基于益肾填精法的茸菖胶囊对海马神经元自噬LC3 mRNA及Cathepsin B mRNA蛋白表达水平的实验研究

目的探讨中药茸菖胶囊抗癫痫和神经保护作用的自噬调控机制,为临床应用提供实验依据。方法将无镁诱导的新生SD大鼠海马神经元放电模型分为模型组、5%茸菖胶囊组、10%茸菖胶囊组、20%茸菖胶囊组,3-甲基腺嘌呤(3-MA)组,另设正常组,给予相应处理6,12,24,72 h后,采用RT-PCR法检测自噬活性相关蛋白LC3 mRNA及Cathepsin B mRNA的表达。结果 (1)在无镁诱导后6h、12h、24h三个时间点的5%、10%、20%茸菖胶囊组LC3 mRNA表达水平较模型组降低(P0.01或P0.05),72h各浓度茸菖胶囊组LC3 mRNA表达水平不稳定;(2)在无镁诱导后6h 20%茸菖胶囊组Cathepsin B mRNA表达水平较模型组降低(P0.01),12h、24h 5%、10%、20%茸菖胶囊组表达水平较模型组降低(P0.01或P0.05);72h各浓度茸菖胶囊组LC3 mRNA表达水平不稳定。结论茸菖胶囊对神经元保护作用的机制可能与影响LC3 mRNA及Cathepsin B mRNA蛋白的表达干预自噬过程有关。     

茸菖胶囊对幼年大鼠癫痫后NRSF和BDNF蛋白表达的影响

[目的]研究茸菖胶囊对幼年大鼠癫痫后神经元限制性沉默因子(NRSF)和脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达的影响。[方法]建立戊四唑点燃癫痫模型,分为中药高、中、低剂量组、西药组、模型组和空白组,用蛋白免疫印迹杂交法检测各组NRSF和BDNF蛋白的变化。[结果]幼年大鼠致痫后模型组海马NRSF和BDNF蛋白表达升高,中药高剂量组可显著降低大鼠海马齿状回NRSF和BDNF蛋白表达(P0.01),作用优于西药组和其他中药组。[结论]中药复方茸菖胶囊抗癫痫及改善癫痫后认知障碍机制可能与调控组蛋白乙酰化修饰及其所介导的神经元基因表达有关。     

熄风胶囊、茸菖胶囊、抗痫胶囊对海马神经元NMDA受体电流及细胞内游离钙的影响

目的:探讨中药复方(熄风胶囊、茸菖胶囊、抗痫胶囊)对海马神经元惊厥损伤的保护作用和作用机制。方法:将无镁诱导的海马神经元放电模型分为正常组、无镁组、MK801(地卓西平)组、抗痫胶囊组、茸菖胶囊组、熄风胶囊组,给予相应处理后6h、24h、72h,比较神经元放电频率、NMDA受体通道电流及细胞内游离[Ca~(2+)]i浓度。结果:放电频率:6h、24h各组较无镁组放电次数减少;72h MK801、抗痫组、熄风组较无镁组放电次数减少。NMDA受体通道电流:72h无镁组与正常组比较,通道电流增多;6h、72h抗痫组,72h茸菖组较无镁组通道电流减少。细胞内游离[Ca~(2+)]i浓度:三个时点无镁组Ca~(2+)浓度高于正常组;三个时点MK801组、熄风胶囊组,24h、72h抗痫胶囊组,72h茸菖胶囊组较无镁组Ca~(2+)浓度降低。结论:熄风胶囊、茸菖胶囊、抗痫胶囊可能通过减少NMDA受体通道电流,降低细胞内Ca~(2+)浓度,达到抑制海马神经元反复高频放电,减轻Ca~(2+)超载造成的细胞毒性,从而起到神经保护作用。     

