ELISA方法筛查住院病人梅毒结果分析及筛查方案研究

目的:建立住院病人梅毒筛查方案,以提高梅毒检测的准确性,减少假阳性和假阴性,避免漏检和误诊。方法:先用ELISA方法对14028例住院病人进行检测,对阳性标本再作TPPA及RPR检测,结果以TPPA和RPR最高稀释倍数为阳性报告。结果:以TPPA为确认结果,ELISA梅毒检测敏感性为100%,假阳性率为2.08%,RPR检测敏感性为100%,假阳性率为1.35%;ELISA检测阳性标本OD值大于1.5倍阴性对照OD值又小于2.1倍阴性对照OD值的标本47例(7.7%),OD值小于5倍阴性对照OD值的标本有107例(17.5%),OD值大于5倍阴性对照OD值的标本43例(7.0%)。结论:此筛查方案既能减少假阳性和漏检,又能为临床诊断和治疗提供准确的依据,值得推广应用;ELISA方法检测梅毒要注意钩状效应造成的假阴性结果,阳性的结果要谨慎结合临床表现,才可以诊断是否感染梅毒。     

抗梅毒螺旋体主要抗体与RPR的关系探讨

目的 分析梅毒阳性血清抗TP15、17、47单组分抗体的检出情况并探讨其与梅毒心磷脂反应素的关系.方法 分别建立抗TP15、17、47 ELISA双抗体夹心法检测梅毒阳性血清,再用苍白密螺旋体颗粒(明胶)凝集试验(TPPA)法确定,同时快速血浆反应素试验(RPR)法测定抗心磷脂反应索阳性滴定度.结果 抗TP15、17、47与常规ELISA的阳性不符合率分别为15.2%,3.3%和5.1%,各组分抗体强度的分布不同;ELISA检测的OD值与TPPA检测时血清的抗体强度无相关性(r=0.073);比较3种抗TP单组分抗体的OD值在RPR阳性和阴性组的差异均有统计学意义.结论 抗TP15、17、47单组分抗体与ELISA有不同的阳性不符合率,ELISA与TPPA检测的血清抗体强度无相关性;RPR的阳性检出率为47.1%,3种抗TP单组分抗体均为阳性而RPR阳性组OD值低于阴性组.     

两种方法检测HBeAb、HbcAb弱阳性标本的比较

目的 比较ECL(电化学免疫发光法)与ELISA(酶联免疫吸附试验)检测乙肝HbeAb和HbcAb结果的符合率,避免假阳性或假阴性的发生.方法 先用ELISA法筛选出HBeAb、HbcAb标本的OD值与COV值相近标本922例,分组后再用ECL法进行检验并计算出它们之间的符合率.结果 ELISA法检测HBeAb、HbcAb弱阳性组符合率分别为97.7%、97.5%,检测阳性组符合率均为100%.检测阴性组符合率为97.0%、98.0%,差异均无统计学意义(P>0.05),而检测OD值>COV值0.1的弱阴性组符合率分别为85.3%、84.2%,两方法间比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 ELISA法检测乙肝抗体,应注意标本OD值与COV值相近的标本,尤其弱阴性标本,必要时用ECL法进行复查.     

丙型肝炎病毒核心抗原检测用于临床诊断价值的评估

HCV核心抗原是由HCV基因组中最为保守的部分编码而来,研究表明,丙型肝炎患者外周血中HCV核心抗原与HCV RNA水平具有良好的相关性,本文评估HCV核心抗原测定法用于丙型肝炎早期诊断的特异性、敏感性及缩短HCV窗口期诊断时间的可行性和临床价值。1.材料与方法[1](1)HCV核心抗原测定使用HCV抗体诊断试剂盒(ELISA),空白对照调零后,阴性对照OD值<0·10,并且3孔阳性对照OD平均值>阴性对照OD值0·6以上方可认为试剂盒有效,操作无误。若1孔阳性对照OD值与3孔阳性对照OD平均值差异>30%,该孔应舍弃,并用另2孔重新计算OD平均值。阈值=…     

常用血清学ELISA试剂内部对照的有效性与结果判定

血清免疫学诊断用ELISA试剂盒内部对照一般包括阳性对照、阴性对照和空白对照.按照试剂说明书要求,每次每板都应设立三项对照(空白对照有的ELISA试剂盒不要求做),对照OD值在说明书要求或质控范围方能对检测标本的阴性或阳性做出判断,结果才具有真实性.     

