先天性甲状腺功能减低症汉族儿童的促甲状腺素受体基因失活突变

目的探讨汉族儿童促甲状腺素受体（TSHR）基因失活突变与先天性甲状腺功能减低症（CH）的相关性。方法（1）选择79例CH汉族儿童（亚临床甲减14例,年龄1～5.5岁,男8例,女6例;甲减65例,年龄1.5～6岁,男27例,女38例）为研究对象;100名正常儿童（男40例,女60例,年龄1～8岁）作为对照组。（2）采用PCR和DNA测序技术检测TSHR基因失活突变。结果（1）79例CH患儿中有1例发生复合杂合子突变,其突变位点为（Pro52Thr／Val689Gly）。1例发生杂合子突变,其突变位点为（Gly245Ser）。30例患儿在第10外显子2181位核苷酸处发生C-G转换（GAC→GAG）,使727位密码子天冬氨酸被谷氨酸代替（Asp727Glu）。47例患儿在第7外显子561位核苷酸处发生T-c转换（AAT→AAc）,相应的187位氨基酸（Asn）不发生改变。（2）33例正常对照儿童在第10外显子2181位核苷酸处发生C-G转换;50例正常对照儿童在第7外显子561位核苷酸处发生T-c转换（AAT→AAc）。结论浙江汉族CH患儿TSHR基因有3个杂合子突变位点：（Pr052Thr）、（Gly245Ser）、（Val689Gly）,第10外显子2181位核苷酸处（GAc→GAG）及第7外显子561位核苷酸处（AAT→AAC）存在TSHR基因多态性。     

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目的了解反复呼吸道感染(RRTI)儿童血清甘露聚糖凝集素(MBL)水平及第一外显子54密码子的突变率,探讨血清MBL水平与RRTI的关系。方法用ELISA方法检测2000～2003年在重庆医科大学附属儿童医院就诊的65例RRTI儿童和238名正常儿童血清MBL水平,测定其中11例低MBL血症的RRTI儿童的免疫学指标(IgG、IgA、IgM、C3、C4),并用聚合酶链反应(PCR)限制性内切酶片段长度多态性分析(RFLP)方法与55名正常儿童MBL第一外显子54密码子基因多态性进行分析。结果RRTI儿童出现低血清MBL水平频率明显多于正常儿童(χ2=6.96,P<0.05),其MBL54密码子突变率亦明显增高(P<0.05),低血清MBL血症导致RRTI主要在2岁以前,血清MBL水平越低,感染频率越高,其C3、C4水平也越高。结论儿童MBL54密码子突变导致低MBL血症在2岁以前有反复呼吸道感染的倾向,MBL水平越低,感染机率越高。     

儿童急性白血病p16基因纯合子缺失和点突变的实验研究

为探讨ｐ１６基因纯合子缺失和点突变与儿童急性白血病（ＡＬ）发生，发展及预后的关系。用聚合酶链反应（ＰＣＲ），ＤＮＡ单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析和ＤＮＡ测序技术研究５３例初治和复发儿童ＡＬ及３０例对照组ｐ１６基因纯合子缺失和点突变的情况。结果：儿童ＡＬｐ１６基因纯合子缺失及点突变为２８．３０％（１５／３３例），对照组未发现缺失及突变。ＡＬＬ组ｐ１６基因纯合子缺失为３５．００％（１４／４０例），其中     

内皮型一氧化氮合酶基因多态性与儿童体位性心动过速综合征的相关性

目的 探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子-T786C、第7外显子G894T突变与儿童体位性心动过速综合征(POTS)的相关性.方法 选择POTS患儿(POTS组)及健康儿童(健康对照组)各60例,提取静脉血基因组DNA,通过PCR扩增获得目的片段,限制性内切酶消化目的片段,计数基因型及突变基因频率.结果 eNOS基因第7外显子的G894T位点有3种基因型:GG、GT、TT.健康对照组14例发生G894T突变,其中纯合子3例,杂合子11例;POTS组24例发生G894T突变,其中纯合子6例,杂合子18例.POTS组突变基因型频率(纯合子+杂合子)和T等位基因频率高于健康对照组(P＜0.05).eNOS基因启动子T786C位点有3种基因型:TT、CC、TC,健康对照组12例发生T298C突变,其中纯合子3例,杂合子9例;POTS组23例发生T786C突变,其中纯合子6例,杂合子17例.POTS组基因型频率(纯合子+杂合子)和C等位基因频率高于健康对照组(P＜0.05).结论 G894T和T786C突变基因型频率可能为POTS发病的一个危险因子.     

