梗阻性黄疸围手术期肾髓质水通道蛋白2表达变化的实验研究

目的探讨大鼠胆道梗阻解除后肾髓质集合管上皮细胞形态学改变及水通道蛋白2(AQP2)表达的变化。方法30只大鼠按随机表法随机分为假手术组(n=10)和梗阻性黄疸组(n=20)。梗阻性黄疸组大鼠全麻后建立梗阻性黄疸模型;假手术组大鼠行假手术。7d后再次全麻解除胆道梗阻,而假手术组再次行假手术。各组动物分别于解除梗阻后立即或24h处死取材。将静脉血离心后血清冻存备检肝、肾功能;部分肾脏标本分离后冻存,Western blot法半定量检测AQP2表达;部分肾脏固定后作光镜观察。结果各组动物均顺利完成实验,无实验动物死亡。梗阻性黄疸组大鼠取材时见腹腔较多金黄色腹水。解除梗阻后24h大鼠血清胆红素水平下降〔(45.95±8.39)μmol/L〕,P<0.01,血肌酐及尿素氮未见明显改变。梗阻性黄疸组肾髓质AQP2表达(15665.30±1181.85)较假手术组(21966.20±1544.70)明显下降(P<0.01),解除梗阻后梗阻性黄疸组肾髓质AQP2表达增强(19490.80±4239.32),P<0.01。结论胆道梗阻会造成肾髓质集合管上皮细胞结构损伤,同时下调AQP2表达。     

胆道梗阻解除术后肾水通道蛋白2表达变化的实验研究

目的明确水通道蛋白2（aquaporin 2 protein,AQP2）在梗阻性黄疸梗阻解除术后大鼠肾脏的表达情况。方法采用蛋白质印迹（western blotting）法及RT-PCR方法检测在梗阻性黄疸梗阻解除后不同时间的大鼠肾脏AQP2及其mRNA的水平。结果AQP2蛋白水平在0h,24h,72h随时间推移逐渐降低,1周时明显高于解除梗阻0h的水平．但所有实验组均较正常对照组（假手术组）低（P〈0．05）。而AQP2的mRNA水平在梗阻性黄疸梗阻解除后0h．24h,72h随时间推移逐渐性升高,1周时回落,但比0h水平还要高,然而所有实验组均较正常对照组（假手术组）高（P〈0．05）。结论梗阻性黄疸梗阻解除术后肾功能在早期受损逐渐加重,AQP2蛋白水平下调．而AQP2基因水平上调。1周时这些结果仍未恢复正常。AQP2在梗阻性黄疸梗阻解除术后肾功能的变化上可能起到了重要的作用。     

梗阻性黄疸围手术期肾水通道蛋白3表达变化的实验研究

梗阻性黄疽是胆道外科常见疾病，临床上约8％的患者在围手术期出现急性肾功能不全，1991年Peter Agre发现水通道蛋白之后，利用其特点在分子水平研究肾损伤。aqp3是肾脏集合管自由水代谢调节的主要蛋白质．梗阻性黄疸。肾集合管损伤的研究对于指导临床早期治疗具有重要意义，目前国内外尚未见该方面的相关报道。本文旨在探讨解除胆道梗阻时大鼠肾aqp3蛋白表达的变化。[第一段]     

黄芪对梗阻性黄疸大鼠肾功能的保护作用

目的:探讨黄芪对梗阻性黄疸大鼠肾功能的保护作用及机理.方法:SD大鼠胆总管结扎后分2组,每组20只,术后分别用3 mL黄芪或生理盐水腹腔注射.假手术组20只.术后10 d、20 d(每小组n=10)心脏取血测定血浆内皮素(ET-1)、血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量,同时测定血清肌酐(Cr)尿素氮(BUN)和直接胆红素(DB),对肾脏行病理形态学观察.结果:血浆ET-1、血清MDA浓度在梗阻10 d即升高且随胆道梗阻时间延长进一步升高,SOD在梗阻10 d即下降,同时伴有血清Cr、BUN、DB的升高和肾脏病理形态学的进行性改变.黄芪治疗组ET-1及MDA显著低于对照组,而SOD显著高于对照组,并能改善肾组织病理形态.结论:大鼠梗阻性黄疸时血浆ET-1升高及氧自由基损害是肾损伤的原因,黄芪通过降低ET-1水平、抗氧化作用对梗阻性黄疸大鼠肾脏起保护作用.     

