人内皮抑素克隆表达及对血管内皮细胞生长的抑制作用

目的　获得具有抑制血管内皮细胞生长活性的重组人内皮抑素 (recombinanthumanen dostatin)。方法　从肝细胞中分离总RNA ,经反转录多聚酶链反应 (RT PCR)得到endostatin全基因。用原核细胞表达载体构建了pBV2 2 0 /endostatin重组质粒 ,经DNA测序确认后 ,将其转化大肠杆菌DH5α进行表达、初步纯化及活性测定。结果　经SDS PAGE分析 ,表达产物相对分子质量 (Mr)约 2 0× 10 3,薄层扫描显示表达产物可达细菌总蛋白的 30 %。结论　经生物学活性测定 ,表达蛋白能够抑制碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对牛毛细血管内皮细胞 (BCEC)的增殖作用     

血管内皮生长因子和内皮抑素对血管生成的作用研究进展

血管内皮生长因子（VEGF）是一种多功能糖蛋白，是由肿瘤细胞或宿主的非内皮细胞分泌的特异的内皮细胞有丝分裂因子，是最主要的促进血管生成因子。它具有促进血管通透性增加、血管内皮细胞分裂、增殖及诱导血管生成等作用。内皮抑素（ES）是胶原XⅧC末端降解片段，体内、体外实验表明内皮抑素能有效抑制血管内皮细胞增殖、迁移及新生血管形成，是一种特异性的目前为止作用最强的血管形成抑制荆。但其确切的抗血管形成的作用机制尚未阐明。现就血管内皮生长因子、内皮抑素在血管生成中的作用作一综述。     

内皮细胞生长抑制素的研究进展

内皮细胞生长抑制素是胶原蛋白ⅩⅧ的C末端水解片断,Mr为20,000。体外试验表明它可以抑制内皮细胞增殖和转移,在体内它可以通过诱导内皮细胞凋亡而抑制新血管生成和肿瘤生长,并且内皮细胞生长抑制素无毒副作用,不产生耐药性,因而它已经成为一种非常有潜力的治疗肿瘤的新药物。本文将对内皮细胞生长抑制素研究的最新进展作一综述。     

鼠内皮抑素基因腺病毒载体的构建及对血管内皮细胞的生长抑制

构建含鼠内皮抑素基因的腺病毒载体（pAd／mEnd），并观察内皮抑素蛋白对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）的生长抑制、细胞周期和凋亡的影响。结果发现pAd／mEnd感染BEL7402细胞后，能有效表达内皮抑素蛋白，显著抑制HUVEC增殖，阻滞HUVEC细胞S期，凋亡指数显著增加。     

重组人内皮抑素腺病毒抗肿瘤实验研究

目的肿瘤生长具有血管依赖性。内皮抑素为胶原X羧基末端裂解片段,是重要的内源性血管抑制因子。实验中利用重组人内皮抑素腺病毒(recombinanthumanendostatinadenorirus,Ad-hEndo)在肿瘤局部给药以探索其抗血管基因治疗的可行性。方法以Ad-hEndo感染体外培养肿瘤细胞,观察重组蛋白表达及其对培养的血管内皮细胞的抑制效应;在裸鼠A549肺癌模型中瘤内注射重组病毒,观察肿瘤抑制效应、剂量依从效应和毒副反应。结果不同感染复数的Ad-hEndo感染肿瘤细胞均表达重组内皮抑素蛋白,并能抑制血管内皮细胞的生长。动物实验中Ad-hEndo治疗组肿瘤体积及肺转移结节数明显低于对照组,且转移数与治疗剂量负相关。结论以腺病毒为载体的肿瘤局部血管基因治疗能抑制肿瘤新生血管形成进而有效抑制肿瘤生长和转移,其效应具有剂量依从性。     

血管内皮抑制素的研究进展

实体瘤当生长到一定的体积时必然伴随着血管生成。 1971年 ,Ｆｏｌｋｍａｎ[1] 最早提出肿瘤生长是血管依赖性的。他认为肿瘤血管生成是肿瘤生长和转移的形态学基础。它不仅向肿瘤提供充足的营养 ,同时也向机体输出肿瘤细胞 ,导致肿瘤细胞的恶性生长和转移。因此 ,Ｆｏｌｋｍａｎ[2 ] 提出抗血管疗法 ,设想抑制肿瘤血管生成 ,使肿瘤细胞因缺血、缺氧而大部分死亡 ,从而可延缓晚期肿瘤生长 ,延长病人带瘤生存期 ,并可抑制亚临床转移灶生长 ,推迟复发。这一设想为越来越多的证据所支持 ,并使这一领域成为肿瘤研究的热点及肿瘤治疗的新策略。人…     

