受体介导的基因转移治疗肿瘤的研究现状

肿瘤基因治疗的实施主要包括以下 3个方面 :( 1)寻找具有治疗意义的目的基因 ;( 2 )建立有效的靶细胞向转移目的基因的载体系统 ;( 3)使目的基因在靶细胞中表达 ,发挥生物学效应达到治疗目的 ,目的基因成功转移入靶细胞是基因治疗最重要的环节。肿瘤基因治疗基因转移方法较多 ,可分为物理、化学和生物 3大类。包括裸露 DNA直接注射、多价阳离子 - DNA复合物转化、电转化、脂质体共转化和病毒方法等。利用细胞表面受体介导的基因转移技术将外源基因特异性导向靶细胞表达是近年来基因治疗研究的热点之一。它是利用细胞表面存在的特异性受体…     

瘤内注射脂质体包裹的IL－2基因激活免疫效应细胞及诱导细胞因子

目的：为了探讨脂质体介导的ＩＬ－２基因体内基因转移的可行性及对荷瘤小鼠全身免疫功能的激活作用及诱导细胞因子产生的效果。方法：将脂质体分别包裹ＩＬ－２基因、空白质粒及ＰＢＳ后，直接注射至黑瘤体内，１０ｄ后无菌取出小鼠脾细胞，诱导并检测肿瘤特异性杀伤细胞（ＣＴＬ）活性、ＬＡＫ活性及细胞因子的含量，用抗ＭＨＣＩａ单抗检测腹腔巨噬细胞的ＭＨＣＩ类分子的表达。结果：瘤体内注射脂质体包裹的ＩＬ－２基因后，小鼠脾ＣＴＬ细胞活性明显高于瘤体内注射脂质体包裹空白质粒及ＰＢＳ的对照组，其脾淋巴细胞ＬＡＫ活性、诱导ＩＦＮ－γ等细胞因子的含量及表达ＭＨＣＩａ分子的水平均有相应的提高。结论：瘤体内注射脂质体包裹的ＩＬ－２基因后，通过在原位转染肿瘤细胞，增强了肿瘤细胞的免疫原性，诱导机体产生肿瘤特异性的ＣＴＬ以及提高机体非特异性的抗肿瘤免疫反应，发挥抗肿瘤作用。本研究为肿瘤的基因治疗的研究和应用提供了较实用的方法。     

稳定表达NGF、BDNF和NT3星形胶质细胞系的建立及其鉴定

目的：探讨星形胶质细胞直接作为转基因靶细胞进行目的基因的表达。 方法：克隆大鼠NGF、BDNF和NT3基因,构建真核表达载体;3种重组载体分别转染星形胶质细胞,G418筛选后获得阳性克隆细胞进行扩大培养;取基因修饰星形胶质细胞培养液上清培养PC12细胞或TrkB-PC12细胞;用Western blotting杂交或免疫组织化学方法检测基因靶细胞目的基因的表达及其水平。结果：经G418筛选后,转染NGF、BDNF和NT3基因修饰星形胶质细胞呈G418抗性;转染NGF和NT3基因条件培养液上清培养的PC12细胞,数量增多,突起明显变长,转染BDNF基因条件培养液上清培养的TrkB-PC12细胞,同样数量增多,突起明显变长。大部分G418抗性的基因靶细胞出现NGF、BDNF和NT3免疫染色阳性。Western blotting杂交显示有相应分子量大小的蛋白条带出现。 结论：星形胶质细胞直接作为基因靶细胞能有效地表达和分泌有生物学活性的NGF、BDNF和NT3。     

鳞癌瘤体内注射脂质体包裹的人α-干扰素基因的抗肿瘤作用

目的：研究瘤体内直接注射脂质体包裹的人ＩＦＮα基因的抗肿瘤效果。方法：在鳞癌荷瘤裸鼠的瘤体内注射体外已制备好的用脂质体包裹的ＩＦＮα ＤＮＡ,观察肿瘤生长状况及小鼠存活情况。结果：瘤体内注射脂质体包裹的人ＩＦＮα基因后,荷瘤裸鼠肿瘤的生长明显受抑,其中部分荷瘤裸鼠的肿瘤消失;荷瘤裸鼠的存活期明显延长,部分荷瘤裸鼠可长期存活。病理结果显示,治疗后的肿瘤细胞形状不一,有多数细胞质崩解,破坏明显。结论：瘤体内注射脂质体包裹的ＩＦＮα基因后,可在瘤体内原位直接转染肿瘤细胞并破坏该肿瘤细胞,从而达到抑制肿瘤生长的效果。     

