AAVC-1诱导A549细胞凋亡的线粒体机制研究

目的:探讨皖南五步蛇蛇毒抑瘤组分Ⅰ(AAVC-1)诱导人非小细胞型肺癌A549细胞凋亡的作用,并分析其可能的线粒体机制。方法:以不同作用浓度的AAVC-1处理A549细胞,采用Annexin V/PI双染流式细胞仪分析法检测A549细胞凋亡百分率;JC-1检测细胞线粒体的膜电位变化,免疫组化检测细胞色素C在线粒体内的分布。结果:不同浓度梯度AAVC-1 1.0、3.0、9.0、20.0μg/m L处理24 h后,与对照组相比,A549细胞早期凋亡率明显增加(P<0.05);线粒体膜电位绿色荧光百分比由(23.01±6.07)%上升至(87.26±9.54)%(P<0.01),荧光显微镜观察到绿色荧光增强;免疫组化显示,随着AAVC-1浓度增加,胞质内细胞色素C平均光密度值明显增加(P<0.05)。结论:AAVC-1可以通过降低线粒体膜电位和促进细胞色素C的释放,激活线粒体通路诱导人非小细胞型肺癌A549的凋亡。     

大麻受体激动剂对肺癌A549细胞凋亡和增殖的影响

目的研究大麻受体激动剂(delta9-tetrahydrocannabinol,THC)对肺癌A549细胞凋亡和增殖的影响。方法 MTT法测定THC对A549细胞增殖的影响;苏木精-伊红染色、扫描电镜观察细胞的形态学变化;Western blot法分析大麻受体CB1、CB2的蛋白表达;DNA梯度电泳检测A549细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞凋亡率变化。结果 THC预处理后,MTT检测表明THC对A549细胞增殖有明显抑制作用,随着药物浓度增大,抑制作用更加明显;苏木精-伊红染色、扫描电镜观察显示:肺癌A549细胞有典型的细胞凋亡形态;Western blot检测显示:A549细胞大麻受体CB1、CB2水平较正常气道上皮细胞株16HBE升高;DNA梯度电泳法及流式细胞仪检测显示:THC能抑制A549细胞生长,诱导其凋亡,并具有剂量依赖性。结论大麻受体激动剂THC能抑制肺癌细胞的增殖,并诱导肺癌细胞凋亡,此效应可能与大麻受体CB1、CB2作用有关。     

细胞因子诱导的杀伤细胞对Lewis肺癌细胞的抑瘤作用及抑瘤机制的研究

目的观察细胞因子诱导的杀伤(cytokine induced killer,CIK)细胞对Lewis肺癌细胞增殖和Lewis肺癌移植瘤生长的抑制作用,探讨其抑瘤机制。方法常规方法培养CIK细胞,以CIK细胞为效应细胞,Lewis肺癌细胞为靶细胞,以不同效靶比共同培养,MTT法检测细胞增殖情况,同时电镜观察Lewis肺癌细胞形态特征改变;流式细胞仪检测Lewis肺癌细胞的凋亡;免疫细胞化学法检测并比较FasL在单个核细胞和CIK细胞表面的表达;用MTT法检测抗FasL单克隆抗体对CIK细胞杀伤Lewis肺癌细胞的影响;用ELISA方法检测Lewis肺癌荷瘤小鼠脾细胞上清液中IL-2、IL-4、IFN-γ和TNF-α浓度。结果电镜观察:CIK细胞能促进Lewis肺癌细胞凋亡超微结构的改变;流式细胞仪检测:CIK细胞组凋亡率明显高于对照组;FasL在CIK细胞表达增加;抗Fas单抗可抑制CIK杀伤Lewis肺癌细胞的活性;CIK细胞治疗的Lewis肺癌小鼠脾细胞培养上清液中细胞因子水平明显高于对照组。结论CIK细胞可在体内及体外抑制Lewis肺癌细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,Fas/FasL途径在其中发挥一定作用,同时CIK细胞抗肿瘤作用可能与淋巴细胞活化和分泌细胞因子有关。     

CIK细胞对Lewis肺癌细胞凋亡作用的影响

目的观察CIK(cytokine induced killer)细胞对Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用,探讨其抑瘤机制。方法常规方法培养CIK细胞,以CIK细胞为效应细胞,Lewis肺癌细胞为靶细胞,检测Lewis肺癌细胞的凋亡情况。结果电镜观察CIK细胞能促进Lewis肺癌细胞凋亡超微结构的改变;流式细胞仪检测CIK细胞组凋亡率明显高于对照组。结论CIK细胞可在体内及体外抑制Lewis肺癌细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡。     

