磷酸二酯酶1A参与调节转化生长因子β_1诱导的血管外膜成纤维细胞胶原表达

目的探讨环核苷酸依赖的磷酸二酯酶1A(PDE1A)在转化生长因子β_1(TGF-β_1)诱导的血管外膜成纤维细胞(AF)Ⅰ型胶原表达中的作用。方法采用组织块贴壁法培养 SD 大鼠胸主动脉 AF。Bradford 方法测定蛋白浓度,免疫印迹技术观察Ⅰ型胶原和 PDE1A 蛋白表达,Leica Qwin 软件进行图像灰度分析。结果 1)TGF-β_1上调Ⅰ型胶原蛋白表达呈时间和剂量依赖性,以 TGF-β_1(10 ng/mL)诱导 AF 24 h 上调Ⅰ型胶原蛋白表达最强,较诱导前上调(147.5±38.7)%(P<0.05)。2)TGF-β_1上调 PDE1A 蛋白的表达呈时间和剂量依赖性,TGF-β_1(20ng/mL)诱导 AF 24 h PDE1A 蛋白表达量达(302.7±86.3)%,较诱导前显著上调(P<0.01);3)非特异性 PDE 抑制剂 IBMX 和特异性 PDE1A 抑制剂 IC86340均显著抑制 TGF-β_1诱导的Ⅰ型胶原的表达,抑制率分别达24.6%和15.8%,(P<0.05,P<0.05)。结论 PDE1A 参与 TGFβ-1诱导的血管外膜成纤维细胞Ⅰ型胶原表达的调节。     

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1介导外膜成纤维细胞表型转化

目的探讨血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)是否参与血管外膜成纤维细胞(AF)表型转化。方法选取雄性SD大鼠,组织切块法培养胸主动脉AF,将未用转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的AF分别作为空白组、对照1和2组,用2.5、5.0、10.0和15.0ng/ml TGF-β1诱导AF依次为A、B、C和D组;分别用50μmol/L的EMD638683和SB203580预处理细胞为抑制剂1和2组;用5ng/ml TGF-β1刺激细胞分别为刺激1和2组。Western blot检测SGK1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白相对表达量。结果与空白组比较,A、B和C组SGK1表达显著增加(P0.05),B组SGK1表达量最高;B、C和D组α-SMA表达显著增加(P0.05),C组α-SMA表达量最高(P0.05)。与对照1组比较,刺激1组细胞α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白表达明显升高(P0.05),与刺激1组比较,抑制剂1组细胞α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白表达显著降低(P0.05);与对照2组比较,刺激2组细胞SGK1表达明显升高(P0.05),与刺激2组比较,抑制剂2组细胞SGK1表达显著降低(P0.05)。结论 SGK1通过p38促分裂素原活化蛋白激酶参与TGF-β1诱导的血管AF表型转化,参与血管的病理性重构。     

松弛素对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠血管外膜成纤维细胞胶原水平的影响

目的:探讨松弛素(RLX)对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的大鼠血管外膜成纤维细胞胶原水平的影响及机制。方法:体外培养大鼠主动脉外膜成纤维细胞,随机分为对照组、AngⅡ组(10-6 mmol/L),RLX组(100μg/L)及AngⅡ+RLX组。采用波形蛋白染色法鉴定血管外膜成纤维细胞,用RT-PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达,用Western blot印迹法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9及转化生长因子(TGF)-β1蛋白的表达。结果:AngⅡ可显著增加培养液上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量及TGF-β1蛋白表达,而RLX明显抑制AngⅡ的上述作用;AngⅡ可显著下调细胞内MMP-2和MMP-9的蛋白表达,而RLX明显抑制AngⅡ的上述作用(均P<0.05)。结论:AngⅡ可刺激血管外膜成纤维细胞胶原合成增加,而RLX通过上调MMP-2、MMP-9表达和下调TGF-β1表达,抑制AngⅡ刺激的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白生成,从而发挥抗血管纤维化作用。     

