萘乙酸对睾丸细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨萘乙酸(NAA)对小鼠睾丸细胞增殖与凋亡的影响。方法将25只健康雄性昆明种小鼠随机分为5组,每组5只。正常对照组和阳性对照组小鼠喂饲普通颗粒饲料,高、中、低剂量组的饲料中加入萘乙酸的剂量分别为5000、1000、200mg/kg,喂养4周处死小鼠,阳性对照组于处死前3天每天腹腔注射环磷酰胺20mg/kg。取睾丸组织,用MTT法测定各组睾丸细胞增殖活性,用免疫组织化学方法检测各组增殖细胞核抗原(PCNA)和半胱天冬酶(Caspase-3)表达。结果高剂量组和正常对照组的睾丸细胞增殖活性分别为(0.501±0.069)和(0.875±0.082),差别有显著性(P<0.05)。高剂量NAA组PCNA和Caspase-3阳性表达率分别为8.9%和41.3%,正常对照组分别为34.9%和9.1%,差异均有显著性(P<0.05)。结论萘乙酸有一定抑制睾丸细胞增殖活性、诱发睾丸细胞凋亡的作用。     

葡多酚对小鼠肝细胞体内外增殖活性的影响

目的观察葡多酚(GPC)对正常肝细胞及受乙醇损伤的肝细胞增殖活性的影响.方法将小鼠正常肝细胞和乙醇引发损伤的肝细胞加入GPC培养,用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法测定各组肝细胞增殖活性.将GPC经口给予正常小鼠和乙醇引发急性肝损伤的小鼠,取肝脏匀浆后培养3和16 h,用前述方法测定肝细胞增殖活性.结果体外实验的正常对照组和乙醇对照组细胞增殖活性分别为0.438±0.040和0.365±0.024;50mg/L GPC保护组和50 mg/L GPC对照组则为0.541±0.026和0.603±0.060.体内实验的150 mg/L GPC保护组细胞增殖率较乙醇对照组升高0.095;150mg/LGPC对照组则较正常对照组升高0.030.各组之间的差异均有统计学意义(P＜0.05).结论GPC能抑制乙醇对肝细胞增殖活性的损伤,并对正常肝细胞增殖活性有一定促进作用.     

葡多酚对小鼠肝细胞蛋白激酶C和增殖细胞核抗原表达的影响

目的观察葡多酚(GPC)对小鼠肝细胞蛋白激酶C(PKC)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法每日给小鼠经口灌胃不同剂量的GPC,30天后取肝组织,用MTT法测各组小鼠肝细胞的增殖活性水平,免疫组化的方法检测各组PKC和PCNA的表达。结果高剂量GPC组PKC和PCNA阳性表达率分别为47.62%和82.76%,阴性对照组则分别为6.42%和32.62%,经χ2检验,差异有显著性(P<0.05)。各组肝细胞的PKC和PCNA阳性表达率随GPC剂量的增高而增高。结论葡多酚可促进小鼠肝细胞PKC的表达,提高肝细胞增殖活性。     

葡多酚对肝细胞内Ca~(2+)浓度和增殖活性的影响

目的探讨葡多酚(GPC)对正常肝细胞和受乙醇损伤肝细胞内Ca2+浓度与细胞增殖活性的影响。方法将大鼠正常肝细胞和乙醇损伤肝细胞加入不同剂量GPC共同培养,用Fura-2荧光测定肝细胞内Ca2+浓度,用MTT法测定细胞增殖活性。结果①正常对照组和乙醇对照组的Ca2+浓度分别为(108·26±14·17)和(651·24±47·95)nmol/L,二者差异有显著性意义(P<0·05);中、高剂量GPC组均较乙醇对照组显著性降低(P<0·05)。②加入GPC的正常肝细胞内Ca2+浓度依次为:细胞外液含Ca2+组>外液无Ca2+组>正常对照组。③正常肝细胞和乙醇损伤肝细胞的中、高剂量GPC组细胞增殖活性均较正常对照组和乙醇对照组显著性升高(P<0·05)。结论GPC可通过增加细胞外液Ca2+内流和胞内Ca2+库的释放两种途径升高正常肝细胞内Ca2+浓度,提高细胞增殖活性,并可抑制乙醇引发的肝细胞内Ca2+浓度异常升高(超载)和细胞增殖活性损伤。     

