HGF对肝癌SMMC-7721细胞株上皮—间叶转化蛋白表达的影响

目的探讨肝细胞生长因子（HGF）对肝癌SMMC-7721细胞株细胞外上皮—间叶转化蛋白基质蛋白的影响及可能作用途径。方法分别用HGF和PI3激酶抑制物LY294002处理肝癌SMMC-7721细胞,流式细胞技术检测SMMC-7721细胞株N-cad、E-cad、MMP-2、MMP-9、Vimentin表达水平。结果与对照组比较,HGF组N-cad、MMP-2、MMP-9、Vimentin表达明显升高、E-cad表达明显降低。LY294002预处理后,MMP-2、MMP-9的表达较HGF处理组明显下降,E-cad表达升高,N-cad和Vimentin变化不明显。结论 HGF可促进SMMC-7721的上皮间叶转化,该作用可能通过PI3激酶途径实现。     

肝细胞生长因子对肝癌细胞系SMMC-7721失巢凋亡的影响

目的:探讨HGF对SMMC-7721失巢凋亡的影响以及P13K在该过程中的作用.方法:悬浮培养SMMC-772l,建立失巢凋亡模型.应用TUNEL染色观察凋亡率.分别悬浮培养SMMC-7721、HGF处理后SMMC-721及LY294002预处理后的HGF处理细胞,用台盼蓝染色观察细胞失巢凋亡后存活率,用MTT检测细胞的增殖能力的变化,流式细胞仪检测失巢凋亡细胞的早、晚期凋亡率,Hoechst染色观察不同处理细胞的凋亡情况.应用免疫印迹技术检测失巢凋亡后Akt、p-Akt、FAK、p-FAK的表达.结果:TUNEL染色显示,悬浮培养的SMMC-7721失巢凋亡率远大于贴壁培养的SMMC-7721(21.72%±6.85% vs 66.67%±7.66%,P<0.05);台盼蓝染色显示,HGF处理后的SMMC-7721存活率明显高于悬浮培养细胞(P<0.05),而HGF不能提高经LY294002预处理后细胞的存活率:MTT实验显示HGF处理细胞A值明显大于悬浮培养细胞(P<0.05),LY294002预处理细胞与悬浮培养细胞相似.流式细胞仪和Hoechst 33258染色均显示HGF处理后细胞的失巢凋亡明显低于悬浮培养细胞(P<0.05),而经LY294002处理后细胞的失巢凋亡率明显升高.蛋白印迹结果显示HGF处理后细胞Akt、FAK、p-Akt、p-FAK的表达均升高,而经LY294002预处理后,其表达与悬浮培养SMMC-7721一致.结论:在肝细胞癌SMMC-7721失巢凋亡过程中,HGF通过活化Akt和FAK来增强细胞的抗失巢凋亡能力,该作用受P13K的调节.     

肝细胞生长因子对肝细胞癌侵袭和转移的影响

目的:研究HGF对肝细胞癌SMMC-7721的上皮-间叶转化的作用,并对其机制进行探讨.方法:HGF处理SMMC-7721后,应用细胞培养、Transwell、划痕实验、WB技术研究HGF对肝癌细胞SMMC-7721上皮-间叶转化的作用.并应用P13 kinase抑制物LY294002 10umol/L顸处理细胞,观察SMMC-7721的变化,研究P13 kinase对于HGF作用机制的影响.结果:Transwell和划痕实验显示HGF处理的细胞侵袭和转移能力增强,蛋白印迹结果显示HGF处理的细胞的N-cad、MMP-2、MMP-9和Vimentin的表达增加,E-cad的表达减少.LY294002预处理后,细胞不再受HGF的影响,细胞的形态没有明显变化.Transwell和划痕实验结果与未经处理的SMMC-7721相同.蛋白印迹结果显示:细胞的N-cad、MMP.2、MMP-9、Vimacntin和E-cad的表达变化不明显.结论:HGF能够促进SMMC-7721的上皮间叶转化,这种作用通过PD Kinase实现.     

