面部皮下福尔马林注射致大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核c-fos和GFAP表达的动态变化

目的：观察福尔马林致炎性鼠中枢三叉神经尾侧亚核（Sp5C）c-fos和胶质原纤维酸性蛋白（glialfibrilary acidic protein GFAP）表达的动态变化。方法：选择体重200-250g健康SD大鼠,在左上唇皮下注射2.5%福尔马林50μl建立炎性痛模型。分别在注射后30,60,120,240,360min等时间点处死,每组6只。免疫荧光染色观察各组大鼠同侧Sp5C核c-fos和GFAP表达的情况。结果：在面部皮下注射福尔马林后,fos阳性（fos-immunoreactivity,Fos-IR）神经元在注射后30分钟即可观察到,120分钟达到峰值,到360分钟观察结束仍有较高的表达。GFAP-IR在福尔马林注射后30分钟即有较高表达,60分钟达峰值后下降,240分钟即恢复到正常水平,二者分布区域相同。结论：在福尔马林致炎性痛模型中Sp5C内神经元和星形胶质细胞共同参与中枢神经系统对炎性疼痛刺激的调节,星形胶质细胞可能对神经元的活动有调节作用。     

颌面部甲醛疼痛模型行为特征及中枢c-fos的表达

目的:研究动物清醒状态下颌面部注射5%甲醛对大鼠诱发的伤害性行为反应特征与中枢神经元c-fos的表达情况。方法:将大鼠分为实验组(5%甲醛50μl右侧上唇区皮下注射)、对照组(0.9%生理盐水50μl右侧上唇区皮下注射)、冲动阻断组(1%Articain300μl右眶下区注射后10分钟再注射5%甲醛50μl)。观察注射后的伤害性行为反应———擦面反应和脑干c-fos的表达。结果:实验组大鼠出现明显的伤害性擦面反应,此行为反应呈典型的2个时相性:第一时相为注射后0～3min,经过一段平静期,12～42min为第二时相反应期;冲动阻断组仅有个别的伤害性行为反应;对照组无明确的伤害性行为反应。实验组在注射侧的三叉神经脊束核尾侧亚核(Vc)及腹侧髓质(VLM)可见大量的c-fos表达。冲动阻断组,两侧Vc及VLMc-fos表达数量及范围明显少于实验组。对照组未见c-fos表达。结论:清醒大鼠甲醛注射法可作为颌面部疼痛研究的动物实验模型。甲醛作为颌面疼痛刺激剂引发出的疼痛行为反应———擦面反应及中枢神经元c-fos表达,可否作为疼痛程度的指标,有待进一步研究。     

急性牙髓炎致敏时Vc核c-fos蛋白的时程变化

目的:研究大鼠急性牙髓炎造成中枢致敏时三叉神经脊束核尾侧亚核(caudal part of spinaltrigeminal nucleus,Vc)内c-fos蛋白的变化情况。方法:建立大鼠急性牙髓炎模型,利用免疫组化实验检测不同时间点Vc核c-fos蛋白变化情况,采用单因素方差分析比较不同时间点的变化情况。结果:在封药后12h至24h,Vc核c-fos阳性神经元表达数目显著增多。结论:Vc内c-fos蛋白的变化时程与牙髓炎进展密切相关。     

颌面不同强度伤害性刺激后疼痛行为和中枢神经元c-fos表达比较研究

目的：采用福尔马林疼痛动物模型，定量比较颌面部不同浓度福尔马林刺激后动物疼痛行为和中枢神经元c-fos表达。方法：第Ⅰ-Ⅳ组分别于大鼠右侧上唇皮下注射50μl5％、2．5％、1．5％福尔马林液和生理盐水；第V组右侧眶下注射1％ Articaine 300μl，l0min后再于右侧上唇皮下注射5％福尔马林50μl。记录比较注射后1h内动物疼痛行为，2h后的脑干切片c-fos表达阳性神经元数目。结果：不同浓度福尔马林液刺激均可诱发典型的两个时相性的疼痛反应，5％福尔马林诱发更明显的疼痛行为，但并没有产生更多的擦面行为。脑干三叉神经脊索核c-fos表达量与福尔马林浓度高度相关。结论：擦面行为是颌面部福尔马林刺激引起的特异性疼痛行为，可反映伤害性刺激强度，但浓度宜低于2．5％(或2．5％)。中枢c-fos表达是外周伤害性刺激后神经元兴奋的标志，c-fos表达量可代表外周伤害性刺激强度。     

