注射用双黄连类过敏反应与特异性免疫细胞之间关系的探讨

目的:将ICR小鼠、SCID小鼠和BALB/C裸鼠用于注射用双黄连(SHLI)类过敏反应研究,以探讨SHLI类过敏反应的发生与特异性免疫细胞之间的关系。方法:ICR小鼠、SCID小鼠和BALB/C裸鼠耳廓血管通透性分析:小鼠随机分成不同实验组,不同组的小鼠分别一次性静脉注射含有0.4%伊文思蓝的不同浓度的Compound 48/80溶液、注射用双黄连(SHLI)、生理盐水,给药后30 min记录各组动物耳廓血管通透性增高反应的阳性率,进行耳廓蓝染程度评分,并定量测定耳廓伊文思蓝渗出量。结果:SHLI 300,600 mg.kg-1(分别相当于临床剂量的等效剂量和2倍剂量)静脉注射均可引起ICR小鼠耳廓血管通透性增高,耳廓明显蓝染。以上剂量的SHLI均未引起SCID小鼠和BALB/C裸鼠小鼠耳廓蓝染。结论:SHLI在临床等效剂量和2倍临床剂量下有明显增高血管通透性的作用,提示有致ICR小鼠类过敏作用;相同剂量的SHLI对于免疫缺陷小鼠没有致类过敏作用,提示特异性免疫细胞可能参与了SHLI的致类过敏反应。     

生脉注射液工艺改进前后类过敏反应比较

目的:比较生脉注射液工艺改进前后对动物的类过敏反应的差异,以探讨提高生脉注射液安全性的可能性。方法:小鼠耳廓血管通透性分析:将ICR小鼠随机分成不同实验组,分别一次性静脉注射含有0.4%伊文思蓝(EB)的5%葡萄糖注射液、Compound 48/80溶液或工艺改进前后的不同浓度生脉注射液。给药后30 min记录各组动物耳廓血管通透性增高反应的阳性率,进行耳廓蓝染程度评分,并定量测定耳廓伊文思蓝渗出量。大鼠皮肤血管通透性试验:即动物先静脉注射给予0.6%伊文思蓝生理盐水溶液,10 min后再从背部皮内注射给予上述受试物,每个点注射50μL药液,20 min后处死大鼠,测量皮肤内的蓝色斑点大小,并定量测定其中伊文思蓝渗出量。结果:生脉注射液原工艺16.7 mL.kg-1组(相当于临床剂量的1.67倍剂量)的小鼠可见耳廓血管通透性明显增高,而10 mL.kg-1的生脉注射液(相当于临床等倍剂量)组未见明显的耳廓血管通透性增高;新工艺16.7 mL.kg-1组的耳廓通透性增高程度较相同剂量原工艺组明显减轻。原工艺生脉注射液皮内注射后,在注射部位导致明显的渗出、水肿,从而形成较大的蓝斑,有一定剂量关系。新工艺在注射局部也可造成一定程度的蓝斑,但蓝斑直径较原工艺组减小,皮肤伊文思蓝渗出量减少,说明新工艺的皮肤类过敏反应较轻。结论:生脉注射液原工艺有明显增高血管通透性的作用,提示有致类过敏作用;改进工艺后其导致血管通透性增高的不良作用减轻,提示改进工艺可减轻类过敏反应。     

