木兰脂素对离体大鼠胸主动脉环血管舒张机制和大鼠肾细胞毒性作用

目的: 研究木兰脂素（magnolin,Mag）的舒张血管作用、作用机制和细胞毒性。 方法: 应用离体血管环技术观察Mag对大鼠胸主动脉环张力的作用,记录去氧肾上腺素 （phenylephrine,PE,1 μmol·L^-1）预收缩的离体大鼠胸主动脉环张力变化。采用一氧化氮合酶（eNOS） 抑制剂L-硝基精氨酸甲酯（L-NAME,100 μmol·L^-1）预处理后观察Mag对血管环张力改变的 影响,并用MTT方法观察对大鼠肾细胞（NRK）增殖的影响。 结果: 木兰脂素（0.1~1 000 μmol·L^-1）对PE预收缩的血管环具有浓度依赖的舒张作用,该舒张作用为内皮依赖性。50%最大效应浓度（Half maximal effective concentration,EC₅₀）为24.43 μmol·L^-1。 内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthesis,eNOS）抑制剂-NG-硝基-L-精氨酸甲酯（NG-Nitro-L-arginine methyl ester hydrochloride,L-NAME,100 μmol·L^-1）预处理可以抑制Mag对具内皮血管的舒张效应。木兰脂素（0.1~1 000 μmol·L^-1）处理NRK的相对增殖率在84.17%和134.60%。 结论: 木兰脂素具有内皮依赖性舒张血管作用,其机制可能与内皮型一氧化氮合成酶激活有关,且没有肾细胞毒性。     

辣椒碱通过下调SIRT1表达抑制乳腺癌MCF-7细胞的迁移和侵袭

目的：观察辣椒碱对人乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭的影响,并初步探讨其分子生物学机制。方法：设立辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）组以及空白组,采用穿透小室（Transwell）迁移和侵袭实验分别检测辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）干预乳腺癌MCF-7细胞24 h后和空白组细胞的迁移和侵袭能力;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）干预乳腺癌MCF-7细胞24 h后和空白组细胞中沉默信息调节因子2同源蛋白1（SIRT1）和DNA聚合酶δ催化亚基p125的编码基因POLD1（POLD1） mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）干预乳腺癌MCF-7细胞24 h后和空白组细胞中SIRT1和DNA聚合酶δ催化亚基p125（p125）的蛋白表达水平。结果：与空白组比较,辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）干预乳腺癌MCF-7细胞24 h后,穿膜细胞数明显减少,迁移率和侵袭率显著降低,且呈浓度依赖效应（P<0.01）;与空白组比较,辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）干预24 h能显著下调乳腺癌MCF-7细胞中SIRT1,POLD1 mRNA表达水平（P<0.01）;与空白组比较,辣椒碱（25,50,75 μmol·L^-1）干预24 h能显著降低乳腺癌MCF-7细胞中SIRT1和DNA聚合酶δ催化亚基p125的蛋白表达水平（P<0.01）。结论：辣椒碱能显著抑制乳腺癌MCF-7细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与下调细胞中SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平以及POLD1 mRNA和p125的蛋白表达水平有关。     

连翘酯苷对PC12细胞增殖及其细胞损伤模型的保护作用

目的： 研究连翘酯苷对PC12细胞增殖及其损伤模型的影响。方法： 应用谷氨酸（20 mmol·L^-1）、低糖低血清培养基及β淀粉样蛋白_25~35（Aβ_25~35,10 μmol·L^-1）建立谷氨酸、低糖低血清及Aβ_25~35致PC12细胞损伤模型,观察连翘酯苷低、中、高浓度（0.1,1,5 μmol·L^-1）剂量对上述模型细胞存活率的影响,同时观察连翘酯苷低、中剂量对Aβ_25~35致PC12细胞凋亡的影响。结果： 连翘酯苷可提高PC12细胞存活率,提高谷氨酸、低糖低血清及Aβ_25~35致PC12细胞损伤模型的存活率,与模型组比较,有显著性差异（P<0.05）,并呈现一定量效关系。连翘酯苷（0.1,1 μmol·L^-1）可降低Aβ_25~35引起PC12细胞凋亡率（P<0.05,P<0.01）。结论： 连翘酯苷在体外实验具有神经细胞保护作用。     

