RT—PCR用于脊髓灰质炎病毒的检测及定型

本研究中共用了４对引物，所设计的Ｐｏｌｉｏ０１、Ｐｏｌｉｏ０２引物对与核苷酸序列中高度保守的５’端非编码区的序列匹配，它们给我们提供了待检样品中是否有脊髓灰质炎病毒核苷酸的证据，扩增产物为１０９ｂｐ。在ＶＰ１区我们设计对３对区分Ｓａｂｉｎ株疫苗病毒３个血清型及用于区别脊髓灰质炎病毒疫苗株和野毒株的引物，各引物序列之间无互补，识别同型Ｓａｂｉｎ疫苗病毒准确可靠。Ｓａｂｉｎ１１、Ｓａｂｉｎ１２引种对不     

脊髓灰质炎病毒的中性红染色微量中和试验的初步应用

病毒微量中和试验有很多优点,我们不用倒置显微镜进行了脊髓灰质炎病毒(简称脊灰)微量中和试验,试验后第7天用普通光学显微镜一次观察结果和用中性红染色目     

巨细胞病毒单克隆抗体的制备及其初步应用

用CMV AD-169株感染自制人胚肺纤维母细胞，制备抗原，锣疲BALB／c小鼠，．取其脾细胞与Sp2／0-Ag14细胞融合，建立了一株稳定分泌抗HCMV特异性McAb的3B0杂交瘤细胞株。3B0McAb经鉴定属于IgG3亚娄。用间接免疫荧光法和间接酶免疫法证实为抗CMV特异性抗体。用微量细胞培养中和试验证实3B0McAb在加有豚鼠血清后可阻止HcMV感染后细胞病变的出现。3B0McAb经间接免疲荧光法检测中，晚期孕妇羊水细胞中HCMV抗原，在68例标本中有一例为阳性，阳性率为1．47％。该法方便，快速可为在胎儿时期诊断先天性HCMV感染提供依据。     

抗脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原单克隆抗体的研制

目的应用杂交瘤技术制备抗脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原的单克隆抗体。方法用脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原免疫雌性Balbc小鼠,取其致敏脾脏淋巴细胞与SP20小鼠骨髓瘤细胞融合。间接ELISA法筛选阳性克隆,制备腹水。检测McAb效价、抗体亚类和杂交瘤细胞核型。结果获得4株阳性杂瘤细胞株,选择一株制备腹水,ELISA效价为1∶2.4×106,中和试验效价1∶1.3×104,蛋白浓度为27.2mgmL。McAb与Ⅱ型Sabin株C抗原(ⅡC)、Ⅰ型Sabin株及Ⅲ型Phizer株D抗原(ⅠD、ⅢD)不发生交叉反应,具有高度特异性。结论成功的制备了针对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原的McAb,为进一步研究IPV效力检测奠定了基础。     

巨细胞病毒单克隆抗体的制备及其初步应用

用CMV AD-169株感染自制人胚肺纤维母细胞,制备抗原,免疫BALB/c小鼠,取其牌细胞与Sp2/0-Ag14细胞融合,建立了一株稳定分泌抗HCMV特异性McAb的3B_6杂交瘤细胞株。3B_6McAb经鉴定属于IgG_3亚类。用间接免疫荧光法和间接酶免疫法证实为抗CMV特异性抗体。用微量细胞培养中和试验证实3B_6McAb在加有豚鼠血清后可阻止HCMV感染后细胞病变的出现。3B_6 McAb经间接免疫荧光法检测中,晚期孕妇羊水细胞中HCMV抗原,在68例标本中有一例为阳性,阳性率为1.47％。该法方便,快速可为在胎儿时期诊断先天性HCMV感染提供依据。     

巨细胞病毒单克隆抗体的研制和初步应用

应用人巨细胞病毒(CMV)AD169株,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,得两株(1F9和2H10)能分泌单克隆抗体(McAb)标记酶和荧光素以后,能与AD169株病毒感染的人胚肺二倍体细胞发生特异性染色反应,而与正常细胞和其它疱疹病毒感染的细胞不发生染色反应,说明两株McAb特异性好。用标记酶的1F9 McAb检测抗体,建立抗体捕获EL-ISA(Antibody Capture ELIKA ACEL     

单克隆抗体亲和层析法粗提HFRS病毒的初步研究

用McAb亲和层析法粗提HFRS病毒81-14A株感染BHK细胞培养上清液,效果较满意。病毒抗原获得率为48.07％。经McAb亲和层析法洗脱,病毒抗原,蛋白峰基本一致。特异性试验证明洗脱物为HFRS病毒抗原。SDS-RAGE经氨银染色主要有4条区带。     

呼吸道合胞病毒单克隆抗体用于纸上桥联酶标诊断的初步探讨

为了呼吸道合胞病毒(RSV)能够在基层及时诊治和控制其流行,作者旨在更加简化RSV的快速诊断,将RSV-McAb移在微孔滤膜上,以搭桥法和RSV抗原结合,由碱性磷酸酶催化底物,在膜上显色。将RSV-McAb用于RSV培养物检测,并作了     