可溶性血管内皮生长因子受体1真核克隆表达及其对血管内皮细胞增殖的影响

本研究旨在构建可溶性血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)受体1(soluble fmslike tyosine kinase-1,sFlt-1)的真核表达质粒pcDNA3.1-sFlt-1,并观察sFlt-1对血管内皮细胞增殖的影响。提取人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)总RNA,扩增Flt-1基因胞外1-3结构域,构建真核表达质粒pcDNA3.1-sFlt-1,测序鉴定基因序列。将重组质粒转染Lewis肺癌细胞,采用RT-PCR和SDS-PAGE检测sFlt-1在基因及蛋白水平的表达情况。MTT法检测sFlt-1对VEGF诱导的HUVECs生长的影响。结果显示:①插入片段序列正确;②sFlt-1在基因水平成功表达且转染后的Lewis肺癌细胞能分泌表达sFlt-1;③含sFlt-1的细胞上清液可明显抑制VEGF诱导的HUVECs增殖。本研究成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-sFlt-1,sFlt-1,在基因和蛋白水平均获得有效表达,且表达的蛋白可明显抑制由VEGF诱导...     

重组人血管内皮抑素联合放疗对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及VEGF表达的影响

目的:研究重组人血管内皮抑素(rh-Endostatin,YH-16,恩度)对不同放射剂量治疗的Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:制作Lewis肺癌细胞接种肿瘤的动物模型,并将60只模型小鼠随机分为5组:A,空白对照组(不予任何治疗);B,小剂量多次放疗组(1Gy/f,隔日一次,共4次);C,大剂量单次放疗组(4Gy/f,共1次);D,小剂量多次放疗联合恩度组(放疗前4天起每天右侧腹股沟区皮下注射恩度0.1ml,共15天,放射剂量为1Gy/f,隔日一次,共4次);E,大剂量单次放疗联合恩度组(放疗前4天起每天右侧腹股沟区皮下注射恩度0.1ml,共15天,放射剂量为4Gy/f,共1次)。分别给予上述处理后计算抑瘤率,并用免疫组化SP法测定各组VEGF的阳性表达率。结果:与C、E组比较,B、D组的抑瘤作用及VEGF表达下降明显(P<0.05),尤以D组抑瘤更强(P<0.05)、VEGF下降最多(P<0.05)。结论:放疗前使用恩度可使Lewis肺癌小鼠对放疗的敏感性增加,其机制可能与下调VEGF的表达有关。     

内皮抑素对肝癌HepG-2细胞生长和血管内皮生长因子表达的影响

目的:探讨内皮抑素对人肝癌细胞株HepG-2细胞生长和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及其可能的机制.方法:采用MTT法检测不同浓度的内皮抑素作用不同时间后对HepG-2细胞生长的抑制作用;电镜观察加药前后HepG-2细胞超微结构的变化;免疫组织化学法检测内皮抑素作用前后HepG-2细胞中存活素表达的改变;RT-PCR法检测加药前后HepG-2细胞中VEGF基因表达的变化.结果:内皮抑素能抑制HepG-2细胞的生长增殖,呈剂量-时间依赖性,并诱导细胞凋亡;内皮抑素作用后HepG-2细胞中存活素表达明显减少,VEGF表达明显减少.结论:内皮抑素通过下调存活素的表达,诱导HepG-2细胞的凋亡、抑制其增殖,并能显著降低HepG-2细胞中VEGF的表达.     

血管内皮抑素联合放射治疗对肿瘤微环境的影响

<正>肿瘤微环境疗法已成为治疗恶性肿瘤的一个重要新靶点。血管内皮抑素(Endostatin,ES)是目前研究最为透彻的内源性血管生成抑制因子,具有广谱的抗血管形成活性,可以与正常的血管形成相关基因进行作用,且毒副作用低可长期应用。大量研究证实ES可以抑制许多肿     