氧化苦参碱下调p38MAPK磷酸化及改善胶原沉积抑制TGF-β1诱导的CFBs增殖

目的:研究氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对TGF-β1诱导心肌成纤维细胞(CFBs)增殖的作用,并分析可能的作用机制。 方法:试验分为空白对照组(无血清DMEM)、模型组(20 μg·L^-1TGF-β1)、OMT低剂量组(OMT-L组,1.89×10^-4 mol·L^-1)、OMT中剂量组(OMT-M组,3.78×10^-4 mol·L^-1)、OMT高剂量组(OMT-H组,7.56×10^-4 mol·L^-1)和SB203580(p38MAPK阻断剂,1×10^-5 mol·L^-1)。免疫细胞化学法鉴定CFBs中波形蛋白,测定TGF-β1诱导CFBs 24 h后α-SMA的表达情况;采用MTT法分析CFBs增殖的抑制作用;苦味酸天狼星红染色观察Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的沉积;Western blot分析p38MAPK,p-p38MAPK,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白的表达。 结果:MTT结果提示3.78×10^-4,7.56×10^-4mol·L^-1的OMT对TGF-β1诱导的CFBs异常增殖具有抑制作用(P<0.01);α-SMA免疫细胞化学实验提示OMT能够抑制CFBs-myFBs转换;苦味酸天狼星红染色显示OMT能明显减少Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的沉积;Western blot表明OMT可以显著抑制TGF-β1诱导Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的沉积及p38MAPK的磷酸化(P<0.01)。 结论:OMT可抑制TGF-β1诱导CFBs增殖的作用并抑制相关胶原蛋白的表达,改善心肌纤维化,其机制可能与抑制p38MAPK磷酸化有关。     

北五味子乙素抗AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖及作用机制

目的：探讨北五味子木脂素（schisandra lignin,SCL）中的活性成分之一五味子乙素（schisandrin B,Sch B）对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）诱导心肌成纤维细胞（cardiac fibroblast,CFb）增殖的作用及作用机制。方法：以培养的新生Wistar大鼠乳鼠CFb为实验模型,实验分为对照组、AngⅡ模型（10^-1μmol·L^-1）组、Sch B 1,10,30 μmol·L^-1 3个剂量组。采用胰酶消化、差速贴壁法培养CFb,MTT法测定CFb增殖活力;分光光度计测定CFb中超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二醛（MDA）含量;流式细胞仪检测线粒体膜电位水平（mitochondrial membrane potential,MMP）ΔΨm;激光共聚焦显微镜检测细胞内钙离子水平。结果：AngⅡ组SOD 活力（122.72±21.59） U·mL^-1低于对照组（135.81±26.62）U·mL^-1,P<0.01,MDA水平（2.82±0.14） μmol·L^-1高于对照组（1.17±0.06） μmol·L^-1,P<0.01。SchB 1~30 μmol·L^-1能显著提高CFb中SOD活力,降低MDA含量,与AngⅡ相比（P<0.05或P<0.01）;AngⅡ组线粒体膜电位明显下降（587.6±55.2）ΔΨm,钙离子水平升高（335.6±28.3）,与对照组比较（3 069.2±282.4）ΔΨm,（50.7±4.6）,P<0.01或P<0.001,给予Sch B处理后ΔΨm升高（Sch B 10,30 μmol·L^-1）,钙离子水平下降（SchB 1~30 μmol·L^-1）,与AngⅡ组比较（P<0.05或P<0.01）。结论：Sch B通过提高CFb SOD活力、降低MDA水平、增加清除自由基能力抑制CFb增殖,其作用与其升高线性体膜电位水平,抑制细胞内钙离子浓度,减少促进CFb增殖的氧化物质生成有关。     