呼吸道合胞病毒单克隆抗体用于纸上桥联酶标诊断的初步探讨

为了呼吸道合胞病毒(RSV)能够在基层及时帮助诊断和控制其流行,作者旨在更加简化RSV的快速诊断,将RSV-McAb移在微孔滤膜上以搭桥法和RSV抗原结合,由碱性磷酸酶催化底物,在膜上显色。作者将RSV-McAb用于RSV培养物的检测,并作了异种动物血清封闭试验以及vero细胞等阴性对照,证实RSV-Mc-Ab用于纸上桥联是特异性显色,对23例患儿鼻咽部脱落细胞同时作纸上桥联,免疫荧光及APAAP 3种RSV的快速诊断的比较,获得初步满意结果。     

分泌抗脊髓灰质炎Ⅲ型Saukett株病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

<正> 自从 Kohler和 Milstein(1975,1976)成功地发展了淋巴细胞杂交瘤技术后,自内外已有不少学者先后建立起分泌抗不同抗原的单克隆抗体细胞系。为了便于对脊灰炎病毒株特征的研究以及对脊灰炎活疫苗的安全性和流行病学监测,我们建立了     

抗合胞病毒单克隆抗体用于IFAT供临床快速诊断的研究

本文以8株合胞病毒单克隆抗体(RSV-McAb)和北京地区近三年RSV地方株结合,选其中7株敏感性、特异性高的McAb进行混合,以RSV多价动物抗血清以下简写RSV-PolyAb)和双份血清学作为对照,用免疫间接萤光染色法(IFAT)检测69例患儿鼻咽部脱落细胞内的RSV-Ag。证实了McAb对RSV快速诊断敏感性高,特异性强,具有极大实际应用价值。它可以完全作为一种RSV快速诊断的新试剂来代替PolyAb。     

单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒血凝素抗原的初步研究

用蔗糖-丙酮法从HFRS病毒陈栋感染的乳小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素,将此粗制血凝素通过抗HFRS病毒血凝素McAb 3G_1与Sepharose 4B偶联的免疫吸附柱,获得初步纯化的HFRS病毒血凝素抗原,经鉴定具有较高的血凝滴度和较好的免疫原性。用SDS-PAGE和Wes-tern-blot技木分析该纯化的血凝素抗原,并与同法纯化的正常鼠脑抗原比较,证明该特异性血凝素抗原分子量为5×10~4道尔顿。用2株抗HFRS病毒以及10株抗HFRS病毒血凝素McAb,以ELISA阻断试验分析纯化50K血凝素,结果有10株McAb可阻断McAb3 G_1与其结合,其抗原决定簇之间有部分相同或重叠,提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一结构蛋白上。以上结果表明,该50k血凝素蛋白特性及结构均较复杂,尚待进一步研究。     

脊髓灰质炎病毒2型和3型D抗原单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备脊髓灰质炎病毒2型(PV2)和3型(PV3)D抗原的单克隆抗体(mAb),并对抗体的特性进行初步鉴定。方法以PV2及PV3的D抗原为免疫原,常规方法制备小鼠源性mAb,用间接ELISA检测小鼠腹水效价、型别特异性及与C抗原的交叉反应。结果获得4株PV2特异性并与PV2的C抗原不交叉的mAb,2株PV3特异性并与PV3的C抗原不交叉的mAb。结论成功制备了PV2及PV3特异性并与C抗原不交叉的D抗原mAb。     

胃癌单克隆抗体MG7用于消化道肿瘤血清学诊断的初步研究

应用胃癌单克隆抗体MG7,建立放射免疫沉淀分析法,用以检测消化道肿瘤患者血清中相应抗原MG7Ag,现将初步结果报道于后。 MG7的纯化和标记:含MG7的小鼠腹水经50％饱和硫酸铵沉淀,过DE_(52)阴离子纤维素层析柱纯化。纯化后的MG7的~(125)Ⅰ标记采用氯胺-T法。血清中MG7Ag的测定:     

伪狂犬病病毒单克隆抗体的研究

本文采用杂交瘤技术得到能分泌伪狂犬病病毒(PrV,Pseudorabies Virus)特异抗体的杂交瘤细胞。细胞融合率为98％,分泌特异抗体的杂交瘤细胞达65％,得到不同类和亚类的杂交瘤细胞系,克隆出的杂交瘤细胞系染色体数在82～109条之间。微量血清中和试验表明这些细胞系分泌的抗体为非中和性抗体。利用单抗IgG1与荧光素结合,制备出伪狂犬病病毒特异的荧光抗体,建立了伪狂犬病免疫荧光诊断法。同时,利用放射自显影和SDS-PAGE对病毒结构多肽进行了分析,表明伪狂犬病病毒主要有13种多肽成分,能被高免血清识别的有5种。     

用碱性磷酸酶免疫斑点试验检测小鼠血清中的HFRS病毒抗体

将ＨＦＲＳ病毒陈株可溶性抗原吸附于硝酸纤维素膜上，建立了用碱性磷酸酶免疫斑点试验（ＡＰ－ＤＩＢＡ）检测小鼠血清中的ＨＦＲＳ病毒抗体的方法，并与应用辣根过氧化物酶的免疫斑点试验（ＨＲＰ－ＤＩＢＡ）作了比较。结果表明，ＡＰ－ＤＩＢＡ具有特异性；其敏感性高于ＨＲＰ－ＤＩＢＡ。该法可用于不同ＨＦＲＳ病毒株感染小鼠血清中抗ＨＦＲＳ病毒抗体的检测。