塞来昔布对Lewis肺癌的抑制作用

目的:观察选择性COX-2抑制剂塞来昔布对Lewis肺癌细胞增殖和Lewis肺癌移植瘤生长的抑制作用,探讨其作用机制.方法:应用不同浓度塞来昔布与Lewis肺癌细胞共培养,以MTT比色法检测细胞增殖,ELISA法检测细胞上清液VEGF浓度,流式细胞术检测细胞凋亡情况.20只C57BL/6小鼠进行Lewis肺癌移植瘤实验,随机分为加药组(每天给以含塞来昔布1 mg/g的食物)和对照组(普通食物),电镜观察药物作用24 h后Lewis肺癌移植瘤细胞的超微结构改变;免疫组化检测移植瘤VEGF和COX-2的表达.结果:塞来昔布对Lewis肺癌细胞增殖有抑制作用,效应呈剂量(120、50、12.5、3.1、0 μmol/L)和时间(24、48、72 h)依赖性.50 μmol/L塞来昔布组细胞凋亡率为(14.93±0.79)%,明显高于对照组的(4.73±0.83)%(P<0.001).药物组移植瘤质量为(1.37±1.04) g,明显低于对照组的(3.49±1.75) g (P<0.01),抑瘤率为60.1%.电镜观察Lewis肺癌组织,药物组出现较多有凋亡特征的细胞.免疫组化结果显示塞来昔布对肿瘤组织的VEGF表达有明显抑制作用.结论:塞来昔布可在体内及体外抑制Lewis肺癌细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管生成是其可能的作用机制.     

咖啡酸锗对小鼠肝癌H22端粒酶活性及凋亡的影响

目的:探讨咖啡酸锗对小鼠肝癌H22端粒酶活性及细胞凋亡的影响.方法:建立小鼠肝癌H22移植瘤模型,应用咖啡酸锗腹腔注射给药后,通过电镜观察H22细胞凋亡的情况以及用ELISA法半定量检测端粒酶活性.结果:咖啡酸锗能诱导H22细胞凋亡以及抑制端粒酶的活性,并与药物浓度有关.结论:咖啡酸锗能显著抑制H22细胞端粒酶的活性,抑制其细胞增殖,诱导其细胞凋亡.     

反义端粒酶RNA对肺癌细胞A549抑制作用研究

目的 探讨反义人端粒酶RNA(human telomeric,RNA,hTR)对肺癌细胞A549端粒酶活性和细胞增殖的抑制作用，研究以端粒酶为靶的肺癌基因治疗的可能性。方法 将端粒酶hTR的cDNA反向插入到逆转录病毒载体pLXRN中，转染包装细胞PT67后获得反义hTR重组病毒，感染肺癌细胞A549。处理前后采用TRAP法检测端粒酶活性，光镜观察细胞形态，DNA电泳观察凋亡情况。结果 作用后端粒酶活性和细胞增殖受到明显抑制，并出现明显的细胞凋亡。结论 反义hTR 对肺癌细胞A549端粒酶活性具有明显的抑制作用，使肺癌细胞A549生长抑制，促进细胞凋亡。     

Fas诱导胃印戒细胞癌细胞株增殖与凋亡的研究

目的:研究不同浓度的Fas对胃印戒细胞癌细胞株的影响.方法:采用细胞染色法观察细胞凋亡的形态,MTT法检测细胞增殖情况,原位末端标记法(TUNEL法)检测凋亡细胞,流式细胞仪检测细胞的DNA含量及凋亡百分率.结果:2～8μg/ml的Fas均可抑制胃印戒细胞癌细胞增殖且诱导细胞发生凋亡.结论:Fas有明显抑制胃印戒细胞癌细胞株生长及促进细胞凋亡的作用     

蝎毒对小鼠淋巴瘤细胞株的生长抑制和诱导凋亡作用的研究

目的：研究蝎毒对小鼠淋巴瘤细胞株的生长抑制和诱导凋亡作用。方法：应用MTI、法观察蝎毒对细胞的抑制作用,光镜、透射电镜观察细胞结构的改变,原位末端标记检测DNA断裂,流式细胞术分析凋亡细胞。结果：蝎毒(12．5—200μg/ml)可明显地抑制小鼠淋巴瘤细胞生长和诱导细胞凋亡,并且其作用强度在一定范围内呈现对浓度和时间的依赖性。结论：蝎毒能抑制小鼠淋巴瘤细胞生长和诱导细胞凋亡。     

