Epo多克隆抗体对抗Epo活性的研究

目的:探讨促红细胞生成素(Epo)多克隆抗体是否具有拮抗Epo所致的高原红细胞增多症患者骨髓红系增殖活性的功能。方法:抽取高原红细胞增多症病人骨髓,分离单个核细胞,进行红系定向体外培养,观察加入Epo及Epo多克隆抗体对红系集落形成单位(CFU-E)的影响。结果:Epo多克隆抗体体外能抑制高原红细胞增多症病人骨髓红系增殖。结论:Epo抗体可以显著拮抗Epo促红细胞增生作用。     

EPO多克隆抗体抑制EPO促CFU-E形成研究

目的:探讨EPO多克隆抗体是否具有对抗EPO促红系形成的功能。方法:对大鼠骨髓进行定向体外红系集落形成单位(CFU-E)培养,观察CFU-E数量,判定EPO多克隆抗体对红系增殖活性的影响。结果:与常规培养组比较,EPO多克隆抗体培养组CFU-E明显减少,P<0.01,差别有非常显著性。结论:EPO抗体可抑制EPO促红系形成,其可作为治疗高原红细胞增多症病人的药物进一步研究。     

EPO单克隆抗体抑制CFU-E研究

目的 探讨EPO单克隆抗体是否具有抑制红系集落形成单位（CFU-E）形成的功能.方法 对大鼠骨髓进行定向体外CFU-E培养,按以下条件进行分组培养：空白对照组（不加EPO）、常规组（加EPO,不加EPO单克隆抗体）、EPO单克隆抗体干预组（EPO＋EPO单克隆抗体）.培养168 h后,观察各组CFU-E数量.结果 空白对照组、常规组、EPO单克隆抗体干预组的CFU-E集数落分别为0.0±0.0、151.8±23.3和10.7±3.9.EPO单克隆抗体干预组与常规组比较,CFU-E集落数存在非常显著性差异（P＜0.01）.结论 该EPO单克隆抗体可明显抑制CFU-E形成,即抑制红细胞系的增殖,是治疗高原红细胞增多症的可能药物.     

高原红细胞增多症骨髓红系祖细胞凋亡异常的研究

目的：了解高原红细胞增多症(HAPC)骨髓红系祖细胞在细胞凋亡方面是否存在异常；方法：应用造血干细胞体外培养技术对红系祖细胞进行动态观察，培养72小时以后细胞染色观察细胞形态，应用凋亡细胞检测盒了解细胞凋亡发生率；结果：高原红细胞组与正常对照组均发生细胞凋亡，但发生率程度不一，高原红细胞凋亡少于正常对照(P＜0．05)；结论：高原红细胞增多症红系祖细胞存在凋亡异常，需进一步研究是否存在基因表达异常。     

胰蛋白酶酶切EPO之多肽片段抑制EPO促CFU-E形成的研究

目的:观察胰蛋白酶酶切EPO之多肽片段能否抑制EPO促红系形成。方法:对大鼠骨髓进行红系定向体外培养,加入胰蛋白酶酶切EPO之多肽片段干预,观察红系集落形成单位(CFU-E)之数量,判定胰蛋白酶酶切EPO之多肽片段对红系增殖活性的影响。结果:胰蛋白酶酶切EPO之多肽片段加入干预培养后,CFU-E数量明显减少(P<0.01)。结论:胰蛋白酶酶切EPO之多肽产物体外能对抗EPO,抑制红系增殖。其可作为治疗高原红细胞增多症的可能药物进一步研究。     

高原红细胞增多症骨髓红系祖细胞体外培养的研究

目的：了解高原红细胞增多症（ＨＡＰＣ）骨髓红系组细胞增殖状况。方法：ＨＡＰＣ患者２５例，正常对照２２例身体健康者，应用造血祖细胞体外培养技术了解骨髓红系祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ，ＣＦＵ－Ｅ）增殖能力，ＢＦＵ－Ｅ及ＣＦＵ－Ｅ对红细胞生成素（Ｅｐｏ）的反应能力，结果：ＨＡＰＣ患者骨髓ＢＦＵ－Ｅ，ＣＦＵ－Ｅ集落数分别高于正常对照。Ｅｐｏ对ＨＡＰＣ患者骨髓ＢＦＵ－Ｅ集落数差异显著（Ｐ〈０．０１）。结论：ＨＡＰＣ     