中药复方对无镁诱导培养的发育期大鼠海马神经元细胞活力及其凋亡的影响

目的:探讨中药复方对惊厥性海马神经元细胞活力及其凋亡的影响。方法:将无镁诱导的海马神经元放电模型分为对照组、无镁组、MK801组(仅用于细胞凋亡试验部分)、抗痫组、茸菖组、熄风组,给予相应处理后6 h、24 h、72h,比较海马神经元的细胞LDH浓度及其凋亡率。结果:(1)处理6 h、24 h、72 h后,3个不同浓度3个时间点无镁组LDH值与正常组相比均无统计学差异。处理6 h后15%抗痫组、15%熄风组LDH值较无镁组明显降低,统计学分析均有显著性差异(P0.05);处理24 h后15%抗痫组、15%茸菖组、15%熄风组LDH值较无镁组明显降低,统计学分析均有显著性差异(P0.05);处理72 h后10%抗痫组LDH值较无镁组降低,统计学分析有显著性差异(P0.05)。(2)处理6 h、24 h、72 h后,无镁组细胞凋亡率明显高于对照组,统计学分析具有显著性差异(P0.05)。药物干预组中MK801在三个时点的细胞凋亡率均明显下降,均具有统计学差异(P0.05);中药复方组的细胞凋亡率与无镁组相比均有不同程度的降低,但仅茸菖组在72 h与无镁组相比有统计学差异(P0.05)。中药复方组在其他时点的细胞凋亡率与无镁组相比无统计学差异。结论:中药复方对惊厥性海马神经元的细胞活力具有一定的增强作用,可逆转无镁处理引起的细胞凋亡,具有保护神经细胞的作用。     

基于P38 MAPK信号通路探讨艾灸督脉对APP/PS1双转基因AD小鼠自噬水平的研究

摘要：目的：观察p38丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路来探讨艾灸督脉“百会”“大椎”“风池”穴对APPswe/PS1de9（APP/PS1）双转基因阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）小鼠脑内β-淀粉样蛋白（amyloid β-peptide,Aβ）清除功能的影响。方法：将48只APP/PS1双转基因AD小鼠随机分为模型组、艾灸组、西药Ⅰ组、西药Ⅱ组,每组小鼠12只且相同年龄相同条件的C57BL/6J雄性小鼠作为对照组。艾灸组小鼠实按灸“百会”、雀啄灸“大椎”和“风池”,每次灸20min,一天一次,治疗2周;西药Ⅰ组每只小鼠腹腔注射雷帕霉素,2mg?kg-1?d-1,治疗2周;西药Ⅱ组在艾灸组治疗基础上同时给予3-甲基腺嘌呤腹腔注射,1.5mg?kg-1?d-1,治疗2周;模型组和对照组动物不给予任何干预并常规饲养2周。各组小鼠于治疗结束后,用免疫组织法、透射电镜法、Western blot法依次分别检测小鼠皮质和海马脑区Aβ1-42 表达水平、海马区自噬体形成和海马组织p38MAPK、Bcl-2、Beclin-1相关蛋白表达。结果：免疫组织化学结果显示,与对照组相比,模型组小鼠大脑皮质和海马区Aβ1-42 蛋白表达阳性增多（P﹤0.01）;与模型组相比,艾灸组、西药Ⅰ组、西药Ⅱ组小鼠大脑皮质和海马区Aβ1-42 蛋白表达阳性减少（P﹤0.01）;与艾灸组相比,西药Ⅰ组大脑皮质和海马区Aβ1-42 蛋白表达差异无统计学意义（P﹥0.05）,西药Ⅱ组小鼠大脑皮质和海马区Aβ1-42 蛋白表达阳性增多（P﹤0.01）。透射电镜结果显示,模型组海马区可见神经元变形、萎缩或不规则,细胞胞质内自噬泡减少;艾灸组海马区有部分神经元变形、萎缩、不规则,胞质内自噬泡增多;西药Ⅰ组胞质内自噬泡增多,神经元变形;西药Ⅱ组偶见少量自噬泡和较多变形神经元。Western blot结果显示,模型组p38 MAPK、Bcl-2蛋白表达较对照组显著升高（P﹤0.05）,而模型组Beclin-1蛋白表达较对照组显著下降（P﹤0.05）。与模型组相比,艾灸组、西药Ⅰ组、西药Ⅱ组小鼠p38MAPK、Bcl-2蛋白表达均明显下降（P﹤0.05）,但Beclin-1蛋白表达上升（P﹤0.05）。与艾灸组相比,西药Ⅰ组小鼠p38MAPK、Bcl-2蛋白表达稍微升高（P﹤0.05）,而Beclin-1蛋白表达稍微下降（P﹤0.05）;西药Ⅱ组小鼠p38MAPK、Bcl-2蛋白表达显著升高（P﹤0.05）,而Beclin-1蛋白表达显著下降（P﹤0.05）。与西药Ⅰ组相比,西药Ⅱ组小鼠p38MAPK、Bcl-2蛋白表达显著升高（P﹤0.05）,Beclin-1蛋白表达显著下降（P﹤0.05）。结论：通过加速自噬的作用,艾灸督脉可以清除APP/PS1双转基因AD小鼠脑区Aβ1-42 蛋白异常沉积,作用机制与艾灸督脉抑制P38 MAPK信号通路的异常激活可能有关。     