人p65和IκBα基因真核表达载体的构建及在永生化滑膜细胞中的表达

目的：构建人p65和IκBα基因的真核表达载体并检测其在人永生化滑膜细胞MH7a中的毒达．方法：应用RT—PCR方法从体外培养的HEK293细胞mRNA中扩增出p65和IκBα基因的编码区。克隆至pMD18T载体并测序,然后亚克隆至真核表达载体pcDNA3．1myc／His（-）A,酶切鉴定正确后以脂质体法瞬时转染MH7a细胞,Western Blot检测p65和IκBα的表达．结果：测序证实PCR扩增得到的p65和IκBα基因编码区序列正确;脂质体法转染MH7a细胞后检测到预期目的蛋白的表达．结论：成功构建了p65和IκBα的真核表达载体并使其在人永生化滑膜细胞中表达．     

异种大动物移植模型中内皮细胞诱导的自然杀伤细胞杀伤活性变化的体外研究

目的:探讨体外条件下猪血管内皮细胞诱导的猴NK细胞杀伤活性的改变及其与细胞因子含量变化的相互关系。方法:将中国猕猴的NK细胞与多聚甲醛固定后的猪血管内皮细胞按不同比例进行体外混合培养，检测NK细胞在以不同比例接触靶细胞后的杀伤活性变化以及培养液上清液中的IFN-γ及TNF-α含量。结果：猴NK细胞与猪血管内皮细胞混合培养后。在一定范围内其杀伤活性随混合比例的升高而逐步升高．同时其IFN-γ及TNF-α分泌量也不断增加。结论：NK细胞与异种靶细胞接触后，其杀伤活性和细胞因子的分泌水平与效靶细胞的比例在一定范围内呈正相关。     

TNF-α及sTNFR I对子宫内膜异位症在位内膜基质细胞的作用

目的：探讨肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor，TNF—α）和可溶性肿瘤坏死因子受体（soluble TNFRI，sTNFRI）对体外培养的子宫内膜异位症（Endometriosis）患者在位内膜基质细胞的影响，为子宫内膜异位症的生物学治疗提供新思路。方法：对EMS患者的在位子宫内膜基质细胞进行体外培养，分别用不同浓度的TNF—α（0、0．1、1．0、10．0和100．0ng／m1）或者同-浓度TNF—α（1ng／ml）培养不同时间（4、8、12、24、48和72h）或者TNF—α（1ng／m1）和sTNFRI（2μg／m1）对基质细胞进行刺激并收集细胞上清液，利用双抗体夹心ELISA检测细胞培养上清液中IL-6、基质金属蛋白酶-3（matrix metalloproteinases，MMP-3）的水平。结果：TNF-α可促进体外培养的EMS子宫内膜基质细胞IL-6、MMP-3的分泌，而且IL-6、MMP-3浓度与TNF—α之间存在剂量、时间依赖关系（P〈0．05），而sTNFRI具有抑制TNF—α的作用。结论：TNF—α在EMS的发病机制中发挥重要的作用，其对EMS患者子宫内膜基质细胞的促黏附、侵袭、增殖等作用可能是通过促进IL-6、MMP-3的分泌来完成的；sTNFRⅠ有望用于EMS生物学治疗。     

两型TNFα杀伤U937细胞的差异表达基因

目的 比较两型TNFα对U937细胞的胞毒效应及二者诱导U937细胞差异表达的基因。方法 采用生物活性检测法测定两型TNFα对U937细胞的胞毒效应；用抑制消减杂交法探索两型TNFα诱导U937细胞差异表达基因。结果 两型TNFα对U937细胞胞毒效应存在差异，分泌型TNFα(sTNFα)的杀伤率为24．3％，且引起靶细胞坏死率大于其诱导的凋亡率；跨膜型TNFα(TM—TNFα)的杀伤率为34．3％，主要引起靶细胞凋亡。以sTNFα诱导基因做消减，得到TM—TNFα诱导的差异表达基因，即25个EST，其中8个EST与已知基因有高度同源性，17个EST为未知序列，已向GenBank登录。结论 两型TNFα杀瘤作用不同可能是由于它们启动了不同的基因转录及信号分子。     