瑞舒伐他汀对TGF-β1诱导的新生大鼠心脏成纤维细胞增殖及其胶原合成与分泌的作用和机制

目的 探讨瑞舒伐他汀对转化生长因子β1 (TGF-β1)诱导的新生大鼠心脏成纤维细胞增殖及其胶原合成与分泌的作用和可能机制.方法 分离、培养新生SD大鼠的心脏成纤维细胞,采用CCK-8比色法测定细胞数目.用RT-PCR检测Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达,用ELISA测定Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白含量,用Western blot检测心脏成纤维细胞Akt的蛋白表达.结果 CCK-8比色法显示,瑞舒伐他汀能抑制TGF-β1引起的心脏成纤维细胞增殖;RT-PCR结果显示,瑞舒伐他汀能抑制TGF-β1诱导的Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达;ELISA结果显示,瑞舒伐他汀能抑制TGF-β1诱导的Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白分泌;Westernblot结果显示,瑞舒伐他汀能抑制TGF-β1诱导的Akt蛋白表达.结论 瑞舒伐他汀可能通过抑制TGF-β1诱导的新生大鼠心脏成纤维细胞增殖、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的合成与分泌来抑制TGF-β1诱导的心脏纤维化,其分子机制可能与抑制Akt信号通路有关.     

转化生长因子-β1和阿托伐他汀对人心房成纤维细胞Ⅰ型胶原和Smads蛋白表达的影响

目的 :通过转化生长因子-β1(TGF-β1)和阿托伐他汀对培养的人心房成纤维细胞进行干预,观察其Ⅰ型胶原,Smad2、Smad4和Smad7 m RNA及蛋白表达的变化,探讨心房纤维化和抗纤维化机制。方法 :通过心外科手术获得患者右心耳组织,并培养出人心房成纤维细胞;将细胞传代培养,应用四唑盐比色(MTT)法检测不同浓度(0、0.1、1.0、5.0、10.0、20.0、50.0 ng/ml)TGF-β1和不同浓度(0、0.1、1.0、10.0、100.0μmol/L)阿托伐他汀对心房成纤维细胞生长影响;应用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹杂交(Western blot)技术检测10.0 ng/ml TGF-β1、10.0μmol/L阿托伐他汀以及10.0 ng/ml TGF-β1+10.0μmol/L阿托伐他汀联合对心房成纤维细胞中Ⅰ型胶原,P-Smad2,Smad4和Smad7 m RNA和蛋白表达的变化。结果:MTT法检测示:与对照(0 ng/ml)比,1.0 ng/ml和10.0 ng/ml TGF-β1干预使心房成纤维细胞Ⅰ型胶原、P-Smad2、Smad4的m RNA和蛋白表达水平增高(P0.05),而Smad7的m RNA和蛋白表达水平减低(P0.05),差异均有统计学意义;与10.0 ng/ml TGF-β1相比,TGF-β1加用或单用阿托伐他汀(10.0μmol/L)心房成纤维细胞Ⅰ型胶原、P-Smad2、Smad4的m RNA和蛋白表达水平减低(P0.05),而Smad7 m RNA和蛋白表达水平增高(P0.05),差异均有统计学意义。结论:TGF-β1促进心房成纤维细胞增殖和Ⅰ型胶原表达,阿托伐他汀抑制其增殖和Ⅰ型胶原表达,可能是通过影响TGF-β1/Smads途径起作用。     

转化生长因子β1促风湿性心脏病心肌细胞胶原合成的调控机制

目的揭示转化生长因子β1(TGF-β1)促风湿性心脏病(风心病)心肌细胞胶原合成的信号转导机制.方法应用风心病患者心肌细胞体外培养模型,反转录-聚合酶链反应和Western蛋白印迹方法检测不同浓度人TGF-β1(5、10、20 μg/L)刺激风心病患者心肌细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA、Ⅰ型胶原蛋白、c-fos、c-jun和磷酸化c-jun (Phospho-c-jun) 的表达情况;以及蛋白激酶C(PKC)拮抗剂Staurosporine(SP)预处理对其作用的影响.结果人TGF-β1呈浓度依赖性的方式促进风心病患者心肌细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA、Ⅰ型胶原蛋白以及c-fos、c-jun、Phospho-c-jun的表达;SP预处理不仅抑制其表达,同时部分逆转人TGF-β1上调胶原基因和蛋白表达的效应.结论TGF-β1通过介导PKC的活化,激活核转录因子AP-1,上述信号分子共同参与风心病心肌细胞胶原合成的细胞内信号转导过程.     

