大黄素联合顺铂对食管癌EC-9706细胞增殖的影响

目的 研究大黄素联合顺铂对人食管癌EC9706细胞增殖与凋亡的影响.方法 大黄素、顺铂与两药联合分别作用于EC9706细胞12、24、48 h,MTT法测细胞抑制率,流式细胞术测细胞凋亡和细胞内活性氧含量,并分别与单药比较,计算两药相互作用系数(CDI),检验其协同作用.结果 大黄素、顺铂单独作用12、24、48 h后增殖率分别为(58.35±5.03)%、(45.18±1.33)%、(40.24±9.71)%和(72.06±2.92)%、(56.60±6.41)%、(23.06±4.52)%,两药联合为(47.35±5.78)%、(37.29±4.85)%和(15.45±1.46)%,与单药比较差异有统计学意义(P＜0.05);两药联合CDI值为0.94±0.03、0.91±0.04和0.90±0.03;两药联合作用2 h后,细胞内活性氧显著升高.结论 大黄素能抑制EC9706细胞增殖,促进凋亡,与顺铂联用能增强其促凋亡作用,两药存在协同作用.     

顺铂诱导人食管癌Eca—109细胞凋亡的观察

在体外采用光镜、电昏头昏脑主ＤＮＡ断片检测方法对顺铂作用于人食管癌Ｅｃａ－１０９细胞后的形态学及生化改变进行了观察。药物作用后细胞皱缩变小，呈圆形、细胞核固缩、破裂或消失、胞浆红染，有的细胞似出芽状，可见到凋亡小体被吞噬的现象。顺铂低浓度时凋亡现象不明显，５ｍｇ／Ｌ以上时作用明显。药物作用２４小时经ＤＡ琼脂糖凝胶电泳，可见到呈梯状的条带。结果提示，顺铂可经起Ｅｃａ－１０９细胞凋亡，ＤＮＡ降蟹 细胞     

活性氧在顺铂致HepG2凋亡中的作用

目的利用Acivicin阻断GGT的功能,观察其单独对HepG2凋亡及联用顺铂后对HepG2的凋亡、细胞内ROS产生的影响.方法细胞毒性测定采用MTT法.Acivicin和顺铂分别或联合处理HepG2细胞.采用DCFH-DA能被ROS作用发光的特性.通过流式细胞仪测定细胞内ROS的变化.凋亡检测采用细胞凋亡原位检测法(TUNEL法).结果MTT法测定HepG2I IC50值Acivicin为1.4 mmol/L,顺铂为67μmol/L.Acivicin 1.4 mmol/L和顺铂67μmol/L以及Acivicin(1.4mmol/L) 顺铂(67μmol/L)HepG2 24h细胞内的ROS显著升高,尤其是在当与顺铂联用时HepG2细胞内的ROS升高就更加明显.TUNEL法测定Acivicin(1.4 mmol/L)在24、48、72 h致HepG2的凋亡率分别分(16.3±3.5)%、(27.9±4.3)%、(47.2±3.0)%.与对照组相比差异显著(P＜0.05).顺铂(67μmol/L)HepG2 24h的凋亡率为(73.4±1.5)%,Acivicin(1.4 mmol/L) 顺铂(67 μmol/L)HepG2 24h的凋亡率为(94.7±0.5)%,较单用显著增加(P＜0.01.结论顺铂致HepG2凋亡的机制之一是增加细胞内ROS的产生.Acivicin抑制GGT,干扰GSH代谢,可致HepG2细胞内的ROS升高,使细胞凋亡,并增强顺铂的细胞毒性.     

