人巨细胞病毒对多向造血祖细胞的影响

目的：探讨人巨细胞病毒（HCMV）对多向造血祖细胞（CFU－Mix)的抑制作用及其机制。方法：采用造血祖 外半固体培养技术,研究HCVMVAD169株对脐血CFU－Mix集落生长的影响;用原位聚合酶链反应（IS－PCR）检测集落细胞中的HCVM DNA;用免疫组化方法检测集落细胞中HCV早期蛋白P52。结果：HCMVAD169在体外能明显抑制UF－Mix集落生长,集落数随病毒感染滴度的增高而减少,抑制幅度亦加大的趋势;经IS－PCR检测发现病毒感染线CFU－Mix集落细胞中有HCVMVDNA存在,免疫组化检测发现病毒感染缄CFU－Mix涨集落细胞中有HCMV P52的表棕,结论HCMV AD169可抑制 CFU－Mix的分化、增殖;HCMV AD169对CFU－Mix有直接损害作用。此作用可能 是HCMV感染所致的粒细胞和血小板减少,贫血的主要原因;并证实CFU－Mix集落细胞右存在HCMV蛋白的早期表达。     

人类巨细胞病毒感染对脐血造血祖细胞增殖的影响(英文)

目的：探讨人类巨细胞病毒(HCMV)感染对脐血造血祖细胞(CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk)体外增殖的抑制作用及其机制。方法：20例脐血标本收集于正常足月顺产新生儿。实验共分5组:(1)3个HCMV感染组,每个感染组分别加入0.1 mL的103、104及105空斑形成单位(PFU)HCMV-AD169病毒液于培养体系中;(2)灭活对照组,加入同体积灭活HCMV病毒液;(3)空白对照组,不加HCMV病毒液,代之以同体积的IMDM。采用造血祖细胞体外半固体培养技术,培养、观察、计数HCMV-AD169株对脐血CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk集落数、抑制率和集落维持时间;并用聚合酶链反应(PCR)技术检测集落细胞内HCMV-DNA。结果：(1)在造血祖细胞培养体系中加入不同滴度的HCMV-AD169后,104和105PFU滴度感染对CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk集落形成均有显著的抑制作用,103PFU滴度感染对CFU-Mix及CFU-Mk集落形成有显著的抑制作用,与空白对照组和灭活对照组比较,差异有显著性(P<0.05)。病毒滴度越高,抑制程度越明显(P<0.05)。(2)104和105PFU滴度感染组CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk集落维持时间较对照组明显缩短(P<0.01),103PFU滴度感染组CFU-Mix和CFU-Mk集落维持时间较对照组明显缩短(P<0.01)。(3)PCR显示3个感染组的CFU-GM、CFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk集落细胞内均有HCMV-AD169DNA存在。结论：HCMV-AD169能直接感染CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk造血祖细胞,并抑制造血祖细胞的增殖,这可能与HCMV感染患儿出现粒细胞减少、血小板减少和贫血等造血功能紊乱有关。     

人巨细胞病毒感染对脐血巨核系祖细胞体外增殖的影响

目的　探讨人巨细胞病毒 (HCMV)对脐血巨核系祖细胞 (CFU Mk)体外增殖的影响及其机制。方法　采用造血祖细胞体外培养技术 ,观察、计数HCMV AD169感染的CFU Mk集落产率、抑制率、集落峰值及维持时间 ;并采用聚合酶链反应 (PCR)技术检测集落细胞内HCMV AD169DNA。结果　 1.HCMV AD169感染组集落产率较对照组明显减少 ,HCMV对CFU Mk集落的抑制程度与病毒滴度有关 ,集落产率随病毒感染滴度增高而减少 ,抑制率随病毒感染滴度增高而渐增加 ;各组集落峰值出现时间无明显差异 (P均 >0 .0 5 ) ,但各感染组集落维持时间明显短于对照组 (P <0 .0 1) ;2 .用PCR在集落细胞内检测到HCMV AD169DNA。结论　CFU Mk是HCMV的宿主细胞之一 ,HCMV能直接感染CFU Mk ;在体外HCMV AD169对CFU Mk的增殖和集落形成有明显抑制作用 ,此作用可能与临床HCMV感染后患者血小板减少有关     