促红细胞生成素抑制血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心脏成纤维细胞中转化生长因子β1和胶原的表达

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心脏成纤维细胞(CF)中转化生长因子(TGF)-β1蛋白表达和胶原生成的影响,以及磷脂酰肌醇-3-激酶(PD-K)/Akt信号途径和一氧化氮合酶(NOS)在其中的作用.方法 应用胰酶和胶原酶双酶法分离培养新生大鼠CF细胞,应用EPO、Ang Ⅱ、PI3-K抑制剂LY294002、NOS抑制剂L-NAME等不同因素干预.ELISA法检测CF中Ⅰ型和Ⅲ型胶原的浓度.化学酶法检测CF培养液中的NO浓度以及NOS总的活性及其亚型的活性.Western blot检测Akt、p-Akt、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、iNOS和TGF-β1蛋白的表达.结果 EPO剂量依赖性的抑制Ang Ⅱ诱导的CF培养液中Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达以及提高NO的浓度.10 U/ml的EPO对Ⅰ型和Ⅲ型胶原浓度的抑制分别达到了28%和46%,同时NO浓度则提高了154%.EPO也显著抑制了Ang Ⅱ促CF中TGF-β1蛋白的表达,同时Akt的磷酸化水平显著提高,并促进eNOS蛋白的表达.应用LY294002使eNOS蛋白表达水平明显下降,培养液中的NO浓度也随之下降.L-NAME不能降低eNOS蛋白表达,但抑制了NO的生成.EPO抑制Ang Ⅱ诱导的CF中TGF-β1蛋白的表达以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原合成作用均能被二者阻断.结论 EPO可抑制Ang Ⅱ诱导的新生大鼠CF中TGF-β1的表达以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达,可能是通过激活PI3-K/Akt信号途径促使CF中eNOS表达,从而促进NO的表达来实现.     

吡非尼酮抑制转化生长因子β1诱导肺成纤维细胞胶原合成的实验研究

目的:探讨吡非尼酮对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肺成纤维细胞胶原合成的影响及机制。方法 :以人胚胎肺成纤维MRC-5细胞为研究对象,用p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号抑制剂SB203580和吡非尼酮处理TGF-β1诱导的肺成纤维细胞,MTT检测细胞增殖, Western blot检测细胞中Ⅲ型胶原酶(ColⅢ)、I型胶原酶(ColⅠ)蛋白表达和p38MAPK磷酸化水平。结果:TGF-β1诱导处理后的肺成纤维细胞增殖能力升高,细胞中ColⅢ、ColⅠ和p38MAPK磷酸化水平升高。吡非尼酮处理可以降低TGF-β1诱导的肺成纤维细胞增殖能力,减少细胞中ColⅢ、ColⅠ和p38MAPK磷酸化蛋白表达。p38MAPK信号抑制剂SB203580处理具有协同吡非尼酮降低TGF-β1诱导的肺成纤维细胞增殖和表达蛋白ColⅢ、ColⅠ及p38MAPK磷酸化水平的作用。结论:吡非尼酮通过抑制p38MAPK信号,从而抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞胶原合成。     

肾上腺髓质素对血管外膜成纤维细胞迁移及胶原生成的影响

目的:探讨肾上腺髓质素(ADM)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管外膜成纤维细胞(AF)迁移及胶原生成的影响及机制。方法:体外培养大鼠胸主动脉AF,运用Trans well技术测定不同浓度ADM对AF迁移的影响,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量,用RT-PCR及Western blotting分析AngⅡ(10-6mol/L)及不同浓度ADM干预后大鼠胸主动脉AF内骨桥蛋白(OPN)、转化生长因子β1(TGFβ1)mRNA及蛋白的表达。结果:在AngⅡ(10-6mol/L)趋化作用下,AF迁移数目较对照组显著增多[(30.26±1.08)∶(4.35±1.26),P<0.01]。ADM可抑制AngⅡ刺激的细胞迁移,迁移细胞数目在一定范围内随着ADM浓度增加而减少;AngⅡ(10-6mol/L)诱导OPN呈高表达,ADM可下调这种表达,呈一定剂量依赖性;AngⅡ显著增加培养上清中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量,ADM呈剂量依赖的抑制AngⅡ上述作用,其中10-8mol/LADM组中Ⅰ、Ⅲ型胶原合成分别抑制了30%和31%(P<0.01),10-7mol/LADM组则分别抑制了43%和4...     