原花青素对硫酸镍染毒大鼠肝脏细胞Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的观察原花青素对硫酸镍染毒大鼠肝脏细胞凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响,探讨原花青素在拮抗镍诱导肝细胞凋亡中发挥的作用及可能的调控机制。方法选择健康Wistar雄性大鼠40只,每组8只,硫酸镍模型组给予硫酸镍2.50mg/kg腹腔注射染毒及生理盐水灌胃处理,原花青素干预组在用硫酸镍2.50mg/kg腹腔注射染毒的同时,给予原花青素水溶液1.25、2.50、5.00mg/kg等容积灌胃处理,1次/d,连续30d。采用Western Blot技术检测各组大鼠肝脏细胞中Caspase-3、Bcl-2及Bax的蛋白表达水平。结果原花青素可拮抗硫酸镍染毒大鼠肝脏细胞中Caspase-3的活化,并引起Bcl-2蛋白表达量的增强及Bax蛋白表达量的减弱,且Bax/Bcl-2比值随着原花青素干预剂量的增加呈下降趋势,其中原花青素1.25mg/kg剂量组Pro-Caspase-3活性、5.00mg/kg剂量组Cleaved-Caspase-3活性与硫酸镍模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05);原花青素1.25mg/kg剂量组Bcl-2蛋白表达量、1.25和5.00mg/kg剂量组Bax/Bcl-2比值与硫酸镍模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论原花青素可拮抗硫酸镍诱导的大鼠肝脏细胞凋亡,其机制可能与拮抗Caspase-3蛋白活化、并抑制Bcl-2蛋白表达的下调和Bax蛋白表达上调有关。     

葡多酚对人乳腺癌细胞增殖的抑制作用研究

目的研究葡多酚(GPC)对人乳腺癌(MCF-7)细胞增殖活性的影响及雌激素受体(ER)的调节作用。方法将GPC与MCF-7细胞共同培养,共设肿瘤细胞对照组、高、中、低(200、100、10μg/ml)剂量GPC组、ER阻断剂对照组(ICI10-6mol/L)和ER阻断剂(ICI10-6mol/L)+GPC(200μg/ml)6个组。用MTT法测定各组乳腺癌细胞的增殖活性水平,用免疫组化方法检测乳腺癌细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)和Bax蛋白的表达水平。结果与肿瘤细胞对照组比,高剂量GPC组乳腺癌细胞的增殖活性水平和PCNA阳性表达率降低,Bax蛋白阳性表达率升高(P<0.05);ER阻断剂+GPC组乳腺癌细胞的增殖活性水平、PCNA阳性表达率,均较高剂量GPC组升高,Bax蛋白阳性表达率降低,各项差别均有显著性意义(P<0.05)。结论GPC可有效抑制人乳腺癌细胞的增殖,并促进其凋亡;其作用与ER调节有密切关系。     

葡多酚对大鼠肝脏TNF-α与TGF-β_1mRNA异常表达的抑制作用

目的: 研究葡多酚(GPC)对N-亚硝基化合物引发的大鼠肝细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA与转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA异常表达的抑制作用。 方法:将大鼠随机分为正常对照组、阳性对照组和2个GPC实验组,每组10只,雌雄各半。后3组给口服50 mg/kg bw亚硝酸钠诱发突变,2个GPC实验组经口分别给予GPC100 mg/kg bw和10 mg/kg bw,喂养8 w,体内灌注固定肝组织,用原位杂交技术检测肝细胞TNF-αmRNA与TGF-β1 mRNA的表达水平。 结果: 阳性对照组TNF-αmRNA与TGF-β1 mRNA表达的阳性细胞率分别为30.23%和19.47 %,高剂量GPC组则为11.94 %和6.96 %,低剂量GPC组分别为18.16%和14.03%,与阳性对照组之间的差别均有显著性意义(P<0.05)。结论: 葡多酚对N-亚硝基化合物引发的大鼠肝细胞TNF-αmRNA与TGF-β1 mRNA的异常表达均有抑制作用。     