顺铂通过活性氧协同抗hDR5抗体诱导食管癌细胞凋亡

目的：探讨顺铂与抗死亡受体5（DR5）激动性抗体mDRA-6联合应用对食管癌细胞系EC9706细胞凋亡的影响及作用机制.方法：顺铂、抗体mDRA-6单独或联合作用于食管癌细胞,用流式细胞术检测药物的细胞毒作用、食管癌细胞表面DR5表达、细胞凋亡、细胞内活性氧水平、以及线粒体膜电位的变化;在荧光显微镜下观察细胞凋亡的形态学变化及DR5表达.结果：顺铂和抗体mDRA-6对食管癌细胞均具有细胞毒作用,并具有剂量依赖性,而且顺铂明显提高食管癌细胞对抗体mDRA-6细胞毒的敏感性.顺铂、抗体mDRA-6单独或联合应用均导致食管癌细胞呈现典型细胞凋亡特征.流式细胞术分析结果显示,mDRA-6和顺铂均诱导食管癌细胞凋亡,而且顺铂明显提高细胞对mDRA-6诱导细胞凋亡的敏感性;顺铂增强食管癌细胞表面及胞内的DR5表达,提高细胞内活性氧水平,降低线粒体膜电位.结论：顺铂主要通过活性氧激活细胞内线粒体细胞凋亡信号传导途径以及增强DR5表达,与抗体mDRA-6联合协同诱导食管癌细胞凋亡.研究结果对进一步探讨抗DR5激动性抗体及TRAIL的抗肿瘤临床应用有一定的指导意义.     

顺铂诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡的观察

在体外采用光镜、电镜及ＤＮＡ断片检测方法对顺铂作用于人食管癌Ｅｃａ１０９细胞后的形态学及生化改变进行了观察。药物作用后细胞皱缩变小，呈圆形，细胞核固缩、破裂或消失，胞浆红染，有的细胞似出芽状，可见到凋亡小体及凋亡小体被吞噬的现象。顺铂低浓度时凋亡现象不明显，５ｍｇ／Ｌ以上时作用明显。药物作用２４ｈ时经ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳，可见到呈梯状的条带。结果提示：顺铂可引起Ｅｃａ１０９细胞凋亡，ＤＮＡ降解是细胞凋亡过程中的重要变化之一。     

TRAIL联合低剂量顺铂诱导前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的观察低剂量顺铂对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导细胞凋亡的增敏作用.方法人前列腺癌细胞株LNCaP经过TRAIL(100ng/ml)、低剂量顺铂(0.2～1.0 mg/ml)以及联合用药处理24h后,观察其生存率以及相关蛋白的动态变化.结果 LNCaP细胞株单独经过TRAIL或低剂量顺铂处理后并不能降低其存活率,但联合用药后细胞生存率大大降低.经1.0 mg/ml顺铂处理后的LNCaP细胞株,其凋亡抑制蛋白BCL-2的表达随时间延长而明显下降.结论低剂量顺铂可以增强TRAIL对前列腺癌细胞的杀伤效应,效果优于两种药物的单独使用;凋亡抑制蛋白BCL-2可能是肿瘤细胞抵抗TRAIL诱导凋亡机制中的一个重要因素.     

TRAIL联合低剂量顺铂诱导前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的观察低剂量顺铂对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导细胞凋亡的增敏作用.方法人前列腺癌细胞株LNCaP经过TRAIL(100ng/ml)、低剂量顺铂(0.2～1.0 mg/ml)以及联合用药处理24h后,观察其生存率以及相关蛋白的动态变化.结果 LNCaP细胞株单独经过TRAIL或低剂量顺铂处理后并不能降低其存活率,但联合用药后细胞生存率大大降低.经1.0 mg/ml顺铂处理后的LNCaP细胞株,其凋亡抑制蛋白BCL-2的表达随时间延长而明显下降.结论低剂量顺铂可以增强TRAIL对前列腺癌细胞的杀伤效应,效果优于两种药物的单独使用;凋亡抑制蛋白BCL-2可能是肿瘤细胞抵抗TRAIL诱导凋亡机制中的一个重要因素.     

大黄素抑制食管癌EC-109细胞增殖的机制探讨

目的：探讨大黄素对人食管癌细胞株EC-109增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法：不同浓度（0．0,2．5、5．0、10．0、20．0μg/mL）大黄索作用食管癌细胞EC-109,应用噻唑蓝比色法检测大黄素对食管癌细胞增殖的影响;用Annexin V-FTTC碘化丙啶双染流式细胞术检测细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞内活性氧变化情况。结果：不同浓度大黄素可明显抑制EC．109细胞增殖,并且呈浓度-时间依赖性;在作用EC-109细胞2h后,细胞内活性氧明显增加;12h后可见细胞凋亡率分别为8．1％、15．6％、24．0％、36．5％。结论：大黄素能明显抑制EC-109细胞的增殖,通过诱导细胞内活性氧的产生引起食管癌细胞EC-109凋亡。     

