阿姆西汀抗抑郁作用的细胞调控机制

目的：在体外细胞水平探讨阿姆西汀的抗抑郁作用机制。方法分离培养新生大鼠海马神经前体细胞,采用ATP生物发光法检测阿姆西汀对神经前体细胞增殖的影响;以皮质酮损伤原代培养大鼠海马神经元为模型,检测阿姆西汀的细胞保护作用;并采用PKA特异性抑制剂H89探讨其可能的作用机制。结果0．5～2．5μmol／L阿姆西汀可浓度依赖性地促进神经前体细胞的增殖;100μmol／L 皮质酮对神经元具有明显的损伤作用,2．5,5μmol／L阿姆西汀可显著逆转皮质酮的损伤作用,度洛西汀具有同样的作用;并且10μmol／L H89可取消以上作用。结论阿姆西汀在体外具有促进神经元再生和对神经元损伤的保护作用,这可能是阿姆西汀抗抑郁效应的重要细胞机制,且这一作用可能与cAMP-PKA-CREB通路有关。     

银杏内酯B对谷氨酸诱发原代培养皮层神经元损伤的实验研究

目的观察银杏内酯B（Ginkgobalide B，GB）对谷氨酸致原代培养皮层神经元损伤的保护作用。方法采用体外培养皮层神经元的方法，利用终浓度为0．5mmol·L^-1的谷氨酸造成皮层神经元损伤，通过测定细胞存活率、细胞活性、乳酸脱氢酶（LDH）漏出率、丙二醛（MDA）含量，超氧化物歧化酶（SOD）活性，研究GB对谷氨酸造成神经元损伤的保护作用机制。结果GB10^-5 mol·L^-1可抑制谷氨酸所致LDH漏出率的升高。GB10^-4、10^-5 mol·L^-1可提高神经细胞活性；扭转谷氨酸致神经细胞存活率的下降；升高SOD酶的活性，抑制谷氨酸所致MDA含量的升高。结论提示GB对谷氨酸所致原代皮层神经元的损伤具有保护作用。     

胍丁胺对谷氨酸和高钾诱发海马神经元细胞内钙离子浓度升高的影响

目的观察胍丁胺对原代培养的大鼠海马神经元细胞内钙离子浓度([Ca2 ]i)的影响及其对谷氨酸和高钾诱发[Ca2 ]i升高的影响,探讨胍丁胺对N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体和电压依赖性钙通道(VDCC)的作用。方法原代培养的新生大鼠海马神经元,在细胞外液中加入1、10、100、1000μmol·L-1胍丁胺,再用300μmol·L-1谷氨酸诱发NMDA受体通道的开放,或用50mmol·L-1KCl诱发VDCC的开放,应用激光共聚焦扫描技术,动态观察胍丁胺对[Ca2 ]i的影响。结果1~1000μmol·L-1胍丁胺对细胞内基础钙荧光强度无影响,1、10、100、1000μmol·L-1胍丁胺使谷氨酸引起的[Ca2 ]i升高最大变化率由对照组的372%分别降至349%、327%、297%、233%。其中100、1000μmol·L-1胍丁胺对谷氨酸引起的[Ca2 ]i升高的抑制作用与对照组相比有显著性差异(P<0.01)。仅1000μmol·L-1胍丁胺能抑制KCl诱发的[Ca2 ]i升高(P<0.01),低剂量组对KCl诱发的[Ca2 ]i的变化无影响。结论胍丁胺可以阻断NMDA受体耦联钙离子通道而抑制钙离子的内流,高浓度时也抑制VDCC。     