口颌面部炎性疼痛对大鼠三叉神经脊束核p38信号转导的影响

目的 观察口颌面部炎性疼痛对大鼠中枢p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 mitogenactivated protein kinase,p38MAPK)活性的影响.方法采用标准的福尔马林实验方法,在大鼠上唇皮下组织内注射2.5％福尔马林50μl建立福尔马林致口颌面部炎性疼痛模型,设正常对照组(对照组)、福尔马林组(FOR组)、福尔马林+生理盐水组(FOR+ NS组)和福尔马林+抑制剂阻断组(FOR+SB组).后两组大鼠小脑延髓池内置管,于造模前20 min 给予生理盐水或p38MAPK抑制剂(SB203580),观察动物行为变化.免疫荧光和蛋白质印迹法检测各组大鼠注射福尔马林20、60、120和180 min 时三叉神经脊束核尾侧亚核(Vc核)c-fos表达和p38MAPK、磷酸化p38 MAPK( p-p38)含量的变化.结果各组Vc核总p38MAPK水平差异无统计学意义(P＞0.05),但FOR组和FOR+ NS组20 min时p-p38水平[分别为(0.66±0.04)和(0.64±0.04)]比对照组(0.12±0.01)明显增加(P＜0.001).各组p-p38在福尔马林注射后20 min达高峰,之后逐渐下降.与FOR组和FOR+NS组相比,FOR+ SB组大鼠由福尔马林引发的第Ⅱ期疼痛行为反应明显受到抑制(P＜0.05);同时,Vc核的c-fos表达也减弱,在120 min 时减弱最明显(P＜0.01).结论福尔马林致口颌面部炎性疼痛模型中p38MAPK活化水平增加,参与病理性疼痛的形成;p38MAPK抑制剂可明显缓解疼痛,进一步证实了p38MAPK在口颌面部炎性疼痛中的作用.     

实验性牙移动后三叉神经脊束核尾侧亚核CGRP的研究

目的：研究实验性牙移动过程中，三叉神经脊束核尾侧亚核(Vc)内降钙素基因相关肽(CGRP)的改变。方法：在大鼠左侧上颌第一、二磨牙间塞入一弹性橡皮圈模拟临床正畸加力状态。于不同加力时间点对三叉神经脊束核尾侧亚核进行CGRP免疫组化染色。结果：加力后6h和24h，实验侧三叉神经脊束核尾侧亚核CGRP样纤维明显少于对侧；施力3d后Vc浅层中CGRP样阳性终末与对照侧无明显差异，加力后1w大于对侧，2w时恢复至对侧水平。结论：实验性牙移动引起CGRP在三叉神经脊束核尾侧亚核释放。     

三叉神经脊束核小胶质细胞在大鼠口面部癌性疼痛调节过程中的作用评价

目的 探讨三叉神经脊束核尾侧亚核（Vc）小胶质细胞在口腔癌性疼痛调控中的作用。方法 健康成年雄性Wistar大鼠（280~300 g）,采用舌黏膜下注射Walker 256细胞悬液,制备舌肿瘤疼痛模型。实验一,将大鼠随机分为2组（n=10）,即对照组（Sham组）和肿瘤组（Tumor组）。观察肿瘤生长,通过测定大鼠机械缩头反应阈值（HWMT）观察口面部机械痛行为,通过免疫荧光技术检测Vc小胶质细胞的增殖、活化情况。实验二,将大鼠随机分为4组（n=10）,即对照+空白组（Sham+Veh组）、对照+抑制剂组（Sham+Mino组）、肿瘤+空白组（Tumor+Veh组）、肿瘤+抑制剂组（Tumor+Mino组）。检测Vc小胶质细胞的增殖、活化情况,利用qRT-PCR检测Vc中Iba-1、IL-6、IL-1β及TNF-α的mRNA表达水平。测定HWMT,观察大鼠口面部机械痛行为变化。采用SPSS 19.0 软件包对数据进行统计学处理。结果 与Sham组相比,随着肿瘤不断增长,Tumor组于第5天时开始出现口面部机械痛（P<0.05）,Vc小胶质细胞显著增殖、活化,直至第10天仍处于口面部机械痛敏和小胶质细胞活化状态。给予米诺环素后,与Tumor+Veh组相比,Tumor+Mino组大鼠的Vc小胶质细胞增殖活化显著受到抑制,Iba-1、IL-6、IL-1β及TNF-α mRNA水平显著降低（P<0.01）,HWMT显著升高（P<0.05）,机械痛敏显著减轻。结论 小胶质细胞增殖活化促进炎症因子释放,参与口面部癌性疼痛的发生、发展过程。抑制小胶质细胞活化,可显著减轻口面部癌性疼痛。     