反复呼吸道感染患儿血浆甘露糖结合凝集素水平及其结构基因单核苷酸多态性分析

目的研究儿童甘露糖结合凝集素(MBL)结构基因外显子1区单核苷酸多态性(SNPs)、血浆MBL水平与反复呼吸道感染(RRTI)的关系。方法观察浙江大学医学院附属儿童医院2004-01—2005-10收治的反复呼吸道感染患儿60例,2005-05—2005-08入托体检儿童105名,其血浆MBL质量浓度的检测采用ELISA法,MBL基因SNPs分析采用序列特异性引物PCR法和序列分析法,统计分析采用SPSS软件11.0版。遗传学分析采用SHEsis软件。结果105名健康儿童血浆MBL质量浓度范围为3～6025ng/mL,中位数1065ng/mL;60例RRTI患儿MBL质量浓度范围为1～3633ng/mL,中位数822ng/mL;RRTI组中低血浆MBL的个体所占比例明显高于健康组(χ2=4.05,P<0.050)。健康组和RRTI组结构基因密码子54即 230位点的变异频率分别为0.167和0.283,两组该位点的等位基因分布均符合Hardy-Weinberg平衡,RRTI组的变异频率显著高于健康组(χ2=6.285,P=0.012);密码子52( 223位点)和57( 239位点)无突变,即无C和D型突变体发现。A/A、A/B和B/B型外显子表达的血浆MBL水平依次显著下降(χ2=80.028,P≈0.000)。结论中国汉族人中MBL结构基因C和D型外显子罕见,而54号密码子的变异与小儿反复呼吸道感染之间可能存在相关关系。     

儿童肾母细胞瘤WT1基因突变四例报道

目的 研究儿童肾母细胞瘤患者WT1基因的突变类型及突变频率.方法应用聚合酶链反应(PCR)扩增出54例儿童肾母细胞瘤患者WT1基因全部10个外显子及其相邻内含子序列,经纯化后进行PCR产物直接测序.结果 4例患者WT1基因分别存在3个杂合无义突变及1个纯合错义突变.例1患者WT1基因7号外显子第1006位碱基A→T杂合突变,造成第336号氨基酸由赖氨酸转变为终止密码子,即K336X.例2患者WT1基因9号外显子第1168位碱基c→T杂合突变,造成第390号氨基酸由精氨酸转变为终止密码子,即R390X.例3患者WT1基因6号外显子第814位碱基G→T杂合突变,造成第272号氨基酸由谷氨酸转变为终止密码子,即E272X.例4患者WT1基因10号外显子第1228位碱基A→G纯合突变,造成第410号氨基酸由丝氨酸转变为甘氨酸,即S410G.结论 散发的中国儿童肾母细胞瘤患者WT1基因外显子突变的发生率与国外报道相近,检测到的4例突变患者中3例为无义突变、1例为错义突变.     

甘露糖结合凝集素基因多态性与中国汉族儿童过敏性紫癜的相关性研究

目的：近来有研究认为某些自身免疫性疾病可能与甘露糖结合凝集素(MBL)缺陷有关。MBL基因多态性影响MBL水平。过敏性紫癜(Henoch-Schnlein purpura, HSP)是一种全身性血管炎综合征,其病因被认为可能与免疫损伤有关。该研究探讨MBL基因第54号密码子多态性与中国汉族儿童过敏性紫癜(HSP)的关系。方法：应用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性分析,对160例健康中国汉族儿童及104例过敏性紫癜(HSP)患儿的MBL基因多态性进行检测。结果：①HSP患儿MBL基因GGC/GAC基因型频率明显高于健康对照组(51.9% vs 25.0%)(P<0.05),而GGC/GGC基因型频率显著低于健康对照组(46.2% vs 73.8%)(P<0.05)。HSP患儿GAC等位基因频率明显高于健康对照组(0.279 vs 0.138)(P<0.05),而GGC等位基因频率明显低于健康对照组(0.721 vs 0.862)(P<0.05);GAC等位基因与HSP的发病明显相关(OR=2.46,95% CI=1.32-4.48,P<0.05)。②在HSP患儿中,GAC型等位基因携带者中有前驱感染史者明显多于GGC纯合子(P<0.05)。结论：HSP发病受遗传背景影响,MBL第54号密码子基因多态性可能是HSP易感性标志。     

哮喘与血管紧张素转换酶基因插入及缺失多态性关联的研究

对探讨血管紧张素转换酶（ACE）基因插入（I）及缺失（D）多态性与儿童哮喘易感性及病情程度的关联,应用聚合酶链反应（PCR）确定108例哮喘患儿及56例健康儿童的ACE基因型并结合临床病情程度及总IgE水平进行了分析,结果显示,哮喘组和正常对照组儿童ACE基因纯合子缺失型（DD）,插入型（II）,杂合子插入缺失型（ID）的构成比有显著差异,其中DD型在哮喘组的频率为38％,在对照组为16％,两组比较（DD型与II和ID型）有显著差异（P均＜0．05）,优势比（OR）分别为2．44和5,D等位基因频率亦明显高于对照组（P＜0．05）,携带DD基因型的哮喘患儿病情呈中,重度发作的比例和II,ID型比较明显高于轻型组（P＜0．05）,提示：ACE基因DD型与中国北方儿童哮喘的遗传易感性有关,并且与病情的严重程度有关。     