小补心汤总黄酮含药血清对皮质酮损伤神经细胞的保护作用

目的探讨小补心汤总黄酮（XBXT-2）含药血清的神经保护作用。方法采用血清药理学方法分别制备大鼠的空白血清、氟西汀（10 mg/kg）和XBXT-2（25,50,100,200 mg/kg）含药血清。采用皮质酮损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12）、人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）及原代培养大鼠海马神经元为体外药理学模型,应用ATP生物发光法检测XBXT-2及氟西汀含药血清对损伤细胞存活率的影响。结果皮质酮（50～300μmol/L）能够浓度依赖性地抑制SH-SY5Y的存活,氟西汀与XBXT-2（25,50 mg/kg）含药血清能显著提高皮质酮（100μmol/L）损伤的SH-SY5Y的存活率（P〈0.01,P〈0.05,P〈0.01）;与空白对照组比较,200μmol/L皮质酮导致PC12的存活率显著下降（P〈0.01）,氟西汀与XBXT-2（25,50,100 mg/kg）含药血清能显著对抗这种损伤（P〈0.05,P〈0.01,P〈0.05）;100μmol/L皮质酮使原代海马神经元存活率显著下降（P〈0.001）,XBXT-2（25、50 mg/kg）对这种损伤具有显著的保护作用（P〈0.05,P〈0.001）,其作用与阳性药氟西汀含药血清相当。结论 XBXT-2含药血清对皮质酮所致的神经细胞损伤具有明显保护作用,这可能是其抗抑郁效应的重要细胞机制之一。     

在慢性应激小鼠模型上评价胍丁胺的抗抑郁作用及机制

目的在小鼠慢性应激抑郁动物模型上评价胍丁胺的抗抑郁作用及其作用机制。方法以慢性应激抑郁模型检测胍丁胺的抗抑郁活性，以western blot方法检测脑源性神经营养因子（brain—derived neurotrophic factor，BDNF）、细胞外信号调节激酶（extracellular signal—regulated kinase，ERK）、cAMP反应元件结合蛋白（cAMP response element—binding protein，CREB）的表达。结果慢性应激导致小鼠探究行为和自发活动减少，表现为测定时间内的活动总路程和活动时间明显减少，新奇抑制摄食潜伏期延长，伴随给予胍丁胺（10、20mg·kg^-1，灌胃）和阳性对照药丙咪嗪（10mg·kg^-1，灌胃）均能够逆转这种改变。同时慢性应激导致海马BDNF、pERK、pCREB表达下调，伴随给予胍丁胺或丙咪嗪可逆转之。结论胍丁胺在慢性应激小鼠抑郁模型上具有抗抑郁作用，此作用与上调海马BDNF及其上、下游信号通路相关激酶，即神经营养通路密切相关。     

多氯联苯对体外培养大鼠海马神经元毒性的研究

目的：研究多氯联苯（PCB）对体外培养大鼠海马神经元细胞生长，存活的影响。方法：体外法培养大鼠海马神经元细胞经不同剂量PCB共培养后，用MTT法观察海马神经元细胞生长，发育，结果：高浓度的PCB明显抑制海马神经元细胞的存活率，10^-4mol.L^-1组同对照组相比相差极显著（P＜0．01），10^-7mol.L^-1,10^-6mol.L^-1组同对照组相比相差显著（P＜0．05），海马神经元细胞存活率明显降低。结论：PCB对海马神经元细胞可产生明显的神经毒性。     

海马神经元损伤及保护的纳米级三维构像变化研究

目的：观察海马神经元细胞表面形态的三维构像变化，探讨抑制p38 MAPK信号通路对减轻红藻氨酸(KA)毒性作用引起大鼠海马神经元所造成损伤的作用和机制。方法：原代培养海马神经元给予SB203580(0．2μmol／L)预处理，30min后再予不同浓度(0，25和250μmoL／L)红藻氨酸分别作用10min和100min，利用原子力显微镜(AFM)对胞膜表面结构进行纳米级水平扫描和观测。结果：正常海马神经元表面光滑，起伏均匀、规律；红藻氨酸作用后神经元呈损伤性改变，表现为胞体肿胀，胞膜表面粗糙，出现“孔洞”样结构，并且其变化程度分别与作用时间和红藻氨酸浓度呈量-效关系；预先给予SB203580处理，以上变化有所减轻。结论：抑制p38MAPK信号通路，对红藻氨酸诱导海马神经元胞膜的损伤起一定保护作用。     

