胃癌相关基因Serpine1的RT-LAMP快速检测法

目的建立逆转录-环介导的等温扩增快速检测高侵袭型胃癌转移相关基因。方法快速抽提肝转移胃癌患者标本的RNA用环介导的等温扩增反应(LAMP)扩增转移相关基因Serpine1,扩增条件为63℃保温30min,扩增后产物通过特异性内切酶进行鉴定。结果RT-LAMP能特异性快速的扩增目的基因。结论RT-LAMP能因其特异,快速,高效的优点可以广泛运用于肿瘤转移相关基因的检测,对临床早期诊断提供标准。     

环介导恒温扩增技术快速检测大肠杆菌O157特异基因的建立

目的 建立环介导的恒温扩增快速检测大肠杆菌O157的方法。方法 采用环介导的恒温扩增反应（LAMP）技术扩增大肠杆菌O157特异性基因,并与传统PCR比较。结果与传统的PCR技术相比,LAMP法更加简便快速、且在等温条件下进行,具有更高的灵敏性;特异性100%。结论 该方法具有灵敏度高,特异性强,操作简便快速,不需要复杂仪器设备、为临床检测大肠杆菌O157提供了一个快速简便的新方法。     

LAMP结合核酸试纸条技术快速检测粪便中艰难梭菌的方法研究

目的 研究利用环介导等温扩增（loop–mediated isothermal amplification,LAMP）结合核酸试纸条技术建立艰难梭菌（Clostridium difficile,CD）的快速检测方法,为艰难梭菌检测提供一种快速检测的方法。方法 收集2016年1月至2017年12月杭州市临安区第一人民医院临床感染性腹泻患者的粪便标本201份。根据艰难梭菌毒素A基因特异序列设计引物,选择6条最佳引物,用LAMP环介导等温扩增曲线、钙黄绿素目视法和核酸试纸条测试实验结果,再优选反应体系,最后检测粪便中的艰难梭菌。结果 LAMP法能在60℃条件下扩增1h检出艰难梭菌,对1株艰难梭菌和7株非艰难梭菌检测,只有艰难梭菌能检出阳性扩增,设计的引物具有良好的特异性。脱氧核糖核酸（deoxyribo nucleic acid,DNA）检出限为0.8pg/μl。结论 LAMP结合核酸试纸条技术快速检测粪便艰难梭菌具有敏感度高、操作简便、特异性强、可视化、方便快捷的特点,适用于艰难梭菌的快速检测。     

环介导等温扩增技术检测铜绿假单胞菌的研究

用环介导等温扩增技术(LAMP)快速、灵敏地检测铜绿假单胞菌.利用铜绿假单胞菌gbca基因,特异性设计3对LAMP引物,在反应体系中添加羟基萘酚蓝(HNB)荧光染料,通过反应前后颜色的变化肉眼观察结果,并用琼脂糖凝胶电泳加以验证.对临床标本利用LAMP和PCR法平行检测,验证该法灵敏度、特异性.针对铜绿假单胞菌DNA特异性引物的LAMP法可以扩增,其他无扩增产物.本实验建立的LAMP法具备简便、快速、特异性强和灵敏度高的特点,适于实际应用.     

环介导等温扩增技术在疾控机构微生物检测中的应用

环介导等温扩增技术(LAMP)是一种新型的体外等温扩增特异核酸片段的技术,具有特异性强、灵敏度高、快速简便等优点.本文综述了近年来LAMP在微生物检测领域的具体应用实例和研究进展,并对其应用前景做了展望.     

LAMP和PCR法检测痢疾志贺菌的特异性和灵敏性比较

目的建立环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测痢疾志贺菌,并对其特异性、灵敏度与传统PCR进行比较。方法以痢疾志贺菌侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)为靶序列,设计6条特异性引物(内引物、外引物和环引物各2条),优化LAMP反应体系及反应条件,检测LAMP反应的灵敏度、特异性及模拟样品,同步与PCR进行比较。结果 LAMP法和PCR均能特异性地扩增出志贺菌靶DNA,而其他非志贺菌均未扩增出特有条带。检测细菌纯培养物和模拟食品的灵敏度LAMP法分别为5.3×101cfu/ml、6.8×101cfu/ml,PCR法分别为5.3×102cfu/ml和6.8×102cfu/ml。结论利用LAMP技术,可快速、灵敏、简便地检测痢疾志贺菌,与PCR方法比较,特异性强、操作简便、检测成本低、耗时短,有望发展成为快速检测痢疾志贺菌的有效手段。     