转换生长因子-β_1对肺成纤维细胞窖蛋白-1与细胞外基质表达的影响

目的 研究转换生长因子-β_1(TGF-β_1)对人胚肺成纤维细胞(HFLF)的窖蛋白-1、Ⅰ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.方法 体外培养HFLF,以未加TGF-β_1的HFLF为对照组.分别以不同终浓度(2、5和10 μg/L)TGF-β_1处理的HFLF为实验组,每组5×10~8细胞,实验重复3次,逆转录-PCR和Western blot法分别检测TGF-β_1刺激3、6、12和24 h后各组窖蛋白-1及其mRNA、Ⅰ型胶原和α-SMA蛋白表达.组间均值比较采用单因素方差分析,采用直线回归模型进行相关性分析.结果 TGF-β_1作用后,HFLF窖蛋白-1的mRNA和蛋白表达逐渐减少,呈时间-浓度依赖关系;TGF-β_1作用12 h,中剂量组(5 μg/L)窖蛋白-1的mRNA和蛋白表达的积分吸光度值(0.59±0.06和0.53±0.04)明显低于对照组(1.22±0.12和1.45±0.06),差异均有统计学意义(F值分别为29.279和95.786,均P＜0.01);TGF-β_1作用24 h,中剂量组(5 μg//L)Ⅰ型胶原和α-SMA蛋白表达的积分吸光度值(1.35±0.09和0.75±0.06)明显高于对照组(0.28±0.04和0.18±0.04),差异均有统计学意义(F值分别为81.221和65.477,均P＜0.01);相关分析结果显示,HFLF窖蛋白-1的蛋白表达下调与Ⅰ型胶原和α-SMA蛋白表达上调旱显著负相关(r值分别为-0.923和-0.793,均P＜0.05).结论 TGF-β_1可下调HFLF窖蛋白-1的mRNA和蛋门表达,并与Ⅰ型胶原和α-SMA蛋白表达上调呈负相关,提示HFLF窖蛋白-1下调可能与肺间质纤维化的发生和发展有关.     

转化生长因子-β1受体依赖的心肌纤维化伴随大电导钙激活钾通道的表达和功能下调

目的:探讨大电导钙激活钾通道(BKCa)是否参与转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的心肌纤维化过程,以及在这一过程中的作用机制。方法:分离培养乳大鼠心室成纤维细胞,并根据TGF-β1的不同浓度(5 ng/ml组、10 ng/ml组),以及在10 ng/ml TGF-β1基础上加入不同浓度TGF-β1受体特异阻断剂SB431542(0.1μmol/L组、1μmol/L组、10μmol/L组)进行分组,处理后提取蛋白及RNA,应用蛋白免疫印迹(Western blot)和实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测各组TGF-β1受体蛋白,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)、BKCa蛋白和信使RNA(m RNA)的表达情况。单通道及全细胞膜片钳技术记录TGF-β1作用24 h前后的BKCa电流特点及其变化情况。结果:TGF-β1 5 ng/ml组和10 ng/ml组均上调TGF-β1受体蛋白,α-SMA、 CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白和m RNA的表达,10 ng/ml组TGF-β1下调BKCa蛋白和m RNA的表达。与TGF-β1 10 ng/ml组相比,在10 ng/ml TGF-β1基础上加入SB431542 1μmol/L组、10μmol/L组下调TGF-β1受体蛋白,α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白和m RNA的表达,加入SB431542 10μmol/L组上调BKCa蛋白和m RNA的表达,差异均具有统计学意义。此外,单通道及全细胞膜片钳技术记录结果表明TGF-β1预处理24 h后可明显抑制成纤维细胞上BKCa电流。结论:BKCa可能参与了TGF-β1诱导乳大鼠心室成纤维细胞纤维化通路,其机制可能是TGF-β1抑制了成纤维细胞上BKCa的电流。这提示BKCa可能是防治心肌纤维化的潜在靶点。     