注射用双黄连类过敏反应物质及作用机制研究

目的 探讨注射用双黄连(SHLI)发生类过敏反应的物质基础及其作用机制.方法 ①类过敏反应和致类过敏物质研究 ICR小鼠随机分成不同实验组,分别一次性静脉注射含有0.4%伊文思蓝的不同浓度的SHLI、黄芩苷溶液、连翘苷溶液、绿原酸溶液、Compound 48/80溶液或生理盐水,给药后30 min记录各组动物耳廓血管通透性增高反应的阳性率,进行耳廓蓝染程度评分,并定量测定耳廓伊文思蓝渗出量.②类过敏机制研究 将小鼠分别预先口服不同剂量的息斯敏,腹腔注射环磷酰胺或Compound 48/80后,再静脉注射含有0.4%伊文思蓝的SHLI,同前述方法观察耳廓蓝染情况,将预处理组与同剂量SHLI组比较.结果 ①SHLI 300,600 mg·kg-1(分别相当于临床剂量的等倍和2倍剂量)静脉注射均可引起小鼠耳廓血管通透性增高,耳廓明显蓝染;但相当于SHLI临床2倍剂量的连翘苷、黄芩苷和绿原酸静脉注射均未造成小鼠耳廓血管通透性增高.②预先口服息斯敏后,SHLI 600 mg·kg-1造成的小鼠耳廓血管通透性增高程度明显减轻;预先腹腔注射环磷酰胺后,血管通透性增高程度有轻度减轻,而预先腹腔注射Compound 48/80后,血管通透性增高程度没有明显变化.结论 SHLI在临床等效剂量和2倍临床剂量下有明显增高血管通透性的作用,提示有致类过敏作用.但SHLI的主要成分——连翘苷、黄芩苷和绿原酸可能不是造成SHLI发生类过敏反应的主要物质,SHLI发生类过敏反应的主要机制可能与直接刺激组胺的生成增加有关,白细胞激活可能参与了SHLI的致类过敏反应,抗组胺药可部分预防SHLI的类过敏反应.     

啮齿类动物类过敏试验模型的建立

目的:以不同浓度的聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温-80)为对象,建立一种简便易行的清醒小动物类过敏试验方法,用于中药注射剂的类过敏反应筛选和评价.方法:所有受试物均含有0.4%伊文思蓝,各组分别iv给予受试药小鼠20 mL·kg-1,豚鼠30 mL·kg-1,给药后观察30 min内动物的行为学变化,耳廓蓝染情况,测定小鼠双耳丙酮生理盐水浸液的吸光度.结果:小鼠iv0.5%～10%吐温-80溶液、含0.5%～10%吐温-80的鱼腥草蒸馏液、150～600 mL·kg-1双黄连粉针剂;豚鼠iv0.25%～1.0%吐温-80溶液、含0.25%～1.0%吐温-80的鱼腥草蒸馏液、54 mg·kg-1双黄连粉针剂,均可造成小鼠和豚鼠耳廓不同程度蓝染,并且各组随着剂量增高,耳廓蓝染面积增大、染色加深.鼠耳经丙酮生理盐水液浸泡后,用半自动生化仪检测,发现伊文思蓝渗出量与肉眼观察结果基本一致.结论:利用小鼠和豚鼠耳廓血管通透性测试,可以作为筛选中药注射剂类过敏反应的模型,是一种简便易行的清醒小动物类过敏试验方法.     

中药注射剂的类过敏实验动物模型和实验方法研究

目的：探讨中药注射剂类过敏实验动物模型和实验方法,以用于中药注射剂类过敏反应的临床前评价。方法：（1）Beagle犬随机分成：0.5% T-80组、鱼腥草蒸馏液组、含0.5%吐温的鱼腥草注射液组、0.5% HS15组、含0.5% HS15的鱼腥草注射液组。上述各组分别静脉注射给予各自受试药3mL·kg-1。给药后观察动物的反应,给药前和给药后10、30min分别测定血压、呼吸、心率。（2）小鼠或豚鼠分别一次性静脉注射给予不同浓度 T-80溶液、含不同浓度 T-80的鱼腥草蒸馏液、不含 T-80的鱼腥草蒸馏液,Compound 48/80溶液;以上受试物中均含有0.4%伊文思蓝。记录给药后各组动物耳廓血管通透性增高反应的阳性率,按照耳廓蓝染程度评分,并采用分光光度计定量测定耳廓伊文思蓝渗出量。结果：含T-80的受试物（0.5% T-80组单独或含0.5% T-80的鱼腥草注射液）给Beagle犬一次性静脉注射后,犬迅速出现类过敏反应,包括面部、口唇、眼结膜和耳部皮肤黏膜红肿、瘙痒,流涎、流泪,步态不稳或跌倒,精神萎靡或嗜睡,呼吸急促,血压下降等。在小鼠和豚鼠上,不同浓度的T-80或含不同浓度T-80的鱼腥草注射液可剂量依赖性地导致耳廓血管通透性增高。而其它不含T-80的受试物给Beagle犬静脉注射后未见类过敏反应,给小鼠和豚鼠注射后未见耳廓血管通透性增高反应。结论：鱼腥草注射液可导致类过敏反应,T-80是其主要的致类过敏反应物质。Beagle犬、小鼠和豚鼠均可作为中药注射剂类过敏实验的动物模型。Beagle犬的类过敏反应与临床高度一致,模型敏感性高、重复性好。小鼠和豚鼠的类过敏反应特征主要表现为耳廓血管通透性增高,该血管反应符合类过敏反应发生机制。     

