核苷（酸）类似物疗效欠佳的慢性乙型肝炎患者HBV基因型分析

目前,根据HBV全基因序列异质性≥8％或S基因序列异质性≥4％将HBV基因型分为9种,即A、B、C、D、E、F、G、H和Ⅰ型,其中基因型Ⅰ为新发现的基因型。相关研究已提示HBV基因型分布有地域性差异,并具有相应的临床特点。核苷（酸）类似物抗病毒治疗慢性乙型肝炎（CHB）应用广泛,但部分患者疗效欠佳,因此探讨影响疗效的可能因素包括HBV基因型是很有必要的。目前,基因型是否影响核苷（酸）类似物疗效尚有争议。     

湖南省怀化市少数民族及汉族慢性乙型肝炎患者病毒基因分型及临床分析

目的 了解湖南省怀化市少数民族及汉族慢性乙型肝炎患者病毒基因型分布特点及不同基因型与临床肝病的相关性.方法 采用S基因序列分析法对湖南省怀化市111例慢性乙型肝炎患者进行乙型肝炎病毒基因分型,并分析相关流行病学、病例构成、HBV DNA载量、HBeAg阳性率及肝功能情况.结果 该地区111例慢性乙型肝炎患者HBV基因型检测到B型及C型,其中B型90例(81.08%),C型19例(17.12%),2例(1.80%)无法分型. B、C基因型分布情况:33例少数民族组患者B基因型31例(93.93%),C型2例(6.07%);76例汉族组患者B基因型59例(77.63%),C基因型17例(22.37%).C基因型患者肝硬化及肝癌构成比高于B基因型患者,HBV DNA载量、HBeAg阳性率及球蛋白水平高于B基因型,而白蛋白水平低于B基因型.结论 该地区乙型肝炎病毒基因型以B型为优势基因型,少数民族与汉族患者HBV基因型构成有显著差异,C基因型患者HBeAg血清转换率低,可能较易发生肝病进展.     

慢性乙型肝炎病毒感染者病毒基因型分布及其与肝纤维化和肝细胞癌的关系

目的 调查浙江省杭州地区慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者的HBV基因型分布,并分析基因型与肝纤维化和肝细胞癌的关系.方法 回顾性分析2007年6月至2012年6月在杭州市第一人民医院就诊的190例慢性HBV感染者的血清学、病毒学指标和临床病理学资料.190例患者根据病理及相关检测分为慢性乙型肝炎(CHB)组(62例)、肝硬化组(60例)和肝细胞癌组(68例).HBV基因型测定采用多重PCR扩增,基因亚型测定采用PCR扩增结合限制性片段长度多态性(RFLP)方法.采用SPSS 11.0软件进行统计学分析.结果 190例慢性HBV感染者中,B基因型感染61例(32.1％),C基因型感染126例(66.3％),3例为B、C基因混合型感染.其中,B基因型全部为B2亚型,C基因型中C2亚型占绝对优势(97.6％,123/126).B基因型在CHB组的比例(46.8％,29/62)高于肝硬化组(20.0％,12/60)和肝细胞癌组(29.4％,20/68)(x2=8.73和4.16,P＜0.01或＜0.05);C基因型在肝硬化组和肝细胞癌组的比例高于CHB组(x2=9.54和4.17,P＜0.01或＜0.05).三组患者中感染C2基因亚型的血清透明质酸(HA)水平高于感染B2基因亚型的患者(t=2.685,2.433和2.015,P＜0.01或＜0.05).CHB患者中感染C2基因亚型者比感染B2基因亚型者有更高的肝纤维化分期(x2=6.726,P=0.010),而肝脏炎症分级差异无统计学意义(x2=0.601,P＞0.05).肝细胞癌患者中,感染B2基因亚型者肿瘤直径≥5 cm的比例更高(x2=7.231,P＜0.01),感染C2基因型者伴肝硬化更常见(x2 =4.910,P＜0.05).结论 浙江省杭州地区CHB患者以C2和B2基因亚型为主.感染C2基因亚型的患者可能更易发展为严重肝纤维化,而感染B2基因亚型的患者和大肝癌相关.     