巨细胞病毒抑制多向祖细胞的增殖及干预研究

目的　在体外已证实人巨细胞病毒 (HCMV)能抑制骨髓造血祖细胞的增殖。该研究观察HCMV对脐血多向造血祖细胞 (CFU Mix)体外增殖的影响及黄芪和更昔洛韦 (GCV)对此的干预作用。方法　采用造血祖细胞体外培养技术 ,观察HCMV AD1 69感染的CFU Mix集落数、抑制率、提高率、集落峰值及集落维持时间 ;用聚合酶链反应 (PCR)技术检测集落细胞内HCMV AD1 69DNA。在 1∶1 0HCMV感染组中分别加入黄芪和 /或GCV ,观察黄芪和GCV干预HCMV AD1 69对CFU Mix增殖的抑制作用。结果　① 1∶1 0 ,1∶1 0 0 ,1∶1 0 0 0三种滴度HCMV AD1 69感染的CFU Mix集落数较对照组明显减少 (P <0 .0 5 ) ,集落数随病毒感染滴度的增高而减少 ,抑制率随病毒感染滴度的增高而逐渐增加 ;②各组集落峰值出现时间无明显差异 (P >0 .0 5 ) ,但感染组集落维持时间明显短于对照组 (P <0 .0 1 ) ;③ 1∶1 0 ,1∶1 0 0 ,1∶1 0 0 0病毒感染组中检测到HCMV AD1 69DNA ;④ 1∶1 0感染组中加入黄芪和 /或GCV后 ,HCMV AD1 69感染的CFU Mix集落数明显高于未加药 1∶1 0感染组 (P <0 .0 5 )。结论　CFU Mix是HCMV的宿主细胞之一 ,HCMV能直接感染造血祖细胞 ;在体外HCMV AD1 69对CFU Mix生长和集落形成有明显抑制作用 ;黄芪和GCV有明显的抗HCMV作用 ,二者联     

更昔洛韦和黄芪对巨细胞病毒感染所致造血祖细胞增殖抑制的影响

目的　探讨更昔洛韦 (GCV)和黄芪对巨细胞病毒 (CMV)感染所致脐血粒 巨噬系祖细胞 (CFU GM)、红系早、晚期祖细胞 (CFU E、BFU E)、多向造血祖细胞 (CFU Mix)及巨核系祖细胞(CFU Mk)体外增殖抑制的影响。方法　采用造血祖细胞培养技术 ,培养、观察、计数巨细胞病毒AD169株 (CMV AD169)感染CFU GM、CFU E、BFU E、CFU Mix和CFU Mk后各祖细胞集落、峰期及维持时间 ;用聚合酶链反应 (PCR)检测集落细胞内CMV DNA ;根据细胞毒性实验结果 ,将GCV和黄芪作用于CMV感染的CFU GM、CFU E、BFU E、CFU Mix及CFU Mk祖细胞 ,再分别计数集落、峰期及维持时间。结果 ( 1)CMV感染组CFU GM、CFU E、BFU E、CFU Mix及CFU Mk集落数较对照组明显减少 (P <0 0 1) ;集落维持时间CMV感染组较对照组明显缩短 ;( 2 )用PCR在感染组集落细胞内检测到CMV DNA的存在 ;( 3)黄芪和 (或 )GCV作用于CMV感染的祖细胞后 ,与病毒组比较集落维持时间明显延长 ,集落数和集落增殖率明显提高 (P <0 0 1) ,黄芪组集落增殖率分别为 2 7 2 %、4 5 2 %、4 9 1%、39 0 %、11 9% ;GCV组分别为 37 4 %、74 2 %、71 7%、6 7 4 %、38 9% ;GCV 黄芪组分别为 5 3 6 %、83 8%、88 7%、87 8%、6 1 5 %。结论　CMV AD169在体外能明显抑制CFU GM、CFU E、BFU     

