肿瘤坏死因子-α诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型的建立

目的:应用肿瘤坏死因子d(TNF-α)诱导3T3-L1脂肪细胞,探讨建立可靠胰岛素抵抗(IR)细胞模型的方法.方法:3T3-L1前脂肪细胞经3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、地塞米松、胰岛素诱导分化成3T3-L1脂肪细胞,将其与20,10,5μg·L-1TNF-α共孵育,100 nmol·L-1胰岛素作用30 min刺激脂肪细胞糖转运.以葡萄糖氧化酶法测定培养基上清液葡萄糖含量,观察TNF-α对脂肪细胞糖摄取的影响,鉴定IR模型.结果:TNF-α抑制胰岛素诱导前、后的脂肪细胞糖转运,抑制作用呈剂量依赖性,其中20 μg·L-1TNF-α的抑制率分别为79.2％和81.4％(P＜0.05).结论:肿瘤坏死因子α可诱导3T3-L1脂肪细胞产生IR,这种细胞模型简便、可靠.     

黄芪预防肿瘤坏死因子-α所致胰岛素抵抗

目的：探讨黄芪对大鼠注射肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）后发生胰岛素抵抗（ＩＲ）的预防作用。方法：取正常大鼠分别给予黄芪煎剂和等量蒸馏水预先灌胃１周，尾静脉注射小剂量ＴＮＦα４ｈ后，以葡萄糖－胰岛素耐量试验（ＧＩｎｓＴＴ）检测其胰岛素敏感性等一些指标的变化。结果：外源性ＴＮＦα可致正常大鼠出现高胰岛素血症，胰岛素敏感性Ｋ值下降，并有血浆胰高血糖素、促肾上腺皮质激素和血脂水平的升高，肝脏和红色股四头肌糖原含量减少，肝脏中甘油三酯（ＴＧ）含量升高。黄芪除对血脂和肝脏中ＴＧ无明显改善外，对其它指标均有不同程度的改善作用。结论：黄芪对外源性ＴＮＦα所致ＩＲ有明显的预防作用，可能与降低血中拮抗激素水平和增加组织糖原合成有关。     

肿瘤坏死因子α与胰岛素抵抗的研究

糖尿病是一种以血糖代谢紊乱为特点的常见的慢性疾病 ,其中 90 %以上为 2型 ,而胰岛素抵抗又为 2型糖尿病的根本病机之一。目前对 2型糖尿病的基本共识为 :2型糖尿病不是一种单基因病 ,其发生是多种基因相互作用的结果 ,即多种基因和环境因素共同参与了糖尿病的致病过程 ,其中环境因素(如肥胖 )在决定基因作用的外显方面起到重要的作用。肿瘤坏死因子α(TNFα)作为导致胰岛素抵抗的环境因素之一 ,正日益成为研究热点。1　TNFα的生物学效应八十年代 ,TNFα在细菌性感染动物中随其同源近亲淋巴毒素 (Iymphotoxin ,LT -α或TNF - β)一…     

电针对肥胖大鼠胰岛素抵抗及肿瘤坏死因子α的影响

目的:观察针刺对肥胖大鼠体重、血糖、胰岛素含量、脂肪组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响。方法:随机挑选10只普通饲料喂养为正常组。另一组80只高脂致肥饲料喂养,将造模成功的肥胖大鼠30只随机分为肥胖模型组和针刺组,每组各15只。采用实时定量PCR技术测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达水平,酶联免疫测定法测定血清中胰岛素(insu lin)的含量,生化比色法测定血清葡萄糖含量。结果:针刺治疗组体重、血糖、血清胰岛素、脂肪组织中TNF-α水平均较模型组有不同程度的降低,胰岛素敏感指数有所提高。结论:针刺可以改善肥胖大鼠胰岛素抵抗和糖代谢紊乱状态。     

