组织因子表达影响阿霉素诱导人神经母细胞瘤凋亡的研究

目的 研究组织因子（TF）表达对阿霉素诱导人神经母细胞瘤细胞凋亡的影响。方法 以Western印迹法检测TF表达，以WST法检测阿霉素的细胞毒性。以Western印迹法检测阿霉素诱导的Caspase-3、PARP的裂解，以Hochest33342染色，倒置荧光显微镜下检测凋亡细胞。结果 人神经母细胞瘤系SH-EP1高表达TF而SK-N-SH细胞系中TF表达水平低。以TF基因表达载体TF-pcDNA3转染SK-N-SH细胞，显著增强其TF表达水平。以不同浓度阿霉素处理48h后，可见转染TF-pcDNA3的SK-N-SH细胞的存活数较对照细胞明显增多。转染TF-pcDNA3的SK-N-SH细胞及转染pcDNA3质粒的对照细胞分别以阿霉素处理4h、8h、24h，可见转染TF基因的细胞与对照细胞相比，Caspase．3、PARP裂解减弱。以Hochest33342染色检测到转染TF-pcDNA3的SK-N-SH细胞经阿霉素处理后的凋亡细胞数为134．33±21．00，与转染pcDNA3的对照组相比（232．33±8．84）显著减少（P〈0．05）。结论TF在人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH中的强制表达，可抑制阿霉素诱导的肿瘤细胞凋亡。肿瘤细胞中TF的异常高表达可能参与阿霉素诱导细胞凋亡的调控，影响肿瘤细胞对化疗药物的耐受性和疾病进展。     

内质网应激下肝癌细胞Akt和ERK通路间的cross-talk研究

目的 研究内质网应激介导的肝癌细胞PI3K/AKt和MEK/ERK途径间的信号交流。方法 采用PI3K抑制剂LY294002/Akt激活型突变载体myr-Akt和MEK抑制剂U0126分别阻断/激活内质网应激介导的Akt和ERK活化,并利用Western blot分析内质网应激条件下PI3K/Akt和MEK/ERK途径间的信号交流。结果 阻断PI3K/Akt明显促进内质网应激介导的MEK/ERK活化,而过度激活PI3K/Akt则抑制内质网应激介导的MEK/ERK活化。阻断MEK/ERK对内质网应激介导的PI3K/Akt活化无影响。结论 PI3K/Akt和MEK/ERK信号途径问在内质网应激肝癌细胞中存在信号交流。     

激活PI3K/Akt信号通路抗少突胶质细胞凋亡的研究

目的探讨在脑室周围白质软化的早产大鼠中,脑组织PI3K/Akt通路的磷酸化激活情况,以及神经生长因子是否有抗少突胶质细胞凋亡的作用。方法本实验研究在早产大鼠脑室周围白质软化后,脑组织中少突胶质细胞的凋亡情况。给予神经生长因子,比较脑组织中Akt磷酸化激活情况及相应少突胶质细胞凋亡改变。结果早产大鼠脑损伤后,脑组织中少突胶质细胞凋亡急剧增加,给予神经生长因子后,脑组织中Akt磷酸化激活明显增加,相应少突胶质细胞凋亡明显减少。结论神经生长因子对脑损伤的保护机制与其增强PI3K/Akt信号转导通路的激活有关,激活PI3K/Akt信号转导通路可防治脑损伤刺激后的少突胶质细胞的凋亡。     

FOXP2调控PI3K/Akt信号通路抑制胶质瘤的侵袭

目的：探讨叉头框P2基因（FOXP2）对胶质细胞瘤细胞侵袭的影响。方法：采用荧光定量PCR技术与Western blot分别检测FOXP2在正常星型胶质细胞与胶质瘤细胞中的核糖核酸与蛋白表达水平。用携带FOXP2基因慢病毒质粒转染胶质瘤细胞U87和U251细胞系,通过划痕实验、Transwell侵袭实验和Western blot观察其对胶质瘤细胞侵袭性以及PI3K、Akt蛋白的影响。结果：FOXP2的表达在胶质瘤细胞U87和U251中明显低于正常星型胶质细胞。上调FOXP2后,胶质瘤细胞U87和U251细胞侵袭性明显降低,Akt与PI3K表达明显降低。结论：FOXP2通过调控PI3K/Akt通路可以在一定程度上抑制胶质瘤细胞的侵袭能力,从而延缓胶质瘤的发生发展。     