CD14基因多态性与儿童特应性疾病的相关性

目的研究脂多糖受体基因（CD14）多态性在温州地区汉族儿童中的分布特征及其与特应性疾病的关联。方法特应征组113例,病例入选符合下列标准：（1）年龄2～12岁的汉族儿童;（2）临床诊断为哮喘、过敏性鼻炎或特应性皮炎;（3）血清总IgE升高;（4）血清特异性IgE阳性。选取2～12岁正常体检儿童79例为对照组。应用免疫荧光法测定血清总IsE,UniCAP系统测定sIgE。应用测序法测定两组儿童CD14基因序列,寻找多态位点,调查多态位点的分布特征,比较两组儿童多态位点的基因型频率和等位基因频率,比较不同基因型的血浆IgE水平。结果（1）特应征组和对照组儿童均发现CD141—159多态性,以TT基因型为主,未发现其他多态位点。其中对照组儿童TT、TC、CC3种基因型频率分别为57．0％、28．0％和15．0％,特应征组儿童TT、TC、CC3种基因型频率分别为46.9％、35．4％和17．7％,按Hardy-Weinberg平衡吻合度检验,差异无统计学意义（x^2=3．462,P〉0．05）。两组的基因型频率和等位基因频率分布差异无统计学意义（x^2=1．918,P〉0．05）。（2）不同性别间基因型频率差异无统计学意义（x^2=3．458,P〉0．05）。（3）经对数转换,CD14/—159CC基因型、TC基因型和TT基因型的血清IgE分别为（2500±460）IU／L、（2400±460）IU／L、（2520±460）IU／L,方差分析差异无统计学意义（F=0．807,P〉0．05）。结论（1）温州地区汉族儿童存在CD141—159多态性,未发现CD14基因其他多态位点。温州地区汉族儿童CD141—159基因型以TT为主。（2）未发现CD141—159基因型和特应征发病及IgE水平之间的关联。     

甘露糖结合凝集素基因54号密码子多态性与川崎病易感性的研究

目的　探讨甘露糖结合凝集素 (MBL)基因第 5 4号密码子多态性与中国汉族儿童川崎病的易感性和临床表型的关系。方法　应用聚合酶链反应 限制性内切酶片段长度多态性分析 ,对16 0例中国汉族健康儿童及 95例川崎病患儿的MBL基因多态性进行检测。结果　 ( 1)中国汉族健康儿童MBL基因多态性分布与文献报道的香港华人及高加索人种接近 ,无统计学差异。( 2 )川崎病患儿GAC等位基因频率高于健康对照组 ( 0 2 5 8vs 0 138,P <0 0 1) ,而GGC等位基因频率低于健康对照组 ( 0 74 2vs 0 86 2 ,P <0 0 1)。GAC型等位基因与中国汉族儿童川崎病密切相关 [OR =2 18,95 %CI(OR值的 95 %置信区间 )为 1 38～ 3 4 4 ,P <0 0 5 ]。 ( 3)在川崎病患儿中 ,GAC型等位基因携带者其病史有前驱感染史者多于GGC纯合子 (P <0 0 1)。结论　川崎病发病受遗传背景的影响 ,与MBL第 5 4号密码子基因多态性密切相关     

Association between mannose binding lectin polymorphisms and predisposition to bacterial meningitis

The aim of this study was to examine the presence of any association between mannose binding lectin (MBL) gene variants and bacterial meningitis. Codon 54 (B allele) and codon 57 (C allele) polymorphisms in exon 1 of the MBL gene were investigated in 50 healthy controls and 31 patients diagnosed as purulent meningitis. Codon 57 polymorphism was not found in our patient and control groups. B allele frequency was significantly higher in the patient group (22%) compared to the control group (3%). AB genotype was determined in 39% and 6% of patient and healthy control groups, respectively, and the difference was statistically significant. AA genotype was determined in 61% of the patient group and in 94% of the control group, and it was statistically low in the patient group. These results suggest that codon 54 polymorphism in the MBL gene may play a role in susceptibility to bacterial meningitis in children.     

