急性髓系白血病患者白血病干细胞WT1基因表达水平及其临床意义

目的 探讨急性髓系白血病(AML)患者WT1基因高表达是否发生在白血病干细胞(LSC)阶段及其意义.方法 采用流式细胞术分选AML患者CD34~+ CD38~- CD123~+细胞,实时荧光定量RT-PCR方法 检测其总WT1、+17AA、+KTS异构体的表达,计算出WT1(+/+)、wT1(+/-)、WT1(-/+)、WT1(-/-)四种异构体的比例,并与来源于正常人和AML患者骨髓的CD34~+ CD38~- CD123~-干细胞比较;同时分析AML患者LSC WT1表达水平与缓解率、生存期的关系.结果 AML患者骨髓CD34~+CD38~-CD123~+细胞WT1相对表达水平最高(0.034±0.034),AML患者骨髓CD34~+CD38~-CD123~-细胞群表达次之,来源于正常人的骨髓CD34~+ CD38~- CD123~- 细胞表达最低,三组之间比较差异有统计学意义(P<0.05);三群细胞中均以+17AA为主,组间比较差异无统计学意义.+KTS异构体比例在正常干细胞中最高,为0.57±0.04,在AML患者CD34~+ CD38~- CD123~- 细胞群中所占比例最低,为0.50±0.12,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);三种细胞群中四种异构体的表达比例各组之间比较差异无统计学意义(P>0.05),均以WT1(+/+)为主,WT1(-/-)最少.CD34~+ CD38~- CD123~+ LSC中WT1表达水平与患者性别、年龄、FAB分型及骨髓中原始细胞比例无明显相关性,但AML患者WT1高表达组原始细胞群CD34~+ 细胞比例明显高于WT1低表达组(P<0.01).WT1高表达组患者CR率为21.1%,低表达组CR率为59.1%,差异有统计学意义(P<0.05).对41例患者跟踪随访118(3-290)d,WT1 mRNA高表达组中位生存时间77[95%可信区间(CI)45-108]d,较低表达组中位生存时间158(95% CI 100-215)d短,差异有统计学意义(P= 0.041).结论 AML患者WT1高表达发生于LSC阶段,其异构体比例与正常干细胞比较差异无统计学意义.干细胞阶段WT1高表达常导致患者缓解率低、生存期短.     

WT1基因转染增加白血病细胞凋亡的实验研究

为了探讨WT1基因异构体对急性早幼粒细胞性白血病细胞株NB4凋亡的影响及其分子机制,应用电穿孔的方法将携带WT1基因异构体WTA（-17AA/-KTS）全长cDNA的真核表达载体及其对照质粒pCB6^＋转导白血病细胞株NB4,建立WT1基因异构体表达比例改变的单克隆细胞株;用MTT、形态学观察、DNA凝胶电泳、An-nexin V结合力测定等方法观察WT1基因异构体表达比例的转变对白血病细胞NB4诱导凋亡的影响;用RT-PCR方法检测细胞中p21、p53、bcl-2、bcl-XL、和c-myc等凋亡相关基因表达的改变.研究结果表明,MTT显示NB4/WTA细胞对As2O3的IC50值较对照组明显降低;经As2O3作用48小时,NB4/WTA细胞Annexin V结合力较对照组细胞升高,出现更为典型的凋亡形态学改变;在DNA凝胶电泳可见更为明显的DNA梯形条带,RT-PCR检测提示NB4/WTA细胞p21、c-myc基因的表达较对照组高,bcl-2表达下降,p53、bcl-XL基因表达无明显改变.结论：增加外源性WT1基因异构体WTA的表达从而将WT1基因异构体表达的比例由＋17AA/＋KTS优势型转变为-17AA/-KTS优势型,能使NB4细胞对As2O3引起的凋亡更为敏感,这些改变可能与p21、c-myc等基因的表达上调和bcl-2基因的表达下调有关.     