花旗松素对β-淀粉样肽损伤神经元的保护作用及机制

目的: 研究花旗松素对 β-淀粉样肽(β-amyloid peptide,Aβ)损伤神经元的保护作用及其机制. 方法: 从新生乳鼠大脑皮层中分离纯化神经元,与Aβ(5 μmol·L^-1)、不同浓度花旗松素(20~100 μmol·L^-1)共同孵育24 h,CCK8法检测细胞存活率,Hoechst 33258染色和Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡,分光光度法检测半胱天冬酶-3(caspase-3)活性的变化. 结果: 在细胞活力实验中,与正常组相比,模型组细胞活力显著下降(49.2±1.3) %,不同浓度的花旗松素可以提高神经元活力,其中80 μmol·L^-1花旗松素给药组细胞活力增至(68.7±3.2) %,与模型组相比有极显著差异;细胞凋亡结果显示,与正常组相比较,模型组细胞凋亡率为(50.8±1.5) %(P<0.01),不同浓度的花旗松素给药组可以降低细胞凋亡率,其中40 μmol·L^-1 花旗松素凋亡率为(41.5±2.7) %,与模型组比较呈显著性差异(P<0.05);凋亡酶caspase-3的活性与正常组(0.12±0.02) U·μg^-1比较,模型组的caspase-3的活性升高(2.37±0.16) U·μg^-1,P<0.01),与模型组相比,40 μmol·L^-1花旗松素组caspase-3显著降低(1.77±0.07) U·μg^-1, P<0.01).花旗松素能明显提高Aβ损伤神经元的细胞活力,抑制神经元的凋亡,降低凋亡酶caspase-3的活性. 结论: 花旗松素对Aβ损伤神经元具有保护作用,其机制可能与抑制caspase-3活性从而实现抗凋亡作用有关.     

辣椒碱对肝癌SMMC-7721细胞增殖及HMGB1,IL-6表达的影响

目的：观察辣椒碱对肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响，并探讨其作用的分子机制。方法：设立辣椒碱（50，100，150，200，250，300 μmol·L^-1）组以及空白组，采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测辣椒碱（50，100，150，200，250，300 μmol·L^-1）作用SMMC-7721细胞24，48，72 h后的细胞活性；采用光学倒置显微镜观察辣椒碱（150，200，250 μmol·L^-1）作用SMMC-7721细胞形态的变化；实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测辣椒碱（150，200，250 μmol·L^-1）作用SMMC-7721细胞24 h后细胞中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）和白细胞介素-6（IL-6） mRNA表达水平；采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测辣椒碱（150，200，250 μmol·L^-1）作用SMMC-7721细胞24 h后细胞培养上清中HMGB1和IL-6的水平。结果：与空白组比较，辣椒碱50，100 μmol·L^-1组作用24，48，72 h差异均无统计学意义；其余辣椒碱（150，200，250，300 μmol·L^-1）作用不同时间点，增殖抑制率均明显升高（P<0.05），且具有明显的浓度和时间依赖效应；与空白组比较，辣椒碱（150，200，250 μmol·L^-1）组SMMC-7721细胞均出现不同程度地形态学改变，表现为细胞变圆、皱缩，贴壁差，脱落增多，给药浓度越高，效果就越明显；与空白组比较，辣椒碱（150，200，250 μmol·L^-1）组SMMC-7721细胞中HMGB1，IL-6 mRNA表达明显下调（P<0.05），上清中HMGB1和IL-6分泌明显降低（P<0.05）。结论：辣椒碱对肝癌SMMC-7721细胞增殖具有抑制作用，潜在机制可能与其抑制细胞HMGB1和IL-6的表达与分泌有关。     

侧柏酮对人γδT细胞功能的影响

目的: 探讨侧柏酮对人γδ T细胞功能的影响. 方法: 异戊烯焦磷酸/isopentenyl pyrosphate(IPP)法体外扩增人外周血γδ T细胞.各浓度侧柏酮作用人γδ T细胞48 h,CCK-8法检测其增殖力,流式细胞术测其表型、细胞周期、细胞凋亡及表达CD107a,穿孔素(perforin),粒酶B(granzyme B)的情况. 结果: 300～600 μmol·L^-1侧柏酮明显抑制人γδ T细胞生长(P<0.05);0.036 25～150 μmol·L^-1侧柏酮明显促进其生长(P<0.05),9.4 μmol·L^-1时达增殖最高峰(37.03±0.52)%,且穿孔素表达率明显升高(39.94±1.04)%(P<0.05),余与空白组相比无显著差异. 结论: 9.4 μmol·L^-1侧柏酮明显促进人γδ T细胞增殖并上调其穿孔素的表达.     