RhoA/ROKα反义寡核苷酸抑制TGF-β1诱导的血管外膜成纤维细胞α-SM-actin表达

目的 α-平滑肌-肌动蛋白(α-SM-actin)的表达是血管外膜成纤维细胞/肌成纤维细胞表型转化的分子标记.本研究观察阻断RhoA-ROKα信号转导通路对于转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)诱导的血管外膜成纤维细胞α-SM-肌动蛋白(actin)表达的影响,以揭示RhoA-ROKα信号通路在血管外膜成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞过程中的作用.方法使用贴壁法体外培养大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞;用Western blot技术测定RhoA和ROKα在血管外膜成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞过程中的表达.结果 RhoA-ROKα在血管外膜成纤维细胞表达,TGF-β1可以诱导RhoA表达上调.用反义寡核苷酸技术抑制RhoA或ROKα的表达后能够抑制α-SM-actin的表达.结论 RhoA-ROKα信号转导通路参与了TGF-β1诱导的血管外膜成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞的过程.     

大黄酚与转化生长因子-β1对体外培养人成纤维细胞胶原及盘状结构域受体2的调控作用及机制

目的探讨中药大黄提取物大黄酚和转化生长因子(TGF)-β1对体外培养人成纤维细胞Ⅰ型(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)、盘状结构域受体(DDR)2的调控作用及机制。方法体外培养人成纤维细胞,用大黄酚干扰24 h,观察细胞生长特征,并用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western印迹检测Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、DDR2表达,流式细胞技术检测成纤维细胞细胞周期。细胞分为对照组、TGF组和大黄酚组。结果 TGF-β1、大黄酚上调DDR2表达,与对照组有显著性差异(P0.05)。TGF-β1组Col-Ⅰ表达上调,与对照组有显著性差异(P0.05);大黄酚组Col-Ⅰ表达下调,与对照组有显著性差异(P0.05)。TGF-β1组Col-Ⅲ表达与对照组无显著性差异(P0.05);大黄酚组Col-Ⅲ表达上调,与对照组有显著性差异(P0.05)。G1/G0期细胞比例,TGF-β1组与对照组无显著性差异(P0.05),大黄酚组低于对照组,有显著性差异(P0.05);S期细胞比例,TGF-β1组与对照组无显著性差异(P0.05),大黄酚组高于对照组,有显著性差异(P0.05);G2期细胞比例,各组间无明显差异(P0.05)。结论大黄酚和TGF-β1对培养成纤维细胞的DDR2、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达具有调控作用,并能影响其细胞周期。TGF-β1作用是通过上调Col-Ⅰ表达促进组织修复,而大黄酚作用的机制可能是降低了G1/G0期细胞比例而增加细胞增殖活性来促进组织修复,同时上调DDR2,增加Col-Ⅰ降解,减少瘢痕形成。     

转化生长因子β1对大鼠血管平滑肌细胞Smurf2和Ⅰ型胶原表达的影响

目的探讨体外条件下转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)Smad泛素调节因子2(Smurf 2)以及Ⅰ型胶原(ColⅠ)表达的影响。方法应用RT-PCR法检测Smurf2 mRNA的表达,Western印迹法检测Smurf2蛋白的表达,ELISA检测ColⅠ的表达。结果不同浓度TGF-β1(1、5、10μg/L)作用于VSMCs后,细胞中Smurf2的表达量均低于对照组(P<0.05),且5、10μg/L组同对照组相比差异显著(P<0.01),ColⅠ的浓度高于对照组(P<0.05),且5μg/L组同对照组相比差异显著(P<0.01)。结论 TGF-β1呈浓度依赖性抑制Smurf2的表达,促进ColⅠ的产生。     