清开灵注射液类过敏反应的实验研究

实验采用小鼠全身类过敏试验、大鼠皮肤类过敏试验及测量血液中组胺,VEGF,TNF-α含量来研究清开灵注射液致小鼠和大鼠的类过敏反应,为其临床用药安全提供参考。小鼠全身类过敏试验：ICR小鼠随机分为生理盐水（NS）对照组、阳性药Compound 48/80（Comp）25 mg·kg^-1组、清开灵注射液（QKLI）3,6,12 mL·kg^-1组（本实验所用QKLI为液体,故剂量单位选用mL·kg^-1）,各组分别一次性尾静脉注射含0.4%伊文思蓝（EB）的受试药,记录给药30 min后耳廓蓝染阳性率,对耳廓蓝染程度进行评分,测定耳廓伊文思蓝渗出量。大鼠皮肤类过敏试验：剃除大鼠背部和脊柱两侧的毛,经尾静脉注射含0.6%EB的NS 2 mL·kg^-1,10 min后,在麻醉的情况下,沿脊柱两侧,皮内注射阴性对照NS、阳性对照Comp（0.5 mg,50 μL）、不同浓度QKLI（分别相当于清开灵注射液原液 12.5,25,50 μL）,各组注射体积均为50 μL。给药20 min后记录各注射点的蓝斑直径。对血液中组胺,VEGF,TNF-α的影响：ICR小鼠随机分成NS组、Comp 25 mg·kg^-1组、QKLI 12 mL·kg^-1组。各组经尾静脉注射不含EB的受试物。给药30 min后,摘眼球取血,离心分离血清,采用ELISA方法测定。实验结果显示尾静脉注射QKLI 3,6,12 mL·kg^-1后,小鼠耳廓出现不同程度的耳蓝染现象。提示QKLI可引起小鼠血管通透性增高,导致其发生类过敏反应;大鼠皮内注射QKLI（相当于原液 25,50 μL/点）时可导致注射点处形成与NS组相比直径较大的蓝斑（P<0.01）;静脉注射QKLI后可引起血液VEGF明显增高,组胺有一定增高趋势,TNF-α未见增高。实验证明了QKLI有显著的使血管通透性增高的作用,从而诱发大鼠、小鼠而发生类过敏反应,其类过敏反应可能与组胺和VEGF释放有关。     

双黄连注射液的类过敏反应特点及影响因素分析

目的:分析双黄连注射液(SHLI)的类过敏反应(pseudoallergic reaction,PARs)特点及不同注射速度对PARs的影响。方法:将ICR小鼠随机分成阴性组(生理盐水)、阳性组(组胺10 mg·kg-1)和SHLI低(150 mg·kg-1)、中(300 mg·kg-1)、高(600 mg·kg-1)剂量组,1次性静脉注射含有0.4%伊文思蓝(EB)的受试物,给药30 min后记录各组动物耳廓血管通透性增高反应的阳性率,进行耳廓蓝染程度评分,并定量测定耳廓伊文思蓝渗出量。ICR小鼠随机分成阴性组和SHLI组(600 mg·kg-1),各组小鼠经尾静脉注射不含EB的受试物,给药30 min后取血,利用ELISA试剂盒测定血清中组胺、血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。取耳、肺组织进行病理检查。结果:SHLI致小鼠类过敏反应具有剂量相关性。静脉注射SHLI后可引起血液组胺和VEGF明显增高,TNF-α未见显著性差异。病理结果显示耳、肺组织发生组织水肿,嗜中性粒细胞浸润等炎症反应。SHLI快速静脉注射(5 s)时产生的类过敏反应最强,而注射速度为60 s和120 s时,产生的类过敏反应程度相近,二者均明显低于5 s注射组。结论:双黄连注射液可引起小鼠血管通透性增高,导致其发生类过敏反应,反应机制可能与组胺和VEGF释放有关。双黄连注射液的类过敏反应与剂量、注射速度有关,剂量越大发生类过敏的可能性越大,程度越重;注射速度过快可能增高不良反应程度。临床静脉使用时要SHLI时应严格控制剂量和注射速度,以减少其不良反应的发生。     