人巨细胞病毒抑制粒-单及红系祖细胞的体外增殖及干预研究

探讨人巨细胞病毒 (HCMV)抑制脐血粒 -单系祖细胞的 (CFU GM)、红系爆式祖细胞 (BFU E)及红系祖细胞 (CFU E)的体外增殖和黄芪注射液与更昔洛韦(GCV)对此的干预作用 ,采用造血祖细胞体外培养、聚合酶链反应 (PCR)技术 ,培养、观察、计数CFU GM、BFU E及CFU E集落产率、抑制率、提高率 ,集落峰值时间和集落维持时间 ,并用PCR检测集落细胞内HCMV DNA。结果显示 :①HCMVAD169对CFU GM、BFU E及CFU E均有抑制作用 ,其抑制作用与HCMV浓度有关 ,高浓度 ( 1∶1 0 ,1 1 0 0 )感染组与对照组比较集落产率明显下降 (P <0 0 1 ) ,集落维持的时间明显缩短 (P <0 0 1 ) ,集落峰值时间无明显差异 (P >0 0 5) ,而低浓度组 ( 1∶1 0 0 0 )无此作用 ;②PCR检测发现在HCMV感染的造血祖细胞内存在HCMV DNA ;③在 1∶1 0感染组中 ,加入黄芪注射液与更昔洛韦后 ,HCMVAD169感染的CFU GM、BFU E及CFU E集落产率明显增加 (P <0 0 1 )。结论 :①造血祖细胞是HCMVAD169的宿主细胞之一 ,HCMVAD169能直接感染造血祖细胞 ;②在体外HCMVAD169对CFU GM、BFU E、CFU E的生长 ,集落形成有明显的抑制作用 ;③黄芪与更昔洛韦有抗HCMV作用 ,能促进受HCMV感染的造血祖细胞集落增殖     

特发性血小板减少性紫癜巨核系祖细胞巨细胞病毒感染的临床研究

目的特发性血小板减少性紫癜（ITP）是儿童常见的出血性疾病,其病因尚不十分清楚。很多研究表明,该病的发生与病毒感染密切相关。探讨人类巨细胞病毒（HCMV）感染巨核系祖细胞致ITP血小板减少的发病机制及其有效的治疗方法。方法HCMV相关ITP骨髓巨核细胞集落形成单位（CFU-MK）体外培养技术收集集落细胞,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测HCMV晚期抗原基因mRNA,并给予更昔洛韦治疗。结果46例血清HCMV-DNAPCR阳性或血清HCMV-IgM阳性的ITP骨髓巨核细胞集落形成单位（CFU-MK）集落细胞HCMV晚期抗原基因mRNA阳性19例,更昔洛韦治疗有效16例;mRNA阴性27例,更昔洛韦治疗有效4例。阳性组疗效高于阴性组,P〈0．01,差异有统计学意义。结论HCMV可感染CFU—MK而成为1TP血小板减少的原因之一。巨核系祖细胞HCMV晚期抗原基因mRNA检测阳性者更昔洛韦治疗有效,能使血小板上升或恢复正常。     