白茅内生菌Chaetomium globosum的化学成分研究

采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和高效液相色谱等方法对白茅内生菌Chaetomium globosum固体发酵产物的化学成分进行分离纯化,获得9个化合物。利用高分辨质谱、核磁共振谱及文献比对的方法,将上述化合物分别鉴定为chaetoglobosin F(1),chaetoglobosin F_ex(2),chaetoglobosin E(3),cytoglobosin A(4),penochalasin C(5),isochaetoglobosin D(6),N-benzoylphenylalaninyl-N-benzoylphenylalaninate(7),尿嘧啶(8),5-甲基尿嘧啶(9),其中化合物 7 为首次从毛壳菌中分离得到。采用MTT法测定化合物的体外细胞毒活性,结果显示,化合物 1,3,4,5 对人宫颈癌细胞株HeLa具有明显的抑制活性,IC₅₀分别为99.43,23.77,97.92,86.25 μmol·L^-1,而阳性对照药顺铂的IC₅₀为24.33 μmol·L^-1。     

利用一种耐热耐糖β-葡萄糖苷酶制备黄芩素的研究

对利用一种耐热耐糖β-葡萄糖苷酶水解黄芩苷制备黄芩素进行了研究。该酶催化黄芩苷转化为黄芩素的反应能在醋酸-醋酸钠缓冲液中良好地进行,酶的最适pH 5.5,最适反应温度85 ℃,温度在85 ℃以下,pH 5~7.5酶的稳定性良好。酶的最大反应速率V_max为0.41 mmol·L^-1·min^-1,米氏常数K_m为3.31 mmol·L^-1。不同的金属离子对酶的活性有不同的影响,醋酸-醋酸钠缓冲液中的Na⁺对酶有活化作用。反应体系中葡萄糖醛酸浓度低于0.6 mol·L^-1时,对酶有活化作用,当单糖浓度大于0.6 mol·L^-1时,对酶有抑制作用,当单糖浓度达到1.2 mol·L^-1时,酶活抑制率为50%,糖耐受性较好。通过实验得出较佳反应条件为黄芩苷-酶液1 g : 0.2 mL,pH 5.5的醋酸-醋酸钠缓冲液,反应时间为10 h时,反应温度为85 ℃,酶解率可达97%。     

川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响及其机制

目的: 探讨川芎嗪(TMP)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)所诱导心肌细胞肥大的抑制作用及其机制。方法: 利用Ang Ⅱ(0.1 μmol·L^-1)刺激新生大鼠心肌细胞建立肥大细胞模型。培养心肌细胞随机分为6组:对照组,Ang Ⅱ(0.1 μmol·L^-1)组,低剂量TMP(0.01 mmol·L^-1)组,中剂量TMP(0.1 mmol·L^-1)组,高剂量TMP(1 mmol·L^-1)组,吡咯烷二硫化氨基甲酸酯(PDTC,100 μmol·L^-1)组。在给药处理24 h后,收集各组心肌细胞,检测心肌细胞总蛋白含量、β-肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA表达量和核因子-κB(NF-κB)蛋白表达量。结果: Ang Ⅱ刺激导致培养心肌细胞的总蛋白含量[Ang Ⅱ组(296.7±27.6)mg·L^-1,对照组(184.3±11.6)mg·L^-1,P<0.05]、β-MHC mRNA表达量(Ang Ⅱ组0.936±0.059,对照组0.496±0.030;P<0.05)明显增加,这证实心肌肥大的发生;TMP以剂量依赖的方式抑制Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大。同时TMP 1 mmol·L^-1降低Ang Ⅱ诱导的肥大心肌细胞中磷酸化NF-κB(Ang Ⅱ组0.861±0.065,TMP组0.655±0.052,P<0.05)和I-κB蛋白的表达量(Ang Ⅱ 组0.785±0.042,TMP组0.525±0.045,P<0.05)。在应用Ang Ⅱ刺激心肌细胞同时,给予NF-κB抑制剂PDTC也能抑制Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大。结论: 川芎嗪通过抑制心肌细胞内NF-κB途径,而抑制Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大。川芎嗪的这些作用构成了它对心脏疾病具有保护作用的机制之一。     