丝裂原活化蛋白激酶通路对成纤维细胞内游离钙的影响

为观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)对离体热烫伤后成纤维细胞内钙离子的作用以及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通过对胞内游离钙的影响，将培养的人成纤维细胞进行热损伤刺激后分成4组：（1）bFGF处理组（10ng/ml);(2)预先加ＰＤ９８０５９（10μmol/L)阻断剂３０min，再行bFGF(10ng/ml)刺激；（３）预先加入ＳＢ２０３５８０（１０μmol/L)阻断剂30min，再行bFGF刺激（10ng/ml)；（4）同时加入PD98059（10μmol/l)和SB203580（10μmol/L)2种阻断剂30min，再加入bFGF(10ng/ml)，应用特异性Ca^2 荧光指示剂Fluo-3/AM负载细胞，激光共聚焦显微镜检测细胞内游离钙的浓度，结果：显示，受热刺激的成纤维细胞荧光强度较弱，加入bFGF后可促使成纤维细胞中游离Ca^2 浓度升高，分别预先加入PD98059和SB203580损坏抗剂的成纤维细胞，再加入bFGF，胞内钙离子浓度出现不同的钙振荡现象，同时加入2种阻断剂后胞内钙离子浓度则迅速降低，表明bFGF引起热损伤后的成纤维细胞中游离Ca^2 浓度的增加，MAPK信号通路对胞内钙离子有反馈调节的作用。     

吗啡对原代培养海马神经元内Gi2蛋白水平的影响

目的 观察吗啡对原代培养海马神经元内Ⅱ型抑制性鸟苷酸结合蛋白（Gi2蛋白）水平的影响。方法 取培养7天的成熟海马神经元，随机分为吗啡处理4h组（M4）、8h组（M8）、16h组（M16）、24h组（M24）、48h组（M48）和空白对照组（C），每组6孔。吗啡处理组加入终浓度为10μmol／L的吗啡，C组加入生理盐水。免疫荧光技术检测神经元内的Gi2蛋白水平。结果 与C组比较，M16组、M24组和M48组海马神经元内Gi2蛋白水平显著降低（P〈0．01），而M4和M8组无明显变化（P〉0．05）。M48组海马神经元内Gi水平明显低于M16、M24组（P〈0．05）。结论 吗啡可降低原代培养的海马神经元内Gi2蛋白水平，降低程度与吗啡处理时间密切相关。     

利福平对异烟肼在小鼠原代肝细胞内代谢的影响

目的探讨异烟肼（INH）与利福平（RFP）合用致肝毒性增加的部分作用机理。方法采用在体心脏灌流法获取小鼠原代肝细胞,将其常规培养5d后,分别用含INH（87.5μmol.L^-1）和INH＋RFP（87.5μmol.L^-1＋48.6μmol.L^-1）培养液培养48h,液相色谱-电喷雾质谱联用法测定2组培养液中INH及其代谢产物乙酰肼（Acetylhydrazine,AHZ）和肼（Hydrazine,HZ）的浓度。结果与INH组比较,INH＋RFP组AHZ和HZ浓度增加,有显著性差异（P〈0.01）。结论RFP和INH合用后使INH肝毒性代谢物浓度增加,可能是其肝毒性增加的原因之一。     

LC-MS法测定国人血浆中非那雄胺浓度及生物等效性研究

目的建立非那雄胺血药浓度的LC—MS测定法,用于人体生物等效性研究。方法采用随机双交叉实验设计,20名健康受试者口服受试制剂和参比制剂2mg,用LC—MS法测定国人血浆中的非那雄胺浓度。结果受试制剂和参比制剂的AUC0-24分别为（123．95±25．47）、（126．35±28．16）μg·h·L;AUC0-∞分别为（126．12±27．48）、（129．85±29．12）μg·h·L^-1;Cmax分别为（22．17±3．83）、（22．48-＋4．69）μg·L^-1;Tmax分别为（3．1±0．6）、（2．9±0．8）h;T1／2分别为（4．2±0．3）、（4．3±0．5）h。受试制剂的相对牛物利用度为（99．4±9．2）％。结论经统计学分析,两种非那雄胺片剂具有生物等效性。     