片仔癀通过PI3K/Akt信号通路诱导人骨肉瘤U2OS细胞凋亡

目的探讨片仔癀诱导骨肉瘤U2OS细胞凋亡与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）途径的关系。方法采用不同浓度片仔癀（0.4，0.8，1.2mg/mL）作用U2OS细胞，采用MTT法检测片仔癀对U2OS细胞增殖的影响；Hoechst 333258染色观察细胞凋亡情况；Western blot检测PI3K调节亚基p85α（PI3K p85α）、磷酸化PI3K调节亚基p85α（p-PI3K p85α）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、核多聚（ADP-核酶）聚合酶（PARP）、裂解PARP（Cleaved PARP）等PI3K/Akt途径相关蛋白的表达。结果片仔癀可明显抑制U2OS细胞的增殖，呈时间和浓度依赖性，诱导U2OS细胞凋亡；Western blot显示p-PI3K p85α、p-Akt蛋白表达明显下调，Cleaved PARP表达量增加，与空白对照组相比有明显差异（P<0.05）。结论片仔癀可通过抑制PI3K/Akt信号途径PI3K p85α、Akt磷酸化，促进PARP裂解，诱导骨肉瘤U2OS凋亡。     

太白银莲花皂甙-1诱导胶质瘤U87MG细胞凋亡及机制研究

目的 研究太白银莲花皂甙-1对人脑胶质母细胞瘤U87MG凋亡的影响,并探讨其可能的分子机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度不同时间(6、24、48、72 h)太白银莲花皂甙-1对U87MG细胞生长增殖的抑制作用;应用倒置显微镜和Hoehst荧光染色、末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记法(TUNEL)、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)检测太白银莲花皂甙-1作用U87MG细胞后形态的变化和凋亡情况;通过免疫印迹法法检测太白银莲花皂甙-1处理后细胞凋亡相关蛋白Survivin及活化的Caspase-3的表达.结果 太白银莲花皂甙-1可明显抑制U87MG细胞的增殖,诱导其凋亡;同时下调Survivin表达,激活了凋亡蛋白Activated Caspase-3的表达.结论 体外实验显示,太白银莲花皂甙-1对U87MG细胞具有显著的增殖抑制作用,并能成功诱导人脑胶质母细胞瘤U87MG细胞发生凋亡,其机制可能与抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡有关.     

PI3K/Akt和MAPK信号通路在缺血性脑损伤中的保护作用

磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路是细胞内重要的信号转导通路。研究发现PI3K/Akt和MAPK信号通路经下游多种靶点,即内皮型一氧化氮合酶、糖原合成酶激酶3、核因子κB、细胞外信号调剂激酶等促进脑缺血后神经细胞的存活PI3K/Akt和MAPK这两条信号通路在缺血性脑损伤中发挥重要的作用,在一定条件下,这两条信号通路的激活可以通过上述途径有效抑制神经元细胞的凋亡而发挥脑保护的作用。     

PI3K/Akt抑制剂对内质网应激下肝癌细胞MEK/ERK途径的影响

目的:研究内质网应激介导的PI3K/Akt抑制剂对肝癌细胞MEK/ERK途径的影响。方法:采用PI3K抑制剂LY294002/激活型突变载体myr-Akt分别阻断/激活内质网应激介导的Akt和ERK活化,并利用Western blot ting技术分析内质网应激条件下PI3K/Akt和MEK/ERK途径间的关系。结果:阻断PI3K/Akt促进内质网应激介导的MEK/ERK活化,过度激活PI3K/Akt则抑制内质网应激介导的MEK/ERK活化。结论:PI3K/Akt和MEK/ERK信号途径间在内质网应激肝癌细胞中可能存在信号交流。     

