辛伐他汀对高糖诱导后人腹膜间皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的研究辛伐他汀对体外培养的人腹膜间皮细胞在高糖刺激下血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法体外培养人腹膜间皮细胞,分为5组(每组设3个样本):正常对照组(完全培养液)、高糖对照组(2.5%葡萄糖)和高糖(2.5%葡萄糖)加辛伐他汀(浓度分别为2.5,5,10μmol/L)组。采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞内VEGFmRNA的表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞上清液中VEGF的蛋白质水平,用二喹啉甲酸蛋白检测法测定细胞中蛋白质含量,用以校正ELISA结果。结果高糖组与正常对照组相比VEGF表达增加,辛伐他汀各组与高糖组相比VEGF表达明显减少,两者在蛋白质和基因水平均呈量效关系。结论辛伐他汀可以减少高糖刺激下人腹膜间皮细胞VEGF的表达,可能延缓腹透相关性腹膜纤维化的发展。     

辛伐他汀对高糖致人腹膜间皮细胞Ⅰ型胶原、MMP-1和TIMP-1分泌与表达的影响

目的研究辛伐他汀对体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMCs)在高糖刺激下主要细胞外基质Ⅰ型胶原,及其降解酶系基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)分泌与表达的影响。方法胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞进行原代培养并传代;待细胞同步后,经2.5%高糖和不同浓度的辛伐他汀干预48 h。半定量RT-PCR检测细胞内Ⅰ型胶原、MMP-1和TIMP-1 mRNA表达情况;ELISA方法检测细胞上清液中Ⅰ型胶原、MMP-1和TIMP-1的蛋白质水平。结果辛伐他汀显著下调高糖致HPMCsⅠ型胶原和TIMP-1表达,且在蛋白质和基因水平均呈剂量依赖关系(P<0.01);同时,高剂量的辛伐他汀能显著增加高糖环境下MMP-1蛋白质含量(P<0.01),并上调MMP-1 mRNA表达(P<0.01)。结论辛伐他汀能减少HPMCs高糖刺激下Ⅰ型胶原的合成,并通过调节MMP-1/TIMP-1的平衡,促进Ⅰ型胶原降解,从而减少细胞外基质的沉积。     

水飞蓟宾对高糖诱导人足细胞中VEGF表达的影响

目的 探讨水飞蓟宾对高糖诱导的体外培养人足细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 体外培养的人足细胞分为7组:正常糖(NG,葡萄糖5.5 mmol/L)组、甘露醇对照(MN,甘露醇24.5mmol/L+葡萄糖5.5mmol/L)组、高糖(HG,葡萄糖30mmol/L)组、HG+低浓度水飞蓟宾(HG+LS,水飞蓟宾5 μg/ml)组、HG+中浓度水飞蓟宾(HG+MS,水飞蓟宾10μg/ml)组、HG+高浓度水飞蓟宾(HG+HS,水飞蓟宾20μg/ml)组、HG+二甲亚砜(HG+D,DMSO 1 mg/ml)组.各作用48 h后,RT-PCR半定量法及Western印迹法检测足细胞VEGF mRNA及蛋白表达水平.结果 体外培养人足细胞表达基础水平的VEGF,HG刺激48 h后足细胞VEGF基冈和蛋白表达均显著增加(P＜0.05);与HG组比较,加用5～20μg/ml水飞蓟宾均可抑制HG所诱导的VEGF基因和蛋白表达(P＜0.05),并呈剂量依赖性.结论 HG可使足细胞表达VEGF增加,水飞蓟宾可通过抑制HG诱导足细胞产生过多VEGF而具有潜在保护足细胞和防治糖尿病肾病的作用.     

氟伐他汀对高糖诱导人足细胞血管内皮生长因子表达的影响及机制

目的探讨氟伐他汀对高糖诱导的人足细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及机制。方法体外培养人足细胞,随机分为A组(正常糖组)、B组(高糖组)、C组(高糖+氟伐他汀10-7mol/L组)、D组(高糖+氟伐他汀10-6mol/L组)、E组(高糖+氟伐他汀10-5mol/L组)和F组[高糖+胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059组]。用Western blot检测VEGF和磷酸化ERK1/2(pERK1/2)蛋白表达。结果 B组VEGF、pERK1/2表达较A组明显升高,并呈时间依赖性(P<0.05)。F组VEGF、pERK1/2表达较B组显著降低(P<0.01)。与B组比较,C、D、E组VEGF及pERK1/2表达亦明显减少,并呈浓度依赖性(P<0.05)。结论高糖刺激体外培养人足细胞VEGF表达增加,氟伐他汀可减少高糖诱导的VEGF表达,其机制可能与氟伐他汀抑制ERK信号通路有关。     