WT1基因表达模式改变对NB4细胞分化的影响

目的探讨WT1基因异构体对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4分化的影响及其分子机制。方法用电穿孔法将携带WT1基因异构体WTA(-17AA/-KTS)全长cDNA的重组真核表达载体及其对照质粒pCB6+转导NB4细胞,建立WT1基因异构体表达比例改变的单克隆细胞株。通过形态学观察,细胞周期动力学检测,NBT还原试验,细胞表面分化抗原CD11b的检测了解外源性WT1基因异构体WTA在全反式维甲酸(ATRA)诱导下对NB4细胞分化的影响。用RT-PCR检测细胞中PML/RARα、p21、c-myc基因表达的改变。结果ATRA处理细胞48h,对照组(转染空载体的NB4/CMV和未转导WTA的NB4细胞)细胞分化明显,NB4/WTA细胞只出现部分分化。流式细胞术检测NB4/WTA细胞CD11b相对荧光强度(4.63±1.63)低于对照组(8.15±1.84),ATRA作用24h后CD11b相对荧光强度(31.42±5.65)与对照组(71.95±9.36)相比差异更为明显。NB4/WTA细胞NBT还原能力较对照组下降,经ATRA处理后两组细胞之间的NBT还原能力的差异更加明显。RT-PCR提示NB4/WTA细胞PML/RARα、p21、c-myc基因的表达较对照组升高。结论增加外源性WT1基因异构体WTA的表达从而将WT1基因异构体表达的比例由+17AA/+KTS优势型转变为-17AA/-KTS优势型能部分抑制ATRA对NB4细胞的诱导分化作用,这可能与PML/RARα、p21、c-myc基因表达上调有关。     

CD7阳性急性髓系白血病骨髓干／祖细胞5个基因表达的研究

本研究探讨abca5、mdr-1、kdr、dapk和irf-1 5个基因在CD7^＋急性髓细胞性白血病干／祖细胞的表达。利用实时定量RT—PCR（RQ—PCR）方法检测了15例正常骨髓（NBM）和16例AML患者骨髓单个核细胞（MNC）中5个基因的表达。采用流式细胞仪（FCM）分选8例NBM和21例AML患者骨髓CD34^＋CD38^＋祖细胞和CD34^＋CD38-干细胞,利用微量细胞RQ—PCR方法检测分选细胞中5个基因的表达。结果表明：NBMMNC均表达这5个基因,其中irf-1与dapk表达水平最高,相对表达量分别为4．08和3．86;abca5和mdr-1表达水平较低,为0．49和0．84;kdr表达最低为0．02。在经分选的CD34^＋CD38^＋祖细胞中,dapk和irf-1表达明显减低（P〈0．05）,kdr表达明显增加（P〈0．05）,其余2个基因无明显变化。在CD34^＋CD38^＋Lin-干细胞中,5个基因的表达均高于CD34^＋CD38^＋祖细胞,普遍增加至近2倍,而kdr增加了3倍,其中kdr和irf-l表达的增加具有统计学差异（P〈0．05）。与NBM相比,AMLMNC中5个基因的表达水平均有不同程度减低,以abca5、mdr-1、kdr和dapk最为显著（P〈0．05）。与AMLMNC相比,AMLCD34^＋CD38^＋细胞中,irf-1和dapk表达明显减低（P〈0．05）,其余3个基因表达增加,以kdr表达增加有统计学意义（P〈0．05）。AMLCD34^＋CD38^＋与CD34^＋CD38^-细胞比较,发现5个基因在CD34^＋CD38^＋细胞中的表达均增加,尤以kdr和irf-1的表达增加有意义（P〈0．05）。AMLCD34^＋CD38^＋CD7^＋细胞与CD34^＋CD38^-CD7-细胞中5个基因的表达均比CD34^＋CD38^＋细胞中的高,其中只有CD34^＋CD38^- CD7^＋细胞中KDR和CD34^＋CD38^-CD7^-细胞中KDR和irf-1的表达增加并具有统计学差异（P〈0．05）。结论：NBM中kdr主要表达在干／祖细胞中,而dapk和irf-1主要表达在较分化的细胞中。5个基因在干细胞阶段的表达均高于祖细胞阶段。AMLCD34^＋CD38^-CD7^＋细胞与CD34^＋CD38^＋CD7^-都具有干／祖细胞的基因表达特点。     

