8、10-7和10-6 mol/L睾酮作用24h后,颗粒细胞乳酸生成显著下降(P<0.05);10-7 mol/L睾酮作用24h,再用胰岛素刺激30min后颗粒细胞的乳酸生成亦显著下降(P<0.05)。结论较高浓度的雄激素可抑制小鼠卵巢颗粒细胞的乳酸生成,影响其能量代谢。     

hUC-MSCs来源的外泌体miR-1260a影响PCOS患者颗粒细胞凋亡的研究

目的 探究人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）来源的外泌体miR-1260a靶向CASP8对多囊卵巢综合征（PCOS）患者颗粒细胞凋亡的影响。方法 取健康足月胎儿的脐带进行组织块贴壁法分离培养获得hUC-MSCs，采用流式细胞仪检测其标志性蛋白CD73和CD90的表达。收集hUC-MSCs培养上清液，提取hUC-MSCs外泌体，透射电镜观察其形态，Western blot检测外泌体膜表面标志物热休克蛋白70(HSP70)和肿瘤易感基因101(TSG101)的表达。PKH67标记外泌体，采用激光共聚焦显微镜观察PCOS颗粒细胞对外泌体的内化作用。Western blot检测hUCMSCs外泌体对PCOS颗粒细胞凋亡的影响。利用GSE69909临床样本进行生物信息学分析，得到hUC-MSCs外泌体中异常高表达的miRNAs，并通过实时荧光定量PCR进行验证。合成miR-1260a模拟物及其对照转染至KGN细胞中，流式细胞术检测颗粒细胞凋亡率。利用Target Scan Human 7.2数据库进行miR-1260a靶基因的预测，采用双荧光素酶报告基因系统检测miR-1260a对靶基因的调...     

左归丸对化疗性卵巢早衰小鼠卵巢组织中缝隙连接蛋白43表达的影响

目的:研究左归丸对环磷酰胺(CTX)致卵巢早衰(POF)小鼠卵巢组织中缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响,探讨左归丸治疗化疗性POF的作用机制。方法:将72只小鼠按体质量随机分为空白组、模型组、戊酸雌二醇片组(阳性对照,0.000 13 g/kg)和左归丸低、中、高剂量组(13.65、40.95、122.85 g/kg),每组10只。除空白组外,其余各组小鼠均ip CTX复制POF模型,每天1次,连续20 d;并同时ig相应药物,每天1次,连续30 d。末次给药2h后,分别采用反转录-聚合酶链反应法和Western blot法检测卵巢组织中Cx43 mRNA和蛋白表达;并采用免疫组化法检测卵巢组织中Cx43蛋白的分布。结果:与空白组比较,模型组大鼠卵巢组织中Cx43 mRNA及蛋白表达均明显减弱,卵泡与颗粒细胞中Cx43蛋白的分布明显减少(P<0.01);与模型组比较,戊酸雌二醇片组和左归丸中、高剂量组小鼠卵巢组织中Cx43 mRNA及蛋白表达均明显增强,卵泡与颗粒细胞中Cx43蛋白的分布明显增加(P<0.01)。结论:左归丸可上调CTX致POF小鼠卵巢组织中Cx43 mRNA及蛋白表达,增加Cx43在卵泡及颗粒细胞间的分布,改善缝隙连接功能,这可能是其治疗POF的作用机制之一。     

达英-35对PCO模型大鼠中卵巢组织cx43表达的影响

目的探讨达英-35对PCO模型大鼠中卵巢组织cx43表达的影响。方法选用36只6周龄SD雌性有规律的动情周期大鼠完全随机分为正常对照组、模型组和达英-35组(炔雌醇环丙孕酮)组,每组12只。第22天各组大鼠采血,检测血清睾酮、黄体生成素、卵泡生成素水平,采用化学发光方法,符合PCO大鼠模型标准者纳入实验研究,21d后,处死取卵巢,观察卵巢组织学变化;免疫组织化学观察达英-35对PCO模型大鼠中卵巢组织cx43表达。结果①与正常对照组比较,PCOS模型组大鼠卵巢组织颗粒细胞cx43灰度值下降(98.194±6.51),卵巢组织cx43蛋白表达水平下降(0.66±0.15),差异具有显著性(P<0.05)。达英-35治疗组大鼠卵巢组织cx43蛋白表达水平(0.82±0.14),差异无显著性(P>0.05)。②与PCO模型组比较,达英-35治疗组大鼠卵巢组织cx43灰度值上调(143.794±9.81),达英-35治疗组大鼠卵巢组织cx43蛋白表达上调(0.88±0.12)。结论①卵泡颗粒细胞cx43表达异常降低与多囊卵巢综合征的发生有相关性。②达英-35治疗作用可能与提高卵巢组织连接蛋白cx43有关。     