中药心康方对大鼠心力衰竭模型心肌胶原代谢的影响

目的观察中药心康方对大鼠心力衰竭模型心肌胶原代谢的影响。方法阿霉素腹腔注射法建立大鼠心力衰竭模型,随机分为对照组(10只)、模型组(9只)、心康方组(9只)和卡托普利组(9只)。Masson染色观察心肌胶原变化,Western blot检测心肌Ⅰ型、Ⅲ型胶原、转化生长因子β1(TGF-β1)、核因子κB的抑制蛋白(IκB)和p56的表达,Western blot和RT-q PCR分别检测心肌基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1和TIMP-2的蛋白和mRNA表达水平。结果与对照组比较,模型组大鼠心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达显著增加,胶原容积分数显著升高(均为P<0.01);TGF-β1和p56表达显著增加,IκB显著降低(均为P<0.05);MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的蛋白和mRNA表达水平显著升高(P<0.01或P<0.05)。与模型组比较,心康方组和卡托普利组大鼠的心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达显著减少,胶原容积分数显著降低(均为P<0.01);TGF-β1和p56显著降低,IκB显著升高(均为P<0.05);MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的蛋白和mRNA表达水平显著降低(P<0.01或P<0.05)。结论中药心康方可减轻心力衰竭大鼠的心肌胶原沉积,其机制可能与抑制核因子κB介导的TGF-β1上调有关。     

替米沙坦联合氨氯地平对乳鼠转化生长因子-β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的探讨替米沙坦联合氨氯地平对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的乳鼠心肌成纤维细胞增殖及细胞中转化生长因子(TGF)-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响。方法对Wistar乳鼠心肌成纤维细胞行体外原代及传代培养,将培养好的细胞分为5组:对照组(加入15%小牛血清DEME培养液)、AngⅡ组(15%小牛血清DEME培养液+1×10~(-6)mol/L AngⅡ),替米沙坦组(TE组,在AngⅡ组基础上加入10μmol/L替米沙坦),氨氯地平组(AM组,AngⅡ组基础上加入1μmol/L氨氯地平)及替米沙坦+氨氯地平组(TE+AM组),在AngⅡ组基础上加入10μmol/L替米沙坦+1μmol/L氨氯地平),每组3份。观察各组细胞不同时期增殖情况及TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、p27蛋白表达情况。结果与对照组相比,AngⅡ组心肌成纤维细胞在S期时增殖率较高,而在G_0/G_1期、G_2/M期时增殖率下降(P0.05),TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、p27蛋白表达水平显著升高(P0.05)。与AngⅡ组相比,TE组、AM组及TE+AM组心肌成纤维细胞在S期时增殖率显著下降,而在G_0/G_1期、G_2/M期时增殖率升高(P0.05),TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、p27蛋白表达水平下降(P0.05),其中TE+AM组心肌成纤维细胞在G_0/G_1期、G_2/M期增殖较TE组、AM组显著,而TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、p27蛋白表达水平低于TE组、AM组。结论替米沙坦联合氨氯地平能有效抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖,其可能机制与抑制TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及p27蛋白过度表达有关。     

MAPK信号通路在转化生长因子β1诱导心肌成纤维细胞趋化运动中的作用

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导心肌成纤维细胞趋化运动中可能的作用机制。方法 培养新生SD大鼠的心肌成纤维细胞,将细胞随机分为空白对照组、TGF-β1组、c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制因子(SP600125,10 μmol/L)组、P38MAPK抑制因子(SB203580,10 μmol/L)组、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)抑制因子(U0126,10 μmol/L)组,除空白对照组外,其余组均给与10 μg/L TGF-β1及对应抑制因子处理。MTT比色法测定心肌成纤维细胞增殖活性,Transwell小室检测心肌成纤维细胞运动能力,羟脯氨酸试剂盒检测胶原含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测心肌成纤维细胞中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)水平,Western blot检测成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col-1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达水平。结果 TGF-β1可明显促进心肌成纤维细胞增殖活性、趋化运动能力及胶原含量,MAPK信号途径抑制因子干预后能够抑制这种增殖及趋化运动,并降低胶原含量(P＜0.05);ELISA结果显示,MAPK信号途径抑制因子能够显著降低TGF-β1处理后导致的MCP-1、PAI-1水平升高(P＜0.05);Western blot结果显示,MAPK信号途径抑制因子能够显著降低TGF-β1处理后导致的α-SMA、Col-1、MMP-9蛋白表达升高(P＜0.05)。结论 TGF-β可能通过激活MAPK信号通路促进心肌成纤维细胞的趋化运动,通过使用MAPK抑制剂能够一定程度的抑制心肌纤维化。     