解偶联蛋白-2、PPARγ在梗阻性黄疸及胆道再通大鼠肝脏氧化损伤中的作用

目的 研究解偶联蛋白-2(UCP-2)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在梗阻性黄疸及胆道再通大鼠肝脏中的表达与肝功能及超微结构改变的关系.方法 将30只雄性Wistar大鼠随机分为3组:假手术组(A组)、梗阻性黄疸1周组(B组)、梗阻性黄疸1周胆道再通1周组(C组),检测各组大鼠血清中直接胆红素(DBIL)、总胆红素(TBIL)和丙氨酸转氨酶(ALT)水平.免疫组织化学法检测UCP-2、PPARγ蛋白在肝脏中的表达.结果 血清DBIL、TBIL、ALT水平:B组明显高于A组,C组明显低于B组.PPARγ的表达:B组明显低于A组,C组较B组明显增强;UCP-2的表达:B组明显强于A组,C组较B组明显减弱.在电镜下可见B组超微结构改变较A组显著,C组超微结构改变较B组明显减轻.结论 梗阻性黄疸氧化损伤,造成肝功能及超微结构的改变,解除梗阻有利于肝功能及超微结构的恢复.PPARγ可能参与梗阻性黄疸及胆道再通肝脏的氧化与抗氧化反应,UCP-2可能参与肝脏氧化损伤时氧自由基的清除,减轻肝脏氧化损伤.     

还原型谷胱甘肽对梗阻性黄疸大鼠肾脏线粒体保护作用的研究

目的:探讨氧自由基在梗阻性黄疸引发肾脏损害中的作用以及还原型谷胱甘肽对肾脏线粒体的保护作用.方法:将54只Wistar大鼠随机分为假手术对照组(A组),胆总管结扎组(8组),胆总管结扎+药物治疗组(C组).采用胆总管结扎法建立大鼠梗阻性黄疸模型,C组采用还原型谷胱甘肽每天150mg/kg腹腔注射治疗21 d.3组大鼠分别于术后第7、14、21天处死,每组每次处死6只.检测血清胆红素(BIL)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)以及肾脏线粒体脂质过氧化产物丙二醛(MDA)和线粒体膜胆固醇含量的变化,并观察肾脏病理组织学改变.结果:B组及C组大鼠肾脏线粒体膜胆固醇及MDA含量高于A组(P<0.05),但C组增高的程度低于B组(P<0.05),并且病理改变也较轻.结论:氧自由基所引发的脂质过氧化作用是梗阻性黄疸引起肾脏损害的重要原因之一,应用还原型谷胱甘肽可减少脂质过氧化作用对肾脏的损害作用,对梗阻性黄疸时的肾脏损害具有保护作用.     

葡萄糖-6-磷酸酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶mRNA在梗阻性黄疸及胆道再通大鼠中的表达及意义

目的研究梗阻性黄疸及胆道再通大鼠肝脏葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)mRNA表达的改变及意义,探讨梗阻性黄疸影响糖代谢的分子机制。方法 30只健康雄性大鼠随机分为5组:假手术组(A组)、梗阻性黄疸1周组(B组)、梗阻性黄疸2周组(C组)、梗阻性黄疸1周再通1周组(D组)、梗阻性黄疸2周再通1周组(E组)。检测各组动物血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、直接胆红素(DBIL),总胆红素(TBIL)水平;光镜观察肝脏形态学改变;采用RT-PCR方法检测大鼠肝脏葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)mRNA的表达。结果胆道梗阻后,B、C两组血清TBIL、DBIL、ALT水平较A组明显升高,尤其是C组升高的更明显;光镜下可见B组和C组肝细胞肿胀,炎性细胞浸润,汇管区可见胆管增生,C组较B组除以上改变更加严重外,还可见典型的片状肝细胞坏死;B、C两组肝组织G-6-P、PEPCK的mRNA表达显著升高。相比,D、E两组血清TBIL、DBIL、ALT水平均分别低于B、C两组,肝脏形态改变也明显趋于正常,肝组织G-6-P、PEPCK的mRNA表达亦均低于B、C两组,且D组在血清、肝组织mRNA表达及光镜下肝细胞损伤方面与E组比较均降低。结论梗阻性黄疸模型形成后,大鼠肝脏分泌的胆汁排泄不畅形成淤积。肝脏中G-6-P、PEPCK mRNA表达开始增强且随梗阻时间延长其表达增强趋势更加明显,加强了糖异生的过程,可导致血糖浓度的升高。梗阻解除后,受损肝脏形态及肝功能开始恢复,肝脏G-6-P、PEPCKmRNA表达开始降低,及早解除梗阻,恢复越快。提示肝组织G-6-P、PEPCK的mRNA表达升高可能是梗阻性黄疸时糖代谢紊乱的主要原因之一。     