慢性乙型肝炎患者肝细胞HBV cccDNA、tDNA及HBV表面标志物的相关性研究

目的 回顾性分析慢性HBV感染者肝细胞内HBV ccc DNA含量与肝细胞tDNA、HBsAg、HBcAg的关系以及临床意义.方法 应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测未经抗病毒治疗的患者58例(未抗病毒组)、经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者4例(抗病毒组)的肝细胞HBV ccc DNA和tDNA含量,应用免疫组化法定性检测肝组织内HBsAg和HBcAg表达,用SPSS 13.0软件统计分析肝细胞HBV ccc DNA含量、tDNA、HBsAg、HBcAg间的关系.结果 肝细胞HBV ccc DNA、HBV tDNA含量与HBsAg、HBcAg在肝细胞中的表达模式间差异无统计学意义(P> 0.05).肝细胞内HBV cccDNA含量与HBV tDNA含量呈高度正相关(P<0.01).慢性乙型肝炎抗病毒治疗患者中,疗程> 2年并达到<病毒性肝炎防治方案>停药标准,肝细胞内ccc DNA、tDNA含量较未抗病毒组显著降低,但肝细胞内仍然可以检出HBV ccc DNA、tDNA.结论 肝细胞HBV ccc DNA含量与HBsAg、HBcAg在肝细胞的表达模式间无一定规律性.核苷(酸)类似物抗病毒治疗 2~3年并不能完全清除肝细胞内HBV ccc DNA.     

闽南地区核苷（酸）类药物经治的乙型肝炎患者乙型肝炎病毒基因型与逆转录酶区耐药突变特点

目的分析闽南地区核苷酸（类）药物（NAs）经治的乙型肝炎患者乙型肝炎病毒（HBV）基因型与逆转录酶区（RT）耐药突变特点。 方法采用PCR产物直接测序法分析2012年1月至2017年12月中国人民解放军联勤保障部队第910医院肝病中心收治的524例HBV感染者HBV RT区K169～M250核苷酸序列。随访患者抗病毒治疗史,同时检测其血清中HBV e抗原（HBeAg）、HBV DNA、丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）等水平。 结果入组524例患者中,293例（55.92%）为HBV B型,231例（44.08%）为HBV C型。HBV B型和C型患者性别、HBeAg状态、病程、NAs药物选择、不同药物治疗方式下NAs相关耐药突变率、NAs用药时间及血清HBV DNA载量、ALT、AST水平差异均无统计学意义（P均> 0.05）。但HBV C型患者年龄（t = 6.486、P < 0.001）和NAs相关耐药突变率（64.94% vs. 51.88%,χ² = 8.493、P = 0.003）显著高于HBV B型患者。524例患者中NAs相关耐药突变检出率为57.63%（302/524）,204位点突变频率最高,其次为180、181和229。10个位点突变均伴随M204变异出现,包括169、173、180、200、202、207、214、237、245和250。HBV C型患者在9个位点上（180、181、184、191、200、221、224、229和238）的突变率显著高于B型患者,差异有统计学意义（P均< 0.05）。HBV B型患者在236和250位点的突变率显著高于C型患者（χ² = 5.867、P = 0.015,χ² = 4.226、P = 0.040）。M204相关的伴随突变在基因型B和C中亦表现出不同的倾向性：M204I突变更易出现在B型患者中,而L180 + M204I、T184 + L180 + M204V更易出现在C型患者中。 结论在NAs药物选择压力下,HBV B型感染者和C型感染者表现出不同耐药突变特点。     