不同活化表型的巨噬细胞对Lewis肺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨不同活化表型的小鼠巨噬细胞对小鼠Lewis肺癌(LLC)细胞增殖和侵袭的影响.方法 分别以mr IFN-γ LPS、mr IL-4处理小鼠RAW264.7巨噬细胞,24 h后以RT-PCR鉴定它们表达经典活化的巨噬细胞(caMphi)或替代性活化的巨噬细胞(aaMphi)的标识iNOS或Fizz1的情况.采用Transwell系统共培养活化的巨噬细胞(分为4组:空白对照组、caMphi组、aaMphi组、RAW264.7组)和LLC细胞,绘制LLC细胞生长曲线,并以免疫细胞化学法检测LLC细胞表达血管内皮生长因子-C(VEGF-C)情况,以硝酸还原酶法检测培养液上清中NO含量.分别采用3H-TdR掺入法和Transwell侵袭模型观察活化的巨噬细胞对LLC细胞增殖和侵袭的影响.结果 成功地建立了小鼠caMphi和aaMphi模型.在4个共培养组中,aaMphi组的LLC细胞生长最快,表达VEGF-C最强,RAW264.7组次之;caMphi组大量分泌NO,其余3组未见NO分泌.通过3H-TdR掺入法和Transwell侵袭模型观察到,aaMphi组的LLC细胞增殖速度最快,侵袭能力最强;RAW264.7组次之;caMphi组的LLC细胞的增殖和侵袭则受到抑制.结论 aaMphi能够促进LLC细胞的增殖和侵袭,与其上调后者表达VEGF-C有关;caMphi能够抑制LLC细胞的增殖和侵袭,与其大量分泌NO有关.在与LLC细胞共培养后,RAW264.7细胞的功能朝着aaMphi的方向极化.     

莱菔硫烷对小鼠肺癌细胞凋亡的影响及机制研究

目的：研究莱菔硫烷（sulforaphane,SFN）对小鼠肺癌细胞系（Lewis lung cancer cells,LLC）细胞的生长抑制作用,并探讨其作用机制。方法：CCK?8 法鉴定SFN对LLC细胞增殖率的影响;流式细胞术检测SFN对LLC细胞周期和细胞凋亡的影响;DCFH?DA探针检测SFN对LLC细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）表达的影响;Western blot检测SFN对LLC细胞Nrf2蛋白和ERK信号通路的影响。最后通过皮下注射建立C57BL/6J小鼠肺癌模型,建模后实验组及对照组分别给予SFN及PBS灌胃处理,检测SFN治疗对小鼠肿瘤的影响。结果：细胞实验证实SFN能显著抑制小鼠LLC细胞的增殖（P < 0.05）,促进LLC细胞的凋亡,随着SFN浓度的增加,LLC细胞晚期凋亡比例逐渐升高（P < 0.05）。细胞周期分析提示12.5 μmol/L和25.0 μmol/L的SFN处理可减少LLC细胞G1期比例（P < 0.05）,增加G2/M期的细胞比例（P < 0.01）,细胞周期相关基因CyclinD1、CDK4、CDK6、CyclinB1和CDK1的表达显著下降（P < 0.01）。Western blot提示SFN促进LLC细胞ERK磷酸化以及增加Nrf2表达（P < 0.05）。流式细胞术检测DCFH?DA探针显示SFN能显著提高LLC细胞内ROS水平。动物实验结果发现SFN处理组小鼠肿瘤显著小于对照组（P<0.05）。结论：体内及体外实验证实SFN触发LLC细胞内ERK磷酸化,使得细胞内Nrf2表达增加,细胞内ROS水平升高,阻滞细胞周期,从而加速LLC细胞的凋亡。SFN可能会是一种安全且有效的抗癌药物。     

P38MAPK在双氢青蒿素诱导Lewis肺腺癌细胞凋亡中的作用

目的探讨p38丝裂素活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPK）在双氢青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）所致小鼠Lewis肺腺癌（Lewis lung carcinoma,LLC）细胞凋亡中的作用。方法以DHA处理LLC细胞后,采用四甲基偶氮唑盐（microculture terazolium,MTT）法观察LLC细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率,采用透射电镜观察凋亡细胞的形态,应用Western blot法检测p38MAPK表达及SB202190对其表达的影响。结果 DHA抑制LLC细胞增殖具有剂量效应关系,能使LLC细胞周期阻滞于G0/G1期;经20μg/ml DHA处理后,透射电镜下可见典型的凋亡细胞,Western blot显示p38MAPK表达阳性,并能被SB202190所抑制。结论 p38MAPK的活化参与了DHA诱导LLC细胞凋亡的过程。     