葡多酚对体外培养肝细胞PKC表达影响

目的 体外观察葡多酚(GPC)对小鼠肝细胞蛋白激酶C(PKC)表达的影响。方法 将正常小鼠肝细胞加入不同剂量GPC共同培养后,用免疫细胞化学法检测各组肝细胞PKC表达;四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测各组肝细胞的增殖活性。结果 100 mg/L GPC组肝细胞内PKC阳性表达率和细胞增殖活性分别为34.24%和0.654±0.062,经统计学χ²检验和t检验,与正常对照比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 葡多酚可促进小鼠肝细胞PKC表达,提高肝细胞增殖活性。     

松花粉对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用研究

目的:研究松花粉对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用。方法:通过预先给予各组小鼠松花粉,剂量分别为500、1000mg/kg,30d后各剂量组及模型对照组小鼠经口一次给予乙醇4800mg/kg,建立急性肝损伤模型,观察松花粉对急性肝损伤小鼠肝脏脂质过氧化反应、肝细胞脂肪变性等的影响。结果:12h后各剂量组小鼠肝组织MDA含量与乙醇模型组相比均降低,高剂量组具有显著差异(P<0.05);低、高剂量组肝组织GSH含量均高于乙醇模型对照组,分别具有显著和极显著差异(P<0.05,P<0.01)。肝组织苏丹Ⅲ染色显示,各剂量组肝细胞内脂滴比乙醇模型对照组明显减少。结论:实验结果表明松花粉能对抗酒精中毒引起的肝脏脂质过氧化损伤,具有有效的保肝作用。     

果蔬发酵液对小鼠酒精性肝损伤的保护作用及氧化应激机制

目的研究果蔬发酵液(vegetables and fruits ferment liquid,VFFL)对小鼠酒精性肝损伤的保护作用及其氧化应激机制。方法 50只雄性ICR小鼠随机分为正常对照组、乙醇模型组、果蔬发酵液组[10、30、60ml/(kg·d)],正常对照组和乙醇模型组蒸馏水灌胃,其余组用不同剂量果蔬发酵液灌胃,连续30d,最后一次灌胃16h后,乙醇模型组和各果蔬发酵液组均1次性50%乙醇12ml/kg·bw灌胃,6h后处死、取血和肝组织。分别采用HE染色观察肝组织,试剂盒测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(AKP)含量及肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、蛋白质羰基、活性氧(ROS)含量,TUNEL法测定肝细胞凋亡,蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白表达。结果与乙醇模型组比较,果蔬发酵液组的肝组织水肿和坏死明显减轻;血清中的ALT、AST、AKP水平和肝细胞凋亡明显低于乙醇模型组(P0.05);肝组织中SOD、GSH、GSH-Px水平明显高于乙醇模型组(P0.05),而ROS、MDA、蛋白质羰基含量明显低于乙醇模型组(P0.05);果蔬发酵液组的VDAC(电压依赖性阴离子通道蛋白)、Bcl-2蛋白表达增高(P0.05),细胞色素C、caspase-9、caspase-3、Bax蛋白表达下降(P0.05)。结论果蔬发酵液具有较好的抗氧化作用,它可通过阻止ROS介导的线粒体信号通路,抑制肝细胞凋亡,从而保护小鼠酒精性肝损伤。     

葡多酚对辐射引发胰腺细胞凋亡的抑制作用

目的　探讨葡多酚 (GPC)对辐射引发的细胞凋亡与增殖活性损伤的防护作用。方法　给口服不同剂量GPC的小鼠用 60 Co γ射线进行 1次全身性照射 ,照射后第 2天处死动物 ,取胰腺组织分别检测bcl 2和bax表达水平、细胞增殖活性及凋亡率等指标。结果　高剂量GPC组动物的细胞增殖率为 3.16 %± 0 .13% ,bcl 2表达水平为 4 9.8% ,均较辐射对照组 (分别为 0 .6 4 %± 0 .11%、2 9 .7% )高 ;而细胞凋亡率和bax表达水平则为 19.8%和 5 5 .0 % ,均低于辐射对照组 (35 .6 %、85 .7% )。各组间差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　GPC可抑制60 Co γ射线诱发的小鼠胰腺细胞凋亡及相关基因的异常表达 ,对辐射损伤有一定防护作用。     