磷脂酰肌醇-3激酶/Akt在体外神经干细胞存活和分化中作用的实验研究

目的:探讨磷脂酰肌醇-3激酶/Akt信号途径在体外培养神经干细胞存活、分化中的作用.方法:分为对照组、wortmannin组和LY294002组;免疫组化检测Nestin、NSE和S100的表达;TUNEL评价细胞凋亡率;Western Blotting检测磷酸化Akt、Caspase-9的表达.结果:随着wortmannin和LY294002浓度增大,细胞凋亡率逐渐增加.随着wortmannin和LY294002浓度增大,磷酸化Akt的表达逐渐减弱.高浓度时磷酸化的Caspase-9表达减弱.结论:神经干细胞存活依赖于PI3K/Akt途径的活化,其机制可能是PI3K/Akt活化后,促进了Caspase-9等蛋白的磷酸化,抑制了细胞凋亡事件的发生.     

P13K/Akt通路在药物放射增敏中作用的机制

目的 进一步探讨PI3K/Akt信号转导途径在药物放射增敏中作用的分子机制.方法 体外培养HeLa细胞,多西紫杉醇(docetaxel)和顺铂(cisplatin)单独及分别联合P13K抑制剂LY294002作用24 h,X线6 Gy剂量照射;Western blot检测Akt、磷酸化Akt(pAkt)、Bad、磷酸化Bad(pBad)蛋白的表达变化;RT-PCR检测Bad、Ku70、Ku80 mR-NA的表达变化;中性彗星电泳检测不同处理组细胞DNA的损伤.结果 ①docetaxel+LY294002联合照射组、cispla-tin+LY294002联合照射组Bad mRNA表达增高,Ku70 mRNA表达减低,Ku80 mRNA表达无明显变化;②docetaxel+LY294002联合照射组、cisplatin+LY294002联合照射组Bad蛋白表达增高,pAkt、pBad蛋白表达减低,Akt蛋白表达无明显变化;③docetaxel+LY294002联合照射组、cisplatin+LY294002联合照射组细胞彗星电泳尾距明显长于单纯药物增敏照射组.结论 ①docetaxel和cisplatin药物增敏照射能够明显活化PI3K/Akt信号转导途径;②抑制PI3K/Akt信号转导途径能够抑制Ku70表达,减少细胞DNA损伤后的再修复,提高促凋亡因子Bad的表达,促进细胞的凋亡.     

Down-regulation of Tissue Factor by siRNA Increased Doxorubi-cin-induced Apoptosis in Human Neuroblastoma

The effects of tissue factor (TF) on doxorubicin-induced apoptosis in human neuroblas-toma were investigated. The expression of TF was examined by Western blotting. TFsiRNA-pSUPER plasmid was constructed by inserting specific 19-nt silencing sequence targeting TF gene into pSU-PER vector. Transfection of TFsiRNA-pSUPER was performed using lipofectamine2000. The cytotox-icity of doxorubicin was determined by WST assay. The activation of Caspase-3 and PARP induced by doxorubicin was tested by Western blotting. The apoptotic cells were stained by Hochest33342 and counted under fluorescence inverted microscope. It was found that human neuroblastoma cell line SK-N-MC expressed high level of TF. Knockdown of the TF expression was achieved by trans-fection of TFsiRNA-pSUPER on SK-N-MC cells in a dose-dependent manner. Inhibition of TF sig-nificantly decreased the viability of transfected SK-N-MC cells treated with different concentrations of doxorubicin. Cleavage of Caspase-3 and PARP was enhanced in transfected SK-N-MC cells with down-regulation of TF. TFsiRNA treatment significantly increased the number of apoptotic cells in transfected SK-N-MC cells as compared with those control cells (P<0.05) when these cells were ex-posed to 1 μg/mL doxorubicin for 8 h. These results suggested that knockdown of the TF expression by specific siRNA vector could increase the cytotoxicity of doxorubicin and enhance doxorubi-cin-induced apoptosis in human neuroblastoma cells. Over-expression of TF might contribute to chemotherapy resistance in human neuroblastoma and its progression, at lest in part, by regulating doxorubicin-induced apoptosis.     