高原红细胞增多症骨髓红系祖细胞体外培养的研究

目的 了解高原红细胞增多症(HAPC)骨髓红系组细胞增殖状况。方法 HAPC患者25例,正常对照22例身体健康者,应用造血祖细胞体外培养技术了解骨髓红系祖细胞(BFU-E,CFU-E)增殖能力,BFU-E及CFU-E对红细胞生成素(Epo)的反应能力。结果 HAPC患者骨髓BFU-E,CFU-E集落数分别高于正常对照。Epo对HAPC患者骨髓BFU-E,CFU-E刺激明显,与正常对照组比较BFU-E集落数差异显著(P<0.05);CFU-E集落数差异显著(P<0.01)。结论 HAPC骨髓红系祖细胞增殖能力增强,对Epo敏感性增高。     

河豚毒素小鼠多克隆抗体的中和毒素效应及其活性-质量关系

目的:制备河豚毒素(TTX)的小鼠多克隆抗体,研究抗体中和TTX的效果,以探讨开发TTX抗素素的可能。方法:以中国鲎血蓝蛋白(TTH)为载体,通过甲醛与TTX化学连接,制成人工抗原(TTXTTH)并免疫BALB/c小鼠;以福氏佐剂诱导腹水抗体。酶联免疫分析方法检测血清和腹水抗体质量;将TTX与抗体在体外共温育而被中和,然后腹腔注射于KM小鼠,作体内攻毒实验,检验抗体的抗毒活性,并计算抗体的免疫当量。结果:经人工抗原免疫并福氏佐剂诱导,获得了20株具有不同亲和力的腹水抗体,与血清抗体具有同质性,其表观亲和力为10-4～10-7M。抗体可在体外和体内、完全或部分地中和毒素的毒性,有效保护中毒动物免于死亡。抗体体外中和毒素,最高可保护1.5×LD的TTX攻击,动物全部活存(1LD=14μg/kp,i.p.);抗体的最高免疫当量达1300μgTTX/L腹水;抗体的抗毒活性与抗体滴度、亲和力和质量因子显著相关(分别为P<0.05,P<0.01,P<0.001)。抗体在体内预防4d时,可保护1.3×LD的TTX攻击动物活存。结论:TTX小鼠腹水多克隆抗体可在体外和体内有效中和毒素,其抗毒活性依赖于抗体质量,提示了免疫防治对抗河豚毒素中毒的希望。研究提出的抗体“质量因子”是评价抗毒素质量的有效参数。     

高原红细胞增多症骨髓红系祖细胞体外培养的研究

目的了解高原红细胞增多症(HAPC)骨髓红系组细胞增殖状况。方法 HAPC患者25例，正常对照22例身体健康者，应用造血祖细胞体外培养技术了解骨髓红系祖细胞(BFU，CFu-E)增殖能力，BFU-E及CFU-E对红细胞生成素(Ep0)的反应能力。结果HAPc惠老骨髓BFU-E，CFUE集落数分别高于正常对照。Ep0对HAPc患者骨髓BFUE，CFu-E刺激明显，与正常对照组比较BFu-E集落数差异显著(P＜0．05)；CFU-E集落数差异显著(P＜0.01)；结论HAPc骨髓红系祖细胞增殖能力增强，对Epo敏感性增高。     

高原红细胞增多症的骨髓组织病理学研究

高原红细胞增多症(High altitude polycythemia,HAPC)是严重危害人类常见的高原病。世居者与移居者均可患病,以男性移居者发病率为多。现已有不少临床资料报道,但病理资料较为少见。本文探讨HAPC的发病机理以及对该病的发生提供形态学依据。     