黄芪注射液对腹膜透析相关腹膜间皮细胞 TGF-β1分泌与表达的影响

目的:探讨黄芪对腹膜透析相关性腹膜纤维化的作用。方法:人腹膜间皮细胞(HPMC)做体外培养,第三代细胞用于实验。分5组观察,对照组为RP-MI1640;PDS(peritoneal dialysis solution,腹膜透析液)组为加入PDS;黄芪12、3、组为加入含黄芪注射液的PDS,黄芪终浓度分别为102、04、0 mg.ml-1。分别在24 h采用ELISA法检测细胞上清液中转移生长因子-1β(TGF-1β)的含量,采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测TGF-1βmRNA表达。结果:腹膜间皮细胞在PDS干预下分泌TGF-1β明显增加(P<0.05)。腹膜间皮细胞经含不同浓度黄芪注射液的PDS干预后,TGF-1β分泌与PDS组比较有显著下降(P<0.05)。不同浓度黄芪注射液组之间比较无显著差异(P>0.05)。腹膜间皮细胞在PDS干预下TGF-1βmRNA表达明显升高,比对照组上升62.43%,腹膜间皮细胞经含不同浓度黄芪注射液的PDS干预后,TGF-1βmRNA表达显著低于PDS组(P<0.01)。结论:商业性腹膜透析液可促进腹膜间皮细胞分泌和表达TGF-1β,黄芪可以部分抵消这一作用所致的腹膜透析相关性腹膜纤维化。     

川芎嗪对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞增殖的影响

目的 观察川芎嗪对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞（HRCECs）增殖的影响。方法 将HRCECs细胞分为对照（生理盐水）组、模型（25 mmol/L葡萄糖）组和川芎嗪低、中、高浓度（50、100、200 μmol/L）组,培养48 h后,MTT细胞毒实验检测细胞增殖变化,流式细胞技术检测细胞周期,ELISA法检测血管内皮生长因子（VEGF）表达。结果 与对照组比较,高糖对HRCECs细胞增殖、分裂（M）期比例、上清VEGF浓度均具有显著促进作用（P<0.05、0.01）;与模型组比较,低、中、高浓度川芎嗪对高糖诱导的HRCECs细胞增殖、分裂（M）期比例、上清VEGF浓度均发挥显著抑制作用（P<0.05、0.01）,且呈浓度相关性。结论 川芎嗪可能通过抑制高糖诱导的HRCECs细胞VEGF高表达,阻滞细胞周期,发挥抑制HRCECs细胞增殖的作用。     

肾康注射液抑制体外培养小鼠腹膜间皮细胞中TNF-α、 TGF-β1、 VEGF、 CTGF的释放

摘要： 目的 探讨肾康注射液对体外培养的小鼠腹膜间皮细胞 （PMCs） 的肿瘤坏死因子 （TNF） -α、 转化生长因子（TGF） -β1、 血管内皮生长因子 （VEGF）、 结缔组织生长因子 （CTGF） 等细胞因子水平的影响。方法 小鼠PMCs经传代培养及鉴定后, 分为空白对照组 （A组, DMEM）; 阳性对照组 （B组, DMEM+ 140 mmol/L葡萄糖）; 低 （C组）、 中 （D 组）、 高 （E组） 剂量肾康干预组 （B组培养液+含体积比为1%、 2%、 4%肾康注射液）。培养24 h后分别收集细胞和培养上清液, 采用酶联免疫吸附试验检测培养上清液中TNF-α、 TGF-β1、 VEGF、 CTGF水平, Real-time RT-PCR检测 PMCs中TNF-α、 TGF-β1、 VEGF、 CTGF的mRNA转录水平。结果 与A组比较, B组TNF-α、 TGF-β1、 VEGF、 CTGF 浓度及mRNA表达水平均明显上升 （P＜0.05）; 与B组比较, 加入肾康注射液后, C、 D、 E组培养上清液中由高糖诱导的TNF-α、 TGF-β1、 VEGF、 CTGF浓度及相应mRNA水平均出现不同程度下降 （P＜0.05）, 并呈现一定的剂量依赖性。结论 一定浓度的肾康注射液可抑制高糖诱导的小鼠PMCs中TNF-α、 TGF-β1、 VEGF、 CTGF的表达和转录。     