二脱甲氧基姜黄素与阿霉素联合应用对HL-60/ADR的生长抑制作用

目的： 研究二脱甲氧基姜黄素（Bdmc）与阿霉素（ADR）联合应用对人白血病多药耐药细胞株 （HL-60/ADR）的生长抑制作用。 方法： HL-60/ADR细胞2×10³/孔,1,2,4,8 μmol·L^-1 Bdmc分别与0.4,0.8,1.6,3.2 μmol·L^-1 ADR同时联合给药,48 h 后,MTT法测定两种药物的体外杀伤作用。6,12,24,48 μmol·L^-1Bdmc分别与0.08,0.2,0.4,1.0 μmol·L^-1ADR序贯联合给药,48 h 后,应用金氏公式进行序贯联合用药效果分析。 结果： 单独ADR 0.4,0.8 μmol·L^-1时抑制率6.9%,11.8%,同时联合加8 μmol·L^-1Bdmc时,抑制率达到94%以上。1~8 μmol·L^-1 Bdmc和0.8~3.2 μmol·L^-1ADR同时联合作用 HL-60/ADR细胞可产生单纯相加至增强的协同杀伤效果。序贯给药法中,先给Bdmc后给SDR结果为协同作用,先给ADR后给Bdmc实验结果为拮抗作用。 结论： Bdmc与ADR同时用药可产生协同作用,二者序贯联合用药仅产生单向协同作用。     

补肾活血汤对慢性心力衰竭患者免疫炎症反应的影响

目的: 观察补肾活血汤对慢性心力衰竭患者(CHF)临床疗效及对免疫炎症反应的影响。方法: 将60例患者按 随机数字表法分为两组,对照组30例用西医常规治疗,治疗组30例在对照组治疗基础上加服补肾活血汤,每日1剂,疗程14 d。观察两组临床症状积分、左室舒张末内径(LVED),左室射血分数(LVEF),血浆脑钠肽(BNP),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-6(IL-6),长正五聚蛋白3(PTX-3)水平的变化。结果: 治疗组临床症状积分改善的总有效率(90%)优于对照组(80%),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组治疗后 [BNP(1 058.72±575.62) ng·L^-1,IL-6(6.88±0.91) ng·L^-1,TNF-α(251.54±52.72) ng·L^-1,PTX-3(3.16±0.60) μg·L^-1]均较对照组[(1 542.26±732.18) ng·L^-1,(9.63±1.25) ng·L^-1,(283.24±48.58) ng·L^-1,(3.40±0.56) μg·L^-1]明显改善(P<0.05),两组患者LVED,LVEF均较治疗前好转,但差异无统计学意义。结论: 补肾活血汤可以显著改善CHF患者心功能,降低TNF-α,IL-6,BNP,PTX-3水平,抑制免疫炎症反应,改善预后。     