联合阻断哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路及其旁路激活通路对胶质瘤细胞生长的抑制机制

目的 筛选敲减哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因后胶质瘤细胞表达上调的基因及信号通路,探讨联合阻断mTOR信号通路及其旁路激活通路抑制胶质瘤细胞生长的有效性.方法 选取5种人胶质瘤细胞系(U87、U251、U373、T98、LN229),采用蛋白质印迹法验证mTOR蛋白表达.构建靶向mTOR基因的短发夹RNA稳定转...     

叔丁基羟基茴香醚对双香豆素加强阿霉素毒性的保护作用及其机制

目的：探讨叔丁基羟基茴香醚（ＢＨＡ）对双香豆素加强阿霉素毒性的保护作用及其抗氧化机制。方法：小鼠随机分为以下各组：正常对照组，双香豆素组，阿霉素组，双香豆素＋阿霉素组和ＢＨＡ＋双香豆素＋阿霉素组，每组６只。血清醌还原酶（ＱＲ）、ＡＬＴ、ＬＤＨ和ＣＫ催化活性用酶动力学方法测定，肝丙二醛（ＭＤＡ）含量按硫代巴比妥酸方法测定。结果：经双香豆素处理组血清ＱＲ催化活性显著降低。与单给阿霉素组比较，双香豆素能显著增强阿霉素所致的血清ＡＬＴ、ＬＤＨ、ＣＫ催化活性升高，肝ＭＤＡ含量也增高。ＢＨＡ具有对抗双香豆素所引起的ＱＲ催化活性降低的作用，并具有显著降低双香豆素＋阿霉素所导致的ＡＬＴ、ＬＤＨ、ＣＫ及肝ＭＤＡ含量增高的作用。结论：双香豆素具有加强阿霉素对小鼠毒性的作用，而ＢＨＡ对双香豆素加强阿霉素毒性则显示出明显保护作用，其机制与ＢＨＡ增强ＱＲ催化活性及抗脂质过氧化作用有关     

丙戊酸钠增强阿霉素的体外抗乳腺癌作用

目的观察丙戊酸钠对阿霉素体外抗乳腺癌Hs578T细胞作用的影响。方法Western blot 检测缝隙连接蛋白Cx43 的表
达;MTT法检测阿霉素的细胞毒性;Annexin V/PI双染法观察阿霉素对细胞早期凋亡的影响;Hochest 33258荧光染色法检测阿
霉素对细胞晚期凋亡的影响。结果Western blot结果显示丙戊酸钠可以显著增强缝隙连接蛋白Cx43的表达（P<0.01）;MTT结
果表明在细胞间缝隙连接功能形成的条件下,丙戊酸钠联用阿霉素组的细胞存活率显著低于阿霉素组（P<0.01）;Annexin V/PI
双染法显示丙戊酸钠联用阿霉素组的细胞早期凋亡率显著高于阿霉素组（P<0.01）;Hochest 33258荧光染色结果显示丙戊酸钠
联用阿霉素组的细胞晚期凋亡率显著高于单用阿霉素组（P<0.01）。结论丙戊酸钠可显著增强阿霉素的细胞毒性及其诱导的
细胞凋亡作用,其机制可能与增强缝隙连接通讯功能有关。
     

氨氯地平衍生物CJX2对K562/DOX细胞阿霉素耐药的逆转作用

目的:研究氨氯地平衍生物CJX2对K562/DOX细胞阿霉素耐药的逆转作用。方法:应用流式细胞仪和MTT法观察了CJX2对K562/DOX细胞P-糖蛋白(P-glycoprotein,Pgp)的抑制作用及对K562/DOX细胞阿霉素耐药的逆转作用。结果:CJX2能剂量相关性地增加K562/DOX细胞对罗丹明123(rhodamine123,Rh123)的摄取以及细胞内Rh123的累积,明显抑制Pgp介导的Rh123外排,显著增强阿霉素对K562/DOX细胞的细胞毒作用,提高细胞caspase3活性,增加K562/DOX细胞内阿霉素水平。结论:氨氯地平衍生物CJX2能显著抑制Pgp的外排功能,逆转Pgp介导的K562/DOX细胞的多药耐药性。     