microRNA在人脐血CD34^＋CD38^-、CD34^＋CD38^＋细胞中的差异性表达

为进一步探讨microRNA（miRNA）在造血调控中的作用奠定基础,比较了miRNA在人脐血CD34^＋CD38^-、CD34^＋CD38^＋细胞中的差异性表达。从人脐血中分离单个核细胞（MNC）,应用FACSVantage分选流式细胞仪分选CD34^＋CD38^-、CD34^＋CD38^＋细胞;抽提miRNA后与miRNA芯片杂交,应用生物信息学技术分析miRNA芯片的表达结果。结果发现,miRNA在人脐血CD34^＋CD38^＋细胞的表达水平比在CD34^＋CD38^-细胞的表达水平降低至1／2以下者共11个,表达水平升高至2倍以上者共73个,以上84个miRNA被称为“干细胞性”miRNA。经比较Georgantas等和芯片表达结果,发现有12个（14、29％,12／84）相同的miRNA。部分miRNA经历了类似于CD34在造血细胞表面的发展历程。应用生物信息学技术可寻找到新的与造血调控相关的miRNA簇及miRNA的下游靶基因。结论：“干细胞性”miRNA在正常造血中发挥着重要作用,即miRNA的系统表达模式一造血干／祖细胞基因表达谱一造血干／祖细胞的自我更新和系列定向分化。     

佛波酯诱导K562细胞分化过程中WT1基因表达及其异构体比例变化的研究

目的 分析佛波酯（TPA）诱导K562细胞分化过程中WT1基因及其四种异构体表达水平及比例变化，探讨WT1基因不同异构体与细胞分化的关系。方法采用TPA诱导K562细胞分化，以硝基四氮唑蓝（NBT）还原实验及细胞免疫表型CD9检测判断细胞分化程度；实时荧光定量RT—PCR技术检测K562细胞被诱导分化过程中总WT1基因表达水平，并计算出WT1（＋／＋）、WT1（＋／-）、WT1（-／＋）、WT1（-／-）四种异构体在细胞分化过程中的比例变化。结果 TPA诱导K562细胞分化过程中NBT阳性率及CD9表达阳性率均有显著增加（P〈0．05）。WT1相对表达水平由分化前（4．67±1．11）×10^-3，降到（1．67±0．45）×10^-3（P〈0．05），随后回升，96h达（4．64±1．53）×10^-1；四种异构体比例变化不-致，WT1（＋／＋）比例由0h的（39．65±19．46）％降至96h的（15．25±7．27）％，而WT1（-／-）异构体由0h的（15．38±11．34）％上升至96h的（37．60±11．90）％，另外两种异构体比例变化无显著性差异。结论 TPA诱导K562细胞分化过程中总WT1表达水平24h内迅速下降，随后回升。分化前异构体以WT1（＋／＋）为主，而分化后以WT1（-／-）为主，提示WT1基因可能通过调节四种异构体的比例而发挥抑制分化或促进分化的作用。     