生长分化因子-9与超排卵周期卵巢低反应的相关性研究

目的:研究超排卵周期卵巢低反应与颗粒细胞中生长分化因子(GDF)-9表达的相关性。方法:选取行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的患者70例,采用本中心常规方案进行超排卵,依据取卵时获得平均直径>14mm的卵泡数分为卵巢低反应组21例,中反应组25例,高反应组24例。应用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-timePCR)技术检测卵巢不同反应组患者卵泡壁颗粒细胞和卵丘颗粒细胞GDF-9mRNA的表达,分析其与卵巢低反应的关系。结果:卵巢不同反应组患者年龄、不孕年限、基础卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)水平及促性腺激素(Gn)用量差异均无统计学意义(P>0.05)。卵巢低反应组卵泡壁颗粒细胞和卵丘颗粒细胞的GDF-9mRNA表达均低于中反应组和高反应组(P<0.05),GDF-9在卵泡壁颗粒细胞和卵丘颗粒细胞中的表达与获卵数呈正相关(r分别为0.508、0.632,均P<0.01)。结论:超排卵周期卵巢低反应与颗粒细胞GDF-9表达有关。     

8-溴-环磷酸腺苷和TGF-α在PCOS患者颗粒细胞中的作用

目的 探讨8-溴-环磷酸腺苷(8-Bromo-cyclic adenosine monophosphate 8-Br-cAMP)和转化生长因子-α(TGF-α)对多囊卵巢综合征(PCOS)患者离体卵巢黄素化颗粒细胞雌二醇(E2)生成的影响.方法 收集体外授精-胚胎移植(IVF-ET)时PCOS组和正常组的黄素化颗粒细胞进行体外原代培养,在其培养的不同时间(0、48、120 h)以睾酮(10-7mol/L)作为底物,分别添加8-Br-cAMP(2mmol/L)和/或TGF-α(10ng/ml)于无血清培养液(TCM199)中,共培养3h后收集培养上清、细胞.用放射免疫法(RIA)测定颗粒细胞分泌E2量;用考马斯亮蓝G250/BSA测颗粒细胞蛋白含量,以校正E2含量.结果 TGF-α在0h显著刺激PCOS组颗粒细胞分泌E2的量(P＜0.05),而48h、120 h均显著抑制PCOS组颗粒细胞分泌E2的量(P＜0.05);8-Br-cAMP在0h、48h、120 h均显著增强PCOS组颗粒细胞雌激素的产生;8-Br-cAMP显著增强TGF-α的作用(P＜0.05).结论 ①8-Br-cAMP加速PCOS患者卵巢颗粒细胞内雄激素向雌激素的转化;②TGF-α抑制PCOS患者卵巢颗粒细胞内雄激素向雌激素的转化;③TGF-α的作用是在8-Br-cAMP之后.     

bFGF在多囊卵巢综合征大鼠卵巢中的表达及意义

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在多囊卵巢及正常大鼠卵巢中的表达及在多囊卵巢综合征(PCOS)发病中的作用.方法 应用来曲唑建立PCOS大鼠模型,采用放免法测定大鼠血清性激素水平;应用免疫组织化学技术以及Biosens Digital图像系统,对bFGF在多囊卵巢大鼠和对照组大鼠卵巢组织的表达强度变化进行对照研究.结果 PCOS大鼠模型建立成功;PCOS组bFGF在卵泡膜细胞上的表达强度明显高于对照组(P＜0.05),而在间质细胞和颗粒细胞上的表达强度(实验组84.61±23.40,100.45±40.82;对照组83.15±13.08,94.43±27.14)无明显差异(P＞0.05).结论 bFGF在多囊卵巢大鼠发病中起着重要作用.     

补肾调冲方含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞增殖、激素分泌和mRNA表达的影响

目的 运用血清药理学方法观察补肾调冲方对大鼠卵巢颗粒细胞增殖、激素分泌功能以及抑制素B (INHB)、胰岛素样生长因子-1 (1GF-1) mRNA表达的影响.方法向培养的SD大鼠卵巢颗粒细胞中分别加入10％空白血清(对照组)、人转基因重组促卵泡激素(hFSH)含药血清(阳性对照组)、补肾调冲方含药血清(补肾调冲方组...