肝细胞生长因子的抗鼠心肌细胞凋亡作用与抑制钙敏感受体有关

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)在缺血再灌注损伤中的抗细胞凋亡作用与钙敏感性受体(CaSR)mRNA表达下调的关系.方法 分离的新生鼠心肌细胞,随机分为对照组、模拟心肌缺血再灌注组(I/R组)、特异性CaSR激活剂GdCl3组(GdCl3组)、GdCl3+Na+/Ca2+交换抑制剂NiCl2+L-型钙通道阻滞剂CdCl2组(GdCl3+NiCl2+CdCl2组)、GdCl3+选择性PI3K阻断剂LY294002组(GdCl3+LY294002组)、GdCl3+肝细胞生长因子HGF组(GdCl3+HGF组)、GdCl3+HGF+LY294002组.新生鼠心肌细胞经缺氧处理后在缺血缓冲液中培养2 h,然后在标准培养液中培养24 h,建立模拟心肌缺血再灌注(I/R)模型.TUNEL法检测各组心肌细胞凋亡情况.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定各组CaSR mRNA表达.Western blot测定促凋亡蛋白Caspase-3,抗凋亡蛋白Bcl-2和磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K).结果 模拟的I/R增强了CaSR mRNA的表达(I/R组:2.62±0.41,对照组:1.00±0.31,P＜0.01)及心肌细胞的凋亡[I/R组:(15.32±2.54)%,对照组:(2.90±1.45)%,P＜0.01].GdCl3进一步增强了CaSR mRNA的表达(GdCl3组:4.46±0.62,I/R组:2.62±0.41,P＜0.01)及心肌细胞的凋亡[GdCl3组:(25.36±2.60)%,L/R组:(15.32±2.54)%,P＜0.01],同时上调了Caspase-3(GdCl3组:1.93±0.28,I/R组:1.50±0.21,P＜0.01),下调了Bcl2的表达(GdCl3组:0.82±0.18,I/R组:1.71±0.30,P＜0.01),抑制了PI3K的磷酸化(I/R组:0.87±0.08,GdCl3组:0.61±0.07,P＜0.01).GdCl3+LY294002组心肌细胞凋亡率显著高于GdCl3组[(32.60±3.42)%比(25.36±2.60)%,P＜0.01],但两组间CaSR mRNA的表达差异无统计学意义.HGF通过抑制Caspase-3(GdCl3+HGF组:1.12±0.23,GdCl3组:1.93±0.28,P＜0.05;GdCl3+HGF+LY294002组:1.87±0.31,GdCl3+LY294002组:3.86±0.47,P＜0.05)和促进Bcl-2的表达(GdCl3+HGF组:2.56±0.54,GdCl3组:0.82±0.18,P＜0.05;GdCl3+HGF+LY294002组:1.68±0.28,GdCl3+LY294002组:0.68±0.13,P＜0.05)减少了I/R和GdCl3诱导的心肌细胞凋亡[GdCl3+HGF组:(11.8±1.89)%,GdCl3组:(25.36±2.60)%,P＜0.05],同时促进了PI3K的磷酸化(GdCl3+HGF组:2.87±0.21,GdCl3组:0.61±0.07,P＜0.05;GdCl3+HGF+LY294002组:2.01±0.14,GdCl3+LY294002组:0.44±0.10,P＜0.05)、下调了CaSR mRNA的表达(GdCl3+HGF组:1.46±0.37,GdCl3组:4.46±0.62,P＜0.01).结论 HGF对心肌细胞的保护作用在I/R诱导的新生鼠心肌细胞凋亡中至少部分与抑制CaSR mRNA表达、促进PI3K的磷酸化途径活化从而下调Caspase-3和上调Bcl-2有关.     

HGF过表达对慢阻肺小鼠肺功能、肺动脉压力的影响及其作用机制

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)过表达对慢性阻塞性肺疾病小鼠肺功能、肺动脉压力的影响及相关机制。方法取30只小鼠建立慢阻肺模型,随机分为模型组、HGF组、HGF+PI3K抑制剂LY294002组,各10只,另取10只小鼠设为对照组。各组小鼠给予相应处理后,采用实验仪器检测肺功能和肺动脉压力指标,ELISA法检测肺组织爱帕琳肽(Apelin)水平,RT-PCR检测肺组织HGF mRNA表达量,Western blot检测肺组织相关蛋白表达量,TUNEL法检测肺组织细胞凋亡。结果与对照组比较,模型组小鼠mPAP水平升高,TV、PEF、PIF、FEV0.3、FEV0.3/FVC、Apelin水平降低,肺组织HGF mRNA和蛋白表达量降低,Caspase-3表达量和细胞凋亡率升高,Bcl-2表达量、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt比值降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。HGF过表达可显著逆转模型组上述指标水平,LY294002显著抑制HGF过表达对慢阻肺小鼠的作用效果。结论HGF可通过增加Apelin水平、抑制细胞凋亡改善慢阻肺小鼠肺功能和肺动脉压力,其作用机制可能与PI3K/Akt信号通路的激活相关。     