慢性粒细胞性白血病干细胞抗伊马替尼机制的初步分析

目的：了解伊马替尼对慢性粒细胞性白血病患者体内BCR／ABL融合基因阳性的原始及定向白血病干，祖细胞分化及增殖的影响，从而更深入阐明部分慢性粒细胞性白血病患者在经历一段血液学甚至是细胞遗传学水平上的完全缓解后复发及对伊马替尼耐药的机制。 方法：实验于2006—09/2007—06在河南省血液病研究所完成。①对象：选取10例慢性粒细胞白血病患者，患者对治疗及实验知情同意：实验经医学伦理委员会批准。实验过程中应用的伊马替尼为Novartis公司产品，批号B-1701-0001-000005；氟波酯为浙川制药公司产品，批号030321495。②实验方法：抽取慢性粒细胞性白血病患者骨髓10mL，分离得到具有血液血管干细胞特性、BCR／ABL融合基因阳性的FIk1^＋CD31^-CD34细胞。以诱导造血集落的前48h，96h，120h内培养体系中含5μmol/L伊马替尼分别作为伊马替尼1，2，3组，设立空白对照，均体外培养18d，检测伊马替尼对造血集落培养基中的未分化及处于分化阶段的BCR／ABL融合基因阳性FIk1^＋CD31^-CD34细胞的增殖抑制作用。采用流式细胞术将BCR／ABL融合基因阳性FIk1^＋CD31^-CD34细胞分为3个亚群，即G0期、G1期及S/G2＋M期，分别评估氟波酯、伊马替尼、氟波酯联合伊马替尼对3个亚群细胞的体外增殖及凋亡的影响。 结果：①伊马替尼对处于分化阶段BCR／ABL融合基因阳性FIk1^＋CD31^-CD34细胞增殖及向血管内皮细胞分化的影响：与空白对照组比较，伊马替尼1组每1000个BCR／ABL融合基因阳性FIk1^＋CD31^-CD34细胞产生的粒-单系祖细胞集落数、红系爆式集落数无明显变化（P〉0．05），伊马替尼2，3组两种造血集落数均显著降低（P〈0．05）。在内皮诱导体系中与空白对照组比较，伊马替尼3组CD31^＋／vWF^＋细胞出现率明显降低（P〈0．05），且分化形成血管样结构的时间延迟。②伊马替尼诱导BCR／ABL融合基因阳性FIk1^＋CD31^-CD34细胞及其分化细胞凋亡的比较：5μmol/L伊马替尼作用48h后，BCR／ABL融合基因阳性FIk1^＋CD31^-CD34细胞凋亡数量明显低于其分化的造血、血管内皮细胞（P〈0．05）。③氟波酯联合伊马替尼对白血病干细胞体外分化及凋亡的影响：氟波酯联合伊马替尼能显著诱导处于G0期的BCR／ABL融合基因阳性FIk1^＋CD31^-CD34细胞分化为造血细胞，同时也能显著诱导其凋亡。单独应用氟波酯或伊马替尼均对处于Go期的BCR／ABL融合基因阳性FIk1^＋CD31^-CD34细胞凋亡无呀显影响．进入G，期及S/G2＋M期后有一定的促凋亡作用。 结论：①临床所观察到的慢性粒细胞性白血病患者在运用伊马替尼一段时间后出现正常的造血恢复现象，可能仅仅是因为伊马替尼清除了定向恶性白血病祖细胞的增殖。②氟波酯联合伊马替尼可有效诱导原始白血病干细胞的分化及凋亡。     

HLA-A^＊0201／WTl五聚体联合胞内IFNγ染色在检测白血病患者外周血WT1特异性T细胞中的应用

本研究探讨五聚体及胞内因子染色在定性定量检测抗原特异性T细胞中的应用价值。用RT—PCR方法检测受试者WT1表达水平;用HLA—A＊0201／wTl五聚体及胞内IFNγ染色检测14例表达HLA—A＊020l的白血病患者全相合移植前后及其供者外周血中的WT1特异性T细胞。结果表明：14例供者中2例有低水平WT1表达,白血病患者均有不同水平的WT1表达。14例供者均未检测到WT1＋CD8^＋CTL和WT1^＋IFNγ^＋细胞;移植前14例患者中2例可检出WT1^＋CD8^＋CTL,3例检出WTl^＋IFNγ^＋细胞,二者间无明显差异（P=0．357）,而移植后均可检出WT1^＋CD8^＋CTL和WT1^＋IFNγ^＋细胞,明显高于移植前（P值均〈0．01）。移植后大部分患者均在30天内检出WT1^＋CD8^＋CTL和WT1^＋IFNγ＋细胞,但后者检出率高于前者（P=0．014）。14例患者中WT1^＋CD8^＋CTL峰值中位数为0．18％,而WT1^＋IFNγ^＋细胞峰值中位数为0．83％,明显高于前者（P=0．005）;WT1^＋CD8^＋CTL峰值中位时间为移植后75天,WT1^＋IFNγ^＋细胞峰值中位时间为移植后105天,但二者间无明显差异（P=0．455）。结论：五聚体及胞内IFNγ染色能有效检测白血病患者外周血中白血病抗原特异性T细胞;两种方法联合检测有助于抗原特异性T细胞的准确定性定量检测。     