小鼠抗人Nanog多克隆抗体的制备及其鉴定

目的用基因免疫方法制备小鼠抗人Nanog多克隆抗体并进行鉴定。方法应用Accelrys软件分析Nanog抗原表位,选择其中免疫原性较强的抗原表位（A16-V101）,从Nanog cDNA全长质粒中扩增其cDNA（258bp）序列,克隆到pBQAP-TT构建基因免疫载体,鉴定正确后与辅助载体pCMVi-GMCSF和pCMVi-Fh31。同时免疫小鼠,12周后用ELISA方法检测血清抗体滴度,Western blot方法鉴定抗体对人肾组织的特异性。同时将Nanog-AAV2病毒转染到HKC细胞,免疫荧光定位Nanog在细胞的表达。结果成功构建了Nanog基因免疫载体,经酶切及序列分析鉴定完全正确。ELISA结果显示抗体滴度为1：32000。Western blot结果显示小鼠抗Nanog多克隆抗体识别人肾组织34kD的Nanog蛋白。免疫荧光结果表明转染的Nanog基因主要表达在HKC细胞细胞核。结论用基因免疫的方法可以成功制备高效价和高特异性抗Nanog多克隆抗体。     

重组人促血小板生成素体内生物学活性的研究

目的　探讨重组人血小板生成素 (rhTPO)体内的生物学活性。方法　本研究以Babl/c纯系小鼠为实验对象 ,将其分成实验组及对照组 ,实验前采尾静脉血 ,测小鼠血小板正常值 ;然后连续 7d腹腔注射rhTPO ,并于注射后第 7天及第 14天采眶静脉血 0 .2ml,测定小鼠外周血小板数量 ,同时观察小鼠的死亡情况。结果　在实验第 7天 ,实验组小鼠外周血小板数明显高于同期对照组 (P <0 .0 5 ) ;而且随实验时间的延长 ,实验组血小板数有升高趋势。结论　rhTPO促进小鼠外周血小板的产生 ,增加外周血小板数量。     

人前列腺特异性抗原的原核表达及多克隆抗体制备

目的：建立人前列腺特异性抗原（prostate specific antigen,PSA）的可溶性大肠杆菌表达系统,获得高活性重组人PSA及多克隆抗体,为临床相关疾病的监测、诊断和治疗提供关键材料。方法：构建可溶性表达载体pET-S1-S2-PSA质粒,采用化学法将pET-S1-S2-PSA质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）细胞,IPTG诱导BL21（DE3）细胞表达rPSA,阳离子交换层析纯化rPSA,经Western印迹鉴定后免疫大耳白兔制备PSA抗体,ELISA法检测抗体效价。结果与结论：构建了可溶性表达载体pET-S1-S2-PSA,获得了可溶性高表达rPSA的BL21（DE3）细胞株,并制备了可特异性结合天然PSA的抗体,其效价在1∶20000以上。     

抗人胃癌相关蛋白GCRG224多克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备胃癌相关蛋白GCRG224的多克隆抗体,为进一步深入研究其生物学功能及其在胃癌发生发展中的作用奠定基础.方法 在大肠杆菌中表达Thioredoxin/GCRG224融合蛋白,并以所获蛋白免疫新西兰兔,制备抗GCRG224的多克隆抗体.分别用ELISA、Western blot法鉴定抗体的效价及特异性.结果 在大肠杆菌中高效表达出相对分子量约为16.8kD的Thioredoxin/GCRG224融合蛋白,经凝胶回收法得到纯度近100%的蛋白产品.制备了抗GCRG224多克隆抗体.ELISA法检测抗体的效价达到1∶256 000,Western blot证实该抗体可与原核表达的GCRG224蛋白特异性结合.结论 成功地制备了胃癌相关蛋白GCRG224多克隆抗体.     