蛇葡萄素对大鼠肝星状细胞增殖及胶原蛋白、细胞因子生成的影响

目的：研究蛇葡萄素对大鼠肝星状细胞（HSC-T6）的增殖及胶原蛋白、细胞因子生成的影响。方法：对HSC-T6增殖的影响：用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养液制备成HSC-T6细胞3×10⁴个/mL细胞悬液100 μL/孔接种于96孔培养板。设细胞对照组、秋水仙碱1.0 mg·L^-1组和100.0,75.0,50.0,25.0,12.5 mg·L^-15个不同质量浓度蛇葡萄素组,置37 ℃ 5%CO₂培养48 h。采用MTT法检测蛇葡萄素对大鼠肝细胞HSC-T6增殖的影响。对HSC-T6生成Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原蛋白及细胞因子（TGF-β₁,PDGF）含量的影响：取终质量浓度分别为50.0,25.0,12.5 mg·L^-1蛇葡萄素,3×10⁴个/mL细胞悬液100 μL/孔细胞液接种于96孔培养板。阳性组秋水仙碱的质量浓度为1.0 mg·L^-1。置37 ℃ 5%CO₂培养48 h。ELISA法检测HSC-T6细胞生成的胶原蛋白（Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ）、转化生长因子（TGF-β₁）及血小板衍生因子（PDGF）含量。结果：蛇葡萄素100.0,75.0 mg·L^-1对HSC-T6细胞的增殖有明显抑制作用,其无毒浓度为50.0 mg·L^-1。50 mg·L^-1的蛇葡萄素可使HSC-T6细胞生成的Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原蛋白,TGF-β₁,PDGF含量明显低于细胞对照组（P<0.05）,25 mg·L^-1的蛇葡萄素也可使HSC-T6细胞生成的Ⅲ型胶原蛋白含量明显低于细胞对照组（P<0.05）。结论：蛇葡萄素能抑制HSC-T6增殖并可使HSC-T6生成的Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原蛋白,TGF-β₁,PDGF含量降低。     

牛蒡根水提物扩血管作用及机制研究

目的: 探讨牛蒡根水提物对大鼠离体胸主动脉环的舒张作用及其作用机制。 方法: 采用测定离体血管环张力的方法,观察牛蒡根水提物（0.075~15 g·L^-1）分别对基础状态、去氧肾上腺素（PE） 5×10^-6mol·L^-1和氯化钾（KCl 40 mmol·L^-1） 预收缩的内皮完整血管环和去内皮血管环的舒张作用;并观察左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME, 10^-4mol·L^-1） 和亚甲蓝鸟苷酸环化酶抑制剂（ODQ, 10^-5mol·L^-1）、吲哚美辛（Indo, 10^-5mol·L^-1）、 四甲基乙二胺（TEA, 10^-4mol·L^-1）预处理对牛蒡根水提物的舒张血管作用的影响。 结果: 牛蒡根水提物对基础状态的内皮完整和去内皮血管环的张力无影响;对PE预收缩的去内皮和内皮完整血管环具有浓度依赖性舒张作用;L-NAME（P<0.01）和ODQ（P<0.05）预处理可明显减弱牛蒡根水提取物的舒血管作用,Indo预处理没有作用;TEA预处理（P<0.05）显著性增强牛蒡根水提物舒张PE预收缩血管的作用;对KCl 预收缩的内皮完整血管环有明显舒张作用。 结论: 牛蒡根水提物能引起血管发生内皮依赖性和非内皮依赖性的舒张作用,其作用机制可能涉及促进血管内皮NO释放和血管平滑肌细胞的Ca²⁺激活。     

伴侣自吞噬在MPP+损伤的SH-SY5Y细胞中的影响及葛根素的干预作用

目的： 研究葛根素通过分子伴侣自吞噬途径保护MPP⁺损伤的SH-SY5Y细胞。方法： 以1 mmol·L^-1 MPP⁺损伤SH-SY5Y细胞建立帕金森病细胞模型。采用CCK-8染色检测不同浓度的葛根素对MPP⁺损伤的SH-SY5Y细胞存活率的影响;透射电镜、AO染色观察自噬体的形成及检测溶酶体活性的变化;RT-PCR检测Lamp2a,Hsc70 mRNA表达的变化,Western blotting法检测细胞内Lamp2a,Hsc70,α-synuclein蛋白的表达。结果： 在12.5~50.0 μmol·L^-1,预先30 min加入葛根素可以保护SH-SY5Y细胞抵抗MPP⁺诱导的损伤,并呈一定的量效关系;AO染色和电子显微镜检测25.0,50.0 μmol·L^-1葛根素作用于1 mmol·L^-1MPP⁺损伤的SH-SY5Y细胞,细胞内出现自噬体,并且随着葛根素剂量的增加,胞质中形成的自噬体增多;流式细胞术检测结果显示50.0 μmol·L^-1葛根素可以拮抗1 mmol·L^-1 MPP⁺诱导的SH-SY5Y细胞内ROS水平的增加,阻止氧化损伤的发生;RT-PCR和Western blotting结果表明在12.5~50.0 μmol·L^-1葛根素通过上调细胞内Hsc70,Lamp2a mRNA和蛋白水平保护MPP⁺造成的SH-SY5Y细胞损伤并抑制MPP⁺诱导的SH-SY5Y细胞α-synuclein蛋白的积聚。结论： 葛根素可以拮抗MPP⁺诱导的SH-SY5Y细胞损伤,其保护机制可能与干预分子伴侣自吞噬途径有关。     