胆汁对肠黏膜中肠碱性磷酸酶表达的影响

目的:探讨肠道缺失胆道胆汁后肠碱性磷酸酶(IAP)在肠黏膜中的表达变化及胆汁对肠上皮Caco-2细胞模型中IAP表达的影响。方法:将30只健康雄性SD大鼠按随机数表法分为3组：对照组( n＝10),假手术组;梗阻性黄疸组( n＝10),结扎造成胆道梗阻;胆汁外引流组( n＝10),造...     

梗阻性黄疸大鼠肾细胞凋亡及bcl-2表达的作用

目的探讨梗阻性黄疸引起肾损伤过程中细胞凋亡的意义。方法32只雄性SD大鼠随机均分为2组，假手术组（SO组）只暴露腹腔但不结扎胆管，胆总管结扎组（BDL组）以双重结扎胆管中间离断方法制成梗阻性黄疸大鼠模型。于术后行光镜下肾脏病理学检查，琼脂糖凝胶电泳检测肾细胞DNA的断裂形式，测定血清中D-Bil、TBA、GOT、GPT、Cr和BUN的含量，检测尿β2-微球蛋白，流式细胞术检测肾脏细胞凋亡率，免疫组化法检测肾组织凋亡抑制基因bcl-2蛋白的表达。结果BDL组大鼠肾脏细胞凋亡率明显高于SO组（P〈0．05），出现细胞凋亡特征性DNA梯状带；其肾脏细胞bcl-2蛋白的表达阳性细胞率明显高于SO组（P〈0．01），并于术后7d达高峰，14d时bcl-2表达阳性细胞率开始下降。结论梗阻性黄疸大鼠肾功能损害过程中存在肾脏细胞凋亡，梗阻性黄疸可反馈性启动肾小管上皮细胞凋亡抑制基因bcl-2的表达。     

贝前列腺素钠对梗阻性肾病再通大鼠的疗效及机制研究

目的:研究贝前列腺素钠对梗阻性肾病再通大鼠的保护作用及机制。方法:通过单侧输尿管结扎手术建立梗阻性肾病大鼠模型,将大鼠分为假手术组、模型组和贝前列腺素钠治疗组三组,术后第15天处死大鼠,收集血清检测肌酐、尿素氮、血钠和血钾的水平,苏木精-伊红(HE)染色评价肾组织损伤程度,Western blot检测大鼠肾组织肾损伤分子1(KIM-1)、缺氧诱导因子α(HIF-α)和转化生长因子β(TGF-β)蛋白表达水平。结果:模型组大鼠血清肌酐、尿素氮和血钾的含量显著高于假手术组,血钠的含量显著低于假手术组(P0.05)。贝前列腺素钠治疗组大鼠血清肌酐、尿素氮和血钾的含量显著低于模型组,血钠的含量显著高于模型组(P0.05)。HE染色结果显示,与模型组比较,贝前列腺素钠治疗组的肾组织损伤程度显著降低。Western blot检测结果显示,与模型组比较,贝前列腺素钠治疗组的肾组织KIM-1、HIF-α和TGF-β蛋白表达水平显著降低。结论:贝前列腺素钠能够改善梗阻性肾病梗阻解除后的肾损伤,抑制肾脏中TGF-β、HIF-α和KIM-1的表达。