丹参酮ⅡA注射液对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠皮质神经元自噬及Akt-mTOR通路的影响

目的观察丹参酮ⅡA注射液对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠皮质神经元自噬及Akt-mTOR通路影响并探讨其机制。方法 7日龄SD新生大鼠80只,随机平均分为5组,分别为假手术组、模型组及经丹参酮ⅡA处理的高剂量组(0.1 mg/g)、中剂量组(0.05 mg/g)、低剂量组(0.02 mg/g)。Rice法造模,透射电镜观察新生大鼠大脑皮质神经元变化情况,TTC染色检测脑梗死情况,蛋白免疫印迹检测脑组织LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin-1、p-Akt、p-mTOR、p-S6蛋白表达情况。结果假手术组神经元结构正常,模型组中观察到皮质神经元中存在大量的自噬体和自噬溶酶体,其中泡状自噬体中包裹有可见的细胞质结构。相较于模型组,高剂量组、中剂量组、低剂量组中自噬体数量明显减少,且呈一定的剂量依赖性(P 0.05)。与假手术组相比,模型组中幼鼠脑梗死面积显著增加(P 0.05)。与模型组相比,高剂量组、中剂量组、低剂量组中脑梗死面积显著减小,且呈一定的剂量依赖性(P 0.05)。与假手术组相比,模型组中LC3-Ⅰ/(LC3-Ⅰ+LC3-Ⅱ)的比值与Beclin-1蛋白表达水平显著增高(P 0.05)。与模型组相比,高剂量组、中剂量组、低剂量组中LC3-Ⅰ/(LC3-Ⅰ+LC3-Ⅱ)的比值与Beclin-1蛋白表达水平显著降低,且呈剂量依赖性(P 0.05)。与假手术组相比,模型组中pAkt、p-mTOR、p-S6蛋白表达水平均显著降低(P 0.05)。与模型组相比,高剂量组、中剂量组、低剂量组中pAkt、p-mTOR、p-S6蛋白表达水平均显著增加,且呈剂量依赖性(P 0.05)。结论丹参酮ⅡA对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤大脑皮质神经元自噬具有显著的抑制作用,推测其机制可能为通过激活Akt-mTOR信号转导通路实现的。     

痰瘀同治方对心肌缺血再灌注损伤过程中自噬与凋亡相关基因调节作用研究

目的:观察痰瘀同治方对心肌缺血再灌注损伤(IR)不同阶段自噬与凋亡相关基因的调控作用。方法:将80只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、痰瘀同治方组(43 g·kg~(-1)ig)及3-MA干预组(13.5 mg·kg~(-1)iv)。可逆性冠脉左前降支结扎缺血30 min,再灌注2 h复制心肌缺血(MI)及IR模型,利用全自动生化仪检测血清肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)含量;采用RT-PCR法检测各组大鼠心肌自噬基因Beclin-1,心肌微管相关蛋白轻链3蛋白(LC3)及抗凋亡蛋白Bcl-2表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠在缺血及再灌注阶段血清CK,LDH含量及心肌Beclin-1,LC3 mRNA表达均显著增强,且Bcl-2 mRNA表达减弱(P0.01);与模型组比较,痰瘀同治组能降低缺血期血清CK及再灌注期CK,LDH含量(P0.05),抑制缺血期Beclin-1 mRNA及再灌注期Beclin-1,LC3 mRNA表达,上调缺血期及再灌注期Bcl-2 mRNA表达(P0.05,P0.01);与假手术组,3-MA组比较,痰瘀同治组在缺血期可上调Beclin-1,LC3 mRNA表达(P0.01)。经相关性检验,缺血期及再灌注期Beclin-1与Bcl-2均呈负相关表达(P0.01)。结论:痰瘀同治方通过促进缺血期自噬发生及抑制再灌注期自噬过表达,同时促进抗凋亡蛋白Bcl-2表达而发挥其对缺血再灌注损伤心肌的保护作用。     

