实验教学中双向琼脂扩散法的改进

目的：探讨改进后的双向琼脂扩散试验的可行性。方法：在含0．1μg／ml的溴酚蓝的凝胶琼脂板上，以鸡卵白蛋白为抗原，鸡卵白蛋白免疫血清为抗体进行双向琼脂扩散试验。结果：出现典型的沉淀线且与凝胶背景之间的反差明显。结论：加一定浓度的溴酚蓝可提高双向琼脂扩散试验的敏感性；鸡卵白蛋白及其免疫血清既经济又安全，可作为教学实验中双向琼脂扩散试验的实验材料。     

单向免疫扩散试验的安全模拟方法

单向免疫扩散试验是医学检验专业学生必须做的一个验证性实验,单向免疫扩散试验是用已知抗体测定未知量的相应抗原,使待测的抗原从局部向琼脂内自由扩散,在一定区域内形成肉眼可见的沉淀环,从而根据沉淀环的直径与面积对抗原量作出计算.     

免疫血清制备及应用

我们用鸡蛋的卵白作为抗原，定期免疫家兔，获得抗卵白血清，为免疫学中的双向琼脂扩散实验、单向琼脂扩散实验、对流免疫电泳等实验提供材料，节省了大量资金。     

胃癌组织的肿瘤特异性研究

应用胃癌及正常组织碱性提取液作为原始抗原。在柱上电泳中把胃癌抗原分为Ⅰ和Ⅱ两个部分。用琼脂电泳或 DEAE 织维素方法从抗血清分离出γ球蛋白作为抗体。在琼脂弥散试验中进行抗原分析。发现(1)用原始抗原作比较时,胃癌抗原和抗胃癌血清球蛋白产生的沉淀线与正常胃、肝、肾抗原和其相应的抗血清球蛋白产生的沉淀线是互相交叉的。在与脾抗原和抗脾血清比较时,抗脾血清与胃癌抗原之间有附加的沉淀枝,但抗胃癌血清与脾抗原并不起反应。(2)用部分Ⅰ和Ⅱ作比较时,部分Ⅰ或Ⅱ仅     

大火箭电泳—甲胎蛋白定量测定法

<正> 到目前为止,甲胎蛋白(AFP)的检测方法不下20种,但国内一般临床实验室常用的方法仅有4—种。琼脂双向扩散(下简称扩散法)、对流免疫电泳(下简称对流法)和反向间接血球凝集试验(下简称血凝法)均属于定性试验。放射火箭电泳自显影术(下简称自显影)虽系AFP的微量定量试验法,但需有放射性同位素标记抗原、同位素室和暗室等设备,难以普遍开展。大火箭电泳(Rocket-electropho-resis)亦是含抗体琼脂电泳,不需放射性同位素标记抗原,其火箭状锥形沉淀峰可以很高。为与自显影法相区别,故称其为“大火箭”法。只耍制备出特异性的抗体,就可以准确地测出混合物质中的某种抗原的     

固相免疫酶法测定肝癌病人甲胎蛋白

目前,作为原发性肝癌的实验室诊断指标之一是检测病人血清中甲胎蛋白,采用方法有琼脂双向扩散,对流电泳,反向间接血凝,放射免疫自显影等方法。前两种方法敏感性较差,后两种方法灵敏度较高,但需特殊设备或操作麻烦,因之,有必要寻求一种简便迅速,反应结果容易观察的方法。酶免疫技术是本世纪七十年代开展的一项血清学新技术,在检测甲胎蛋白应用报导极少。所以我们采用限量抗原底物珠体系(DASS)测定甲胎蛋白,并与反向间接血凝试验相对比,以     

牛血清白蛋白的抗血清在免疫学沉淀反应实验中的应用

目的 :制备牛血清白蛋白 (BSA)抗血清 ,以探讨获取高效价抗血清的方法。方法 :用BSA配制一定的浓度 ,免疫家兔 ,以制备兔抗 -BSA血清。利用免疫电泳、双向琼脂扩散试验分析和测定抗血清的效价。结果 :双向琼脂扩散在BSA 0 . 5g/mL的浓度时 ,测得抗血清效价为 1∶32 ,对流免疫电泳结果显示BSA 0. 5g/mL与抗BSA在 1∶16时形成一条清晰可见的沉淀线。结论 :BSA免疫家兔可获取效价较高的抗血清。     

甲胎蛋白的定性测定

一、原理血清中存在的可溶性甲胎蛋白抗元与其相应抗体可引起沉淀反应、利用含盐琼脂凝胶作为基质，在一定程度内限制了抗元与抗体分子的扩散速度，能使抗元抗体复合物沉淀线，在琼脂凝胶中较长时间地保持其固定位置，可以肉眼看出，也可染色保存。     

教学用双扩免疫血清的制备

沉淀反应是一种经典的抗原抗体反应,也是高等医学院校学生免疫学试验的重要内容之一,它是指可溶性抗原及其相应抗体在一定条件下出现肉眼可见的沉淀物的现象.免疫学实验课中常做的有单向琼脂扩散法、双向琼脂扩散法(双扩)、对流免疫电泳等.     