三叉神经脊束核尾侧亚核星形胶质细胞对咬合创伤的反应

目的：观察大鼠咬合创伤后三叉神经脊束核尾侧亚核（Sp5C）内星形胶质细胞的反应,探讨星形胶质细胞在咬合创伤中的作用。方法：用方丝将大鼠左侧上颌第一磨牙咬合抬高0.5mm,形成左侧磨牙早接触的创伤咬合。粘固后1,3,7,14,30d取三叉神经脊束核尾侧亚核,免疫荧光染色观察星形胶质细胞在三叉神经脊束核尾侧亚核的表达变化。结果：对照组见少量胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）阳性星形胶质细胞呈散在分布,咬合创伤3d时,实验侧GFAP阳性面积增加,荧光强度增强;7d时达到高峰,14d组GFAP阳性反应产物开始减少。结论：咬合创伤激活了星形胶质细胞,提示星形胶质细胞在口颌面痛产生及维持中发挥作用。     

TRAF6/c-fos在PTH加速兔下颌骨截骨术后正畸牙移动机制的初步研究

目的　研究外源性甲状旁腺激素（PTH）对下颌升支截骨术后正畸牙移动过程中肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）和c-fos mRNA表达变化,探讨PTH加速截骨术后正畸牙移动的调控机制。方法：48只兔建立下颌升支截骨和下颌第一磨牙正畸移动模型,随机分成实验组和对照组。实验组术后间断性注射PTH 40 μg/kg,对照组皮下注射生理盐水,术后测量下颌第一磨牙近中移动速度。HE染色观察正畸牙压力侧组织形态学变化;TRAP染色计数压力侧牙周组织破骨细胞的数目;Real-time PCR检测下颌第一磨牙牙周组织中TRAF6和c-fos mRNA表达变化。结果：实验组下颌第一磨牙近中移动速度快于对照组,且实验组正畸牙压力侧破骨细胞数目较对照组多。实验组正畸牙压力侧牙周组织TRAF6和c-fos mRNA表达均高于对照组（P<0.05）。结论：外源性PTH可通过促进正畸牙压力侧牙周组织中TRAF6和c-fos mRNA表达,促进破骨细胞的成熟和分化,从而加速下颌升支截骨术后正畸牙的移动。     

YDM—1牙科电子麻醉仪引起Vc内SP,CGRP的变化

目的： 分析面部ＴＥＮＳ后,三叉神经脊束核尾侧亚核（Ｖｃ）内Ｐ物质（ＳＰ）、降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）的变化。方法：利用免疫组织化学染色方法观察大鼠面部ＴＥＮＳ后１、２、４ｈ,Ｖｃ 内ＳＰ、ＣＧＲＰ免疫阳性纤维的变化。结果：面部ＴＥＮＳ后１ｈ 实验侧与对照侧相比,ＳＰ、ＣＧＲＰ免疫阳性纤维减少,甚至有脱失现象,２ｈ组呈恢复趋势,４ｈ 组与对照侧无显著差异。结论：面部ＴＥＮＳ引起Ｖｃ 内三叉神经末梢大量释放ＳＰ、ＣＧＲＰ。     