吡格列酮对高糖环境中大鼠腹膜间皮细胞氧化应激及单核细胞趋化蛋白1表达的影响

目的 观察吡格列酮(降血糖药)对高糖培养条件下大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs)活性氧及单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA、蛋白表达的影响.方法 用胰蛋白酶消化法分离培养大鼠腹膜间皮细胞;采用活性氧捕获剂双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)孵育细胞;通过流式细胞仪检测细胞内的荧光强度,测得细胞内活性氧(ROS)水平;分别用RT-PCR和ELISA法检测MCP-1 mRNA及蛋白含量.结果 正常组和甘露醇组比较,ROS水平和MCP-1表达差异无统计学意义,高糖组ROS水平较正常组明显增高(P＜0.01);采用吡格列酮和乙酰半胱氨酸干预后,ROS水平显著降低(P＜0.01);高糖组MCP-1mRNA及蛋白表达显著高于正常组(P＜0.01);而小剂量吡格列酮干预组和乙酰半胱氨酸组的MCP-1 mRNA及蛋白表达显著低于高糖组(P＜0.01);大剂量较小剂量吡格列酮干预组的ROS和MCP-1水平进一步降低.结论 吡格列酮通过抑制氧化应激而降低高糖所诱导的MCP-1表达,这可能是吡格列酮保护腹膜功能的作用机制之一.     

柚皮素对体外糖尿病视网膜新生血管形成的抑制作用及机制

目的 观察柚皮素对体外高糖诱导的视网膜血管生成过程的影响及机制.方法 将猴视网膜血管内皮细胞(RF/6A)采用随机数字表法分为对照组、高糖组、高糖+柚皮素组,对照组在常规培养基中培养,高糖组在培养基中加入30 mmol/L D-葡萄糖,高糖+柚皮素组在培养基中加入30 mmol/L D-葡萄糖及3 mg/L柚皮素.培养24 h后,分别采用cck-8、Transwell和Matrigel实验检测细胞增殖、迁移及管腔形成.采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达.结果 高糖组细胞增殖率(72.08±2.12)％比对照组(99.43±0.67)％减小,高糖+柚皮素组(90.54±1.47)％明显高于高糖组;细胞迁移数和管腔形成比较,高糖组明显高于对照组,高糖+柚皮素组显低于高糖组;Western blotting结果表明高糖组细胞LC3-Ⅱ的表达明显高于对照组,高糖+柚皮素组细胞的表达明显低于高糖组;高糖组细胞p-mTOR的表达明显低于对照组,高糖+柚皮素组细胞的表达明显高于高糖组.结论 柚皮素可通过抑制细胞自噬在体外抑制糖尿病视网膜新生血管形成.     

脂联素对高糖环境下人心肌细胞增殖及VEGF表达的影响

目的通过体外高糖培养人心肌细胞(HCM)及运用脂联素(ADPN)干预以探讨HCM增殖及VEGF表达的影响,以揭示脂联素对高糖环境中的心肌细胞的可能保护机制。方法将HCM分为正常对照组(5.5mmol/L葡萄糖)、高糖组(30.0mmol/L葡萄糖)、脂联素组(30.0mmol/L+2.5μg/mLADPN),分别培养24h、48h、72h,运用MTT测定HCM的增殖情况;通过实时荧光定量PCR(real time PCR)技术测定在脂联素干预和高糖作用下相应时间HCM中VEGF mRNA的含量。结果①高糖组抑制细胞增殖,加入脂联素后促进细胞增殖,且呈时间依赖性;②VEGF mRNA在高糖组表达较高,加入生理浓度脂联素对于VEGF mRNA表达有抑制作用,并随时间的延长VEGF表达逐渐减少。各时间段脂联素组和高糖组相比,VEGF的表达有统计学差异,亦呈时间依赖性。结论脂联素可以促进HCM增殖,对高糖环境下心肌细胞有保护作用。     

The effect of high glucose-based peritoneal dialysis fluids on thioredoxin-interacting protein expression in human peritoneal mesothelial cells