黄芪注射液对人巨细胞病毒感染的粒-单系祖细胞体外增殖的影响

目的：探讨黄芪注射液对人巨细胞病毒(HCMV)感染的粒—单系祖细胞(CFU-GM)体外增殖的影响。方法：采用造血祖细胞体外培养技术,用黄芪干预HCMV感染的CFU-GM,观察计数CFU-GM的产率,大小,峰期及维持时间。结果：①黄芪组每2×105个细胞中CFU-GM簇和集落的产率分别为 333.33±12.69 和81.23±4.93,病毒组每2×105个细胞中簇和集落的产率分别为 167.80±16.63,53.70±1.67,两者相比差异有显著性(P<0.01)。②黄芪组大集落的比例占(9.5±0.8)%,明显高于病毒组(2.7±1.0)%,P<0.01。③黄芪组大集落峰期出现早,集落和大集落维持时间长。结论：在体外黄芪注射液可以促进HCMV感染的CFU-GM增殖。     

造血干细胞分化过程中HOXB6基因表达及干预研究

目的探讨脐血造血干细胞(HSC)向粒-单系(CFU-GM)、红系(CFU-E)和淋巴系祖细胞(CFU-TL)增殖分化过程中HOXB6基因的表达情况及全反式维A酸(ATRA)对其的影响。方法1.采用造血干/祖细胞体外培养技术,以ATRA持续干扰人类脐血造血干/祖细胞,观察HSC经人粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)、促红细胞生成素(EPO)和植物血凝素(PHA)分别诱导后,在培养第3天、第7天和第12天的CFU-GM、CFU-E及CFU-TL集落生成情况。2.采用实时荧光定量RT-PCR技术(FQ-RT-PCR)检测造血干细胞增殖分化过程中HOXB6基因的表达水平。结果1.人类造血干细胞向CFU-GM、CFU-E和CFU-TL增殖分化过程中,各组细胞HOXB6基因均有表达。2.随时间推移,CFU-GMHOXB6 mRNA在增殖分化的第3天开始表达,第7天表达最强烈,第12天表达明显减弱;CFU-E HOXB6 mRNA表达在第3天、第7天和第12天均持续增强;而在CFU-TL中,HOXB6 mRNA表达在第7天最强烈,第12天表达减弱。3.与对照组比较,ATRA可上调各组HOXB6基因的表达。结论1....     

新生儿脐血粒-单系祖细胞体外培养的研究

本文应用体外培养方法对新生儿脐血粒－单系造血祖细胞（CFU-GM）进行了培养，并与成人外周血、骨髓CFU－GM数量及其特征进行了比较观察，评价了脐血作为造血干细胞／祖细胞来源重建骨髓造血的能力。结果显示：（1）脐血中CFU－GM数量明显高于成人外周血，约相当于成人外周血的18倍，与骨髓相比，其数量间无统计学差异；（2）脐血中CFU-GM集落大小、细胞构成、集落生长曲线明显不同于成人外周血及骨髓以上结果提示新生儿脐血中富含造血干／祖细胞，而且在数量和特性上明显不同于成人外周血及骨髓，在移植中可能更具有重建骨髓造血的能力。     

巨细胞病毒感染对淋巴系祖细胞增殖的影响及其干预措施

目的探讨人类巨细胞病毒（HCMV）对淋巴系祖细胞（CFU-TL）体外增殖的影响、作用机制及其干预措施。方法本实验共分为空白对照组、灭活对照组、HCMV感染组、更昔洛韦（GCV）干预组、黄芪注射液（AMI）干预组5组。采用甲基纤维素半固体培养CFU-TL集落，不同浓度HCMV-AD169持续攻击CFU-TL，用AMI、GCV粉剂干预，观察CFU-TL集落形成：用四甲基偶氮唑盐法测HCMV对宿主细胞增殖活性的影响；用PCR检测CFU-TL集落细胞内HCMV-AD169DNA。结果1．与空白对照组及灭活对照组比较，各病毒感染组CFU-TL集落产率明显减少、维持时间明显缩短（P均〈0．01），抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系；2．HCMV感染48、72、96、120h对宿主细胞增殖活性的影响与对照组比较均有显著差异（F分别为11．412，18．058，13．259，56．360 P均〈0．01）。3．PCR检测到HCMV感染组CFU-TL集落细胞内HCMV-AD169DNA。4．与HCMV感染组比较，HCMV＋AMI组、HCMV＋GCV组CFU-TL集落产生率明显增加，集落维持时间均显著延长（P均〈0．01）。结论HCMV在体外能抑制CFU-TL集落的增殖和分化；HCMV感染患儿免疫功能低下可能与HCMV直接抑制CFU-TL有关；GCV、AMI在体外能有效干预HCMV感染所致的CFU-TL增殖抑制的发生。     