药物类过敏反应的临床前评价方法研究(I)——小鼠类过敏反应评价方法的建立和验证

目的:建立适用于注射剂类过敏评价的动物模型。方法:小鼠一次性静脉注射含0.4%伊文思蓝(EB)的受试物,以耳廓蓝染发生率和伊文思蓝渗出量作为类过敏评价指标。结果:小鼠静脉注射生理盐水注射液(NS)、5%葡萄糖注射液(Glu)后,未出现耳廓蓝染,说明无类过敏反应发生。阳性对照物质组胺和Compound 48/80均具有明显的致类过敏反应,可造成耳廓明显蓝染和EB大量渗出。采用临床上可发生类过敏反应的多种中、西药注射剂验证了本模型和评价方法的可靠性和敏感性,检测结果与临床一致。结论:小鼠类过敏反应评价方法敏感、可靠,与临床一致性好,适宜于注射剂临床前类过敏反应评价、注射剂生产过程中的安全性检测、上市产品抽验、致敏原筛选、类过敏反应发生机制研究以及类过敏防治方法研究等。     

一种新的小鼠过敏试验模型的建立及其在中药注射剂致敏性评价中的应用

当药物诱导机体产生Ⅰ型过敏反应时,IgE与肥大细胞结合导致肥大细胞脱颗粒,释放血管活性物质,血管通透性增高,血管内物质可渗出血管外,该研究基于这一病理生理机制,建立一种可客观定量评价注射剂过敏反应的小鼠模型。将卵清蛋白(ovalbumin, OVA)腹腔注射致敏ICR小鼠,隔天1次,共致敏3次,末次致敏后14 d,致敏剂量4倍的OVA伊文思蓝(Evans blue, EB)混合溶液静脉激发,30 min后,根据致敏小鼠的耳廓蓝染面积和EB渗出量进行过敏反应强弱判断。结果与正常组比较,OVA 0.625/2.5、1.25/5、2.5/10、5/20 mg·kg^-1致敏/激发均能诱发小鼠发生明显以耳廓蓝染为主要表现的过敏反应;小鼠不致敏直接静脉注射OVA则不发生耳廓蓝染反应。上述OVA致敏小鼠血清进行小鼠被动皮肤过敏试验,在小鼠背部均可见明显蓝斑,并且5 mg·kg^-1致敏小鼠体内抗OVA-IgE含量明显升高,以上说明该小鼠模型可以检测OVA诱发的Ig介导的过敏反应。与诱发小鼠过敏反应相同剂量的OVA,同样也可诱发豚鼠发生较明显的过敏反应,提示该...     

注射用聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯质量标准草案商榷

近年,注射剂出现了严重的安全问题,人们把更多的目光投向药用辅料的质量和安全性。增溶性辅料聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯(吐温-80)因其在注射剂中的广泛应用,其生产工艺、产品质量和体外安全性成为研究焦点。作者调研了国内外吐温-80质量标准现状,在此基础上对注射用吐温-80质量标准进行较深入的探讨。在2010年版《中国药典》药用级吐温-80质量标准的基础上,建立注射用吐温-80质量标准草案,以期为注射用吐温-80质量标准的建立、注射剂安全性问题研究提供参考。     

药物类过敏反应的临床前评价方法研究(Ⅱ)——大鼠皮肤类过敏试验

目的:建立适用于注射剂类过敏评价的动物模型。方法:大鼠静脉注射含0.6%伊文思蓝(EB)的生理盐水溶液,10 min后,背部皮内注射受试物50μL,20 min后,测量皮内蓝斑直径和伊文思蓝渗出量,以评价类过敏反应程度。结果:生理盐水注射液(NS)、5%葡萄糖注射液造成很小的皮内蓝斑。阳性对照物Compound 48/80可导致局部毛细血管通透性显著增高和水肿,从而引起较大的蓝斑和EB大量渗出。采用临床上可发生类过敏反应的多种中、西药注射剂验证了本模型和评价方法的可靠性和敏感性,检测结果与临床一致。结论:大鼠皮肤类过敏试验方法与临床一致性。该方法敏感、可靠,适宜于注射剂临床前类过敏反应评价、注射剂生产过程中的安全性检测、上市产品抽验、致敏原筛选、类过敏反应发生机制研究以及类过敏防治方法研究等。     