糖脂平对胰岛素抵抗大鼠血清肿瘤坏死因子-α水平及其脂肪组织mRNA表达的影响

目的观察糖脂平对喂养型胰岛素抵抗大鼠血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平及脂肪组织mRNA表达的影响,探讨其抗动脉粥样硬化（AS）的作用机制。方法将28只清洁级SD大鼠随机分为对照组、模型组、中药组和西药组,采用高脂高盐饲料喂养,造模成功后分别给予生理盐水、糖脂平和罗格列酮灌胃。给药8周后,用放免法测定各组大鼠血清TNF-α水平,反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定附睾旁脂肪组织TNF-αmRNA表达水平。结果模型组大鼠血清TNF-α水平为（1.78±0.13）ng/mL,较对照组大鼠明显升高,糖脂平或罗格列酮灌胃可分别使模型大鼠血清TNF-α水平降至（1.46±0.13）ng/mL和（1.32±0.16）ng/mL,差异有统计学意义（P〈0.01）。模型组大鼠脂肪组织TNF-αmRNA表达量较对照组显著升高（P〈0.01）,与模型组相比,糖脂平或罗格列酮灌胃可分别使TNF-αmRNA下降30.2%和31.6%,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论糖脂平改善胰岛素抵抗和抗AS作用可能与其降低血清TNF-α水平,抑制TNF-αmRNA过度表达有关。     

肿瘤坏死因子α和可溶性肿瘤坏死因子受体2与多囊卵巢综合征胰岛素抵抗机制的关系

目的 :探讨血浆肿瘤坏死因子α(TNFα)、可溶性肿瘤坏死因子受体 2 (STNFR2 )与多囊卵巢综合征 (PCOS)患者胰岛素抵抗 (IR)和血清雄激素 (T)水平的相互关系。方法 :将 5 0例PCOS患者分为PCOS肥胖组、PCOS非肥胖组 ,将正常肥胖妇女、正常非肥胖妇女各 2 5例作为肥胖对照组和非肥胖对照组。测定 4组的血清性激素六项、TNFα ,STNFR2水平及血清胰岛素浓度、胰岛素敏感指数(ISI)等 ,并做对比和相关性分析。结果 :PCOS肥胖组及肥胖对照组的TNFα水平明显高于非肥胖对照组 (P <0 .0 5 )。PCOS肥胖组和PCOS非肥胖组的STNFR2均高于非肥胖对照组 ,且以PCOS肥胖组升高更为明显 (P <0 .0 5 )。PCOS肥胖组和PCOS非肥胖组ISI较非肥胖对照组明显降低 (P <0 .0 5 )。PCOS肥胖组和PCOS非肥胖组血浆T水平均显著高于肥胖对照组和非肥胖对照组 (P <0 .0 5 )。在PCOS肥胖组和肥胖对照组中 ,血浆TNFα与其ISI均呈负相关 (P <0 .0 5 )。在PCOS肥胖组、PCOS非肥胖组和肥胖对照组中 ,血浆STNFR2与其ISI均呈负相关。各组TNFα和STNFR2水平与其对应血浆T浓度均无明显相关性 (P >0 .0 5 )。结论 :PCOS患者存在不同程度的IR ;TNFα与STNFR2水平的升高与PCOS患者发生IR有关而与T无关。     

针刺对胰岛素抵抗模型大鼠血清胰岛素抗体和肿瘤坏死因子α的影响

目的:探讨治疗胰岛素抵抗的有效方法及其作用机理。方法:40只SD大鼠随机平均分成①空白组、②模型1组、③模型2组、④针刺1组、⑤针刺2组。②③④⑤组采用高脂高糖高盐饲料喂养复制胰岛素抵抗模型成功后,①③⑤组给予普通饲料喂养,②④组给予高脂高糖高盐饲料饲养,④⑤组同时给予针刺治疗。2w后检测大鼠空腹血糖(FBG)、血浆胰岛素(INS)、胰岛素敏感指数(ISI)、血清胰岛素抗体(INS-Ab)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)。结果:与①组比较,②组大鼠FBG、INS升高,ISI降低(均P<0.01);与②组比较,③④⑤组大鼠FBG、INS下降(均P<0.01),ISI上升(P<0.05,P<0.01);各组INS-Ab( )例数均为0;②组大鼠TNF-α较①组升高(P<0.01),③④⑤组大鼠TNF-α均较②组下降(P<0.01)。结论:针刺对胰岛素抵抗有逆转效应,饮食能促进此效应。其作用机理可能是通过降低TNF-α的分泌来实现的。     