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目的研究脐血红系祖细胞的HOXB6基因的表达情况以及人类巨细胞病毒(HCMV)感染对红系祖细胞的HOXB6基因表达的影响,以探讨HCMV导致脐血红系祖细胞损伤的机制。方法在泸州医学院附属医院儿科以实时荧光定量PCR技术(FQ-RT-PCR)检测人类巨细胞病毒感染和(或)用全反式维甲酸(ATRA)处理后HOXB6基因的表达水平。结果人脐血红系祖细胞可表达HOXB6基因;HCMV感染后,红系祖细胞HOXB6基因的表达明显下调;ATRA能显著上调红系祖细胞HOXB6基因的表达水平,且能够在一定时间内上调HCMV感染后的红系祖细胞HOXB6基因的表达。结论HCMV感染能诱导脐血红系祖细胞HOXB6的表达下调,HC-MV有可能通过调控HOXB6基因表达异常而引起红系祖细胞的增殖障碍。     

再生障碍性贫血患儿骨髓祖细胞培养的临床意义

目的探讨再生障碍性贫血(AA)患儿红细胞集落生成单位(CFU-E)、爆式红细胞集落生成单位(BFU-E)、粒细胞-单核细胞集落生成单位(CFU-GM)及巨核细胞集落生成单位(CFU-Meg)骨髓祖细胞培养情况,了解骨髓祖细胞在AA发病中的作用及意义。方法抽取28例AA患儿骨髓3～4mL,以淋巴细胞分离液提取单个核细胞,用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤2次,调节单个核细胞水平为106/mL,取0.3mL分别接种于红系、粒-单核系、巨核系培养基分别作4类祖细胞培养,在7、14d测定其集落数。结果28例AA中,4类集落数均值与对照组比较,差异有显著意义(P<0.01或P<0.001)。集落数随病情加重而逐步下降。4类集落数低于对照组患儿下限所占百分比分别为BFU-E35.71%、CFU-E85.71%、CFU-GM75.00%、CFU-Meg89.29%。治愈及进步者4类集落数接近对照组水平,治疗无效及进展者与治疗前比较无变化。结论动态监测AA患儿骨髓4类祖细胞集落数变化对辅助诊断、观察疗效及预后判断均有指导意义。     

Cryopreservation of Pluripotent and Committed Hemopoietic Progenitor Cells from Human Bone Marrow and Cord Blood

As one of the studies on autologous bone marrow transplantation for childhood cancer, the viabilities of several kinds of hemopoietic progenitor cells after cryopreservation was assayed using bone marrow and cord blood samples. The mean recovery rates of granulocyte-macrophage colony forming units (CFU-GM), erythroid burst forming units (BFU-E) and erythroid colony forming units (CFU-E) from bone marrow cells were 47.9%, 31.3% and 10.5%, respectively. The mean recovery rates of CFU-GM, BFU-E and CFU-E from cord blood cells were 46.7%, 39.1% and 22.4%, respectively. The ratio of primitive to mature BFU-E did not change after cryopreservation. The mean recovery rate of mixed colony forming units (CFU-mix) from marrow cells was 30.2%, and that from cord blood cells was 58.9%, demonstrating their sufficient proliferative activity after cryopreservation. These results demonstrate that CFU-mix, primitive BFU-E as well as CFU-GM, mature BFU-E can be well cryopreserved, supporting the usefulness of autologous marrow transplantation for the rescue of the ruined hemopoiesis after intensive cancer therapy.