Bcl-2家族在阿司匹林诱导人小细胞肺癌A549细胞凋亡中的作用

摘要 目的: 研究阿司匹林对人小细胞肺癌A549细胞体外增殖抑制作用及凋亡的影响,探究Bcl-2在诱导凋亡机制中的作用。方法:运用体外细胞培养,阿司匹林以不同浓度（1,2.5,5,7.5,10mmol/L）作用于人小细胞肺癌A549细胞。采用噻唑蓝(MTT)法测定阿司匹林对细胞杀伤率;用流式细胞检测法测定细胞周期时相改变及细胞凋亡率;琼脂糖电泳法观察凋亡细胞DNA Ladder 现象;Western blot检测凋亡相关基因Bcl-2等表达;荧光染色观察细胞线粒体膜电位的改变。结果：阿司匹林对人小细胞肺癌A549细胞有较强的抑制作用,有明显的时间和剂量依赖性;可使A549细胞G0/G1期和G2/M期比例明显下降,S期比例升高;诱导细胞凋亡发生;阿司匹林作用A549细胞后,Bcl-2表达量减少,Bax表达增加,Caspase3活化,线粒体膜电位改变。结论：阿司匹林在体外可有效抑制人小细胞肺癌A549细胞增殖,可能通过影响肿瘤细胞DNA合成,改变细胞周期时相分布、诱导凋亡发挥抑制细胞增殖作用,其凋亡机制与Bcl-2表达减少,线粒体膜跨膜电位下降相关。     

阳和汤小鼠血清促进淋巴细胞增殖和阿霉素诱导的HL-60细胞凋亡

目的:观察阳和汤小鼠血清对淋巴细胞增殖和阿霉素致肿瘤细胞死亡的影响。方法:MTT法检测细胞增殖,Western blotting检测bax/bcl-2表达,Histone/DNA ELISA检测细胞凋亡,ELISA与分光光度法分别检测细胞色素C释放和caspase-3激活,流式细胞检测线粒体膜电位。结果:阳和汤小鼠血清能增强小鼠淋巴细胞增殖和对阿霉素的抵抗,但促进阿霉素引起的HL-60细胞生长抑制、DNA断裂、细胞色素C释放和caspase-3激活,上调其bax/bcl-2表达比率,增加细胞凋亡。结论:阳和汤有增强阿霉素抗肿瘤作用,激活肿瘤细胞凋亡通路可能是其化疗增敏的主要机制。     

凋亡抑制因子反义寡核苷酸对肝癌细胞生物学作用

目的: 探讨survivin反义寡核苷酸对人肝癌细胞凋亡、增殖、化疗药物敏感性的影响. 方法: 设计合成特异性survivin的反义寡核苷酸(ASODN). 以高表达survivin基因的人肝癌细胞系(SMMC-7721)为靶细胞、ASODN为阻断剂,Western blot法检测细胞survivin表达情况, 通过MTT试验观察ASODN对该细胞系的生长抑制作用, 倒置显微镜观察细胞形态变化, 流式细胞仪分析细胞增殖周期, MTT法检测survivin表达抑制前后细胞对紫杉醇敏感性影响. 结果: ASODN明显抑制了SMMC-7721肝癌细胞的生长, 细胞分裂阻滞在分裂期的中期,并诱导细胞发生凋亡, 而各对照组细胞生长良好; 各ASODN药物组细胞凋亡指数明显高于各对照组(P<0.05)且细胞增殖指数明显低于各对照组(P<0.05); 紫杉醇药物组细胞IC50低于对照组(16.2±2.2) μg/L vs (35.5±4.3) μg/L, P<0.01. 结论: survivin ASODN能下调其蛋白表达, 诱导人肝癌细胞凋亡, 抑制细胞增殖,增加肝癌细胞对化疗药物的敏感性.     