聚山梨酸酯增溶作用在中药液体制剂中的适应性

对常用增溶性药用辅料吐温80在中药液体制剂中的适应性研究进行文献整理和分析.结果显示近年中药注射剂出现了较严重的安全问题,吐温80因其在注射剂中的广泛应用,其生产工艺、产品质量和体外安全性成为研究焦点.从吐温80对中药液体制剂增溶作用的局限性,吐温80当建立严格的质量标准,提高国产吐温80的质量,提高药典吐温80的质量标准,中药注射剂出现不良反应不是吐温80惹的祸等方面进行探讨.吐温80在一定的限量范围内运用于中药液体制剂是安全有效的.吐温80作为增溶剂或稳定剂用于中药注射剂时必须建立注射级质量标准,严格控制产品质量,在充分的实验数据支持下确定其使用量.     

3种增溶性辅料致大鼠肝肾损伤

目的:研究聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯(吐温80),solutol HS 15,聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油3种辅料对大鼠肝、肾损伤作用。方法:吐温80,solutol HS 15,聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油3种辅料分别按以下方式染毒。将大鼠72只按雌雄各半随机分为4组,每组6只,分别为生理盐水对照组、辅料低、中、高剂量组,按每只im 0.22 mL,每日注射1次,注射4周后,心脏取血后处死大鼠,称肝、肾质量计算脏器系数,测定大鼠血清中反映大鼠肝、肾功能的生化指标,并对肝、肾组织进行病理学观察。结果:吐温80 3个剂量组与对照组以及各剂量组之间对比无明显差异。solutol HS 15的高、中、低剂量组与对照组对比,AST,TP,ALP,ALB无明显差异,各剂量组之间对比,高剂量组与对照组、低剂量组与高剂量组的肝器系数存在显著性差异(P<0.05);高剂量组与对照组之间ALT存在显著性差异(P<0.05);低剂量组与高剂量组的ALB,TP,ALT存在显著性差(p<0.05);低、中剂量组之间TP存在显著性差异(P<0.05);高、中剂量组之间ALT存在显著性差异(P<0.05)。聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油3个剂量组,AST,ALT,ALB,ALP,TP与对照组对比无明显差异,各剂量组之间对比,低、中剂量组之间、低、高剂量组之间,AST,ALT,ALB,ALP存在显著性差异(P<0.05)。光镜下3种辅料的剂量组与对照组对比,大鼠肝细胞、肾细胞除了炎症之外无明显病理改变。结论:通过3种辅料的比较,发现吐温80致大鼠肝、肾损伤较小。     

舒敏方对过敏和瘙痒模型的影响

目的:评价舒敏方对皮肤过敏和瘙痒的治疗作用。方法:以BALB/c小鼠和ICR小鼠为试验动物,研究8,4,2 g.kg-1(分别相当于临床剂量的2,1,0.5倍)舒敏方ig给药对受试动物的皮肤过敏和瘙痒的治疗作用。采用尾静脉iv伊文思蓝与sc磷酸组胺方法制作小鼠被动皮肤过敏模型、尾静脉iv右旋糖酐方法制作小鼠瘙痒模型,对舒敏方进行抗敏和抗瘙痒药效学试验。结果:与模型组比较,舒敏方高剂量组能缩小小鼠腹部皮肤蓝染的风团面积(P<0.05),抑制率为73.85%,高、中剂量组能有效抑制磷酸组胺所致小鼠皮肤毛细血管通透性亢进(P<0.01),抑制率分别为45.16%,41.94%;并能明显减少右旋糖酐诱发小鼠因皮肤瘙痒而搔抓的次数和缩短小鼠皮肤瘙痒持续时间(P<0.01)。结论:舒敏方对皮肤过敏和瘙痒有一定的改善作用。