苗药金乌健骨方对类风湿关节炎滑膜细胞自噬的调控作用研究

目的:探讨金乌健骨方对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞自噬基因LC3、Beclin-1、Bcl-2、VPS34表达的影响。方法:取3代RA滑膜细胞,加金乌健骨方总提物低、中、高浓度(0.06、0.6、6.0 mg/mL)及雷公藤多苷(0.03 mg/mL)干预24 h后,采用透射电镜观察细胞自噬情况,PCR检测LC3、Beclin-1、Bcl-2、VPS34 mRNA表达水平;Western blot检测LC3、Beclin-1蛋白表达。结果:空白对照组细胞无明显自噬小体或自噬溶酶体,各给药组滑膜细胞胞浆中自噬小体和自噬溶酶体明显增多。与空白对照组比较,除金乌健骨方低浓度组外,各给药组滑膜细胞LC3、Beclin-1、VPS34 mRNA表达均显著降低,Bcl-2 mRNA表达显著升高,LC3、Beclin-1蛋白表达显著降低(P0.01)。以金乌健骨方高浓度组和雷公藤多苷组作用最明显。结论:苗药金乌健骨方能抑制RA滑膜细胞自噬相关基因LC3、Beclin-1、VPS34的表达,增强Bcl-2的表达水平。     

月华胶囊对耐多药结核分支杆菌感染自噬的影响

目的:以月华胶囊含药血清对耐多药结核分支杆菌感染小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)进行干预,探讨其对耐多药结核分支杆菌感染巨噬细胞自噬的作用及其机制。方法:低温冷冻干燥法制备月华胶囊,大鼠按3.02 g·kg^-1灌胃给药7 d,制备月华胶囊含药血清。体外培养RAW264.7,耐多药结核分子杆菌。以细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)检测含药血清对RAW264.7的增殖能力并选定其有效浓度。细胞分为模型组(10%胎牛血清);月华胶囊含药血清组(10%月华胶囊);自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)+月华胶囊含药血清组(5 mg·L^-1的3-MA+10%月华胶囊含药血清);雷帕霉素(Rap)组(200 mg·L^-1的Rap+10%胎牛血清);正常组(10%胎牛血清)。除正常组外,各组细胞培养24 h后,按细胞-细菌1∶10感染4 h。透射电镜观察细胞自噬体的出现和形成;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中I型微管相关蛋白轻链3(LC-3Ⅰ),Ⅱ型微管相关蛋白轻链3/I型微管相关蛋白1轻链3(LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ),Beclin-1蛋白的表达;间接免疫荧光染色法观察细胞中LC3B荧光颗粒、斑点及亮度;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞中LC3,Beclin-1 mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组细胞未见自噬体,细胞中LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量均无显著变化,细胞无荧光颗粒、斑点,无荧光亮度。与模型组比较,月华胶囊含药血清组及Rap组细胞,均可观察到自噬体的形成,细胞LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量值均明显升高(P<0.05),月华胶囊含药血清组细胞荧光颗粒和荧光斑点明显增多,Rap组细胞荧光颗粒和荧光斑点增多非常明显,荧光闪亮,可判定细胞荧光呈现为阳性;自噬抑制剂3-MA+月华胶囊含药血清组细胞未见自噬体,细胞中LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量值均无明显升高。结论:月华胶囊含药血清能使耐多药结核分支杆菌感染细胞产生自噬而发挥抗结核的免疫效应,其机制是通过调控自噬相关蛋白LC3,Beclin-1蛋白及其mRNA的表达水平,促使LC3-I趋向LC3-Ⅱ的转化加快而实现的。     