拉米夫定耐药慢性乙型肝炎患者的HBV逆转酶区突变模式

目的研究慢性乙型肝炎患者在拉米夫定（LAM）治疗过程中出现耐药后,HBV逆转录酶区基因的突变模式及临床特征。方法采用巢式PCR方法对2007年4月至2010年12月于沈阳市第六人民医院肝病门诊或住院诊治的共260例慢性乙型肝炎LAM耐药患者的HBV聚合酶基因逆转录酶区进行扩增,对PCR产物进行直接测序,回顾性分析LAM耐药时HBV聚合酶基因的不同突变模式及患者的临床特征。结果260例患者诊断为LAM耐药,215例患者检测到LAM相关的HBV聚合酶基因突变。患者血清HBVDNA为（5．41±1．29）log10拷贝／ml。98．1％（211／215）患者存在YMDD基序突变。其中3种主要突变类型分别为：单位点rtM204I突变占40．0％（86／215）;rtL180M＋rtM204V占37．2％（80／215）;rtL180M＋rtM204I占13．0％（28／215）。与rtM2041相比,rtM204V多以联合rtL180M突变的形式存在（P〈0．05）。LAM耐药时,单位点突变与联合突变类型患者的血清HBVDNA、ALT、年龄、HBeAgFH性与阴性,肝硬化与慢性乙型肝炎差异均无统计学意义（P〉0．05）。测出基因突变患者与伴生化学突破患者HBVDNA载量较高（P〈0．05）。结论YMDD基序突变是LAM耐药后HBV聚合酶基因突变的主要模式,LAM耐药后患者临床病情轻重可能与HBV聚合酶基因突变类型无关。     

128例肝硬化的乙型肝炎病毒基因型分析

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的感染是引起我国肝硬化的主要原因.分析肝硬化患者的HBV基因型,初步探讨肝硬化患者中的HBV基因型的分布情况,有助于HBV基因型的流行病学调查和临床研究.     

大连地区丙型肝炎患者血清HCV RNA及ALT与基因型的相关性研究

丙型肝炎病毒（hepatitis C virus,HCV）感染呈全球分布,全世界HCV感染率为3.0%（0.1%～10%）[1].我国约有3 800万HCV感染者,感染率约为3.2%[2].HCV感染后病情隐匿,50%～80%会转变成慢性肝炎,如未经合理治疗,其中10%～30%的患者在10～20年后会发展成肝硬化,1%～3%会发展成原发性肝癌[3-4],严重危害患者的健康和生命.     

乙醇对慢性丙型肝炎患者HCV基因型分布及肝损害的影响

目的:对比嗜酒与非嗜酒的慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C,CHC)患者HCV RNA基因型及分布,以明确嗜酒的CHC患者病情发展是否与某种特定基因型有关.检测CHC患者IFN-γ及TNF-α水平,了解嗜酒的HCV感染者肝损害的机制.方法:收集CHC患者114名,分为嗜酒组和非嗜酒组,以基因芯片技术对2组患者进行HCV RNA基因分型.采用Ficoll梯度离心法提取所有患者外周血单个核细胞(PBMC)并培养,ELISA法检测IFN-γ及TNF-α的水平.结果:嗜酒组和非嗜酒组HCV RNA的基因型均以1b型为主(嗜酒组的比例为60%,非嗜酒组为43.75%),二者之间无统计学意义(P=022).嗜酒组和非嗜酒组的HCV RNA定量测定分别为(11100±14174.3)×103mL-1和(3927.8±4549.6)×103mL-1,二者比较差异有统计学意义(P=0.025).嗜酒组和非嗜酒组TNF-α水平分别为(4528±3587)ng/L和(3262±3131)ng/L,二者相比差异有统计学意义(P=0.048),但2组IFN-γ水平差异无统计学意义(P>0.05).结论:乙醇促CHC肝患者HCV RNA复制,导致肝损伤加重,但并不能增加慢性HCV感染者对某种HCV RNA基因型的易感性.TNF-α在嗜酒的CHC患者中起重要作用,是导致肝损害的重要细胞因子之一.     