糖克煎剂对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠TNF-α及GLUT4在组织中表达的影响

目的：研究糖克煎剂对2型糖尿病胰岛素抵抗模型大鼠肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及葡萄糖转运体4（GLUT4）在组织中表达的影响,探讨糖克煎剂对胰岛素抵抗的作用机制。方法：用链脲佐菌素（STZ）加高热量饲料的方法复制出大鼠模型,分别用中药复方糖克煎剂和罗格列酮作用于模型大鼠;用胰岛素敏感指数（ISI）衡量胰岛素抵抗程度;用RT-PCR法检测脂肪组织中TNF-αmRNA的表达水平;用免疫组化ABC法观测骨骼肌组织中GLUT4的表达水平,并用电镜观察其在骨骼肌细胞中的分布情况。结果：模型组ISI明显低于正常对照组（P〈0.05）,治疗组ISI与模型组相比均明显提高（P〈0.05）;模型组脂肪组织中TNF-αmRNA的表达明显高于正常对照组和治疗组（P〈0.01）;免疫组化发现骨骼肌组织中GLUT4的蛋白表达各组间差异无显著性,但电镜观察显示正常对照组的GLUT4阳性颗粒多靠近骨骼肌细胞膜边缘,而模型组的GLUT4阳性颗粒靠近骨骼肌细胞膜边缘者则明显减少。结论：糖克煎剂可能通过减少TNF-α和增加GLUT4的转位而非影响其蛋白水平而改善胰岛素抵抗。     

糖耐康对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的 探讨中药糖耐康治疗2型糖尿病的作用机制.方法 44只Wistar大鼠随机分为中药组(n=18),空白组(n=20),西药组(n=6).中药组给予糖耐康灌胃,制备中药血清;西药组给予吡格列酮灌胃制备西药血清;空白组给予蒸馏水灌胃制备空白血清.用3T3-L1脂肪细胞制备胰岛素抵抗模型,分为模型组、吡格列酮组及糖耐康高、中、低剂量组,并以正常脂肪细胞作为空白组.糖耐康高剂量组予含中药血清的培养液,糖耐抗中剂量组予含1份空白血清及2份中药血清配置的培养液,糖耐康低剂量组予含2份空白血清及1份中药血清的培养液,吡格列酮组予含西药血清的培养液,空白组和模型组给予基础培养液.各组均培养72h后采用ELISA法测各组细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,免疫荧光法观察各组细胞内TNF-α蛋白表达,RT-PCR法测定细胞内TNF-α mRNA水平. 结果 模型组脂肪细胞TNF-α蛋白水平较正常组显著升高(P＜0.01);各给药组TNF-α蛋白水平均显著低于模型组(P＜0.01),且糖耐康高、中剂量组显著低于吡格列酮组(P＜0.01).模型组细胞内有大量TNF-α阳性反应颗粒,糖耐康中剂量组和高剂量组及吡格列酮组TNF-α阳性反应颗粒较模型组明显减少.与模型组比较,糖耐康高剂量组、中剂量组及吡格列酮组TNF-α mRNA表达明显减少,且以糖耐康中剂量组最少.结论 糖耐康能够有效改善成熟的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗,明显降低胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞中TNF-α的蛋白及其mRNA表达水平,这可能是其治疗2型糖尿病的作用机制之一.     