咬合创伤致咀嚼肌疼痛的中枢机制研究

目的观察咬合创伤后咬肌区的化学和机械伤害性刺激对中枢神经系统c- fos、P物质（ SP）表达的影响。方法在!面洞型内放入一个2 mm牙用固位钉造成咬合干扰,咬合创伤形成后7 d,咬合创伤机械刺激组和机械刺激对照组在麻醉下对左侧咬肌区行机械性刺激,记录有疼痛反应次数,2 h后处死动物。咬合创伤化学刺激组和化学刺激对照组在麻醉下左侧咬肌区注射体积分数为5%甲醛,2 h后处死动物。取大鼠脑干组织,用SABC漂染法检测c- fos、SP表达,并定量分析。结果机械刺激和化学刺激后,c- fos在脑干obex水平和颈髓C1- 2水平有两个表达高峰,咬合创伤机械刺激组和咬合创伤化学刺激组动物c- fos表达均明显高于其对照组（ P<0.05）。咬合创伤机械刺激组机械性刺激后脑干SP表达明显高于其对照组（ P<0.05）,在颈髓C1- 2水平SP表达咬合创伤机械刺激组比其对照组增高,但无统计学差异（ P=0.072）。结论咬合创伤可引起脑干和颈髓中枢神经元的敏化,是咬合创伤致咀嚼肌疼痛的中枢机制之一。     

大鼠眶下孔注射高渗盐水阿霉素后三叉神经节的病理变化

目的：本实验旨在研究大鼠眶下孔注射高渗盐水阿霉素后,三叉神经功能和三叉神经节细胞病理形态的变化。方法：48只SD大鼠,随机分为A、B两组,每组24只,每组又分四个时间点：1周组,2周组,1月组,3月组取材,每时间点6只大鼠。将A、B组分别给予10%NaCl和1%阿霉素的混合溶液10μl眶下孔注射,生理盐水10μl眶下孔注射（B组）每组给药后于1周、2周、1月及3月时测试各组剩余大鼠的触须垫感觉功能,后处死取三叉神经节标本,制作H E染色切片,分别观察神经节细胞的形态学变化,用等距随机抽样法记录节细胞总数及异常节细胞率。结果：各组动物感觉功能测试,A、B组同时间点有统计学差异（P〈0.01）,眶下孔内神经周围注射高渗盐水阿霉素溶液后A 1-A 4组节细胞总数呈递减趋势（同组各时间点分别比较,P〈0.01）,显著低于B组同时间点（P〈0.01）,而与B组各时间点相比,无统计学差异（P〉0.05）;异常节细胞率A 1-A 4组呈递增趋势（A组各时间点相比（P〈0.01）,显著高于B组同时间点（P〈0.01）。结论：大鼠眶下孔内神经周围注射高渗盐水阿霉素后,阿霉素可在高渗盐水的作用下被神经纤维大量吸收并进一步逆行运输到三叉神经节,随着时间的延续引起三叉神经节细胞的渐进性退变。     

Sustained microglial immunoreactivity in the caudal spinal trigeminal nucleus after formalin injection

Recent studies indicate that glia may be involved in altered nociceptive processing after a peripheral inflammatory lesion produced by injection of inflammatory reagents such as formalin and zymosan. Most of these studies, however, confined their observations to a period shortly after the injections. This study investigated the immunohistochemical responses of microglia in the caudal part of the spinal trigeminal nucleus for up to 60 days after subcutaneous injection of formalin into the lateral faces of Wistar rats. The results showed obvious up-regulation of microglial markers such as OX-18, OX-42 and OX-6 up to 21 days after formalin injection. These were somewhat reduced at 30 days after injection. Electron microscope investigation revealed no evidence of significant phagocytosis of degenerative neuronal elements by microglia in the nucleus at the time--that is, 7 days after formalin injection, when microglial activation was at its peak. Significantly, however, the period of microglial activation corresponded closely to that showing enhanced nociceptive behavior after perioral formalin injection (Cadet et al., 1995). This study indicates a microglial role in the genesis of enhanced nociceptive behavior.     