丙泊酚对Wistar大鼠肝癌模型中Bax与Bcl-2表达的影响

目的：探讨不同浓度丙泊酚对Wistar大鼠肝癌模型中凋亡促进基因Bax和凋亡抑制基因Bcl-2表达的影响。方法：将50只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为五组,每组10只,分别为正常对照组（A组）,肝癌模型组（B组）,低剂量丙泊酚（3 mg/kg）组（C1组）,中等剂量丙泊酚（6 mg/kg）组（C2组）,高剂量丙泊酚（12 mg/kg）组（C3组）。给药结束后24 h处死大鼠,取肝脏标本观察肝脏特征,并做组织切片行苏木精-伊红（HE）染色及S-P免疫组化检测Bcl-2及Bax的表达,TUNEL法检测肝细胞凋亡指数（AI）。结果：（1）大体标本检查及H E染色：与A组比较,B组大鼠肝脏表面粗糙,部分肝叶表面出现黄色斑点,肝细胞脂肪变性,点状坏死及炎细胞浸润,少量胶原纤维增生;与B组比较,C1、C2、C3组肝细胞变性坏死以及胶原纤维增生程度有所减轻;（2）TUNEL检测结果：随丙泊酚剂量增加,肝癌细胞中凋亡细胞逐渐增多,AI逐渐递增,具有显著差异性（P〈0.05）;（3）与A组比较,B组肝脏细胞Bcl-2表达上调,Bax表达下降,差异均有统计学意义（P〈0.05）;与B组比较,C组（C1、C2、C3）肝脏细胞Bcl-2表达均下降,且随着丙泊酚剂量的增加而呈递减趋势,差异有统计学意义（P〈0.05）;Bax表达均上调,且随着丙泊酚剂量的增加而呈递增趋势,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：丙泊酚可导致Wistar大鼠肝癌细胞中Bcl-2/Bax表达比例降低,促进肝癌细胞的凋亡,进而抑制肝癌细胞的增殖能力。     

乙醇对胎鼠脑新皮质神经干细胞凋亡的影响

目的探讨乙醇对胎鼠神经干细胞凋亡的影响。方法将妊娠14 d胎鼠脑新皮质来源的神经干细胞暴露于终浓度分别为0(对照)、25、50、100 mmol/L的乙醇培养基溶液3 d。采用Annexin V/PI法检测细胞早期和晚期凋亡情况,采用JC-1探针法检测线粒体膜电位的改变,并检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果与对照组比较,50、100 mmol/L乙醇染毒组神经干细胞的早期凋亡细胞率明显升高,差异有统计学意义(P0.05);而各浓度乙醇染毒组神经干细胞的晚期凋亡率无明显改变。且随着乙醇染毒浓度的升高,神经干细胞的早期凋亡细胞率呈上升趋势。仅100 mmol/L乙醇染毒组神经干细胞线粒体膜电位低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,各浓度乙醇染毒组神经干细胞Bax mRNA的表达水平均上升,差异有统计学意义(P0.05);而Bcl-2和Caspase-3 mRNA的表达水平均无明显改变。且随着乙醇染毒浓度的升高,Bax mRNA表达量呈上升趋势。与对照组比较,50、100 mmol/L乙醇染毒组神经干细胞Bax蛋白的表达水平均升高,而Bcl-2/Bax蛋白的比值均降低,差异有统计学意义(P0.05);各浓度乙醇染毒组神经干细胞Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达水平均无明显改变。结论乙醇可引起神经干细胞早期凋亡,其机制可能与线粒体损伤和Bax表达上调有关。     