葛根素对自发性高血压大鼠肿瘤坏死因子-α的影响

目的:观察葛根素对自发性高血压大鼠胰岛素敏感性及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.方法:选取15周龄的自发性高血压大鼠为动物模型,以葛根素注射液治疗,观察空腹血糖、胰岛素、胰岛素敏感性指数(ISI)、血压、TNF-α等指标的变化,并与贝那普利组及病理对照组比较.结果:葛根素组及贝那普利组治疗后空腹血糖、胰岛素、血压及TNF-α均有显著下降,ISI明显升高,与病理对照组比较有显著差异(P＜0.01或P＜0.05).结论:葛根素能够降低TNF-α,有改善自发性高血压大鼠胰岛素抵抗的作用.     

阿司匹林对糖尿病大鼠脂肪细胞肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的研究阿司匹林对糖尿病大鼠脂肪细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mR-NA表达的影响,为临床防治2型糖尿病及微血管并发症提供理论基础和实验依据。方法用高糖高脂饮食及腹腔注射小剂量链脲佐菌素方法建立2型糖尿病大鼠模型,分为模型组、阿司匹林组和西药对照组,另选正常大鼠作为正常组。阿司匹林组给予阿司匹林450 mg/(kg.d)灌胃,西药对照组给予二甲双胍134 mg/(kg.d)灌胃。给药1个月后检测血糖、血脂、血清胰岛素含量和脂肪细胞TNF-αmRNA表达的变化。结果模型组大鼠血糖、血脂、血清胰岛素含量明显上升,脂肪细胞TNF-αmRNA表达显著升高;阿司匹林组和西药对照组以上指标均显著降低,组间比较,阿司匹林组明显低于模型组和西药对照组(P均<0.05)。结论阿司匹林能有效降低2型糖尿病大鼠脂肪细胞TNF-αmRNA表达和血糖、血脂、血清胰岛素浓度,其作用机制可能是通过抑制炎症因子释放而改善了胰岛素抵抗状态,因此有可能成为治疗糖尿病并发症的新的有效药物。     

3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型建立、优化及分子指标鉴定

[摘要]：目的：探讨3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗（Insulin Resistance,IR）模型建立条件、优化及分子指标鉴定。方法：采用3-异丁基-1-黄嘌呤（3-isobutyl-1-methylxanthine, IBMX）,地塞米松（Dexamethason,DEX）和胰岛素联合诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞,油红O染色鉴定。采用1μmol·L-1DEX诱导建立IR-3T3-L1脂肪细胞,1μmol·L-1DEX联合10μmol·L-1罗格列酮（Rosiglitazone,ROS）联合诱导建立IR-3T3-L1脂肪细胞。葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法（Glucose oxidase-peroxidase,GOD-POD）检测不同时间点细胞培养液葡萄糖含量,确认IR-3T3-L1细胞模型最佳诱导时间和IR状态稳定性;甘油磷酸氧化酶法(glycerol phosphate oxidase,GPO-POD)测定胞内甘油三酯（Triglyceride,TG）含量。荧光定量qPCR和Western blot法分别检测脂联素（Adiponectin,ADPN）和葡萄糖转运蛋白-4（Glucose transporter 4,GLUT4）mRNA基因和蛋白质表达水平。结果：DEX作用3T3-L1脂肪细胞96h葡萄糖消耗差值比例最大,为46.84%;DEX ROS作用72h葡萄糖消耗差值比例最大,为22.77%,可确认为两种IR模型建立的最佳时间点,其后可保持稳定IR状态至少60h。两类IR细胞中的GLUT4和ADPN mRNA和蛋白表达水平较正常组显著降低（P<0.01）,相较于DEX ROS组,DEX单独诱导细胞内GLUT4和ADPN mRNA和蛋白表达水平降低更显著。结论：DEX组和DEX ROS组两种诱导方法抑制GLUT4和ADPN mRNA和蛋白表达水平来建立稳定可靠的IR-3T3-L1细胞模型,但DEX单独诱导IR模型方法更稳定可能与更有效抑制了ADPN mRNA和蛋白表达导致葡萄糖消耗下降更为显著。     