骨骼肌细胞葡萄糖运载体多克隆抗体的制备和鉴定──《运动对糖尿病大鼠骨骼肌细胞葡萄糖运载体的影响》研究之一

采用Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ固相合成法制备骨骼肌细胞葡萄糖运载体的羧基端１２肽，以灭活的伤寒杆菌菌壳为载体，用物理吸附方法制备多肽──载体免疫原，对兔子进行免疫后，所得抗血清和抗体经酶联免疫吸附法检测，具有高效价和强特异性。     

肿瘤-睾丸抗原CT45-5的表达纯化及多克隆抗体的制备

目的：原核表达、纯化肿瘤-睾丸抗原CT45-5基因,并制备多克隆抗体,以研究其在Fhit特异的信号通路中的作用。方法：设计出特异针对CT45-5的引物,通过RT-PCR扩增出CT45-5的编码基因,测序正确后插入到含GST基因的原核表达载体pGEX-KG中,以IPTG诱导表达,并经谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白;用纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,经ELISA测定抗体的效价,Western印迹鉴定抗体的特异性。结果：原核表达和纯化了CT45-5,并获得了其多克隆抗体,抗体效价达到1∶12800,Western印迹结果显示,该抗血清能够特异识别原核及真核细胞表达的CT45-5蛋白。结论：肿瘤-睾丸抗原CT45-5能够诱导小鼠产生具有较高效价和特异性的多克隆抗体,为进一步研究CT45-5的功能奠定了基础。     

乙型脑炎病毒NS5蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备

目的表达纯化乙型脑炎病毒非结构蛋白NS5,并制备其多克隆抗体。方法通过PCR法扩增编码NS5蛋白的全长基因,将其克隆到原核表达载体pET28a中,转化大肠杆菌BL21（DE3）进行诱导表达,并通过Ni柱亲和层析纯化重组蛋白。用纯化后的重组蛋白免疫BALB/c鼠制备多克隆抗体。采用间接免疫荧光法检测抗体效价,Western印迹鉴定抗体的特异性。结果与结论成功获得了可溶性表达的NS5蛋白,制备了多克隆抗体,效价为1∶1000,能够特异性识别乙型脑炎病毒感染细胞中表达的NS5蛋白,为进一步研究NS5蛋白的生物学功能奠定了基础。     

肠出血性大肠杆菌O157∶H7毒力蛋白NleB1的表达、纯化及多克隆抗体的制备与鉴定

目的：构建肠出血性大肠杆菌（ EHEC） O157∶H7毒力蛋白nleB1基因的原核表达载体,诱导表达重组蛋白,制备NleB1的抗血清。方法从EHEC O157∶H7 EDL933株的全基因组中PCR扩增出编码nleB1的990个碱基序列,构建原核表达载体pET24a-nleB1,将构建的重组表达载体的质粒pET24a-nleB1转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中,利用异丙硫半乳糖苷（IPTG）诱导融合蛋白His-NleB1表达,并利用镍柱进行亲和层析纯化和切胶纯化,以纯化后的融合蛋白His-NleB1为抗原免疫BALB/c小鼠,获得抗血清。 Western印迹和ELISA法鉴定获得的抗血清。结果成功构建了pET24a-nleB1原核表达载体,纯化得到融合蛋白His-NleB1,进而免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,Western印迹和ELISA法证实多克隆抗体制备成功。结论成功获得了EHEC O157∶H7的毒力蛋白NleB1的多克隆抗体,为研究EHEC O157∶H7毒力蛋白NleB1的功能奠定了基础。     

人肿瘤转移相关基因mag-2的多克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备和鉴定针对人肿瘤转移正相关基因mag-2蛋白产物的特异性多克隆抗体.方法:采用生物软件分析mag-2蛋白序列特性,预测特异性抗原表位,人工合成17肽抗原表位片段,将之与钥孔碱血蓝蛋白(KLH)耦联,采用背部皮下及皮内多点注射法免疫日本大耳白兔,收集分离血清,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)测定其效价, Western印迹试验鉴定其特异性及其在多种肿瘤细胞中的表达.结果:成功免疫日本大耳白兔,ELISA结果表明得到的抗血清与免疫多肽有良好的结合,获得了高效价的多克隆抗体;Western印迹试验结果显示抗血清检测到的条带大小约为55×103,与mag-2理论蛋白产物相对分子质量相符;发现mag-2在多种肿瘤细胞中均有表达.结论:成功制备了mag-2特异性多克隆抗体,为深入研究mag-2基因在肿瘤转移中的作用提供了一个有用的工具.