雷帕霉素在顺铂诱导HeLa细胞凋亡中的协同作用

目的评价雷帕霉素联合顺铂对宫颈癌HeLa细胞的协同作用。方法HeLa细胞经雷帕霉素和（或）顺铂处理后,以MTT法检测细胞的增殖情况。以流式细胞仪检测细胞凋亡。Westernblot检测p-4E-BP1和p-S6K1的表达情况。结果雷帕霉素联合顺铂抑制HeLa细胞的增殖,且随时间延长抑制作用越显著,与单独用药组相比差异有显著性。雷帕霉素可增强顺铂诱导的HeLa细胞凋亡。经雷帕霉素作用后的HeLa细胞表达p-4E-BP1和p-S6K1较对照组下降,两者联用明显下降。结论雷帕霉素和顺铂联用在抑制HeLa细胞增殖并诱导其凋亡上具有协同作用。这预示着雷帕霉素和顺铂联用可能是一种合理的靶向治疗宫颈癌的方法。     

褪黑素联合顺铂对人食管癌Eca109细胞株的增殖抑制作用研究

目的：观察褪黑素（Mel）联合顺铂（DDP）对人食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响.方法：以DDP 2.5 mg/L、不同浓度Mel及两药联合作用于食管癌Eca109细胞.通过MTT实验检测用药后对食管癌Eca109细胞增殖的影响,并计算抑制率;通过集落克隆形成实验观察用药后对细胞集落克隆形成的影响;通过流式细胞仪检测用药后细胞凋亡率的变化.结果：DDP 2.5 mg/L与不同浓度Mel联合用药组对食管癌Eca109细胞生长抑制率均明显高于单独使用DDP或Mel组（P＜0.01）;10-5 mol/L Mel诱导人食管癌Eca109细胞的24 h凋亡率为7.8%,10-5 mol/L Mel与2.5 mg/L DDP联合刺激人食管癌Eca109细胞的24 h凋亡率为32.0%,高于DDP本身诱导的24 h凋亡率9.7%（P＜0.01）.结论：Mel可增强DDP对人食管癌Eca109细胞增殖的抑制作用,并增强其诱导凋亡作用,为临床食管癌的治疗提供了一定的实验研究基础.     

长波紫外线致人皮肤成纤维细胞凋亡和活性氧生成的作用

目的 :分析长波紫外线照射诱发人皮肤成纤维细胞凋亡及活性氧生成的作用。方法 :用长波紫外线照射培养的人皮肤成纤维细胞 ,经流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞凋亡情况 ,荧光分光光度计检测活性氧 ,电子自旋共振波谱仪检测自由基。结果 :110～ 12 0kJ·m-2 的UVA照射能够诱导明显的细胞凋亡 ,甘露醇能够拮抗这种作用 ,照射样品中发现活性氧生成增加 ,并检测到了羟自由基信号。结论 :低辐照度UVA(0 .6mW·cm-2 )照射能够诱发人皮肤成纤维细胞凋亡 ,氧化损伤可能在其中发挥着一定作用。     

褪黑素对氧自由基诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的：探讨氧自由基在阿尔茨海默病(Alzheimer Disease，AD)发生中的作用及可能机制，评价褪黑素(Melatonin，MT)的临床应用价值。方法：采用超氧自由基产生系统黄嘌呤／黄嘌呤氧化酶系统(X／XO)作用于PC12细胞，以褪黑素拮抗其作用，观察细胞的形态学变化；MTT法检测细胞存活率，DNA电泳和流式细胞术分析细胞凋亡情况，RT-PCR技术测定凋亡相关基因bcl-2、bax的表达。结果：X/XO作用后，PC12细胞出现凋亡特征性改变，凋亡率增加，电泳呈现DNA ladders，凋亡相关基因bax上调：而10^-5M褪黑素即能改善凋亡情况。结论：氧自由基可诱导神经元凋亡从而促进AD发生，其机制与促凋亡相关基因Bax表达增高有关；褪黑素可减缓神经元凋亡，可用于临床预防与治疗。     