AcSDKP对大鼠心脏成纤维细胞MMP-1、TIMP-1及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响

目的探讨N-乙酰基—丝氨酰—天门冬酰—赖氨酰—脯氨酸（AcSDKP）抗心肌纤维化的可能机制。方法将大鼠心脏成纤维细胞随机分为三组,对照组予0.4%胎牛血清的DMEM;转化生长因子（TGF）-β1组在0.4%胎牛血清的DMEM中加入终质量浓度为5 ng/ml的TGF-β1;AcSDKP组在5 ng/ml的TGF-β1诱导刺激同时加入终质量浓度为10-9mol/L的AcSDKP。Western blot法检测MMP-1、TIMP-1、Ⅰ和Ⅲ型胶原表达。结果 TGF-β1可使MMP-1表达下降,TIMP-1表达升高,MMP-1/TIMP-1值下降;AcSDKP抑制TGF-β1对MMP-1的作用,使MMP-1表达增加,但对TIMP-1表达无明显影响,MMP-1/TIMP-1值增加。同时AcSDKP减弱由TGF-β1诱导的Ⅰ和Ⅲ型胶原表达,并降低Ⅰ/Ⅲ型值。结论 AcSDKP抗纤维化的作用机制可能是调节胶原合成/降解代谢的平衡,加速细胞外基质降解,同时抑制Ⅰ和Ⅲ型胶原生成。     

槲皮素对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞的影响

目的研究槲皮素(Que)对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞(CFB)增殖和胶原合成的影响及其作用机制。方法采用酶消化法和差速贴壁法获得纯化的CFB,应用MTT法测定CFB增殖,羟脯氨酸法测定胶原蛋白含量,化学比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)活力含量,实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测CFB的Ⅰ型胶原(ColⅠ)、转化生长因子(TGF)-β1基因的mRNA表达。结果槲皮素在10⁴0μmol/L浓度范围内可明显抑制AngⅡ诱导的CFB增殖和胶原蛋白合成增加,同时可升高SOD含量、降低MDA活力,可以降低ColⅠ、TGF-β1蛋白的mRNA表达。结论槲皮素可抑制AngⅡ诱导的CFB增殖和胶原蛋白合成的作用,从而延缓心肌纤维化的发展。     

转化生长因子β1对老年心房颤动患者内皮细胞向间质成纤维细胞转化的影响

目的探讨转化生长因子(TGF)β1对老年心房颤动患者内皮细胞向间质成纤维细胞转化的影响。方法选择老年阵发性心房颤动患者100例及持续性心房颤动患者100例,分离循环血内皮细胞,将其分为对照组[加入等量磷酸盐缓冲液(PBS)培养]和TGF-β1组(加入TGF-β1 10 ng/ml培养)。采用MTT实验测定细胞增殖,transwell实验测定细胞迁移,免疫荧光染色观察CD31和vimentin表达,Western印迹法测定CD31、vimentin、ve-cadherin和α-平滑肌肌动蛋白(SMA)含量。结果 TGF-β1组吸光度A值明显低于对照组(P<0.05),穿膜细胞数高于对照组(P<0.05)。免疫荧光染色显示:和对照组比较,TGF-β1组间质细胞特异性蛋白vimentin表达明显升高、内皮细胞特异性蛋白CD31表达明显降低;对照组含极少vimentin和CD31双阳性细胞,TGF-β1组vimentin和CD31双阳性细胞明显增多。Western印迹检测结果显示,TGF-β1组CD31和ve-cadherin明显低于对照组(P<0.05),间质细胞标志性蛋白vimentin和α-SMA明显高于对照组(P<0.05)。结论 TGF-β1可诱导老年心房颤动患者内皮细胞向间质化细胞转化。