抗伤寒沙门菌SOD抗体的免疫保护作用

用伤寒沙门菌Ｆｅ－ＳＯＤ免疫家兔制备免疫抗Ｆｅ－ＳＯＤ血清，ＥＬＩＳＡ效价为１：１０２４０。双向琼脂扩散试验结果显示此抗体不与牛红细胞ＳＯＤ形成沉淀线，抗体可抑制Ｓｔｗ及鼠伤寒沙门菌无细胞溶解物中部分ＳＯＤ活性，对小鼠腹腔吞噬细胞杀灭Ｓｔｗ无影响，但对受５ＬＤ５０Ｓｔｍ攻击的小鼠有效叉免疫保护作用。     

用对流电泳检测肝炎相关抗原(HAA)1331例的小结

检测肝炎相关抗原(HAA)的方法很多,目前有双向琼脂扩散法、对流免疫电泳法、补体结合试验、红血球凝集试验、胶乳凝集试验、放射免疫法,萤光抗体法等近10种。其中以双向琼脂扩散、对流免疫电泳两方法所需设备简单、操作方便、适宜普及。我们用对流免疫电泳方法检查献血员1331例、现将检测的方法、体会小结如下。     

介绍用洗衣粉纯化国产条状琼脂的方法

近年来,用琼脂扩散和对流电泳方法检测人体甲胎蛋白及肝炎相关抗原比较普遍。这两种方法都是以琼脂为载体的。因此,实验效果的好坏在根大程度上,取决于琼脂的质量。我们用洗衣粉纯化国产条状琼脂,效果很好,介绍如下:一、材料:1.广东省汕头市出品条状琼脂;2.西安洗     

非甲非乙型肝炎血清学研究(简报)

临床和流行病学相继证明了非甲非乙型肝炎病毒的存在,它可以引起输血后肝炎,并能实验性感染黑猩猩(Tabor,1978)。但对该病毒本身的研究由于困难较多,至今尚无肯定结论。1978年以来,Shirashi和Trepo等人先后报道用免疫琼脂扩散法获得了非甲非乙型肝炎抗原,但未得到公认。 最近,我们以一输血后非甲非乙型肝炎患者恢复期血清,用琼脂扩散法检测血清转氨酶异常的献血员血清,发现有3份血清是清晰的沉淀反应,它们在琼脂扩散时出现沉淀连线,表示其抗原性质相似。电子显微镜下2例出现以丝状体为主的或有丝状体存在的类乙型肝炎表面抗原颗粒,并且有类丹氏颗粒结构和20～30nm直径的圆形颗粒;另1例以类疱疹样病     

宜宾1129人血清甲胎蛋白、乙型肝炎抗原检测结果

1976年7月至1978年6月间,我们对268例正常人(甲组)、861例临床疑似肝病病人(乙组),用对流免疫电泳法作了血清甲胎蛋白(AFP)和乙型肝炎抗原(HBAg)检测。两种标准抗体血清均系北京生物制品研究新产品,效价1∶16,琼脂粉系日本产品,;缓冲液:琼脂板用PH8.6 0.05M巴比妥—巴比妥纳缓冲液,电泳槽内用PH8.20.05M巴比妥纳—盐酸缓冲液。对阳性结果再用琼脂双相扩散法作对照。肝功能检测正常值:SGPT—40单位以下,TFT—正常或“+”,CCF—正常或“+”。     

兔抗羊免疫血清的制备

目的：为学生进行沉淀反应自制实验材料.方法：用羊血清免疫家兔制备兔抗羊免疫血清.结果：自制兔抗羊免疫血清和羊血清经环状沉淀、琼脂扩散多种沉淀反应试验,验证均与兔抗人血清和人血清的反应结果相近.结论：自制兔抗羊免疫血清与羊血清可替代抗人血清与人血清,作为学生进行沉淀反应的实验材料.     