BackgroundIt has been demonstrated that thioredoxin-interacting protein (TXNIP) interacted with NACHT, LRR and PYD domains-containing protein 3 (NLRP3) and participated in the NLRP3 inflammasome activation. Our previous study has demonstrated that in human peritoneal mesothelial cells (HPMCs), exposure to high glucose-based peritoneal dialysis (PD) solutions induced mitochondrial reactive oxygen species (ROS) production, activation of NLRP3 inflammasome and IL-1β expression. This study aimed to investigate the effect of high glucose-based PD fluids on the TXNIP expression and the underlying mechanisms by which TXNIP-NLRP3 interaction mediates the inflammatory injury to HPMCs in high glucose-based PD fluids conditions.MethodsTXNIP gene and protein expression was detected by real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) and immunoblot. Immunoprecipitation was used to evaluate the interaction between TRX1 and TXNIP, TXNIP and NLRP3. ROS production and IL-1β expression was examined by flow cytometry and immunoblot and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) respectively.ResultsIt was identified that high glucose-based PD solutions enhance the level of TXNIP gene and protein in cultured HPMCs and a rat-based PD model. We also found that ROS generation induced by high glucose-based PD solutions disrupts the TRX1-TXNIP association, while promoting the binding of TXNIP to NLRP3 in HPMCs. Furthermore, the application of a ROS inhibitor (APDC) to HPMCs blocked the high glucose-based PD solution-induced TXNIP-NLRP3 binding, in addition to ROS production and IL-1β expression.ConclusionThe results of the present study revealed a novel mechanism underlying high glucose-containing PD-mediated peritoneal inflammatory injury, supporting the attenuation of ROS generation as a potential therapeutic strategy to alleviate such pathology.     

Ligustrazine inhibits lipopolysaccharide-induced proliferation by affecting P27, Bcl-2 expression in rat mesangial cells

Ligustrazine has a renoprotective effect against nephritis. In the present study, we investigated the roles of ligustrazine on lipopolysaccharide-induced changes of proliferation, cell cycle in cultured rat mesangial cells. 3-(4,5-dimethyltiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide assay revealed that rat mesangial cells treated with lipopolysaccharide (10mg/l) underwent significant proliferation compared with control group. This effect was significantly inhibited by ligustrazine (400 to 2500 mg/l). Flow cytometric analysis revealed that cells treated with lipopolysaccharide showed significant reduction in the ratio of G0/G1 phase and significant elevation in the ratio of S+G2/M phase. The changes of cell cycle induced by lipopolysaccharide were reversed by ligustrazine. In addition, lipopolysaccharide suppressed P27 protein expression was significantly increased by ligustrazine (100, 500, 2500 mg/l). Moreover, rat mesangial cells treated with lipopolysaccharide showed scanty apoptosis with up-regulation of Bcl-2expression, while Bax protein expression was not changed. Ligustrazine (100, 500, 2500 mg/l) significantly reversed lipopolysaccharide-induced up-regulation of Bcl-2 protein and increased apoptotic cell death. In summary, ligustrazine displayed a significant inhibiting effect on lipopolysaccharide-induced proliferation through increasing P27 and decreasing Bcl-2 protein expression in rat mesangial cells.     

川芎嗪对缺氧时视网膜血管内皮细胞HIF-1α、VEGF表达及细胞增殖的影响

目的研究川芎嗪对缺氧时体外培养的牛眼视网膜血管内皮细胞（BREC）VEGF表达及细胞增殖活性的影响,探讨川芎嗪治疗视网膜新生血管性疾病的药理机制及可行性。方法 CoCl2模拟缺氧处理培养的BREC细胞,用浓度分别为20、40、120μg/mL的川芎嗪分别加入细胞培养液中24h,采用ELISA法检测细胞培养上清液VEGF含量,免疫组织化学法和生物荧光法分别检测细胞PCNA的表达、细胞内ATP含量以分析细胞增殖能力,采用免疫组织化学法检测HIF-1α的表达。结果川芎嗪可减少缺氧引起的视网膜血管内皮细胞中PCNA的表达,降低细胞内ATP含量,降低培养上清液中的VEGF浓度,且呈剂量依赖性。结论川芎嗪可抑制缺氧引起的视网膜血管内皮细胞的增殖。其机制可能是通过抑制HIF-1α途径来实现的。     