以双氯酚酸为探针采用高效液相色谱法快速测定CYP4502C9的酶活性

目的建立一种快速、高效的以双氯酚酸作为探针药物评价细胞色素P4502C9（CYP2C9）酶活性的高效液相色谱．紫外检测方法。方法色谱柱为Agilent Zorbax SB—C18柱（50mm×4．6mmI．D．,5μm）;流动相为乙腈（含0．01％七氟丁酸）-水（含0．01％七氟丁酸）（65：35,V／V）,流速2．0mL/min;检测波长为280nm。双氯酚酸与人CYP2C9酶在37℃温孵适当时间后,加入100μL乙腈-冰乙酸（94：6,V／V）终止反应,10000g离心后取上清液进样分析测定。结果4’-羟基双氯酚酸的保留时间为1．35min,线性范围为1．00—200μmol·L^-1（r=0．9999）,最低定量限为1．00μmol·L^-1,回收率为99．5％-100．8％;双氯酚酸的保留时间为2．25min,线性范围为1．00～200μmol·L^1（r=0．9999）,最低定量限为1．00μmol·L^-1,回收率为99．3％～101．1％。两者的日内、日间RSD均〈15％,温孵体系中的其他内源性物质不干扰测定。结论该方法快速、稳定、灵敏度高,适合体外双氯酚酸及其代谢物4’-羟基双氯酚酸的测定,可应用于体外CYP2C9酶活性的评价及酶动力学的研究。     

HPLC法测定黄藤素胶囊中盐酸巴马汀的含量

目的建立黄藤素胶囊中盐酸巴马汀含量的测定方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱采用Hypersil ODS2 C18柱（4.6mm×200mm,5μm）,流动相：乙腈-缓冲液[0.05mol·L^-1磷酸二氢钾溶液和0.05mol·L^-1庚烷磺酸钠溶液（1：1）]（50：50）,检测波长经紫外扫描法确定为273nm,流速：1.0mL/min,柱温：25℃。结果盐酸巴马汀在4～40μg·mL^-1范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系,回归方程Y=70354X＋3482.4,r=0.9999,平均回收率为98.7%,RSD为0.90%。结论本法简便、灵敏、准确,可作为该制剂的含量测定方法。     

伏立康唑胶囊在健康人体的生物等效性研究

目的研究伏立康唑胶囊和片剂在健康人体的生物等效性。方法采用随机自身交叉给药方法,24例健康男性志愿者单剂量口服伏立康唑胶囊与片剂。用液质联用方法测定血浆中的伏立康唑浓度,计算药代动力学参数。结果伏立康唑胶囊和片剂的的主要药代动力学参数,Tmax分别为（0．9±0．46）、（0．9±0．54）h;Cmax分别为（2340．83±607．95）、（1950．83±656．25）μg·L^-1;t1／2分别为（8．6±3．53）、（8．8±4．16）h;AUC0-tn分别为（11529．38±6501．42）、（10217．92±5428．32）μg·h·L^-1;AUC0-∞分别为（12779．70±8020．12）、（11404．55±7156．16）μg·h·L^-1。受试制剂与参比制剂比较,受试制剂的相对生物利用度F0-tn、F0-∞分别为（114．08±20．92）％、（113．84±22．50）％。结论伏立康唑胶囊和片剂具有生物等效性。     