血球凝集试验检测甲胎蛋白应用于肝癌普查的初步报告

甲胎蛋白对原发性肝细胞癌的诊断价值已被公认。甲胎蛋白的检测方法近年也有所发展,目前国内外最常用的有琼脂双向扩散试验(以下简称扩散)、对流免疫电泳(以下简称对流)、补体结合试验、放射免疫自显影、放射免疫测定及血球凝集试验(以下简称血凝)等方法。 1973年12月,我们在江苏省启东县部分公社用血凝试验检测血清中甲胎蛋白的方法进行肝癌普查,检测自然人群及肝病患者共10,931人,查得血凝阳性138例,至目前为止,已确诊肝癌52例。初步看出血凝法检测甲胎蛋白具有简便、快速、敏感度高等优点,并较对流、扩散法具有更为早期的诊断价值,适合于农村、山区、基层医疗单位临     

重组结核分支杆菌16000蛋白抗原(rPA16)的免疫原性研究

目的：研究结核分枝杆菌重组16000蛋白（rPA16)诱发家兔产生抗体的能力并评价其血清学诊断的价值。方法：家兔按注射的抗原及佐剂的不同分组，皮下多点注射分别进行免疫，6次免疫后采血，双向琼脂扩散试验和酶联免疫吸附试验（ELISA）跟踪兔血清抗体效价的时间效应并检测兔血清与所试各类分支杆菌PPD有无交叉反应；同时检测rPA16与各分支杆菌PPD的免疫羊血清的反应，并用rPA16抗原检测人血标本，分析该抗原的临床检测的敏感性和特异性。结果：兔血清抗体效价结果显示：5个月后，加佐剂的抗原组的兔免疫血清仍能检测到抗体，不加佐剂组2个月后血清抗体检测即为阴性，ELISA检测兔免疫血清比双向琼脂扩散方法要更敏感，rPA16抗原加佐剂引起的兔血清抗体滴度最高可达1：6400，不加佐剂组的血清抗体滴度仅为1：400，ELISA法分析抗rPA16的兔血清的特异性表明其特异笥较好，仅与牛、人型结核分支杆菌的PPD呈阳性反应，与其他所试分支杆菌PPD反应均为阴性，同时又分析了rPA16抗原的特异性，与人型PPD相比，该抗原只与所试各类分支杆菌，BCG、牛分支杆菌免疫的血清呈阳性反应，而人型PPD则基本上与结核分支杆菌免疫的血清均呈阳性反应，ELISA检测血清标本结果：肺结核病组中rPA16和PPD检测敏感性分别为64.8%和75.2%；健康组，卡介苗接种阳转健康组，rPA16和PPD检测特异性分别为96.2%,88.5%和94.3%,66.7%。结论：rPA16具有较强的免疫原性和一定的特异性，可能成为结核病血清学诊断试剂之一。     

流行性乙型脑炎病毒重组E蛋白的纯化及多克隆抗体制备

目的：纯化原核表达的JEV E蛋白并制备其多克隆抗体。方法：IPTG诱导大肠杆菌表达JEV E蛋白,Ni-NTA亲和层析纯化。将纯化后的JEV E蛋白免疫新西兰兔,制备多克隆抗血清。琼脂糖双向扩散实验及间接ELISA检测抗体效价。结果：获得浓度1.85mg/ml、纯度92%的JEV E蛋白,并制备了JEV E蛋白兔多克隆抗体血清。琼脂糖双向扩散实验显示多克隆抗体血清1∶16稀释时仍能观察到沉淀线,间接ELISA法显示1∶200稀释时具有较高效价。结论：纯化了JEV E蛋白,并制备出了多克隆抗体。     

E抗原—抗体系统的检测方法和临床意义

自1972年国外在HBAg阳性血清中发现e抗原后,e抗原在临床预后的重要性受到重视,河南医科所肝炎研究小组用免疫琼脂扩散法(AGD)对361例HBAg阳性血清和57例HBAg阴性对照血清进行e抗原、e抗体及亚型的检测。结果证明e抗原主要存在于HBAg持续阳性各型肝病血清中,检出率为23～60％;而e抗体仅存在于健康HBAg阳性血清。而HBAg阴性的对照组血清中均不含e抗原和e     

亲和层析法提纯甲胎蛋白

利用抗人ＡＦＰ多抗亲和层析和抗人ＡＦＰ大鼠单抗亲和层析，从人脐带血和ＡＦＰ阳生肝癌病人腹水中提纯ＡＦＰ，多抗亲和层析纯化ＡＦＰ的回收率为３６％，单抗亲和层析回收率为６０％。两法提纯的ＡＦＰ产物与抗正常人血清抗体在对流免疫电流和双向琼脂扩散中无沉淀线出现，与人ＡＦＰ多抗出现明显的沉淀线，在免疫电泳中两法提纯的ＡＦＰ与抗ＡＦＰ出现沉淀线与抗正常人血清不出现沉淀线，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上显示一条分子量约６８