HPLC 同时测定林蛙油中α-亚麻酸、亚油酸和油酸含量

目的: 建立同时测定林蛙油中α-亚麻酸、亚油酸和油酸含量的HPLC方法。 方法: Alltima C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm), 以乙腈-0.1%磷酸(80:20)为流动相,流速1 mL·min^-1,柱温30℃,检测波长203 nm。 结果: α-亚麻酸在4.76~152.16 mg·L^-1 (r=1),亚油酸在15.36~491.59 mg·L^-1 (r=0.999 8),油酸在47.28~1512.80 mg·L^-1 (r =0.999 9) 呈良好的线性关系;平均回收率α-亚麻酸为95.8%,RSD 1.79% (n=6);亚油酸为98.6%,RSD 1.32% (n=6);油酸为99.3%,RSD 1.59% (n=6)。 结论: 该法操作简便,结果准确,专属性强,重复性好,可作为林蛙油质量控制的参考。     

竹节参醇提物对LPS诱导RAW264.7细胞炎症的保护作用

目的： 观察竹节参醇提物对脂多糖（LPS）刺激小鼠单核巨噬白血病细胞RAW264.7细胞炎症保护作用的初步 探讨。 方法： 用不同质量浓度的竹节参醇提物处理RAW264.7细胞,噻唑蓝（MTT）法检测细胞活性;检测LPS刺激的RAW264.7细胞一氧化氮（NO）释放量以及竹节参醇提物干预后RAW264.7细胞NO释放量;酶联免疫吸附（ELISA）法检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、 白介素1β（IL-1β）分泌;聚合酶链反应（PCR）法检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA的表达;免疫印迹（Western blot）法检测胞浆胞核核转录因子-κB（NF-κB）蛋白表达。 结果： 竹节参醇提物作用RAW264.7细胞的安全范围<100 mg·L^-1;LPS的用药质量浓度为1 mg·L^-1;与LPS模型组相比,竹节参醇提物0.1,1,10,40 mg·L^-1能有效抑制NO释放（抑制率分别为31.2%,41%,46.1%,55.2%）和抑制TNF-α,IL-1β的分泌（P<0.05或P<0.01）;竹节参醇提物10,40 mg·L^-1能下调LPS模型组iNOS mRNA表达且抑制NF-κB的核移位。 结论： 竹节参醇提物对LPS刺激的RAW264.7细胞炎症具有保护作用,其保护机制可能与调控NF-κB通路,进而抑制NO的释放,降低TNF-α,IL-1β,iNOS表达有关。     

人参皂苷Rb1，Rg1和Re调控Raf-CREB，Akt-CREB，CaMKⅡ-CREB信号转导通路的体外研究

目的：研究人参皂苷中的主要有效单体Rb₁,Rg₁和Re对神经营养因子细胞信号转导通路的影响。方法：建立以0.6 mmol·L^-1的皮质酮作用于SH-SY5Y细胞24 h的损伤模型,加入Rb₁（120,60,20 μmol·L^-1）,Rg₁（120,80,40 μmol·L^-1）和Re（120,80,40 μmol·L^-1）,CCK试剂盒检测Rb₁,Rg₁和Re对皮质酮诱导SH-SY5Y细胞损伤的存活率;利用脂质体转染的方法将含有CREB-Luc报告基因的质粒分别和含有hRaf,hAkt,hcAMP,hCaMK基因的质粒转染入人胚肾细胞（HEK293细胞）,加入有效浓度人参皂苷Rb₁,Rg₁和Re后,用双荧光素酶报告基因系统和Western blotting方法检测CREB的表达情况。结果：CCK的测试结果表明人参皂苷Rb₁（60 μmol·L^-1）,Rg₁（80 μmol·L^-1）和Re（80 μmol·L^-1）对SH-SY5Y细胞具有明显的保护作用;报告基因检测方法显示加入Rb₁和Rg₁调控后Raf-CREB,Akt-CREB通路中CREB报告基因活性明显增强,加入Re调控后Raf-CREB,CaMKⅡ-CREB通路中CREB报告基因活性明显增强。Western blotting结果显示,Rb₁和Rg₁调控后Raf-CREB,Akt-CREB通路中CREB蛋白表达明显增强,Re调控后Raf-CREB,CaMKⅡ-CREB通路中CREB蛋白表达明显增强。结论：人参皂苷中的主要有效单体Rb₁,Rg₁和Re对皮质酮所致SY5Y细胞受损具有明显保护作用,其作用机制可能与调节神经营养因子细胞信号转导通路上游的Raf-CREB,Akt-CREB,CaMKⅡ-CREB通路有关。     