PKCgamma in Vc and C1/C2 is involved in trigeminal neuropathic pain

The aim of the present study was to clarify the involvement of protein kinase Cγ (PKCγ) in the facial neuropathic pain following infraorbital nerve injury. We analyzed the change in PKCγ expression in the trigeminal spinal subnucleus caudalis (Vc) and upper cervical spinal cord (C1/C2) following chronic constriction injury of the infraorbital nerve (ION-CCI). We also studied ION-CCI-mediated mechanical nocifensive behavior in rats. The mechanical head-withdrawal threshold significantly decreased 1 to 14 days after ION-CCI compared with that before ION-CCI and in sham rats. The expression of PKCγ was significantly larger in the ipsilateral Vc compared with the contralateral side in ION-CCI rats 3, 7, and 14 days after ION-CCI. Intrathecal (i.t.) administration of the PKCγ inhibitor chelerythrine prevented an increase in the PKCγ expression in the ipsilateral Vc. Moreover, i.t. administration of chelerythrine annulled ION-CCI-mediated reduction in the head-withdrawal threshold. Taken together, these findings suggest that PKCγ expression in the Vc played an important role in the mechanism of orofacial static mechanical allodynia following trigeminal nerve injury.     

牙周炎对大鼠血清瘦素水平及胰岛素抵抗的影响

目的探讨实验性牙周炎对正常和肥胖大鼠血清瘦素水平及胰岛素抵抗的影响。方法 32只雄性SD大鼠随机等量分为肥胖组、牙周炎组、肥胖与牙周炎复合组以及正常对照组。采用皮下注射谷氨酸钠的方法建立肥胖大鼠模型,结扎双侧上颌磨牙建立牙周炎模型。4组大鼠饲养20周后处死,采集血样,运用酶联免疫吸附法检测大鼠血清中瘦素,空腹胰岛素和空腹血糖水平,并计算胰岛素抵抗指数。结果牙周炎组和肥胖与牙周炎复合组大鼠的血清瘦素浓度分别为（11.10±3.36）ng/mL和（50.51±7.60）ng/mL,空腹血糖分别为（12.83±1.87）mmol/L和（7.10±1.32）mmol/L,分别高于正常对照组和肥胖组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。血清瘦素水平的升高与胰岛素抵抗指数存在正相关关系。结论牙周炎可诱导正常与肥胖大鼠的血清瘦素水平和胰岛素抵抗指数升高,尤其是肥胖大鼠更显著,牙周炎可加重其高瘦素血症和胰岛素抵抗状态。     

正畸牙齿移动刺激信息传导通路的动物实验研究

研究丘脑腹后内侧核（ＶＰＭ）是否接受来自三叉神经脊核尾业核传入的牙齿移动性刺激信息,从而探讨牙齿动引起的伤害性刺激信息在中枢神经系统内的感觉传导通路。方法：用微量注射器将２％荧光金ＦＧ）注入大鼠ＶＰＭ４－６ｄ后,进行对侧的实验性牙齿移动２ｈ,用ＦＯＳ蛋白免疫化方法观察Ｖｃ内神经元对ｃ－ｆｏｓ的表达以及是否存在ＦＧ与ＦＯＳ双重阳性的神经元。结果ＦＯＳ阳性神经元密集分布于同侧Ｖｃ浅层,呈带状,背外侧居     

新型SD大鼠压迫性三叉神经痛动物模型建立及其作用研究

目的    本实验探讨建立一种新型SD大鼠压迫性三叉神经痛（TN）动物模型。方法    本研究于2014年6月于中国医科大学附属口腔医院中心实验室进行。雄性SD大鼠30只随机分为2组：实验组15只经脑定位仪3D定位至三叉神经根处,利用微量注射器将5%琼脂溶液10 μL注射到三叉神经根;对照组15只注射等量生理盐水。术前1 d和术后1、2、3、5、7、10、14、21、28、35、42 d分别进行行为学观察,Von Frey纤维测定大鼠机械性刺激反应阈值,利用方差分析及t检验对机械刺激阈值进行统计学分析。同时取压迫处三叉神经行苏木精—伊红（HE）及嗜银染色,并进行三叉神经节（TG）内星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的免疫荧光检测。结果    实验组大鼠术侧机械刺激反应阈值在术后逐渐降低并稳定持续约30 d（P＜0.05）,HE及嗜银染色显示神经纤维肿胀、脱髓鞘样改变;实验组大鼠术侧TG内星形胶质细胞GFAP表达明显增强。结论    琼脂压迫大鼠三叉神经根可以建立稳定的TN动物模型,为未来进一步研究TN病因及治疗提供一种可靠而有效的动物模型。