川芎嗪纳米喷雾剂对大鼠腹腔粘连相关因子和纤溶系统影响的实验研究

目的探讨川芎嗪纳米喷雾剂对大鼠腹腔粘连相关因子和纤溶系统的影响。方法将SD大鼠随机分为空白组、模型组、透明质酸钠组、川芎嗪纳米喷雾剂高、中、低剂量组、聚乳酸空白纳米组、川芎嗪原料组、川芎提取物组共9组。以锉刀法进行造模,分别于术后1周、2周收集大鼠腹腔液,ELISA法测定腹腔液中相关因子TGF-β1、FN、CTGF的含量,以及纤溶系统PAI和t-PA的含量。结果川芎嗪纳米喷雾剂有改善粘连相关因子TGF-β1、FN、CTGF升高的作用;与粘连模型组比较,抑制了PAI活性的增强,相对增强了t-PA的活性作用,且川芎嗪纳米喷雾剂存在一定的量效关系。结论川芎嗪纳米喷雾剂抗腹腔粘连的作用机制可能与抑制了粘连所致的TGF-β1、FN、CTGF的升高以及调节了t-PA、PAI之间的平衡相关。     

川芎嗪、环丙沙星对体外培养的人结膜成纤维细胞增殖抑制作用的研究

目的 :探讨川芎嗪、环丙沙星对人结膜成纤维细胞增殖的抑制作用。方法 :应用噻唑蓝法 ,观察不同浓度川芎嗪、环丙沙星对人结膜成纤维细胞增殖的影响。结果 :川芎嗪、环丙沙星对人结膜成纤维细胞均有明显的抑制作用 ,并与浓度呈正比。结论 :川芎嗪、环丙沙星可有效防治增殖性玻璃体视网膜病变。     

川芎嗪注射液对高眼压大鼠视网膜神经节细胞凋亡的作用机制研究

目的观察川芎嗪注射液通过磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)通路对高眼压大鼠模型视网膜神经节细胞凋亡的影响。方法用前房注射羟丙基甲基纤维素的方法建立高眼压大鼠模型。按照体重将造模成功大鼠随机分为4组:模型组、川芎嗪组、激动剂组和抑制剂组;另取10只正常大鼠作为正常组,每组10只。造模成功3 d后,川芎嗪组给予盐酸川芎嗪注射7.2 mg·kg-1·d-1,激动剂组给予盐酸川芎嗪注射7.2 mg·kg-1·d-1+胰岛素样生长因子-1 1μg·d-1,抑制剂组给予盐酸川芎嗪注射7.2 mg·kg-1·d-1+Ly294002(PI3K抑制剂) 25μg·d-1,模型组和正常组给予等体积的生理盐水,均腹腔注射,1次/天,共2周。免疫组化法检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达(平均光密度值),缺口末端标记法检测视网膜神经节细胞凋亡。结果正常组、模型组、川芎嗪组、激动剂组和抑制剂组的Bcl-2蛋白表达水平分别为58.01±3.78,17.84±1.39,38.80±1.19,39.68±1.71和29.27±1.45;这5组的Bax蛋白表达水平分别为14.73±0.50,56.47±0.91,31.31±0.86,26.60±1.12和44.95±1.73;这5组的细胞凋亡率分别为(5.92±1.18)%,(60.80±1.50)%,(31.70±1.09)%,(28.90±1.90)%和(35.60±1.12)%。上述指标:模型组与正常组比较,差异均有显著统计学意义(均P<0.01);川芎嗪组与模型组比较差异均有显著统计学意义(均P<0.01)。结论川芎嗪注射液能够通过PI3K/Akt/mTOR信号通路调控视网膜的Bcl-2、Bax蛋白表达水平,减少视网膜神经节细胞的凋亡。     

脂联素对高糖环境下人视网膜色素上皮细胞分泌VEGF及PEDF的影响

目的研究脂联素对高糖环境下人视网膜色素上皮（hRPE）细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）和色素上皮衍生因子（PEDF）的影响。方法hRPE细胞分为3组：①正常对照组;②高糖组;③高糖＋不同浓度的脂联素组（2.5,5,10,20μg/ml）,分别在48h后,用ELISA法测定上清液中VEGF及PEDF的含量。结果与正常对照组相比,高糖组VEGF水平明显升高,PEDF水平明显下降,加入2.5μg/ml脂联素对VEGF及PEDF水平影响不大,脂联素浓度达到5～20μg/ml时和高糖组相比,结果相反,VEGF水平显著降低、PEDF水平显著升高,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论5～20μg/ml脂联素可以使hRPE细胞VEGF分泌减少和PEDF分泌增多。提示脂联素可以纠正高糖诱导的hRPE细胞功能紊乱,通过调节VEGF与PEDF的平衡来抑制糖尿病视网膜病变（DR）中病理性新生血管的形成。