bmi-1原癌基因在不同来源CD34^＋细胞的表达

目的：Bmi-1是一种属于PcG家族的原癌基因，它直接参与细胞生长、增殖的调节，是成体干细胞和白血病干细胞自我更新所必需的。检测原痛基因bmi-1在不同来源CD34^＋细胞中的表达，探讨其与细胞增殖的关系。 方法：实验于200703／11在广州医学院生化教研室完成。①实验材料：白血病细胞株SHI-1由苏州大学附属第一医院、江苏省血液病研究所薛永权教授惠赠；脐血由广州医学院附属广州市第一人民医院妇产科提供。实验经产妇知情同意，并经医院伦理委员会批准：外周血采自健康成年自愿捐献者。②实验方法：以CD34免疫磁珠标记急性单核细胞白血病细胞株SHI-1，上柱分选CD3矿细胞，脐血单个核细胞以同样的方法标记CD34免疫磁珠标记和分选CD34^＋细胞，应用流式细胞仪分析分选后CD34^＋的寓集度：将分选前后的CD34^＋、CD34^SHI—1细胞以相同的密度接种于24孔板，分不同的时间点计数细胞，并绘制生长曲线。选用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞。以正常脐带血和外周单个核细胞为对照，采用半定最RT—PCR法检测bmi—1基因在不同来源CD34^＋细胞中的表达。 结果：①SHI—1细胞分选前后标记CD34^＋PE、CD38^＋FITC流式分析显示，分选后CD34^＋细胞的富集度为99％以上。②SHI-1-CD34^＋细胞旱缓慢生长趋势，不同于分选前细胞的指数生长状态。③RT-PCR检测显示，bmi-1 mRNA在SHI—1—CD34^＋细胞中的表达高于其在脐肌-CD34^＋与外周血单个核细胞中的表达（P〈0．05）。bmi-1 mRNA在SHI—1、SHI—1—CD34^＋、SHI-1-CD34^＋细胞中表达差异不显著，在脐血L—CD34^-细胞中弱表达或不表达。 结论：bmi-1基因在SHI细胞株CD34^＋与CD34^-细胞中均高表达，说明其与血液细胞的高增殖能力密切相关。     

人胎盘造血干/祖细胞的增殖分化能力

近年来有研究表明，人胎盘组织富含造血干细胞，而且其CD34^＋CD38^-、CD34^＋CD38^＋造血干／祖细胞（HSPC）的百分率明显高于脐血。但有关人胎盘组织CD34^＋HSPC亚群的增殖分化能力的研究却未见报道。我们采用免疫磁珠分选人胎盘组织CD34^＋CD38^-和CD34^＋CD38^＋HSPC亚群，并用不同培养体系进行血细胞集落培养，以评价其增殖分化能力。     