胶质瘤细胞BT325和U251凋亡相关因子的表达差异

目的比较BT325和U2512种胶质瘤细胞中凋亡相关因子的表达差异及其在凋亡中的作用。方法应用Western blot方法检测细胞中Fas、Caspase-3、Caspase-7、Survivin和Livin的表达情况。结果U251与BT325均有Fas、Caspase-3和Livin蛋白表达,BT325的Caspase-3含量高于U251,U251的Livin含量高于BT325;Survivin仅表达于U251;Caspase-7仅表达于BT325。结论BT325胶质瘤细胞中凋亡效应因子呈高表达,U251胶质瘤细胞中凋亡抑制因子呈高表达。     

Hesperidin as a preventive resistance agent in MCF-7 breast cancer cells line resistance to doxorubicin

Objective

To evaluate of hesperidin to overcome resistance of doxorubicin in MCF-7 resistant doxorubicin cells (MCF-7/Dox) in cytotoxicity apoptosis and P-glycoprotein (Pgp) expression in combination with doxorubicin.

Methods

The cytotoxic properties, 50% inhibition concentration (IC₅₀) and its combination with doxorubicin in MCF-7 cell lines resistant to doxorubicin (MCF-7/Dox) cells were determined using MTT assay. Apoptosis induction was examined by double staining assay using ethidium bromide-acridine orange. Immunocytochemistry assay was performed to determine the level and localization of Pgp.

Results

Single treatment of hesperidin showed cytotoxic activity on MCF-7/Dox cells with IC₅₀ value of 11 µmol/L. Thus, combination treatment from hesperidin and doxorubicin showed addictive and antagonist effect (CI>1.0). Hesperidin did not increase the apoptotic induction, but decreased the Pgp expressions level when combined with doxorubicin in low concentration.

Conclusions

Hesperidin has cytotoxic effect on MCF-7/Dox cells with IC₅₀ of 11 µmol/L. Hesperidin did not increased the apoptotic induction combined with doxorubicin. Co-chemotherapy application of doxorubicin and hesperidin on MCF-7/Dox cells showed synergism effect through inhibition of Pgp expression.     

绞股蓝总甙对阿霉素致膈肌毒性的拮抗作用

目的：探讨绞股蓝总甙对阿霉素致膈肌毒性的拮抗作用。方法：家兔随机分为对照组、阿霉素组和绞股蓝总甙＋阿霉素组,分别注射生理盐水,阿霉素（１０ｍｇ／ｋｇ）和绞股蓝总甙（１００ｍｇ／ｋｇ）＋阿霉素（１０ｍｇ／ｋｇ）,２４ｈ后测膈肌诱发电位（ＤＥＰ）及胯膈压（Ｐｄｉ）,电镜观察膈肌超微结构的变化,数据经方差分析和ｑ检验,结果：（１）与对照组相比,阿霉素能显著降低膈肌诱发电位幅度和跨膈压（Ｐ〈０．０１和Ｐ〈     

双氢青蒿素逆转人结肠癌耐药细胞耐药性的研究

【目的】评价双氢青蒿素逆转人结肠癌细胞HCT8/ADR耐药性的能力,研究其逆转耐药的机制。【方法】采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞术分别进行细胞毒性、细胞凋亡实验评价双氢青蒿素和阿霉素联合用药的药效,采用Western blot法研究逆转耐药的机制。【结果】双氢青蒿素和阿霉素联用后对人结肠癌耐药细胞有较高的毒性,能诱导耐药细胞凋亡,增强耐药细胞的自噬。【结论】双氢青蒿素能逆转耐药性,恢复耐药细胞对化疗药物的敏感性。