免疫结合胶体金层析法和ELISA检测HBsAg用于口岸卫生检疫的风险评估

目的评估免疫结合胶体金层析法(dot immunochromatography gold assay,DICGA)和ELISA检测HBsAg在口岸卫生检疫中的风险.方法用ELISA对血清标本进行HBsAg检测,对阳性标本用DICGA复检,对复检阴性标本再用ELISA检测.比较两种方法的一致性.分析DICGA阴性,而ELISA阳性的标本数在各个吸光度区间的构成比.结果对10 566份出入境人员血清标本用ELISA进行两对半检测,对1 189份HBsAg阳性血清用DICGA进行复核检验,对其中328份DICGA阴性标本再次用ELISA检验,检出39份阳性,289份阴性.DICGA的敏感性为95.67%,准确性为96.72%,特异性为100%,两种方法的一致性(Kappa值)达91.48%.DICGA阴性但是ELISA阳性的标本数在各个吸光度区间的构成比分别是(1.5,1.0)17%,(1.0,0.5)50%,(0.5,0.105)100%.DICGA在(1.5,0.105)区间有一半以上HBsAg不能检出(56.52%),在(1.0,0.105)有77.78%的假阴性,对(0.5,0.105)则基本不能检出.对ELISA两种试剂的假阳性率分别为:34.66%(269/776)和4.84%(20/413).结论在口岸卫生检疫中,不宜单独用DICGA检测HBsAg.对ELISA需要选择质量高的试剂,每个实验室最好在使用前亲自傲试剂评估.     

HIV抗体弱阳性质控血清的制备及应用评价

目的 掌握抗HIV弱阳性外部对照质控血清的制备方法,有效运用到试验过程中。方法 用HIV抗体阴性血清成倍比稀释强阳性血清,采用酶联免疫吸附检验(ELISA)来检测各稀释度OD值,并计算S/CO值来确定某一稀释度为配置稀释度(即临界值2-3倍)。结果 采用倍比稀释法,可获得所需外部质控所用血清浓度,并且连续检测20次,绘制出室内质控图。结论 制备适合自己试验室的弱阳性的外部质控血清方法简单,使用起来方便,也易于保存,适用于HIV初筛实验室日常检测的室内质量控制工作。     

两种ELISA试剂检测麻疹病毒IgM抗体实验室对比与评估

目的：对海泰两种麻疹病毒IgM抗体诊断ELISA试剂的实验室现场应用效果进行对比和评估。方法：同时采用该两种ELISA试剂和参比试剂对疑似麻疹患者的血清标本42份进行检测,并通过标本阳性检出率、敏感性、重复性、稳定性进行对比。结果：过夜法试剂在标本检出率、敏感性和稳定性都优于快速法试剂。结论：应制备外部对照质控血清,以便控制试剂和检测质量。疑似麻疹患者的血清标本OD值接近Cottoff值时,应采集第二份血清进行确诊。     

探讨酶联免疫吸附试验检测乙肝核心抗体假阴性的问题

目的:了解用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙肝二对半核心抗体(抗-HBc)的假阴性。方法:留取用ELISA检测HBsAg阳性、HBeAg阳性、抗-HBc阴性血清标本201份,分别用美国雅培AXSYM免疫发光仪微粒子酶免疫技术(MEIA)定量检测抗HBc、ELISA进行原倍和生理盐水15倍稀释测定。结果:MEIA法定量检测抗-HBc阳性166份,阳性检出率为82. 6%;阴性(S/Co>1 0)35份,与ELISA一步法相比阴性符合率为19 .9%,生理盐水15倍稀释阳性33份,阳性检出率为19 4%,原倍血清100% 阳性。结论:MEIA法定量检测的阳性率远远高于ELISA法检测, 15倍稀释测定结果阳性率比30倍稀释有所提高,原倍血清仅作为流行病学调查结果。     