610例急性髓系白血病免疫表型和白血病相关免疫表型分析

目的探讨急性髓系白血病（AML）患者免疫表型和白血病相关的免疫表型（LAIP）特征及在微量残留病（MRD）检测中的意义。方法采用CD45／SSC设门四色流式细胞术，检测610例AML患者和20名健康志愿者下列抗原的表达：CD7、CDll7、CD33、CD34、CDl0、CDl9、CD56、CD38、CDl3、CDl4、CD64、CD9、CDl6、CD2、CD5、CDllb、CDl23、HIA-DR。结果正常骨髓中CD34^＋和CDll7^＋SSC值低（SSC^low）的细胞比例分别为（0．35±0，15）％和（0．76±0．31）％。CD34^＋SSC^low细胞中绝大多数细胞共表达CDl3、CD33、CD38、CDll7、HLA-DR（84％～94％）。CD9和CDl5的相对比例为20％和33％，而CDllb、CD56、CDl9和CD64的相对比例均低于10％，CD7为12％。CDll7^＋SSC^low细胞中，CDl9^＋、CD11b^＋、CD56^＋和CD7^＋细胞相对比例低于10％，CD9^＋细胞为14％，CD38^＋和HIA-DR^＋细胞的相对比例为87％和91％，其余抗原（CDl5、CDl3、CD33、CD34）均在30％～50％。AML患者中CDll7、CD38表达率约为95％，CD33、CD9表达率约为84％。HLA-DR和CDl3表达率分别为77．23％和75．25％。CD64和CD34的表达率分别为64．41％和59．51％。CDl5表达率为43．06％，CDllb表达率为22，07％。86．39％的AML患者LAIP阳性，以AML-M1和M3最高，AML-M4E0最低。LAIP主要表现为交叉系列抗原表达和非同期共抗原表达，前者以CD34与CD7、CDl9、CD56同时阳性为主。在非同期抗原表达中，CD34^＋CD64^＋、CDll7^＋CDllb^＋、CDll7^＋CD38^-/dim、CDll7^＋HLA-DR-／^dim正常值在0．01％左右，与AML之间的对数差大于3，为灵敏度较高的LAIP。结论多参数流式细胞术适于80％以上AML患者MRD检测。     

健康供者特征对rhG-CSF预激的骨髓采集物CD34+细胞和T细胞亚群的影响

目的 探讨健康供者特征对rhG-CSF预激的骨髓(G-BM)采集物造血和免疫细胞成分的影响.方法 150名健康供者体内应用rhG-CSF 5 μ·kg-1·d-1连续4～5 d,第4,5天采集骨髓和外周血,用流式细胞术测定G-BM采集物中的CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD14+、CD34+细胞以及CD3+CD4-CD8-调节性T细胞的数量,并分析供者性别、年龄、体重、是否妊娠等特征对G-BM成分的影响.结果 150名健康供者G-BM所含有核细胞,淋巴细胞,CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD14+、CD34+细胞以及CD3+CD4-CD8-调节性T细胞的中位值分别为31 050(12 200～58 100)、2122(506～6618)、1344(307～4791)、692(145～3038)、616(112～2575)、986(265～2958)、63(11～505)和83(9～390)/μl.年龄≤38岁的供者G-BM中的有核细胞、CD34+细胞以及CD3+ CD4-CD8-调节性T细胞的数量分别为33800(18600～57100)、76(22～505)和97(11～380)/μl,显著高于年龄＞38岁的供者[分别为28 000(12 200～58 100)、49(11～220)和65(9～389)/μl],P值分别为＜0.05,＜0.001和0.001.外周血单核细胞计数＞0.37×109 /L的供者G-BM中有核细胞的数量[33550(12 200～57 100)/μl]显著高于≤0.37×109 /L的供者[27 150(13 800～58 100)/μl](P=0.005).多因素分析显示年龄和外周血单核细胞是G-BM中有核细胞采集量的影响因素[HR值分别为0.41和2.87;P值分别为0.01和0.003];年龄是G-BM中CD34+细胞采集量的唯一影响因素(HR=0.26;P值=0.001);年龄还是G-BM中CD3+ CD4-CD8-调节性T细胞数量的影响凶素[HR值为0.31;P=0.001].结论 年龄是影响G-BM中有核细胞、CD34+细胞和CD3+ CD4-CD8-调节性T细胞采集数量的因素,年龄≤38岁的供者更易采集满足临床需要的有核细胞和CD34+细胞;外周血单核细胞＞0.37×109 /L的供者采集的G-BM含有较多数量的有核细胞.     