葫芦巴4－羟基异亮氨酸对高糖诱导小鼠3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的影响

目的 研究葫芦巴活性成分4－羟基异亮氨酸（4-hydroxyisoleucine, 4-HIL）对高糖诱导的小鼠前脂肪细胞（3T3-L1）胰岛素抵抗的作用及其机制。方法 以25 mmol/L葡萄糖加0.6 nmol/L胰岛素诱导小鼠3T3-L1脂肪细胞建立胰岛素抵抗细胞模型,予以不同浓度4-HIL（5、10、20 μmol/L）进行干预。采用［3H］－脱氧-D-葡萄糖摄入法检测葡萄糖摄取率,PCR法检测肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-alpha,TNF-α）mRNA表达量,ELISA法检测细胞上清TNF-α蛋白水平。以棕榈酸（palmitic acid,PA）为对照。结果 25 mmol/L葡萄糖加0.6 nmol/L胰岛素作用18 h后,3T3-L1脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖转运抑制了63％;PCR显示脂肪细胞内TNF-α mRNA的表达较正常脂肪细胞明显增高（P<0.05）;ELISA显示细胞上清中的TNF-α分泌量增加70 pg/mL（P<0.05）。PA组表现出类似结果。分别加入5、10、20 μmol/L 4-HIL作用24 h后,3T3-L1脂肪细胞胰岛素刺激所产生的葡萄糖转运分别增加35％、50％、60％;PCR检测显示,脂肪细胞内TNF-α mRNA的表达随着药物浓度的增加呈递减趋势,与模型组及PA组比较,差异有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较,药物干预后脂肪细胞培养基上清TNF-α分泌水平分别下降10、18、39 pg/mL（P<0.05）。结论 4-HIL可以显著改善高糖诱导的小鼠3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗,同时4-HIL能够抑制TNF-α的分泌。     

温化固胎2号方干预痰瘀互结型胰岛素抵抗复发性流产患者血清白细胞介素-8、肿瘤坏死因子-α的研究

目的：观察二甲双胍联合温化固胎2号方治疗痰瘀互结型胰岛素抵抗复发性流产患者的临床疗效。方法：选取复发性流产伴胰岛素抵抗辨证属痰瘀互结型患者,共60例。用随机数字表生成两组数字,分为观察组（温化固胎2号方灌肠+二甲双胍片口服）和对照组（二甲双胍片口服）各30例。治疗3个月后比较两组患者白细胞介素-8、肿瘤坏死因子-α、空腹血糖、空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数、妊娠率。结果：治疗后两组患者安全性指标均未见明显异常,患者症状体征均有所改善。治疗后,观察组与对照组空腹胰岛素均明显降低（P <0.05）,血糖无明显改变（P> 0.05）,胰岛素抵抗指数降低但差异无统计学意义（P> 0.05）。与对照组相比,治疗组血糖、胰岛素、胰岛素抵抗指数差异均无统计学意义（P> 0.05）。治疗后两组白细胞介素-8、肿瘤坏死因子-α均下降,但白细胞介素-8下降明显,差异有统计学意义（P <0.05）,观察组肿瘤坏死因子-α下降明显（P <0.05）,对照组虽下降但差异无统计学意义（P> 0.05）;治疗后观察组白细胞介素-8明显低于对照组（P <0.05）,肿瘤坏死...     