大黄素提升人肝癌细胞活性氧对氟尿嘧啶促凋亡作用的影响

目的：观察大黄素提升人肝癌细胞HepG2活性氧（ROS）水平对氟尿嘧啶（5-FU）促凋亡作用的影响.方法：大黄素以不同方式作用于HepG2细胞,以流式细胞仪（FCM）检测细胞内ROS的动态变化.不同浓度大黄素单用或与5-FU联合作用于HepG2细胞,以MTT检测细胞活力;FCM检测细胞凋亡率及周期分布;透射电镜观察细胞超微结构改变.结果：大黄素剂量和时间依赖性地提升HepG2细胞的ROS水平,2～4h达到高峰.大黄素与5-FU联用,时间及剂量依赖性地增强5-FU对HepG2细胞的促凋亡作用.结论：应用大黄素提升人肝癌细胞HepG2的ROS水平可能是提高化疗药物抗肿瘤疗效的一种手段.     

活性氧生成在8-硝基白杨素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的作用

目的研究活性氧生成在8-硝基白杨素(NOC)诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的作用。方法体外培养SGC-7901细胞,采用流式细胞术分析细胞凋亡率,ELISA法检测细胞组蛋白/DNA碎片,H2DCFH-DA探针流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)生成。结果 NOC诱导亚G1峰(Sub-G1)细胞百分率增高和细胞组蛋白/DNA碎片增加(P<0.01),促进SGC-7901细胞活性氧生成(P<0.01)。抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)能有效对抗NOC诱导SGC-7901细胞凋亡作用。结论 NOC诱导SGC-7901细胞凋亡作用与促进活性氧生成相关。     

活性氧在梗阻性黄疸大鼠肝细胞凋亡中的作用研究

目的 探讨活性氧在梗阻性黄疸大鼠肝细胞凋亡中的作用.方法 测定利用体外原代培养的大鼠肝细胞和大鼠梗阻性黄疸模型中还原型谷胱甘肽、活性氧、谷胱甘肽过氧化物酶活性、活性氧以及肝细胞凋亡指数等指标变化,并行统计学分析.结果 体外实验中肝细胞与终浓度为甘氨鹅脱氧胆酸钠(GCDC)后培养2h和4h后细胞凋亡率达(43.50±7.09)%和(53.38±5.24)%,其内源性还原型谷胱甘肽消耗呈时间依赖性.梗阻性黄疸模型建立后,随着胆盐水平升高,单纯梗阻性黄疸组大鼠肝组织丙二醛水平上升,还原型谷胱甘肽、谷胱甘肽过氧化物酶活性进行性下降.Tunel染色发现大鼠肝组织细胞出现凋亡,并随时间延长而增多.亚硒酸钠治疗组上述指标变化趋势与单纯梗阻性黄疸组相似,但其各时间点丙二醛水平和凋亡率显著低于单纯梗阻性黄疸组,而还原型谷胱甘肽水平和谷胱甘肽过氧化物酶活性则明显高于后者.结论 ROS在肝脏功能损害中起着重要的作用.亚硒酸钠是一种颇有应用潜能的肝细胞凋亡拮抗剂.     

三羟基异黄酮诱导食管癌EC-109细胞凋亡的研究

目的探讨三羟基异黄酮诱导食管癌EC-109细胞发生凋亡的可能性,揭示该凋亡发生与bcl-2和bax之间的关系。方法采用MTT比色法测定三羟基异黄酮对EC-109细胞的生长抑制率;以透射电镜和TUNEL染色法研究三羟基异黄酮与EC-109细胞凋亡的关系;通过免疫组织化学法和RT-PCR法检测bcl-2和bax的表达。结果三羟基异黄酮对EC-109细胞有明显抑制作用,随浓度增加和培养时间的延长而增强;三羟基异黄酮诱导EC-109细胞出现凋亡细胞形态;TUNEL染色法可见,经三羟基异黄酮处理24、48、72、96h后,EC-109细胞凋亡数随时间明显增加。免疫组织化学发现经处理24、48、72、96h后,EC-109细胞的bcl-2蛋白阳性率减少,bax蛋白阳性率增加。RT-PCR也发现经处理24、48、72、96h后,EC-109细胞的bcl-2mRNA条带密度降低,bax mRNA条带密度加强。结论三羟基异黄酮可能通过下调bcl-2的表达和上调bax的表达而诱导食管癌EC-109细胞发生凋亡。     