淋病奈瑟菌porA基因实时荧光环介导等温扩增方法的建立

目的 运用实时荧光环介导等温扩增技术(LAMP)建立一种快速准确检测淋球菌的方法,以期用于淋病的早期临床诊断.方法 以淋球菌porA为靶基因,设计保守性和特异性良好的引物,以淋球菌标准菌株基因组DNA为模板,进行LAMP扩增,用23种其他在生殖系统中存在的微生物验证其灵敏度和特异性.结果 实时荧光LAMP法可检测到1 pg/μl(103CFU/ml)淋球菌基因组DNA,稳定性良好,其针对23种其他在生殖系统中存在的微生物均不能扩增,porA引物对淋球菌高度特异,阳性结果15 min可快速检出.结论 成功建立了检测淋球菌porA的LAMP技术,为淋球菌的快速检测提供了新的手段,有望成为淋球菌常规检测的简便方法.     

LAMP快速检测日本血吸虫感染性钉螺的研究

目的：建立一种快速检测日本血吸虫感染性钉螺的方法。方法采用环介导等温扩增技术（LAMP ）以日本血吸虫的特异基因为靶序列,利用Primer Explorer V3软件设计扩增靶基因的4条LAMP引物,酚氯仿法提取感染性钉螺中的日本血吸虫DNA ,取适量模板DNA加入LAMP反应体系进行对日本血吸虫靶基因扩增,经肉眼观察、SYBR Green I染色电泳及测DNA序列来判定扩增产物。在99个阴性钉螺中各加入1个阳性钉螺,其中每个阳性钉螺分别感染日本血吸虫毛蚴数量分别为10、8、6、4、2、1条。结果感染性钉螺检测管经显色呈绿色为阳性,阴性钉螺呈棕色;日本血吸虫的特异基因经LAMP扩增后电泳呈现LAMP特征性梯状条带,阴性钉螺及感染肝吸虫不出现LAMP特征性梯状条带;扩增产物经酶切及序列分析显示为目的基因;在100个钉螺中只要有2条日本血吸虫毛蚴感染便可检出。结论环介导等温扩增技术（LAMP）可快速有效检测日本血吸虫感染性钉螺,有望为疫区日本血吸虫感染性钉螺高效快速检测提供一种新方法。     

改良环介导等温扩增技术在疟原虫耐药基因SNP检测中的价值及可行性

目的 探讨改良环介导等温扩增技术(LAMP)对常见药物抗性基因SNP的检测价值及可能性.方法 采集非洲赤道几内亚马拉博地区医院提供的500例当地疟疾患者的外周血液样本,以巢式PCR为金标准,比较改良环介导等温扩增技术与其在恶性疟原虫耐药基因SNP检测中的反应效率、敏感性及特异性.结果 对照金标准巢式PCR方法,对500例患者进行检测,两种方法的检测符合率为96.4%,差异无统计学意义(P>0.05).检测效率比较显示,通过与金标准进行比较,改良LAMP的初反应时间较快,在10 min内即起跳并迅速达到阳性反应阈值,而巢式PCR扩增效率相对较低,明显落后于改良LAMP(q浑浊度=6.492,P<0.001;q反应速率=0.931,P=0.079);敏感性比较显示,改良LAMP扩增的阳性反应阈值较巢式PCR出现得早,并且随着时间推移,反应扩增量逐渐增加,在反应的20 min内,改良LAMP反应起跳时间较早(q浑浊度=20.171,P<0.001;q反应速率=0.326,P=0.674);特异性比较显示,改良LAMP对四种疟原虫均有较好的特异性,无论是起跳时间、扩增产物速率均优于巢式PCR(q浑浊度=18.619,P<0.001;q反应速率=1.927,P=0.073).结论 改良环介导等温扩增技术具有较好的反应速率、特异性及敏感性,操作简便、诊断效率高,值得推广.     

快速检测单核细胞增生李斯特菌LAMP方法的建立

目的:建立一种检测单核细胞增生李斯特菌核酸的快速、特异的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermalamplification,LAMP)方法。方法:针对单核细胞增生李斯特菌的李斯特菌溶血素hlyA基因设计4条LAMP引物,在水浴箱内65℃保温约60 min,完成对单核细胞增生李斯特菌的扩增,扩增产物经肉眼、SYBR Green I染色和电泳鉴定。利用LAMP和PCR方法同时检测1株单核细胞增生李斯特菌和10株非单核细胞增生李斯特菌(对照组)来验证LAMP方法的特异性。用LAMP和PCR方法分别检测一系列稀释后的单核细胞增生李斯特菌菌液,比较两者的敏感性。结果:经肉眼、加染料和电泳均能观察到1株单核细胞增生李斯特菌LAMP扩增阳性反应,10株非单核细胞增生李斯特菌没有出现LAMP扩增。LAMP敏感度比PCR高,LAMP检测单核细胞增生李斯特菌的检测下限为3 cfu/ml,PCR检测下限>300 cfu/ml。LAMP检测速度比PCR更快,只需要60 min。结论:建立了一种检测单核细胞增生李斯特菌的快速、特异的LAMP方法。     