两种不同方法检测HIV抗体结果比较

目的了解酶联免疫吸附试验(ELISA)和胶体金(硒)免疫层析(GICA)两种不同方法检测HIV抗体的敏感性。方法采用ELISA和6个不同生产厂家GICA法检测,比较其最低检测下限。结果 6份样本稀释数万倍后ELISA法仍为阳性,GICA与ELISA法OD与值比较,不同生产厂家GICA法敏感性存在很大差异,ELISA法OD值<0.5,GICA法无一厂家试剂检出阳性,OD值>0.5只有1个厂家试剂检出阳性,其他厂家试剂均在ELISA法OD值>1.5~2.0才能检测出阳性。结论 ELISA法敏感性远高于GICA法,选择GICA法做HIV抗体筛查须慎重。     

间接酶联免疫吸附试验检测免疫人群血清狂犬病病毒抗体的效能评价

目的 用金标准快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibtion test,RFFIT)评价间接ELISA检测免疫人群血清狂犬病病毒抗体的效能。 方法 收集在广西壮族自治区疾病预防控制中心门诊部首次全程接种狂犬病疫苗的个体血清和加强免疫血清共314份,用RFFIT和间接ELISA两种方法对其进行狂犬病病毒抗体检测。 结果 314份血清标本用两种方法检测结果一致率为81.85%,与RFFIT比较,间接ELISA检出阳性结果符合率为83.50%,阳性预计值为96.88%,阴性符合率为52.94%,阴性预计值为15.52%,经McNemar检验两种方法检出结果差异有统计学意义(P<0.05);进一步从RFFIT值分析得出87.76%的假阴性标本都存在于RFFIT值<3.0 IU/ml的标本中,从免疫后时间分析得出93.88%的假阴性标本都存在于免后1~3年标本中,而对于高RFFIT值的血清标本特别是全程免疫后42 d和加强免疫的高几何平均滴度的血清标本,间接ELISA结果假阴性率很低(3.26%及以下),两种方法检测结果一致率高达95.70%及以上,经McNemar检验两种方法检出结果差异无统计学意义(P>0.05)。 结论 间接ELISA可以用在狂犬病疫苗全程免疫后抗体阳转率的普查,用于个人免疫效果的评价方面需谨慎。     

以多肽为抗原的HIVELISA检测试剂的影响因素分析

目的探讨以化学合成多肽为抗原的HIV ELISA检测试剂制备过程中的影响因素。方法分别采用链霉亲和素、牛血清白蛋白偶联剂偶联HIV多肽抗原后包被经紫外线处理或未经紫外线处理的酶标板,同时检测HIV阳性、阴性标本,阳性血清OD1.0,阴性血清OD0.1为检测成功,分别重复24孔,计算成功率。结果链霉亲和素偶联的HIV多肽抗原包被经紫外线处理后的酶标板成功率最高,为100.0%(48/48),且显色本底最低。结论采用链霉亲和素偶联HIV多肽抗原及紫外线预处理酶标板对提高检测效果具有很大的帮助。     