大黄灵仙方调控TAK1与TRAF6相互作用及共定位对胆管细胞炎症反应的影响

目的 观察大黄灵仙方（DHLX）对大鼠胆管上皮细胞的修复作用,探讨其作用机制是否通过调节转化生长因子-β（TGF-β）激活激酶1（TAK1）与肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）的相互结合,调控核转录因子-κB（NF-κB）/丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路活化而发挥作用。方法 将20只SD大鼠随机分为正常组和DHLX组,分别予生理盐水及DHLX（320 mg·kg^-1·d^-1）灌胃8 d,制备正常血清及含DHLX血清;从正常SD大鼠中提取胆管上皮细胞,取胆管上皮细胞分为9组：正常组、模型组（20 mg·L^-1）、脂多糖（LPS）+DHLX组（20 mg·L^-1+10%含药血清）、LPS+PDTC组（20 mg·L^-1+200 μmol·L^-1）、LPS+SB203580组（20 mg·L^-1+0.5 μmol·L^-1）、LPS+PDTC+SB203580组（20 mg·L^-1+200 μmol·L^-1+0.5 μmol·L^-1）、LPS+PDTC+DHLX组（20 mg·L^-1+200 μmol·L^-1+10%含药血清）、LPS+SB203580+DHLX组（20 mg·L^-1+0.5 μmol·L^-1+10%含药血清）、LPS+PDTC+SB203580+DHLX组（20 mg·L^-1+200 μmol·L^-1+0.5 μmol·L^-1+10%含药血清）;显微镜下观察药物干预后各组细胞的形态学变化,采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组细胞中白细胞介素（IL）-1β与IL-6的表达量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞中TAK1与TRAF6蛋白表达水平,免疫共沉淀技术检测TAK1与TRAF6的相互作用,激光共聚焦显微镜观察TAK1与TRAF6在细胞中的分布及共定位情况。结果 LPS作用后,细胞突触减少,胞体变圆变小,用药后各组细胞形态趋向正常;与正常组比较,模型组IL-1β和IL-6表达量明显上升（P<0.05）,TAK1表达量降低而TRAF6的表达量升高（P<0.05）,TAK1-TRAF6蛋白质复合物含量呈降低趋势;与模型组比较,LPS+DHLX组IL-1β和IL-6表达量明显降低（P<0.05）,TAK1表达量升高而TRAF6表达量降低（P<0.05）,TAK1-TRAF6蛋白质复合物含量显著增加（P<0.01）,两蛋白共定位于细胞质中;与LPS+DHLX组比较,其余各组IL-1β和IL-6表达量均明显降低（P<0.05,P<0.01）,通路阻滞剂干预后各组TAK1-TRAF6蛋白质复合物含量明显降低（P<0.05）,通路阻滞剂联合DHLX干预后各组TAK1-TRAF6蛋白质复合物含量明显增加（P<0.05）,两蛋白在细胞质中存在共定位但不明显。结论 在LPS诱导的胆管细胞炎症反应中,TAK1与TRAF6相互结合呈减弱趋势,大黄灵仙方可逆转此现象,其作用机制可能与促进TAK1与TARF6的相互结合从而抑制NF-κB/MAPK信号通路活化有关。