福州地区健康儿童外周血淋巴细胞亚群及主要活化相关指标正常参考范围的建立

目的建立福州地区健康儿童外周血淋巴细胞亚群及活化的正常参考范围。方法选取福州地区0~18岁健康儿童593例为研究对象,按年龄分为新生儿组(0~28d)、婴儿组(~12个月)、幼儿组(~3岁)、学龄前组(~7岁)、学龄组(~12岁)和少青组(~18岁),采集外周血以美国BD公司生产的四色荧光抗体进行标记,以FACSCalibur流式细胞仪测定T淋巴细胞亚群CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、B淋巴细胞亚群CD3-CD19+、NK细胞CD3-CD16+CD56+及淋巴细胞活化指标CD4+CD38+、CD4+AntiHLA-DR+、CD8+CD38+、CD8+Anti-HLA-DR+的百分率和绝对计数,以Multi SET软件获取数据并分析结果,SPSS 10.0软件进行统计分析。以百分位数法,采用95%可信区间确定正常参考值范围。结果除CD3-CD16+56+绝对计数在各年龄组间无差异外,淋巴细胞亚群及淋巴细胞活化指标在不同年龄组之间的差异均有统计学意义,表现为CD3+绝对计数、CD3+CD4+、CD4+CD38+百分率和绝对计数、CD4+/CD8+比值随着年龄的增长呈降低趋势。CD4+Anti-HLA-DR+的百分率随着年龄的增长呈增高趋势。新生儿组CD3+、CD3+CD4+、CD4+CD38+、CD8+CD38+的百分率和绝对计数及CD4+/CD8+比值明显高于其它年龄组,CD3-CD19+、CD8+AntiHLA-DR+的百分率和绝对计数明显低于其它年龄组。在不同性别之间CD3+CD4+和CD3-CD19+、CD4+CD38+、CD4+Anti-HLA-DR+和CD8+CD38+的百分率和绝对计数的差异有统计学意义,表现为女童明显低于男童。儿童淋巴细胞亚群绝对计数的参考值高于成人。结论健康儿童淋巴细胞免疫表型的分布存在性别和年龄差别,由于这种差别细微,可以在同一种族同一区域建立统一的正常参考值范围。本研究成功建立福州地区健康儿童淋巴细胞亚群及活化的正常参考范围。     

CD133+CD34+ and CD133+CD38+ blood progenitor cells as predictors of platelet engraftment in patients undergoing autologous peripheral blood stem cell transplantation

BackgroundHematopoietic stem cells (HSC) have been characterized by CD34+ expression and an adequate dose of CD34+ cells is associated with a complete engraftment. CD133 is a more specific marker of HSC.Materials and methodsWe studied the relationship between graft content of CD34+, CD133+, and CD38+ cells and trilineage engraftment after autologous stem cell transplantation in patients with different hematological disorders. Blood samples were obtained before and after mobilization with recombinant granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF, 16 μg/kg), from apheresis collections, and after transplantation.ResultsCell subsets were quantified by flow cytometry, and the dose of each population infused was correlated with success of engraftment. G-CSF induced mobilization of CD133+CD38+ cells (12.6-fold) and CD133+CD34+ cells (14.7-fold). A correlation was observed between the infused dose of CD133+CD34+ and CD133+CD38+ cells and platelet engraftment.ConclusionCD133+CD34+ and CD133+CD38+ cells were mobilized with G-CSF and these cell subsets were correlated with platelet engraftment.     