乙型肝炎病毒大蛋白的临床应用分析研究

目的通过检测血清样本中HBVDNA、乙型肝炎病毒大蛋白(LHBs)、乙型肝炎五项指标以及乙型肝炎前S1(PreS1Ag),探讨LHBs用于乙型肝炎临床诊断的价值及与其他乙型肝炎病毒标志的相关性。方法收集623份乙型肝炎患者血清标本,LHBs、乙型肝炎五项指标以及PreS1Ag,采用ELISA技术检测了HBsAg阳性血清标本中的LHBs、HbeAg、PreS1Ag抗原,采用荧光定量PCR技术检测HBVDNA。结果 515份HBVDNA阳性血清标本中,LHBs检测阳性485份(94.17%);PreS1Ag检测阳性260份(50.49%);LHBs阳性率明显高于PreS1Ag阳性率,两者差异有统计学意义(P0.01);在检测270份HBeAg阴性血清标本中,HBVDNA检出阳性133份(49.26%),LHBs检出阳性119份(44.07%),两者差异无统计学意义;LHBs吸光度(OD值)与HBVDNA呈正相关关系(r=0.980)。结论 LHBs可用于反映乙型肝炎病毒复制水平的敏感新指标,操作方法便捷适合临床应用。     

三种梅毒血清学检测方法的适应性分析

目的:探讨三种不同的梅毒检测方法在诊断和治疗中的价值。方法:对本院1542例门诊标本同时用梅毒血清酶联免疫吸附试验(ELISA)和梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)及甲苯胺红不加热试验(TRUST)检测,阳性标本再用TPPA确证。结果:TPPA确证阳性的159例标本中,ELISA检出158例阳性,检出率99.4%,TRUST检出110例阳性,检出率69.2%,差异具有显著统计学意义;ELISA检测样本OD值的高低与TPPA和TRUST的符合率有显著差异。结论:TRUST仅适合于梅毒治疗的滴度检测及疗效观察,ELISA灵敏度高,适合于筛查,TPPA特异性好,适合于筛查后的确认试验。     

检测梅毒螺旋体感染的两种血清学试验临床评价

[目的 ]评价甲苯胺红不加热血清试验 (TRUST)和梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验 (TP ELISA )检测梅毒感染的灵敏性和特异性。[方法 ]用梅毒微粒凝集试验 (TPPA)为参照 ,将 10 3份血清标本分成阳性、阴性组 ,用TRUST和TP ELISA检测 ,结果与TPPA检测结果比较。 [结果 ]TRUST的假阴性率为 5 %( 2 /3 9) ,假阳性率为 16%( 10 /64 ) ;TP ELISA检测没有出现假阳性和假阴性。TP ELISA的灵敏性及特异性均显著高于TRUST(P <0 0 5 ) ,且结果与TPPA完全一致。[结论 ]TP ELISA方法优于TRUST ,建议临床检测梅毒螺旋体感染用TP ELISA代替TRUST。     

邮寄干血棉球标本检测抗-HIV的研究

目的:研究以邮寄干血棉球标本代替专人运送血清标本用于ELISA法检测HIV抗体的可行性.方法:用包括10份HIV抗体S/CO比值1-6在内的124份HIV抗体阳性血清、162份阴性血清标本进行实验,每份血清分为两部分,一部分血清置-20℃;另一部分血清制成干血棉球置37±1℃贮存6周,然后,用血清标本和干血棉球标本进行HIV抗体检测方法比较.血清标本按HIV抗体ELISA试剂盒说明书方法检测;干血棉球标本按试剂盒说明书改进方法检测.结果:干血棉球与血清标本HIV抗体检测结果无显著性差异(P>0.05),二者符合率为99.7%.10份S/CO比值1-6的HIV抗体弱阳性血清标本,其干血棉球标本检测结果亦均为阳性,未出现HIV抗体弱阳性标本漏检现象.结论:实验说明可用邮寄干血棉球标本方式代替专人专车运送血清标本进行HIV抗体的检测.     