穴位埋线对单纯性肥胖症患者肿瘤坏死因子-α和胰岛素抵抗的影响

目的:探讨穴位埋线治疗单纯性肥胖症的临床机理,为治疗效果的客观化评价提供依据。方法:80例单纯性肥胖患者随机分为埋线和针刺治疗组,主穴为梁丘、中脘、天枢、水分、丰隆、局部阿是穴,并辨证配以阴陵泉、内庭、太冲、气海、太溪穴。埋线1周进行1次,共4次;针刺治疗前5d为每日1次,以后隔日1次,共1个月。观察治疗前后患者的体重、体重指数(BMI)、空腹血清胰岛素(FINS)、空腹血糖(FBG)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化,并与正常人对照。结果:单纯性肥胖患者不同程度地存在胰岛素抵抗,体重、BMI、FINS、HOMA-IR、TNF-α明显高于正常对照组(P<0.01),治疗后两组体重、BMI、FINS、HOMA-IR、TNF-α明显低于治疗前,有非常显著性统计学差异(P<0.01),穴位埋线组FBG较治疗前有显著性降低(P<0.05),针刺组FBG治疗前后比较无显著性统计学意义(P>0.05);两组治疗后指标比较差异无显著性统计学意义(P>0.05),仍高于正常对照组(P<0.01)。结论:穴位埋线疗效可靠,是治疗单纯性肥胖症的一种有效方法。     

黄芪预防肿瘤坏死因子-α所致胰岛素抵抗

目的：探讨黄芪对大鼠注射肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）后发性胰岛素抵抗（ＩＲ）的预防作用方法：取正常大鼠分别给予黄芪煎剂和等量蒸馏水预先灌胃１周,尾泳注射小剂量ＴＮＦ－α４ｈ后,以葡萄糖－胰岛素耐量试验（Ｇ－ＩｎｓＴＴ）检测其胰岛素敏感性等一些指标的变化。结果：外生ＴＮＦ－α可致正常大鼠出现高胰岛素血症,胰岛素敏感性Ｋ值下降,并有血浆胰高血糖素、促蛹 腺皮质激素和血脂水平的升高,肝脏和红色股四头肌     

肿瘤坏死因子-α与妊娠期糖尿病

妊娠期糖尿病（GDM）是指妊娠期间才发现的任何程度的糖耐量异常,是糖尿病分类中的一种独立类型.GDM直接威胁着孕妇、胎儿和新生儿的健康,容易导致巨大儿、羊水过多、妊娠高血压和新生儿并发症等.笔者从肿瘤坏死因子-α、胰岛素抵抗和胰岛β细胞分泌缺陷等方面探讨了GDM的发病机制.     

2型糖尿病胰岛素抵抗与C反应蛋白、肿瘤坏死因子的关系分析

目的：探讨2型糖尿病胰岛素抵抗与C反应蛋白（CRP）、肿瘤坏死因子（TNF-α）的关系。方法：设正常组20例,糖尿病组40例。检测患者血清空腹胰岛素、C肽、C反应蛋白（CRP）、肿瘤坏死因子（TNF-α）水平及胰岛素抵抗（IR）程度。结果：糖尿病组与正常组C-反应蛋白（CRP）、肿瘤坏死因子-α（TNK-α）,胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）相比,有明显差异（P〈0.0001）。结论：2型糖尿病胰岛素抵抗与C反应蛋白（CRP）、肿瘤坏死因子（TNF-α）显著呈正相关。     

胱硫醚γ-裂解酶抑制剂逆转TNF-α引起的脂肪细胞胰岛素抵抗研究

目的观察胱硫醚γ-裂解酶(CSE)抑制剂对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的脂肪细胞胰岛素抵抗的影响。方法用TNF-α培养3T3-L1脂肪细胞,建立胰岛素抵抗脂肪细胞模型。经或未经CSE抑制剂炔丙基甘氨酸(PPG)和二辛可宁酸(BCA)预处理的脂肪细胞与TNF-α作用24 h后,观察脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖消耗和摄取及硫化氢(H2S)含量的变化。结果 TNF-α可增加内源性H2S生成并减少3T3-L1脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖消耗和摄取。BCA和PPG预处理可逆转TNF-α导致的脂肪细胞胰岛素抵抗。结论内源性CSE/H2S系统在胰岛抵抗的发生发展中发挥着重要作用,可能是治疗胰岛素抵抗的一个新方向。