LAMP技术检测弓形虫感染方法的建立

目的建立一种快速、简便的检测弓形虫感染的环介导等温扩增方法(LAMP)。方法根据弓形虫RH株SAG1基因序列合成2对特异性LAMP引物,优化扩增体系与参数。通过与常规PCR方法的比较,评估优化后的LAMP反应的特异性和灵敏性。利用建立的LAMP初步检测人工感染弓形虫4 d后白兔与大鼠的肌肉组织。结果 LAMP法检测弓形虫基因组DNA的灵敏度是传统PCR方法的100倍。LAMP法检测与其他常见寄生原虫、寄生虫无非特异性阳性结果。LAMP法检测人工接种动物的肌肉组织,阳性率达到100%,对照组为0,差异有统计学意义(P0.01)。结论 LAMP法检测弓形虫感染快速简便、敏感性高、设备要求低,具有较好的应用前景。     

环介导等温扩增技术检测福氏志贺菌的实验研究

目的：了解并建立福氏志贺菌的快速、特异的环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）检测方法,探讨快速、简便、有效的消化道传播性病原体的临床诊断、饮水检测和环境卫生监测等检测手段。方法对福氏志贺菌进行细菌培养,然后使用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）和LAMP技术设计4条特异性引物,以及使用克隆等分子生物学方法进行DNA提取,然后对PCR方法与LAMP方法进行对比分析。结果LAMP扩增具有非常高的特异性,几乎不会产生非特异性扩增;与PCR方法相比,LAMP检测限更低,仅为5个拷贝;LAMP在等温条件下扩增,不会因温度改变而造成时间的损失,在1h内可将靶序列扩增至109～1010倍,并且不需要模板的热变性。结论 LAMP技术具有特异敏感简单的特点,不需要特殊的仪器,在65℃时1 h即可完成反应,同时检测结果可直接通过肉眼或加入荧光染料即可判断。     

环介导等温扩增技术联合结核分枝杆菌快速培养在涂阴肺结核中的诊断价值

目的探讨环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification metliod,LAMP,新型的核酸扩增技术)联合结核分枝杆菌快速培养(BACTEC MGIT 960,结核分枝杆菌检测仪)在痰涂片阴性肺结核中的诊断价值。方法收集疑似肺结核患者90例,随机分成A、B、C组,A组通过指南推荐涂阴肺结核诊断,B组通过LAMP确诊,C组通过LAMP联合BACTEC MGIT 960确诊,并给予抗结核治疗2个月后随访所有入组患者胸部CT变化情况,分别比较涂阴肺结核诊断方法、LAMP及LAMP联合BACTEC MGIT 960的诊断可靠性。结果涂阴肺结核指南推荐诊断阳性率40.0%,LAMP阳性率53.3%、联合检测阳性率60.0%,差异无统计学意义。联合检测敏感性88.9%,特异性91.7%均明显升高。结论在实际临床中,环介导等温扩增技术联合结核分枝杆菌快速培养(BACTEC MGIT 960)在痰涂片阴性肺结核诊断中特异性及敏感性高。     

环介导等温扩增法直接检测阳性血培养瓶中大肠埃希菌

目的：应用环介导等温扩增技术（LAMP）建立一种快速敏感的直接检测阳性血培养瓶中大肠埃希菌的方法。方法根据美国国立卫生研究院基因序列数据库（GenBank）上大肠埃希菌的lacZ（登录号：M74750）基因序列,设计4条特异引物（2条内引物、2条外引物）,对lacZ基因进行扩增,对扩增反应进行优化。分别验证该方法的特异性及敏感性,并与传统培养法进行比较。结果在300份阳性血培养瓶中,采用LAMP法检测到68株大肠埃希菌,所设计引物对大肠埃希菌扩增的特异性及敏感性均较好,与传统培养法比较,灵敏度和特异性均达100％,但传统培养法的检出时间为3d,而LAMP法的检出时间只需1h。结论LAMP检测大肠埃希菌是快速、低成本、特异性强、灵敏度高的方法,适合临床开展。     

环介导等温扩增技术及其应用

环介导等温扩增法（LAMP）是一种新的核酸扩增法.该方法在一定温度下一步即可完成扩增反应.由于其扩增效率极高、反应简单快速、高特异性和反应结果只需肉眼观察的特点,LAMP法已广泛应用于病毒、细菌等的定性定量检测和临床疾病的诊断.本文介绍了LAMP方法的原理及其在微生物分子检测方面的应用.     