人内皮抑素抗肿瘤相关肽基因的克隆表达及活性研究

目的克隆并表达人内皮抑素抗肿瘤相关肽,检测其生物活性。方法人工合成人内皮抑素1~30位氨基酸(30肽,序列25~31由RGIRGAD改为RGDRGD)所对应的核苷酸序列,连接到质粒pTYB2中,再转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,几丁质亲和层析树脂一步纯化30肽。通过MTT法、鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验、小鼠体内抑瘤实验比较30肽和内皮抑素抗肿瘤活性。结果MTT证实30肽体外对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、胃癌7901细胞(SGC-7901)半数抑制浓度IC50为36μg/ml、47μg/ml,显著低于内皮抑素IC50179μg/ml、202μg/ml。CAM实验中30肽对血管的抑制作用更强。30肽在小鼠体内抑瘤率47.8%,效果优于内皮抑素28.7%。结论30肽具有更强抗肿瘤活性,有可能成为治疗肿瘤的一种新药物。     

肺癌患者血清血管内皮生长因子、内皮抑素的表达研究

目的探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、内皮抑素(En-dostatin)在肺癌患者血清中的表达以及与肺癌临床病理生理特征的关系。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测初诊肺癌患者47例及18例肺良性病变患者血清中VEGF、Endostatin的表达水平。结果肺癌患者血清中VEGF(60.93±38.23)pg/ml、Endostatin(131.71±50.32)ng/ml水平显著高于肺良性病变者(33.28±26.49)pg/ml,(85.86±36.86)ng/ml(均P(0.01);肺癌晚期、有淋巴结及远处转移及肺腺癌患者血清VEGF、Endostatin高表达。结论检测血清中VEGF及Endostatin均有助于肺癌的诊断及生物学行为的评估。     

体外构建内皮抑素基因真核表达载体抑制血管生成

背景：胶质瘤的根除治疗至今仍是一大难题,抗血管生成治疗胶质瘤有望成为新的有效途径。目的：证实内皮抑素在体外对血管生长的抑制作用,为今后利用其抑制肿瘤生长奠定实验室基础。方法：取Wistar大鼠肝脏,提取mRNA后利用RT-PCR获取内皮抑素cDNA片段。碱裂解法小量提取质粒pcDNA3。重组质粒pcDNA3-Endo的构建。重组pcDNA3-Endo真核表达载体转染骨髓间充质干细胞。RT-PCR及Western Blot检测内皮抑素基因的表达。MTT法检测ECV-304细胞增殖抑制实验。体外实验共分成4个组：重组质粒组、空载质粒组、脂质体对照组及空白对照组。结果与结论：成功构建pcDNA3-Endo重组真核表达质粒,pcDNA3-Endo质粒能在体外有效转录并分泌内皮抑素基因,转染了外源pcDNA3-Endo质粒的ECV-304细胞增殖明显受到抑制。结果提示内皮抑素基因能在体外有效抑制血管内皮细胞的增殖。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

内皮抑素对HepG-2细胞生长的影响及机制研究

目的探讨内皮抑素对人肝癌细胞株HepG-2细胞生长增殖和血管内皮生长因子（VEGF）基因表达的影响及其可能的机制,为临床肝癌治疗中内皮抑素的应用提供实验依据。方法采用MTT法检测不同浓度的内皮抑素作用不同时间后对HepG-2细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测内皮抑素对细胞凋亡及周期分布的影响;免疫组织化学法检测内皮抑素作用前后HepG-2细胞中survivin蛋白表达的改变;Western blotting法检测加药前后HepG-2细胞中VEGF蛋白表达的变化。结果内皮抑素能抑制HepG-2细胞的生长增殖（P〈0．05）,呈剂量-时间依赖性,并诱导细胞凋亡;免疫组织化学结果显示,内皮抑素作用后HepG-2细胞中survivin蛋白表达明显减少,差异具有显著性（P〈0．01）;Westernblotting结果显示药物作用组中VEGF蛋白表达明显减少,差异具有显著性（P〈0．01）。结论内皮抑素通过下调survivin蛋白的表达诱导HepG-2细胞的凋亡、抑制增殖,并能明显降低HepG-2细胞中VEGF的表达。     