不同基因型HBV对药物反应性和S基因突变位点研究

目的分析HBV不同基因型对药物反应性及S基因变异情况。 方法收集遵义医学院附属医院于2016年3月至2017年7月就诊的186例HBV DNA阳性乙型肝炎患者的血清样本,根据是否用药分为治疗组130例和对照组56例,治疗组根据用药不同分为干扰素组、核苷（酸）类似物组、保肝药组和中成药组,分别提取HBV DNA后扩增S基因并测序,结合临床资料分析疗效与基因型相关性。 结果对照组共51例患者扩增出S基因[91.1%（51/56）,其中B基因型30例,C基因型21例],治疗组共有104例患者样本扩增出S基因[80.0%（104/130）,其中B基因型62例,C基因型42例],均以B、C基因型为主。两种基因型对核苷（酸）类似物的反应性（肝功能改变、HBVDNA拷贝数）与未治疗组差异有统计学意义（P < 0.01）。B基因型HBV S基因经核苷（酸）类似物作用后,第597位碱基鸟嘌呤G变为腺嘌呤A即183位苯丙氨酸（Phe/F）突变为缬氨酸（Val/V）,使翻译终止。保肝药和干扰素引起131位鸟嘌呤G突变为腺嘌呤A,进而甘氨酸（Gly/G）变为谷氨酸（Glu/E）,且9和213位氨基酸突变率为100%。C基因型HBV则发生26位胞嘧啶C突变为胸腺嘧啶T,即脯氨酸（P）变为亮氨酸（L）及53位点丝氨酸（Ser/S）突变为亮氨酸L。保肝药物作用主要引起68位点异亮氨酸（Ile/I）突变为苏氨酸（Thr/T）和49位点P变L。干扰素和中成药均可引起225位酪氨酸-异亮氨酸（YI）变为异亮氨酸-组氨酸（IH）和9位氨基酸P变L。 结论不同HBV基因型对药物反应不同,B、C基因型HBV对药物反应可产生相同突变位点。     

耐阿德福韦酯乙型肝炎病毒多聚酶区基因突变模式与病毒B、C基因型相关性分析

目的分析耐阿德福韦酯（ADV）慢性乙型肝炎（CHB）患者中HBV多聚酶区基因突变模式及基因型的关系。方法选取2010年2月-2012年5月宁波市第二医院住院及门诊114例ADV耐药的CHB患者,采用实时荧光定量PCR方法对患者血清HBV多聚酶区进行扩增,对PCR产物进行直接测序比对。正态分布的计量资料以x±s表示,非正态分布数据用M（P25-P25）表示,经过数据转换方差齐的采用方差分析和LSD-t检验。结果114例CHB患者的基因突变模式为8种,以rtA181V／T／S（57．89％）、rtN236T（14．91％）和rtA181V／T／s＋N236T（9．65％）突变为主,其中单独突变102例（89．47％）,联合突变12例（10．53％）。114例患者B基因和C基因分别为21例（18．42％）和93例（81．58％）,B基因以rtN236T突变模式为主,占47．62％（10／21）;C基因以rtA181V／T／s突变模式为主,占65．59％（61／93）;HBVB基因和C基因rtA181V／T／S和rtN236T突变模式比较差异均有统计学意义（χ2=12．269和18．658,P〈0．01）。结论耐ADV的CHB患者血清HBV多聚酶区基因突变以rtA181V／T／S、rtN236T和rtA181V／T／S＋N236T为主,且不同基因突变模式与基因型有关。     