西多福韦对HPV18阳性人宫颈癌HeLa细胞的凋亡作用及机制研究

【摘要】 目的 以抗肿瘤药物顺铂（Cisplatin,DDP）为阳性对照,研究抗病毒药物西多福韦（Cidofovir,CDV）对宫颈癌HPV18阳性HeLa细胞的凋亡现象和凋亡机制,探讨CDV在预防人乳头瘤病毒(HPV)感染和治疗宫颈癌方面的潜力和应用价值。方法 利用流式细胞仪观察DAPI单染后HeLa细胞中凋亡细胞的形态及数目;利用Western blotting技术分析HeLa细胞中E6、p53蛋白相对表达情况;利用免疫荧光技术研究HeLa细胞中p53蛋白的亚细胞定位情况。结果 流式细胞检测显示CDV和DDP能明显抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖,使细胞周期阻滞在S期并引发细胞凋亡;Western Blotting结果显示CDV和DDP抑制HeLa细胞中E6蛋白表达,激活p53蛋白表达;细胞免疫荧光结果显示CDV和DDP可以抑制E6对p53的核输出。结论 CDV和DDP可抑制HeLa细胞增殖,呈浓度和时间依赖性;降低E6蛋白表达,恢复p53蛋白活性,进而调控细胞周期阻滞和细胞凋亡,因而CDV有可能成为宫颈癌治疗的新策略。     

姜黄素对食管癌EC-9706细胞增殖的影响

目的观察姜黄素对人食管癌EC-9706细胞增殖的影响并探讨其分子机制。方法应用50～200txmol／L姜黄素处理食管癌EC-9706细胞株12—48h后,应用四甲基偶氮唑蓝（MTF）法检测细胞增殖抑制率、逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测热休克蛋白70（Hsrv0）mRNA的表达。结果经姜黄素干预后,人食管癌EC一9706细胞生长减慢,MTT法检测结果显示增殖抑制率达18．3％～77．5％（P〈0．05）,呈良好的时间一剂量效应关系,HSP70mRNA的表达下调。结论姜黄素能够有效抑制人食管癌细胞EC-9706的增殖．其机制可能与抑制HSP70mRNA的表达有关。     

顺铂联合多西他赛对食管癌术后转移患者血清转移相关因子及肿瘤标志物的影响观察

目的:观察顺铂联合多西他赛治疗食管癌术后转移患者的疗效,对患者血清转移相关因子及肿瘤标志物的影响。方法:将本院收治的食管癌术后转移肿瘤患者随机分成两组,对照组采用顺铂治疗,观察组采用顺铂联合多西他赛治疗,化疗前及化疗3个月后对两组患者的血清转移相关因子及血清肿瘤标志物进行测量,比较组间差异;治疗3个月后统计两种化疗方案的不良反应发生率差异。结果:治疗3个月后,观察组血清转移相关因子NO、NOS、TNF-α、IL-6、IL-8均显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组血清肿瘤标志物CEA、CA199、CA724、CA125、CY211、SCC亦显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组间不良反应发生率,差异有统计学意义(P>0.05)。结论:顺铂联合多西他赛治疗食管癌术后转移患者疗效优于顺铂单用。     

生长抑制因子诱导膀胱肿瘤细胞凋亡的研究

目的探讨生长抑制因子(PML)诱导膀胱肿瘤细胞凋亡的分子机制。方法应用脂质体Lipofectamine2000分别将重组可诱导表达的真核表达载体PMEP4／PML和对照PMEP4空载体转染到膀胱肿瘤细胞系UM-UC-2中,300μg／ml潮霉素B筛选稳定表达PML的抗性克隆。激光共聚焦检测PML蛋白表达。DNAladder法检测肿瘤细胞凋亡。Western印迹法检测凋亡相关蛋白表达情况。结果经5μmol／L的CdSO4诱导表达后,激光共聚焦显微镜观察发现转染PMEP4／PML组的细胞核内有散在的斑点样的黄绿色荧光亮点,而转染空载体PMEP4组细胞未见特异性的荧光斑点表达。DNA梯度法显示转染PML细胞在诱导PML表达后24h出现梯状凋亡条带。Western印迹法检测凋亡相关蛋白半胱氨蛋白水解酶3、活化PARP上调,而survivin的表达水平下调。结论PML诱导膀胱肿瘤细胞凋亡可能与上调半胱氨蛋白水解酶3、活化PARP蛋白,抑制survivin的表达有关。