缺氧环境中黏着斑激酶对SMMC-7721细胞侵袭能力的影响

目的 研究缺氧对人肝癌细胞SMMC-7721黏着斑激酶(FAK)表达的影响以及FAK表达对SMMC-7721细胞侵袭能力的影响.方法 通过1%体积分数O2的低氧培养建立人肝癌细胞SMMC-7721物理缺氧模型,Western blot检测FAK的表达.构建针对FAK mRNA的干扰质粒pshRNA-FAK及阴性对照质粒pGensil-2,并将其转染至SMMC-7721细胞,G418筛选稳定转染细胞株.Western blot检测FAK蛋白表达的变化,细胞迁移和侵袭实验检测缺氧条件下细胞迁移和侵袭能力的改变.在正常条件下将FAK真核表达质粒pcDNA3-FAK转染至SMMC-7721细胞,观测其侵袭能力的改变.根据数所资料的不同分别采用t检验、单因素方差分析,LSD法及Dunnett法进行统计学处理. 结果低氧培养的SMMC-7721细胞FAK蛋白表达水平逐渐升高,24 h后较0 h时明显升高(P<0.01).SMMC-7721细胞稳定转染pshRNA-FAK后,FAK蛋白表达显著下降,抑制率达74.6%±5.1%,在正常及缺氧条件下都对FAK表达有显著抑制作用.细胞迁移实验结果显示,缺氧显著促进SMMC-7721细胞迁移能力(t=18.66,P<0.01),侵袭实验结果与迁移实验结果一致.转染pshRNA-FAK对促进SMMC-7721细胞在缺氧环境中的迁移能力有显著抑制作用,透膜细胞数(353±36)个较对照组(392±31)个明显降低(F=173.983,P<0.05);细胞侵袭实验显示,转染pshRNA-FAK对促进SMMC-7721细胞侵袭能力有显著抑制作用,透膜细胞数(160±12)个较对照组(194±13)个明显降低(F=59.674,P<0.05).同时转染真核表达质粒pcDNA3-FAK显著促进SMMC-7721细胞侵袭能力.结论 缺氧促进SMMC-7721细胞侵袭可能与FAK表达水平升高相关,FAK表达的上调可能是缺氧促进肝癌细胞侵袭转移的机制之一.     

非小细胞肺癌中PI3K/Akt信号通路通过Cdh1调控Skp2表达的机制研究

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）中Cdc20同源蛋白1（Cdh1）参与磷脂酰肌醇三羟基激酶（PI3K）/Akt信号通路对S期激酶相关蛋白2（Skp2）表达调控的机制。方法体外培养NSCLC细胞系A549、LK2和H460,LY294002特异性阻断PI3K/Akt信号通路后,Western blot检测Skp2、Cdh1及p-Akt蛋白表达的变化,免疫荧光（IF）检测Cdh1在NSCLC中的定位变化。结果 LY294002处理后,与对照组相比3种细胞中Skp2蛋白表达和Akt磷酸化水平均降低（P〈0.01）,Cdh1在3种细胞的核内表达均增多。结论 NSCLC中PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002使Skp2蛋白表达下调与Cdh1由细胞质向细胞核转位有关。     

玻璃酸钠通过干扰HGF/c-Met介导的MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路抑制胃癌细胞增殖

目的 分析玻璃酸钠影响肝细胞生长因子(HGF)受体(c-Met)介导的人胃癌(GC)AGS细胞增殖及其作用机制。方法 应用不同浓度的玻璃酸钠作用于AGS细胞。应用HGF激活c-Met。细胞增殖与毒性检测试剂盒(CVTK)测定细胞增殖；Western印迹测定c-Met酪氨酸(Tyr)1234位点磷酸化(p-c-Met-Y1234)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(p-MEK)、磷酸化细胞外调节激酶(p-ERK)1/2、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)相对蛋白表达。结果 HGF明显促进AGS细胞增殖，并诱导细胞内p-c-Met(Y1234)、p-MEK1/2、p-ERK1/2、p-PI3K、p-AKT明显高表达(P<0.05);不同浓度玻璃酸钠作用细胞后，由HGF引起的细胞增殖明显受到抑制，p-c-Met(Y1234)、p-MEK1/2、p-ERK1/2、p-PI3K、p-AKT表达水平显著降低(P<0.05)。结论 璃酸钠通过抑制人AGS细胞的c-Met酪氨酸磷酸化，调控HGF/c-Met介导的MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路，进而抑...     