白花蛇舌草提取液诱导人肺癌SPC-A-1细胞凋亡的实验研究

目的:探讨中药白花蛇舌草提取液(HDE)诱导人肺癌SPC-A-1细胞凋亡的作用及初步作用机制。方法:MTT法检测HDE对人肺癌SPC-A-1细胞生长的影响;采用倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞形态变化;用DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂的情况(DNA梯状条带);用流式细胞仪检测细胞凋亡率;用免疫组化分析bcl-2基因在SPC-A-1细胞中的表达。结果:HDE抑制SPC-A-1细胞的生长,其效果与白花蛇舌草的浓度和作用时间相关;倒置、荧光镜下SPC-A-1细胞出现细胞凋亡早期形态学改变;琼脂糖凝胶电泳呈现典型的“ladder”;流式检测到凋亡峰,且凋亡率呈浓度依赖性;免疫组化结果提示HDE能使SPC-A-1细胞bcl-2蛋白表达降低。结论:一定浓度的HDE对SPC-A-1细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与相关基因bcl-2的调控有关。     

舒林酸对胃癌细胞株BGC-823作用的实验研究

目的: 研究舒林酸对胃癌细胞株BGC-823增殖、凋亡的作用,探讨其作用机制。方法: 体外培养的胃癌细胞株BGC-823加入不同浓度的舒林酸作用不同时间后,用倒置显微镜观察细胞形态学变化,四甲基噻唑氮蓝(MTT)法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞周期;透射电镜观察细胞超微结构变化及凋亡形态变化,DNA电泳检测细胞凋亡DNA片段。结果: 舒林酸可以改变胃癌细胞株BGC-823的形态,抑制其生长,影响其细胞周期分布,透射电镜观察到细胞凋亡的形态,DNA电泳检测出典型的细胞凋亡的特征性梯状条带。结论: 舒林酸有抑制胃癌细胞株BGC-823增殖,诱导其凋亡的作用,并且可能与舒林酸影响其细胞周期分布、抑制了环氧合酶-2(COX-2)表达有关。     

花边莲提取液对人肺癌SPC-A-1细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨花边莲提取液对人肺癌SPC-A-1细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用体外培养,细胞毒（MTT法）实验、荧光显微镜观察细胞形态变化、DNA琼脂糖凝胶电泳测定DNA ladder及流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化.结果 花边莲提取液能够抑制SPC-A-1细胞增殖,且呈剂量依赖性;观察到凋亡细胞典型的形态和生化特征,花边莲提取液作用48 h,SPC-A-1细胞均呈现凋亡细胞所特有的亚二倍体峰（sub-G1）,凋亡率随药物浓度增加而增高,并使细胞生长停滞在S期,从而阻滞细胞周期的进行.结论 花边莲提取液对SPC-A-1细胞具有增殖抑制作用,并可诱导SPC-A-1细胞凋亡,其机制可能与细胞周期的S期阻滞有关.     

川芎嗪对小鼠Lewis细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨中药川芎嗪对小鼠Lewis细胞的增殖和凋亡作用的影响。方法采用噻唑蓝法检测川芎嗪对Lewis细胞增殖的抑制作用,倒置显微镜观察药物作用前后细胞形态学的变化情况,流式细胞术(FCM)观察Lewis细胞凋亡指标的变化。结果川芎嗪能够抑制Lewis细胞的体外增殖,12.5、25.0、50.0 mg·L-1组的抑制率分别为29.8%、50.5%、61.3%,其48 h半数抑制浓度(IC50)为33.504 mg·L-1。实验组Lewis细胞经12.5、25.0和50.0 mg·L-1的川芎嗪处理48 h后,其凋亡率分别为(19.23±0.17)%、(30.81±0.46)%、(55.26±0.19)%;对照组为(0.64±0.37)%,实验组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论川芎嗪能够抑制Lewis细胞增殖,其作用可能是通过诱导Lewis细胞凋亡和分化实现的。     

昆明山海棠总生物碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡与细胞周期改变

目的 为探讨昆明山海棠总生物碱(alkaloidsfrom Tripterygium Hypoglaucum Hutch,THHa)抗肺癌机制,研究THHa诱导肺腺癌A549细胞凋亡与细胞周期改变的关系.方法 应用形态学观察、DNA凝胶电泳、流式细胞仪检测分析肺腺癌A549细胞凋亡及细胞周期改变.结果 THHa能够诱导肺腺癌A549细胞凋亡并主要作用于细胞周期S期(S期细胞增多).结论 THHa可能通过诱导细胞凋亡而抑制A549细胞增殖,这种作用与细胞周期有关,这些有助于将来肺癌治疗方案的合理设计.