胸腺素α原的生物学活性及基因表达谱芯片分析

目的：对一个新的胸腺素α原（human prothymosina,ProTα）进行生物学活性研究及基因表达谱分析，方法：用体外刺激小鼠脾细胞增殖进行实验及ELISA法检测ProTα对IL－2和TNF－α的诱导分泌作用，并用基因芯片技术对其表达谱进行分析，结果：ProTα对小鼠脾细胞有明显的促进增殖作用，对IL－2和TNF－α有明显的诱导分泌作用（P＜0．01），基因芯片研究发现ProTa对蛋白酷氨酸磷酸酶基因，淋巴细胞抗原6复合体，增殖相关基因A等的表达有上调作用。结论：该新型ProTα在体外实验中有免疫调节活性，并诱导一些基因的表达。     

HIF-1α转染骨骼肌细胞的诱导产物VEGF对血管内皮细胞增殖的影响

目的：将缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因转染体外培养大鼠骨骼肌细胞,观察转染后细胞上清液中VEGF蛋白的表达及其对血管内皮细胞增殖的影响。方法：利用机械和酶消化法分离培养大鼠骨骼肌细胞,贴块法培养血管内皮细胞;用阳离子脂质体介导pHOX／HIF-1α质粒转染骨骼肌细胞,ELISA法检测转染后VEGF蛋白的分泌情况,MTT法检测其对血管内皮细胞增殖的影响。结果：成功将HIF-1α基因转染大鼠骨骼肌细胞,转染组细胞培养上清中24、48、72和96h检测到VEGF含量分别为（1308．40±102．00）、（1449．20±69．86）、（1802．30±96．71）和（1494．95±86．24）pg/ml,明显高于对照组;转染后骨骼肌细胞分泌的VEGF对血管内皮细胞有显著的促增殖作用。结论：HIF-1α基因转染大鼠的骨骼肌细胞后可增加具有正常功能的VEGF蛋白的分泌,促进血管内皮细胞的增殖。     

2001年我国医药研究的若干进展

随着国内外生命科学和生物技术等的飞速发展,我国医药技术在2001年取得了长足的进步。提前完成了我国所承担的人类基因组汁划中的1％测序任务,到2000年,中国科学家在功能基因研究和基因组多样性领域共完成研究论文1850篇,遍及医药各领域,研究手段和水平可于国际先进水平媲美,中国完全有条件在“后基因时代”成为主角之一。     

小儿耳鼻喉手术麻醉的新进展

因小儿耳鼻喉手术刺激强,时间短,且常与气道相关,故麻醉的控制有一定难度,现对国内外现阶段小儿耳鼻喉手术麻醉的改良方法及新观点进行评述,以期对临床工作有较好的指导意义。     

成都市属医院1，175例儿童支气管肺炎住院费用分析

为探讨成都市不同级别医疗机构儿童支气管肺炎单病种费用水平以及不同收费项目占总费用的比例特点及控制医疗费用的有效途径,为患者自主选择就诊医疗机构提供参考指导,对成都市卫生局所属不同级别医院儿童支气管肺炎住院医疗费用分析如下。1资料与方法1.1资料来自成都市卫生局2     

Malaria in children in Birmingham in the 1970s

Thirty-two children with malaria were admitted to Dudley Road Hospital, Birmingham, in the 1970s. None was admitted before 1974 and there was a rapid increase after that. All the infections were due to Plasmodium vivax and occurred in children of Asian immigrant families who had been born in or had visited India or Pakistan apart from one infant born in England who acquired the disease transplacentally. All presented within 12 months of entering or re-entering the United Kingdom. The clinical features of the 32 patients have been analysed and it is suggested that more effort should be made to educate travellers about the need for anti-malarial chemoprophylaxis and the necessity to continue it for one month after return.     

2005年广西流动人口疟疾监测结果分析

目的了解广西流动人员疟疾流行现状,进而提出针对性防治措施。方法收集全区网络直报疫情资料和各级疾病预防控制机构疟疾监测数据进行分析。结果2005年广西流动人口发热病人平均疟原虫阳性率为0·33%。80·62%的病人为本地居民外出到疟疾流行区务工感染所致。以从事护林/砍伐比例最高,占44·19%。结论加强返乡流动人口疟疾监测是巩固广西疟疾防治的关键所在。