LAMP技术对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的快速鉴定

目的建立基于环介导等温扩增(LAMP)技术进行快速鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法。方法采集自鼻拭子样品的MRSA菌株,针对MRSA耐药因子mec A所在基因组岛SCCmec,挑选具有高保守性的边界末端开放阅读框,设计特异性引物,进行LAMP快速检测,优化和确定LAMP反应体系和条件。结果以PCR法作为对照,LAMP检测MRSA的灵敏度为8×10~3 CFU/ml,PCR的灵敏度为8×10~5 CFU/ml。同时,LAMP快速检测法的检出率与特异性分别达92.7%与100.0%。结论 LAMP是可应用于MRSA检测的灵敏和特异性方法。     

环介导等温扩增技术在脑膜炎奈瑟菌检测中的应用

目的应用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术建立一种快速敏感的脑膜炎奈瑟菌属检测方法。方法对脑膜炎奈瑟菌种属基因(ctr A)序列的6个区域设计4条LAMP引物(2条内引物、2条外引物),同时设计2条环引物,并对反应条件和反应体系进行优化。分别验证该方法的特异性及敏感性,并与PCR检测方法进行比较。结果适宜反应条件所设计引物对脑膜炎奈瑟菌采用LAMP扩增技术,其特异性及敏感性均高于PCR检测。结论本实验建立的LAMP方法能够快速、灵敏、特异地检测脑膜炎奈瑟菌。相比普通PCR更快速,在60 min内即可完成扩增反应,扩增效率高,反应不需要精密控温设备和高级复杂的分析仪器,对操作人员的熟练度和专业水平要求不高,适合基层检验部门及小型实验室与现场监测等使用。     

LAMP技术在肺部非典型感染病原体检测中的应用

目的探讨利用现代生物技术开发一套可以快速、准确而且高通量检测肺部3种常见非典型感染病原体的检测方法。方法采用环介导等温核酸扩增技术(LAMP)对导致肺部非典型感染的肺炎支原体、肺炎衣原体及嗜肺军团菌3种常见病原体的特异性DNA片段进行扩增,结合基因芯片杂交技术鉴定这3种肺部非典型感染的病原体。结果采用LAMP技术对目的核酸进行扩增,肺炎支原体、肺炎衣原体及嗜肺军团菌3种致病菌特异性核苷酸片段同时布阵在一张芯片上,证明该鉴定系统可检测出的DNA浓度为104拷贝大小,特异性高,芯片质量稳定。结论 LAMP技术结合基因芯片杂交技术可发挥独特的检测优势,能为常见的肺部非典型感染病原体最终鉴定提供进一步佐证,可提高检验鉴定结果的准确性,具有简便快速、灵敏度高、特异性好等优势。     

环介导等温扩增过程监测与结果分析技术研究进展

2000年,Notomi等[1]建立了一种新颖的核酸扩增方法—环介导等温扩增(loop-mediated isothermalamplification,LAMP)。该技术利用4种不同的特异性引物识别靶基因的6个特定区域,在恒温条件进行反应,不需要模板的热变性和长时间温度循环。较之于传统的PCR方法,其不但简便、快速、不需要昂贵     

产肠毒素大肠杆菌快速检测方法的建立和评价

目的 利用环介导等温扩增（LAMP）技术,建立产肠毒素大肠杆菌（ETEC）的快速、便捷、敏感、特异的检测方法,并对该方法的特异性和敏感性进行评价,为实验动物检测和细菌性腹泻的诊断提供技术支持。方法 根据GenBank公布的产肠毒素大肠杆菌的LT毒素基因序列（S60731.1）设计外引物和内引物进行LAMP扩增,对LAMP特异性和敏感性与PCR方法做比较。结果 建立的LAMP方法检测限为100pg,灵敏度是PCR的10倍以上并具有较高的特异性,利用该方法对27份猴腹泻样品进行LAMP和PCR方法检测, LAMP（60min内）检测结果与PCR符合率为100%,而LAMP（90分钟内）检测敏感性高于PCR。结论 建立了一种用于检测肠毒性大肠杆菌（ETEC）的LAMP检测方法,该方法特异性强,灵敏度高,方便快捷,适合于ETEC临床快速检测。