IL-8对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的探讨白细胞介素-8(IL-8)在肝癌细胞中的表达及其对增殖、迁移、侵袭的影响并分析其可能作用机制。方法采用qRT-PCR与Western blot方法分别检测肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721及正常肝细胞L02中IL-8 mRNA和蛋白表达水平。将IL-8 siRNA转染至HepG2细胞,MTT检测沉默IL-8对HepG2细胞增殖能力的影响,Transwell迁移及侵袭实验检测沉默IL-8对HepG2细胞迁移及侵袭能力的影响,采用qRT-PCR与Western blot方法分别检测MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达水平。Western blot法检测沉默IL-8对磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路蛋白表达的影响。HepG2细胞中加入PI3K/Akt信号通路抑制剂(LY294002),观察其对HepG2细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果相较于L02相,肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721中IL-8 mRNA及蛋白表达均显著升高(P 0. 05); HepG2细胞中敲低IL-8后细胞增殖、迁移及侵袭能力均明显减弱,MMP-2、MMP-9及PI3K、p-AKT表达水平均明显降低;加入LY294002可明显抑制HepG2细胞增殖、迁移及侵袭能力。结论 IL-8可能通过激活PI3K/Akt信号通路进而增强肝癌细胞增殖、迁移、侵袭能力。     

甲胎蛋白激活PI3K/AKT信号促使肝癌Bel 7402细胞抗全反式维甲酸诱导凋亡

目的 研究甲胎蛋白(AFP)对肝癌细胞内PI3K/AKT信号传递的影响,以及其在癌细胞耐受全反式维甲酸(ATRA)中的作用. 方法 四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测ATRA对人肝癌Bel 7402细胞增殖的影响;显微照相观察细胞形态学的改变;流式细胞分析细胞凋亡;激光共聚焦显微镜观察AFP与PTEN的共定位;免疫共沉淀(Co-IP)技术研究AFP与PTEN相互作用;Westemblot法分析磷酸化的蛋白激酶B(pAKT)和Src表达,构建干扰AFP表达的载体(AFP-siRNA)并转染Bel 7402细胞;用PI3K特异性阻断剂Ly294002处理细胞,分析Ly294002的作用效果.通过t检验分析组间的统计学差异. 结果 MTT分析显示,人肝癌Bel 7402耐受ATRA的细胞毒性;共聚焦显微镜观察显示AFP与PTEN共定位于细胞质;Co-IP技术研究发现AFP能与PTEN结合;MTT分析发现,Bel 7402细胞转染AFP-siRNA载体后24 h后,细胞生长显著受抑制,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),而且AFP-siRNA载体和ATRA共同处理组,细胞生长受到抑制更为显著,与对照组、单独处理组比较,差异均有统计学意义(P＜ 0.01);干扰AFP表达能显著增加Bel 7402细胞对ATRA敏感性,并能抑制pAKT和Src的表达;Ly294002能抑制AFP促进Bel 7402细胞表达pAKT和Src的作用.结论 肝癌细胞内表达的AFP能与PTEN结合并抑制PTEN对AKT的去磷酸化作用,肝癌细胞内高表达的AFP能激活PI3K/AKT信息通路对抗ATRA诱导的凋亡.     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP     

Lack of correlation of degree of villous atrophy with severity of clinical presentation of coeliac disease

BACKGROUND AND AIM: Both the clinical presentation and the degree of mucosal damage in coeliac disease vary greatly. In view of conflicting information as to whether the mode of presentation correlates with the degree of villous atrophy, we reviewed a large cohort of patients with coeliac disease. PATIENTS AND METHODS: We correlated mode of presentation (classical, diarrhoea predominant or atypical/silent) with histology of duodenal biopsies and examined their trends over time. RESULTS: The cohort consisted of 499 adults, mean age 44.1 years, 68% females. The majority had silent coeliac disease (56%) and total villous atrophy (65%). There was no correlation of mode of presentation with the degree of villous atrophy (p=0.25). Sixty-eight percent of females and 58% of males had a severe villous atrophy (p=0.052). There was a significant trend over time for a greater proportion of patients presenting as atypical/silent coeliac disease and having partial villous atrophy, though the majority still had total villous atrophy. CONCLUSIONS: Among our patients the degree of villous atrophy in duodenal biopsies did not correlate with the mode of presentation, indicating that factors other than the degree of villous atrophy must account for diarrhoea in coeliac disease.