痰瘀同治方对心肌缺血再灌注损伤大鼠核因子-κB通路及心肌自噬、凋亡的影响

目的观察痰瘀同治方对心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)大鼠核因子(NF)-κB通路及心肌自噬、凋亡的影响,探讨该方抗MI/RI作用机制。方法 40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、吡咯烷二硫代甲酸铵(PDTC)干预组及痰瘀同治组。可逆性冠脉左前降支结扎缺血30 min、再灌注2 h复制MI/RI模型。造模前,痰瘀同治组每日予痰瘀同治方水煎液灌胃,其他各组给予生理盐水灌胃,连续3周。RT-PCR检测各组大鼠心肌NF-κB、自噬基因Beclin-1表达,Western blot检测心肌促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠心肌NF-κB、Beclin-1 m RNA及Bax蛋白表达均显著增强,且Bcl-2蛋白降低(均P0.01);与模型组比较,痰瘀同治组能抑制再灌注后NF-κB、Beclin-1 m RNA及Bax蛋白高表达(均P0.01),且作用与PDTC干预组相当(P0.05),痰瘀同治组能显著上调心肌Bcl-2表达,且作用优于PDTC干预组(P0.01)。结论痰瘀同治方通过抑制NF-κB活化,改善心肌细胞凋亡,抑制自噬而达到保护心肌的作用。     

和颜坤泰胶囊对卵巢去势大鼠子宫形态及细胞凋亡的影响

[目的]研究和颜坤泰胶囊对卵巢去势模型大鼠子宫形态及细胞凋亡的影响。[方法]以雌性去势大鼠为动物模型,分为空白对照组,假手术组,模型组,补佳乐组,莉芙敏组,和颜坤泰胶囊8、4、2 g生药/kg剂量组。给药8周后,观察药物对子宫病理学的影响,检测子宫细胞凋亡率及Bcl-2 m RNA、Bax m RNA和蛋白的表达。[结果]和颜坤泰胶囊可增加去势大鼠子宫横截面及壁厚,肌层面积及厚度,内膜面积及厚度,上皮厚度和腺体数(P0.01,P0.05);能降低去势大鼠子宫细胞的凋亡率(P0.01,P0.05),升高子宫Bcl-2 m RNA和蛋白的表达(P0.01,P0.05),降低Bax m RNA和蛋白的表达(P0.01,P0.05)。[结论]和颜坤泰胶囊有一定的子宫营养作用,可通过调控Bcl-2和Bax基因与蛋白的表达来抑制子宫细胞的凋亡。     

百事乐胶囊对慢性应激抑郁模型大鼠海马神经元凋亡的影响

目的: 探讨百事乐胶囊对慢性应激抑郁模型大鼠行为活动、海马神经元凋亡及凋亡因子B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2),Bcl-2相关x蛋白(Bax)表达的影响。方法: 将SD大鼠随机分为6组,即空白对照、抑郁模型、氟西汀、百事乐胶囊高、中、低(2.88,1.44,0.72 g·kg^-1)剂量组,采用慢性温和不可预见性应激加孤养的方式建立抑郁模型,造模同时ig给药,连续21 d,测定各组大鼠体重变化,Open-field、1%蔗糖偏食度测定大鼠行为学变化,TUNEL染色测定海马神经元凋亡变化,免疫组化检测海马Bcl-2,Bax的表达。结果: 与正常组比较,模型组体重增加、水平及垂直活动次数、蔗糖偏食度明显下降(P<0.01),凋亡细胞所占比例及凋亡细胞计数明显增加 (P<0.01);Bcl-2表达下降(P<0.01),Bax表达上升(P<0.01)。百事乐胶囊高剂量在第14、21天提升模型大鼠体重(P<0.01),中剂量在第21天升高模型大鼠体重(P<0.05);高、中剂量能提升模型大鼠水平或垂直活动次数(P<0.01 或P<0.05);高、中剂量能提高模型大鼠蔗糖偏食度,降低CA1,CA3区凋亡细胞所占比例及凋亡细胞计数(P<0.01或P<0.05),且高剂量能降低模型大鼠DG区凋亡细胞所占比例及凋亡细胞计数,升高海马CA3区Bcl-2并降低Bax的表达(P<0.05)。结论: 百事乐胶囊能通过减少海马神经元的凋亡而达到抗抑郁的作用。     