根皮素对CRS大鼠焦虑行为的影响及机制研究

目的 观察根皮素对慢性束缚应激（chronic restraint stress，CRS）模型大鼠焦虑行为的影响及机制研究。方法 90只SD大鼠随机分为对照组（Con）、模型组（Mod）、舍曲林组（Ser）、根皮素低剂量组（Phl-L）、根皮素中剂量组（Phl-M）和根皮素高剂量组（Phl-H），每组15只。采用束缚器束缚大鼠（3h/d，连续21d）复制CRS大鼠模型。每日应激前30min对各组大鼠进行灌胃给药，1次/d。Ser组灌胃盐酸舍曲林溶液15mg/kg，Phl-L、-M、-H组分别灌胃根皮素溶液20mg/kg、40mg/kg、80mg/kg，Con组和Mod组灌胃等量生理盐水。高架十字迷宫实验和旷场实验评价大鼠的焦虑行为，试剂盒检测大鼠海马组织中MDA含量和SOD、GSH-Px的活性，免疫蛋白印迹法检测大鼠海马组织Bcl-2和Bax的表达，免疫荧光组化观察大鼠海马组织Caspase-3的表达。结果 与Con组比较，Mod组开臂进入次数百分比和开臂滞留时间百分比均明显减少（P<0.05），自主运动总距离明显缩短（P<0.05）；大鼠海马组织中MDA含量以及Bax和Caspase-3蛋白表达明显升高（P<0.05），SOD和GSH-Px活性以及Bcl-2蛋白表达明显降低（P<0.05）。与Mod组比较，各给药组开臂进入次数百分比和开臂滞留时间百分比均明显增多（P<0.05），自主运动总距离明显延长（P<0.05）；大鼠海马组织中MDA含量以及Bax和Caspase-3蛋白表达明显降低（P<0.05），SOD和GSH-Px活性以及Bcl-2蛋白表达明显升高（P<0.05）。结论 根皮素可以改善CRS大鼠的焦虑行为，具有抗焦虑功能，其作用机制可能与抑制氧化应激、减少神经细胞凋亡有关。     

氢醌对人白血病细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的影响

目的 研究氢醌对白血病细胞株U937细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的影响。方法 用不同浓度的氢醌处理U937细胞24 h、48 h后,采用MTT法来检测细胞增殖抑制率;经瑞-吉染色后,观察细胞形态变化;采用流式细胞仪检测细胞凋亡;采用免疫印迹法检测Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达。结果 (1)U937细胞的增殖抑制率随氢醌作用时间及浓度的增加而增加,呈时间-剂量依赖性(P<0.05);(2)氢醌作用后,部分细胞体积增大,胞浆中有空泡,胞核发生畸形;(3)流式细胞术结果显示,细胞凋亡率随着氢醌作用时间及浓度的增加而增加,呈时间-剂量依赖性(P<0.05);(4)免疫印迹结果显示,与空白组相比较,染毒48h时,细胞Bax蛋白的表达量增加(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达量减少(P<0.05),Bcl-2/Bax比值下降(P<0.05),染毒24 h时,细胞Caspase-3蛋白的表达量增加(P<0.05);与染毒24 h各组相比较,染毒48 h时细胞Caspase-3蛋白的表达量随时间延长呈增加趋势(P<0.05)。结论 氢醌可以诱导U937细胞凋亡,其机制可能与调控凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达有关。     

葡多酚对小鼠乳腺癌细胞增殖活性抑制作用

目的研究葡多酚（GPC）对小鼠乳腺癌细胞增殖活性的抑制作用。方法将皮下接种乳腺癌（EMT6）细胞株的小鼠每日经口灌胃给予不同剂量的GPC，13d后取乳腺癌组织，用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法测各组小鼠乳腺癌细胞的增殖活性．免疫组化法检测各组增殖细胞核抗原（PCNA）和P53表达。结果肿瘤对照组PCNA和P53阳性表达率分别为72．78％和37．22％．高剂量GPC组则分别为28．32％和7．46％，差异有统计学意义（P〈0．05）。各组乳腺癌细胞的增殖活性随GPC剂量的增高而降低。结论葡多酚可有效抑制小鼠乳腺癌细胞增殖活性。