探讨ELISA和化学发光法对血清中HIV-1/HIV-2抗体、梅毒抗体和丙肝抗体的检测

目的:比较ELISA法和化学发光法对血清中HIV-1/HIV-2抗体、梅毒抗体和丙肝抗体的检测。方法:用ELISA法与化学发光法对病人血清和标准物质进行以上三种抗体的检测,并对结果进行分析。结果:(1)化学发光法测定值较低的阳性标本,ELISA法测定有可能为阴性。(2)用化学发光法检测病人血清中HIV-1/HIV-2抗体为阴性标本的测定数据有一定程度的波动。(3)同一公司生产的以上三种抗体的标准物质,用ELISA均为阳性,可是用化学发光法仅丙肝抗体检测为阳性,而其它两种均为阴性。结论:基本证实了化学发光法比ELISA法敏感性高。     

HIV抗体阳性血清梯度稀释系列用于实验室质控和试剂评价探讨

目的探讨HIV抗体阳性血清梯度稀释系列用于实验室质控和试剂评价。方法确认阴性血清梯度稀释HIV抗体确认阳性血清,系列的最高稀释度应含HIV抗体确认实验不确定结果,用第三代双抗原夹心法HIV抗体ELISA检测试剂进行检测,寻找稀释度与OD值间的关系,然后应用于实验室质控和试剂评价。结果在一定稀释度范围内-log[稀释度]与OD值呈线性关系。实验系列用于质控,各实验室均正确报出样品的阴阳性结果,但灵敏度(回归曲线斜率/残差标准差)不同,依此对实验室进行排序;同时,没能正确报出检测结果的试剂其确定系数和灵敏度较底。结论HIV抗体阳性血清梯度稀释系列可用于实验室质控和试剂评价。但灵敏度的合适范围还需继续探讨。     

甲型病毒性肝炎的早期诊断:ELISA法检测特异性IgM抗体的研究

本文采用一种ELISA法检测IgM抗-HAV。当在本实验系统中加入2-ME处理的阳性血清或阳性血清结合后再用羊抗人IgM进行阻断试验,结果均可使其OD值下降约78%;甲肝流行点急性期血清IgM抗-HAV检出率高达92.3%(48/52),而恢复期血清仅达17.1%(7/41);11份急性乙肝和33份脐血清检测结果均为阴性;本法与Abbott HAVAB-M试盒检测结果符合率达86%;若以Abbott RIA法为标准,本法的敏感性和特异性分别为91.2%和80%,且重复性良好,操作简便,成太低和无放射性危害等优点。     

应用纯化重组外膜脂蛋白LipL32检测钩端螺旋体病抗体

目的 建立以纯化重组外膜脂蛋白LipL32为基础的钩端螺旋体(钩体)病抗体的检测方法 .方法 以摹因重组技术获取重组钩体外膜脂蛋白LipL32,以该蛋白为抗原,分别使用间接法和夹心法ELISA应用于不同人和鼠血清的检测,检测结果 与钩体显微镜凝集试验(MAT)进行比较,同时人血清的检测结果 还与进口试剂盒比较.结果 纯化的重组蛋白检测9例钩体确诊病例双份血清标本,三种ELISA法的检出率与MAT无明显差别.检测45份MAT阳性标本,间接法ELISA敏感性为71.11%(32/45),夹心法ELISA为80.00%(36/45),而进口 ELISA阳性13份,占28.89%(13/45),25份可疑占55.56%(25/45).特异性检测,MAT阴性血清69份,间接和夹心法ELISA特异度均为97.10%(67/69),其中检测门诊体检血清43份,间接和夹心法ELISA均为阴性,进口ELISA检测14份,也为阴性.检测非钩体发热病例血清标本16份,间接和夹心法ELISA共检出2份阳性,进口ELISA则是1份阳性,12份可疑.检测梅毒螺旋体质控阳性血清10份,四种方法 均为阴性.重组蛋白检测鼠血清标本274份,夹心法ELISA的敏感性为86.75%(131/151),特异性为99.19%(122/123),符合率为92.34%(253/274),与MAT检测结果 相符.结论 重组LipL32蛋白具有结合活性,可应用于钩体血清抗体的检测,其中夹心法ELISA对鼠血清钩体抗体的检测显示较好的敏感性和特异性,适用于钩体病现场血清流行病学大样本调查.