莱菔承气汤对重症急性胰腺炎大鼠肾脏细胞凋亡的影响

[目的]探讨中药莱菔承气汤对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肾脏细胞凋亡及凋亡基因Bax和Bcl-2表达的影响。[方法]健康Wistar大鼠72只,随机分为空白对照组(24只)、SAP模型组(24只)和莱菔承气汤治疗组(24只)。3组大鼠均于术后6 h,12 h,24 h心脏采血,检测血肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN)。Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞术检测肾脏细胞凋亡指数,RT-PCR检测肾脏组织Bax、Bcl-2 mRNA的表达。[结果]与对照组相比较,随着时间变化,SAP模型组大鼠血肌酐、血尿素氮水平明显升高(P0.01),肾脏细胞凋亡指数趋于升高,Bax mRNA表达明显升高(P0.01),Bcl-2 mRNA表达明显下降(P0.01)。与SAP模型组相比较,莱菔承气汤治疗组大鼠血肌酐、血尿素氮水平明显下降(P0.01),肾脏细胞凋亡指数下降,Bax mRNA表达明显下降(P0.01),Bcl-2 mRNA表达明显升高(P0.01)。[结论]中药莱菔承气汤可能通过调节凋亡相关基因,减少肾脏细胞凋亡以减轻肾脏病理损伤,从而改善SAP时并发的急性肾功能障碍。     

茸菖胶囊对戊四唑致痫大鼠学习记忆能力及海马苔藓纤维出芽的影响

[目的]观察茸菖胶囊对戊四唑致癫痫大鼠学习记忆能力及海马组织苔藓纤维发芽(MFS)的影响。[方法]以戊四唑点燃大鼠为模型,随机分为中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、丙戊酸钠组、模型组、正常组,水迷宫实验记录逃避潜伏期和跨越平台次数,戊四唑惊厥阈实验测定惊厥潜伏期,Timm染色法观察海马苔鲜纤维出芽。[结果]各治疗组大鼠与治疗前相比,均可减少大鼠的发作程度,水迷宫实验:中药组逃避潜伏期和跨越平台次数均明显短于模型组(P>0.05)。Timm染色结果表明:各治疗组海马CA3区及齿状回分子层Timm染色颗粒MFS评分低于模型组(P<0.01)。[结论]茸菖胶囊可以有效控制癫痫大鼠的发作次数及级别,改善戊四唑致癫痫大鼠的学习记忆能力,其作用机制与抑制海葬纤维异常出芽,从而保护海马神经元有关。     

坤泰胶囊对卵巢储备功能下降大鼠卵巢凋亡调控蛋白Bcl-2,Bax表达的影响

目的:探讨坤泰胶囊对去氧乙烯基环己烯(4-vinylcyclohexene diepoxide,VCD)所致卵巢储备功能下降(decreasing ovarian reserve,DOR)大鼠凋亡调控蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响,研究该药的作用机制。方法:SD雌性大鼠连续腹腔注射VCD(80 mg·kg~(-1))15 d,建立与人类相似的生理性卵巢储备功能下降模型。将动物分为正常组,模型组,坤泰胶囊高、中、低剂量组(1.89,0.63,0.21 g·kg-1),补佳乐(戊酸雌二醇,0.13 mg·kg~(-1))组,于造模第1天开始灌胃给药,每天1次,连续45 d。酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清激素卵泡刺激素(FSH),黄体生成素(LH)及雌二醇(E2)水平,苏木素-伊红(HE)染色观察卵巢、子宫的病理组织变化,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测卵巢组织Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组FSH与LH明显升高,E_2明显降低(P0.05);模型组卵巢、子宫体积明显缩小,原始卵泡与初级卵泡数目明显减少,子宫内膜变薄,腺体数目减少;模型组大鼠卵巢Bcl-2蛋白表达明显减少,Bax蛋白表达明显增加(P0.05),Bcl-2/Bax显著下降(P0.01)。与模型组比较,坤泰胶囊高、中、低剂量组FSH明显降低,E_2明显升高(P0.05);补佳乐组FSH,LH明显降低,E2明显升高(P0.05)。各给药组卵巢、子宫体积增大,原始卵泡与初级卵泡数目增多,子宫内膜变厚,腺体数目增加,改善程度顺序依次为坤泰胶囊低、中、高剂量组、补佳乐组。坤泰胶囊高、中、低剂剂量组及补佳乐组大鼠卵巢Bcl-2蛋白表达明显增加(P0.05,P0.01);坤泰胶囊高、中、低剂量组及补佳乐药组大鼠卵巢Bax蛋白表达减少(P0.05);坤泰胶囊高、中、低剂量组及补佳乐组大鼠卵巢Bcl-2/Bax升高(P0.05,P0.01)。结论:坤泰胶囊可能通过上调卵巢Bcl-2蛋白表达及下调Bax蛋白表达,抑制卵泡的凋亡,从而改善卵巢功能。     