HPLC-MS／MS联用技术测定人血浆中9-硝基喜树碱的含量

目的建立HPLC-MS—MS法测定人血浆中9-硝基喜树碱浓度。方法以喜树碱为内标，流动相为乙腈-2％甲酸水溶液（55：45，V／V），色谱柱为Agilent C18（3．5μm，2．1mm×150mm），电喷雾离子源（ESI），正离子多反应监测（MRM）方式进行检测。用于定量分析的离子对分别为[M＋H]^＋m／z 394．2→m/z 350．0（9-硝基喜树碱），[M＋H]^＋m／z 349.1→m/z 305．3（喜树碱）。结果9-硝基喜树碱线性范围1～300μg·L^-1内呈良好线性关系（r=0．9990），定量下限为1μg·L^-1。日内、日间精密度的RSD均〈15％，平均回收率为76.02％，RSD为5．7％。结论本方法专属性强，生物样品处理方便，灵敏度高，适用于9-硝基喜树碱临床药动学研究。     

重组人生长激素在猕猴体内相对生物利用度研究

目的评价重组人生长激素（rhGH）冻干粉针剂受试制剂与参比制剂在猕猴体内的相对生物利用度。方法猕猴随机分成两组，运用交叉设计方法，先后接受皮下注射受试制剂或参比制剂0．5IU·kg^-1，测定不同时间点生长激素血药浓度，并进行相关药动学参数分析。结果受试制剂与参比制剂的主要药代动力学参数Tmax分别为（3．0±1．4）、（2．3±1．8）h；Cmax分别为（173．2±79．0）、（159．0±41．3）μg·L^-1；AUC（0-12h）分别为（1139±258）、（1108±390）μg·h·L^-1；结论受试制剂的相对生物利用度为（107±16）％。     

HPLC 法测定氯化铵甘草口服溶液中甘草酸的含量

目的建立HPLC法测定氯化铵甘草口服溶液中甘草酸的含量。方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,0．0025mol·L^-1庚烷磺酸钠水溶液-0．025mol·L^-1磷酸二氢钾溶液-乙腈（35：35：30）为流动相,检测波长为253nm;流速：1．0ml·min^-1;柱温：30℃。结果甘草酸铵在0．01501～0．1501mg·ml^-1的范围内线性关系良好（r=1．0000）,平均回收率为100．11％,RSD为0．45％（n=9）。结论本方法简便、测定结果准确,重复性好,可用于氯化铵甘草口服溶液中甘草酸的含量测定。     

柱前衍生化HPLC法同时测定复方甘草酸苷胶囊中甘氨酸和蛋氨酸的含量

目的建立同时测定复方甘草酸苷胶囊中甘氨酸和蛋氨酸含量的高效液相色谱法。方法采用C18色谱柱（4．6mm×150mm,5μm）,流动相为乙腈-0．01mol·L^-1磷酸溶液（49：51）,流速：1．0mL／min,检测波长：262nm。结果甘氨酸、蛋氨酸浓度分别在10．6～106．0、10．4～104．0μg·mL^-1范围内呈良好的线性关系;平均回收率分别为100．53％和100．66％,RSD分别为1．08％和1．13％（n=9）。结论本法可用于同时测定复方甘草酸苷胶囊中甘氨酸和蛋氨酸的含量,方法简便,结果准确。     

HPLC法同时测定复方氯霉素醇溶液中氯霉素和水杨酸含量

目的建立HPLC法同时测定复方氯霉素醇溶液中氯霉素和水杨酸含量。方法采用CAPCELL PAK C8DD（4.6mm×250mm,5μm）色谱柱;流动相：甲醇-0.05mol.L^-1磷酸二氢钠溶液（用磷酸调pH至2.5）（29∶71）;流速：1.0ml/m in;检测波长278nm;柱温：40℃;进样量10μl。结果氯霉素、水杨酸的线性范围分别为0.020 54-1.027mg.ml^-1、0.021-1.05mg.ml^-1（r=0.999 9）,平均回收率分别为100.01%、99.85%,RSD分别为0.9%、1.0%（n=9）。结论本方法快速、准确,可同时测定复方氯霉素醇溶液中两种主要成分的含量。可用于复方氯霉素醇溶液的质量控制。