慢性乙型肝炎患者HBsAg“a”决定簇变异与HBV基因型的相关性

目的探讨HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者HBsAg＂a＂决定簇氨基酸（AA）变异与HBV基因型的相关性。方法对99例HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者进行HBVS基因直接测序,分析HBV基因型及HBsAg＂a＂决定簇的AA变异,并应用Logistic回归分析其相关性。结果 B基因型占52.5%（52/99）,C基因型占47.5%（47/99）,未发现其他基因型;HBsAgAA126Thr存在变异,而AA124、131、133、139、141、145未发现变异及AA122～124未发现缺失或插入,其中AA126Thr占52.5%（52/99）,Ile占39.4%（39/99）,Ser占4.0%（4/99）,Ala占4.0%（4/99）;AA126Thr变异为Ile在C基因型中多见（χ2=35.201,P〈0.001,OR=48.125）。结论 HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者HB-sAg＂a＂决定簇AA变异多发生在AA126Thr变异为Ile,且基因型C较基因型B更易发生AA126Ile变异。     

漳州地区乙型肝炎病毒基因型分布及其临床意义

目的了解漳州地区乙型肝炎病毒（HBV）基因型分布情况并探讨其临床意义。方法采用特异性引物以巢式多重聚合酶链反应对271例乙型肝炎患者的血清标本进行基因型检测,同时对部分PCR产物进行测序并确定其基因型。结果 271例慢性乙型肝炎患者中,HBV基因B型228例,占84.1%;C型38例,占14.0%;D型4例,占1.5%;B、C混合型1例,占0.4%。入选患者中未检出A、E、F基因型。B、C基因型在不同程度乙型肝炎患者中的分布无显著差异,与肝炎程度无显著相关性。B、C型肝炎患者的年龄,性别,ALT、AST、TBil、DBil、TP、ALB水平,HBVDNA载量及HBeAg阳性率均无显著性差异。结论漳州地区HBV基因型以B型为主,C型次之,有少量的D型及B、C混合型。B、C基因型与乙型肝炎患者ALT水平、HBVDNA载量、HBeAg阳性率等临床指标无显著相关性。     

HBsAg定量在慢性乙型肝炎患者干扰素抗病毒治疗中的变化及临床意义

目的研究HBsAg定量在慢性乙型肝炎患者干扰素抗病毒治疗期间的变化及临床意义。 方法收集43例接受IFN-α治疗的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者为研究对象。分别在治疗前和治疗后1、3和6个月时定量检测患者血清HBsAg水平;并同时监测其HBV DNA、HBeAg、HBcAb及ALT的水平。 结果43例患者治疗前和治疗后1、3、6个月时血清HBsAg水平呈下降趋势,差异具有统计学意义（P = 0.029）;治疗1个月时较治疗前有所下降,但差异无统计学意义（t =-1.12、P = 0.304）;治疗3个月和6个月时均较治疗前显著下降,差异具有统计学意义（t =-2.71、P = 0.015,t =-2.71、P = 0.010）;其他不同时间点间比较差异均无统计学意义。IFN-α治疗6个月时患者血清HBsAg下降> 0.5 log₁₀IU/ml组患者ALT复常率高于下降< 0.5 log₁₀IU/ml组,差异具有统计学意义（χ² =5.536、P = 0.019）;下降> 0.5 log₁₀IU/ml组HBeAg阴转率高于下降< 0.5 log₁₀IU/ml组,差异具有统计学意义（χ² = 4.226、P = 0.040）;下降> 0.5 log₁₀IU/ml组HBeAg血清学转换率高于下降< 0.5 log₁₀IU/ml组,差异具有统计学意义（χ² = 4.226、P = 0.040）。 结论HBsAg定量在慢性乙型肝炎患者IFN-α治疗早期呈下降趋势。HBsAg定量在慢性乙型肝炎IFN-α治疗早期下降迅速的患者ALT复常率、HBeAg阴转率及HBeAg血清学转换率均高于下降缓慢者。     