AML-1/ETO基因相关的AML-M2型白血病免疫表型分析

本研究探讨AML/ETO基因重排的FAB分型为AML-M2患者的骨髓免疫表型的特征和预测性,以及与急性早幼粒白血病（APL）的区别。应用流式细胞术分析17例经荧光原位杂交（FISH）检测AML-1/ETO融合基因阳性、FAB分型为AML-M2（M2/ETO＋）患者骨髓的免疫表型,并与34例AML-1/ETO阴性、FAB分型AML-M3、临床诊断为APL患者进行了比较。结果发现,17例M2/ETO＋患者骨髓中均可见一群（15.89%-68.53%）原始细胞和一群SSC较高异质性的粒细胞。原始细胞表达干细胞相关抗原CD34、HLA-DR和髓系抗原CD33、CD13、MPO。在M2/ETO＋患者中CD33表达强度显著低于APL患者（P〈0.001）,HLA-DR、CD19和CD34＋CD56＋共表达的阳性率均显著高于APL患者（P〈0.001）,而CD9的表达率则显著低于APL患者（P〈0.001）。M2/ETO＋患者粒细胞表达分化的髓系抗原CD11b和CD15,并可分为CD15＋CD11b-和CD15＋CD11b＋两群,而成熟的粒细胞标志CD10均为阴性,与早幼粒细胞的表达图形相似。17例（100%）M2/ETO＋患者的粒细胞均表达CD56,显著高于M3患者（6/34例,17.56%）。结论：AML-1/ETO基因重排的AML-M2型（FAB分型）白血病具有独特的免疫表型,对其基因重排有较高的预测性。应用多参数免疫分型技术可较容易地将M2/ETO＋亚型白血病与APL鉴别。     

多发性骨髓瘤免疫表型特征及其临床意义

目的探讨流式细胞术检测多发性骨髓瘤(MM)的免疫表型特征及其临床意义。方法应用多参数流式细胞术(MP-FCM),采用CD138/CD45/SSC设门,检测40例MM患者和20例正常献髓者骨髓细胞免疫表型。结果 MM患者抗原异常表达率由高到低分别为CD45~(dim+/-)(95%)、CD81~(dim+/-)(80%)、CD56~+(70%)、CD27~(dim+/-)(50%)、CD200~(++)(48%)、CD33~+(40%)、CD28~(++)(35%)、CD117~+(18%)、CD19~+(5%)和CD20~+(3%)。CD56+、CD200~(dim+)、CD28~(dim+)在正常浆细胞的表达率分别为10%、10%和5%。结论应用MP-FCM检测MM细胞免疫表型,可准确地鉴别良恶性浆细胞,有助于MM的诊断、预后判断及靶向治疗。     

粒系集落刺激因子对外周血T淋巴细胞亚群的影响及与CD34+细胞动员效果的相关性

本研究观察粒系集落刺激因子(G—CSF)作为造血干细胞动员剂对外周血T淋巴细胞亚群的影响及与CD34^ 细胞动员效果的关系。对26例行自体造血干细胞移植患在G—CSF动员前后收集外周血标本，用流式细胞术检测动员前后CD3^ 、CD3^ CD4^ 、CD3^ CD8^ 、CD3^ CD4^ CD8^ 及CD3^ CD4^-CD8细胞绝对数量的变化并与外周血CD34^ 细胞的动员效果进行相关性分析。结果表明：GCSF动员后外周血CD3^ 、CD3^ CD4^ 、CD3^ CD4^ CD8^ 及CD3^ CD4^-CD8细胞的绝对数量分别增加2.23，2．62，2.99及10．96倍，而CD3^ CD4^ CD8^ 细胞的变化无统计学意义(P=0．243)。各亚群细胞的变化与CD34^ 细胞动员效果比较，仅CD3^ CD4 CD8细胞的变化与CD34^ 细胞动员效果间具有良好的相关性，r=0．796，P=0.000。结论：G—CSF将造血干细胞由骨髓动员到外周血的同时，使外周血中T细胞亚群的绝对数量发生不同程度的变化。在各T淋巴细胞亚群中CD3^ CD8^-细胞的增加与CD34^ 细胞的动员效果间具有统计学意义的相关性。