荷人鼻咽癌裸鼠血血管内皮生长因子和内皮抑素的研究

目的：探讨不同病期荷人鼻咽癌裸鼠血血管内皮生长因子（VEGF）以及VEGF与内皮抑素（ES）比值的变化，以及它们与肿瘤发展的关系。方法：采用BALB/c裸小鼠复制荷人鼻咽癌裸鼠模型，通过ELISA方法和EIA方法分别测定不同病期荷人鼻咽癌裸鼠血VEGF和ES的浓度，并计算二者的比值。结果：发现荷瘤鼠血中VEGF含量在种瘤5 d组[(81.79±13.20) μg/L]或10d组[(87.78±2.76) μg/L]与正常裸鼠[(82.06±9.78) μg/L]比较未见明显差异（P>0.05），而种瘤20 d组[(101.58±10.71) μg/L]显著高于正常裸鼠（P<0.05）。种瘤30 d组、40 d组[(97.20±9.98) μg/L]、[(88.22±12.94) μg/L]与正常裸鼠、种瘤5 d组、10 d组比较未见明显差异（P>0.05）。随着荷瘤时间的延长，瘤宿主血VEGF含量逐渐升高，种瘤20 d组明显增高并达高峰，种瘤30 d组、40 d组降至正常水平。V/E比值在种瘤5 d组低于正常裸鼠（P<0.05），30 d组、40 d组持续在低水平（P<0.05）。结论：提示肿瘤的发展与血VEGF和VEGF/ES比值的变化有关。     

重组人血管内皮抑制素对小鼠胃癌c-Myc,bFGF表达的影响

目的 通过构建荷胃癌小鼠模型研究重组人血管内皮抑制素对癌基因c-Myc和成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响及可能机制.方法 20只小鼠皮下注射MFC小鼠前胃癌细胞从而构建小鼠胃癌移植瘤模型,后随机分成两组,每组10只,观察组腹腔注射0.8mg/kg重组人血管内皮抑素,对照组腹腔注射等量生理盐水.每天观察小鼠的一般情况,每3天测量肿瘤体积,绘制肿瘤体积生长曲线并对两实验组肿瘤体积进行比较;应用RT-PCR、Western bolt及免疫组织化学法检测两组小鼠肿瘤组织中c-Myc和bFGF的表达,免疫组织化学染色法检测肿瘤组织微血管密度(MVD)的表达,并通过Spearman分析c-Myc和bFGF两者的相关性.结果 在用药的过程中,对照组小鼠随着移植瘤结节的增大而发生行为明显改变,但观察组小鼠精神、反应、活动及进食饮水均如初,未见明显不良反应.治疗后第9d开始,观察组小鼠移植瘤体积明显小于对照组(P＜0.05),在第21 d最明显(P＜0.01).RT-PCR检测显示e-Myc,bFGF mRNA相对表达量明显低于对照组(P＜0.05);Western blot检测显也显示观察组c-Myc,bFGF蛋白的表达量明显低于对照组(P＜0.05);免疫组织化学检测显示c-Myc,bFGF阳性细胞数均明显低于对照组(P＜0.05),c-Myc,bFGF平均灰度值明显高于对照组(P＜0.05);对照组平均MVD为9.2±1.3,观察组为2.9±1.0,两组之间差异亦具有统计学差异(P＜0.05).且Spearman分析得出小鼠胃移植瘤中e-Myc和bFGF mRNA存在正相关(r=0.853,P=0.000).结论 重组人血管内皮抑制素通过抑制胃癌组织c-Myc,bFGF基因表达和血管生成.     

KDR反义寡核苷酸对人血管内皮细胞的作用

VEGF及其受体KDR在肿瘤血管生成中起重要作用。我们用KDR特异性反义寡核苷酸作用于人血管内皮细胞，以阻断VEGF的自分泌作用通路，观察对细胞增殖的影响、细胞超微结构的变化及检测细胞DNA含量，测定细胞分泌VEGF的能力，并检测作用后KDR mRNA和KDR蛋白的水平。结果发现未经处理的人血管内皮细胞能分泌一定量的VEGF，KDR ASODN能抑制人血管内皮细胞内KDR基因的表达，并显著抑制细胞的增殖，在一定剂量下还可诱导凋亡。结果说明KDR ASODN能显著抑制血管内皮细胞的增殖，VEGF受体KDR在人血管内皮细胞的增殖和凋亡的凋控中起重要作用。     

脑胶质瘤组织中内皮抑素的表达及其与血管形成的关系

目的:探讨内皮抑素在脑胶质瘤组织中的表达和意义及其与血管形成的关系.方法:免疫组化方法检测46例脑胶质瘤组织及5例正常脑组织中内皮抑素的表达水平及CD34标记的微血管密度.结果:内皮抑素在脑胶质瘤组织中高表达,并随着肿瘤恶性程度的增高而增强,且内皮抑素表达强度与肿瘤组织中微血管密度呈正相关.结论:内皮抑素在胶质瘤的发生、发展中起重要作用;且可能成为判断胶质瘤的恶性程度及预后的有效指标.