基于PI3K/Akt通路的冠心病痰瘀互结证大鼠发病机制研究

[目的]基于磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)通路探讨冠心病痰瘀互结证大鼠模型的发病机制。[方法] Wistar雄性大鼠,随机分为空白组、假手术组、痰浊组、血瘀组、痰瘀互结组。第54天,血瘀组和痰瘀互结组结扎冠状动脉左前降支,假手术组只穿线不结扎。其中空白组、血瘀组、假手术组采用普通饲料喂养8周,痰浊组和痰瘀互结组采用高脂饲料喂养8周。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记测定(Tunel)染色的方法观察心肌细胞凋亡情况,采用蛋白免疫印迹(Western blot)方法检测Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关的促凋亡蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达情况。[结果] Tunel染色结果显示:痰浊组、血瘀组和痰瘀互结组细胞凋亡明显增多。Western blot结果显示,与空白组比较,血瘀组和痰瘀互结组Akt、p-Akt和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P0.05或P0.01);Bax和Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P0.05或P0.01);痰浊组p-Akt蛋白表达明显升高(P0.05),Akt、Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达无统计学差异(P0.05)。[结论]心肌细胞Akt、p-Akt和Bcl-2蛋白的下调,Bax和Caspase-3蛋白的上调,可以激活PI3K/Akt通路,促进细胞凋亡,此过程可能是冠心病痰瘀互结证的发病机制之一。     

芪玄益心胶囊对冠脉结扎大鼠心肌肝细胞生长因子及血管内皮生长因子mRNA表达的影响

[目的]评价芪玄益心胶囊对冠脉结扎大鼠心肌梗死的治疗作用,并探讨其机制.[方法]建立大鼠冠脉结扎心肌梗死模型,将模型大鼠随机分为麝香保心丸组、芪玄益心胶囊高、中、低剂量组、模型组,并设空白对照组.观察各组模型心肌梗死率和心肌组织肝细胞生长因子(HGF)mRNA、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达,并与空白组对照.[结果]模型组及各治疗组与空白组比较心肌梗死率、HGFmRNA、VEGFmRNA表达均显著增高(P＜05).芪玄益心胶囊各剂量组与模型组比较心肌梗死率明显降低,VEGFmRNA、HGFmRNA表达明显增高(P＜0.05),以高剂量组变化最显著,高剂量组在降低心肌梗死率,增高VEGFmRNA、HGFmRNA表达方面均优于麝香保心丸组(P＜0.05).[结论]芪玄益心胶囊能够降低心肌梗死率,并推测芪玄益心胶囊抗心肌梗死的作用与增加VEGFmRNA、HGFmRNA表达相关.     

心身1号片对大鼠应激性溃疡胃黏膜Bcl-2和Bax表达的影响

[目的]观察心身1号片对大鼠应激性溃疡胃黏膜Bcl-2和Bax表达的影响.[方法]Wistar大鼠水浸-束缚应激12h,用免疫组化方法检测心身1号片对胃黏膜组织Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.[结果]Bcl-2和Bax在正常大鼠胃黏膜组织中有散在的表达;心身1号片各剂量组Bcl-2阳性细胞数目较造模组增多,两者具有明显的差异(P＜0.01);造模组Bax阳性细胞数目较心身1号片各剂量组增多,两者也具有明显的差异(P＜0.01);在造模组和心身1号片各剂量组中,Bax阳性细胞数目均比Bcl-2增加(P＜0.01).[结论]中药心身1号片能够促进应激性溃疡大鼠胃黏膜组织Bcl-2的表达,降低Bax的表达,这可能是心身1号治疗本病的作用机制之一.