高灵敏度HBV DNA检测指导慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗的临床意义

目的探讨高灵敏度HBV DNA检测对于指导HBV DNA低载量慢性乙型肝炎（CHB）患者抗病毒治疗的临床意义。 方法收集应用国产试剂检测结果低于检测下限（< 10³ IU/ml）的拟停药组112例患者和拟用药组48例患者共160份血清标本采用COBAS Amplicor系统再次进行检测,并与HBsAg定量结果进行对照分析。 结果经国产试剂检测结果低于检测下限（<10³ IU/ml）的160份血清经COBAS Amplicor系统再次检测有52例（32.50%）标本HBV DNA > 10³ IU/ml,高于高灵敏度HBV DNA检测下限（20 IU/ml）的标本共115份（占71.88%）。拟停药组患者HBV DNA≥ 20 IU/ml者有72例（占64.29%）;拟用药组患者中有19例HBV DNA> 10³ IU/ml,43例≥ 20 IU/ml（占89.58%）。应用COBAS试剂检测HBV DNA不同载量组别与HBsAg浓度对数值均呈显著正相关（P < 0.01）。 结论对国产试剂检测HBV DNA低载量患者应进一步做高灵敏的定量PCR试剂检测,可更好地指导患者初始应用或停用核苷（酸）类药物。     

外周血单个核细胞中HBV DNA与HBV cccDNA对慢性乙型肝炎患者免疫功能的影响

目的 比较外周血单个核细胞(PBMCs)有或无HBV感染证据组中免疫功能的差异.方法 常规分离78例CHB患者和10例健康对照组全血中的PBMCs,提取DNA,应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测PBMCs中的HBV DNA和HBV cccDNA;进行PBMCs的培养,孵育72 h后,收集PBMCs上清液,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-10(IL-10),并用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测PBMCs的增殖活性.结果 PBMCs中HBV cccDNA阳性的患者组,其PBMCs产生IFNγ水平显著下降,IL-10水平显著升高,同时伴PBMCs的增殖能力显著下降.结论 HBV感染PBMCs可能是HBV感染后机体Th1/Th2细胞因子比例失衡,特异性免疫功能低下,形成慢性HBV感染的主要原因之一.     

慢性乙型肝炎患者肝脏组织中白介素18的表达及意义

目的 检测慢性乙型肝炎(CHB)患者肝脏组织中白细胞介素18(IL-18)的表达并分析其与临床特征的相关性.方法 选取2012年1月至12月在安徽医科大学第二附属医院住院并行肝脏穿刺活检的CHB患者172例.应用免疫组化法检测患者肝组织中IL-18的表达情况,检测患者肝功能、HBV血清学标志物、HBV DNA载量、肝脏炎症分级和纤维化分期等.采用Spearman秩相关检验分析肝组织中IL-18表达与上述指标的相关性.结果 IL-18主要在肝细胞的细胞质中表达,其在健康人群的肝细胞中多呈阳性或强阳性表达,而在CHB患者则以弱阳性表达为主.两者肝组织中IL-18的表达差异有统计学意义(x2=42.124,P＜0.05).在CHB患者中,IL-18的表达随着患者ALT水平升高、炎症及纤维化程度的加重而升高(r =0.182,0.173和0.068,P＜0.05),但与HBV DNA水平和HBeAg无相关性(r=-0.05和0.041,P＞0.05).结论 CHB患者中,IL-18的表达强度与肝脏损伤程度及纤维化形成有关.     

e抗原阴性的慢性乙型肝炎患者病毒基因变异与临床转归

目的研究HBeAg阴性的慢性乙型肝炎病毒的基因变化及其与临床转归的关系。方法应用基因测序的方法检测HBeAg阴性的慢性乙型肝炎、肝硬化患者乙型肝炎病毒1762、1764、pre-18963个位点的基因突变,分析肝炎、肝硬化的发生与各位点变异的关系。结果135例HBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者中发生1762位点变异者9例,pre-1896位点变异者36例,1762、1764位点联合变异者27例,1762、1764、pre-1896位点联合变异者63例。45例肝硬化患者中发生pre-1896位点变异者27例,1762、1764位点联合变异者9例,1762、1764、pre-1896位点联合变异者共9例。结论山东地区HBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒以BCP1762、1764、pre-1896位点联合变异为主,其中pre-1896位点的变异对于肝硬化的发生有重要意义。