The effect of mannose-binding protein gene polymorphisms in recurrent respiratory system infections in children and lung tuberculosis

Mannose-binding lectin (MBL) is able to bind pathogens as an opsonin and plays an important role in the innate immunity. The aim of the present study was to determine the frequencies of the MBL gene variants in the Turkish population and to examine the presence of any association between MBL variants and development of tuberculosis (TB) in adults and recurrent respiratory tract infections in children. Two structural gene mutations in exon 1 of MBL gene (codon 54 and codon 57) were studied. The overall distribution of genotypes did not significantly differ between controls and TB patients/children with recurrent respiratory system infections. The frequency of allele B was calculated as 0.14, 0.09 and 0.06 for control, TB patients and children with recurrent respiratory system infections, respectively. It was found to be significantly lower in children with recurrent respiratory system infections than in controls (chi2: 4.68, d.f: 1, p: 0.030).     

维生素D缺乏性佝偻病遗传易感性的研究

目的：遗传因素是否参与维生素D缺乏性佝偻病目前尚未明了。拟通过研究维生素D受体基因多态性与维生素D缺乏性佝偻病易感性的相关性,探讨维生素D缺乏性佝偻病的遗传易感性。方法：应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术检测159例维生素D缺乏性佝偻病儿童和78例正常儿童(对照组)维生素D受体(VDR)基因FokI位点的多态性,比较两组之间VDR基因型和等位基因的频率。结果：维生素D缺乏性佝偻病患儿和对照组儿童的VDR基因FokI位点基因型分布频率分别为:FF(37%),Ff(51%),ff(12%)和FF(18%),Ff(55%),ff(27%),两组之间的差异有显著性(χ20.01(2)=9.210,χ2=13.3880,P<0.01);佝偻病患儿和对照组儿童的VDR基因FokI位点等位基因分布频率分别为:F(63%),f(37%)和F(46%),f(54%),两组之间的差异有显著性(χ2=6.18,P<0.05)。佝偻病患儿F等位基因分布频率明显高于对照组人群(63%vs46%)两组之间的差异有显著性;而佝偻病患儿f等位基因频率显著低于对照组(37%vs 54%)。结论：VDR基因FokI酶切位点的多态性可能与维生素D缺乏性佝偻病的遗传易感性有关。     

Mannose-binding lectin polymorphisms and recurrent respiratory tract infection in Chinese children

In order to establish the reference value of mannose-binding lectin (MBL) serum level in children and to investigate the correlation between the polymorphisms of MBL2 gene and serum MBL level in healthy Chinese of Han ethnic group and in children of Chinese Han ethnic group with recurrent respiratory tract infections (RRTI), the concentration of oligomerized MBL was measured by enzyme-linked immunosorbent assay, and MBL2 gene polymorphisms were analyzed by restriction fragment length polymorphism of polymerase chain reaction and polymerase chain reaction-sequence specific primer. The median MBL levels in the 470 normal children were 2536 ng/ml, and the P_2.5–P_97.5 was 161–5,070 ng/ml. Our research showed that two promoter polymorphisms at −550, −221 of start codon and coding variants at codon 54 of MBL2 gene affected the protein level significantly and the most frequent genotype in Hans is HYPA/HYPA. Our results also showed that serum MBL level was significantly lower in recurrent respiratory tract infections patients compared with healthy controls (Z, −3.04, P = 0.002). The frequency of the promoter LXP haplotype and the B allele was significantly higher in RRTI patients than in controls (χ ² 4.05, P < 0.05; OR 1.63, 95%CI 1.01∼2.62; χ ² 4.27, P < 0.05; OR 1.94, 95%CI 1.02∼3.68). Conclusion: We have established that the reference value of serum MBL level in Chinese aged between 0 and 6 years (161–5,070 ng/ml), and we found that LXP and the B are risk factors for RRTI.     

注意缺陷多动障碍患儿Period3基因可变数目串联重复序列多态性分析

目的探讨Period3(Per3)基因18号外显子54 bp可变数目串联重复(VNTR)序列多态性与中国汉族儿童注意缺陷多动障碍(ADHD)伴睡眠障碍的相关性。方法选取2005年8月-2010年5月在本科就诊、符合美国《精神障碍诊断与统计手册(第4版)》诊断标准的166例ADHD患儿为ADHD组,另收集150例健康儿童为对照组。用睡眠障碍量表(SDSC)评分评定儿童睡眠障碍情况,采用PCR技术分析ADHD组患儿与健康对照组儿童Per3基因54 bp-VNTR多态性基因型和等位基因的频率分布。将ADHD患儿根据SDSC量表评分分为有睡眠障碍组和无睡眠障碍组,并比较2组间Per3基因54 bp-VNTR多态性。结果 Per3基因54 bp-VNTR多态性各基因型(Per34/4,Per34/5,Per35/5)及等位基因(Per34,Per35)频率在ADHD组和健康对照组间的分布差异均无统计学意义(Pa>0.05),在伴睡眠障碍组和不伴睡眠障碍组间的分布差异均有统计学意义(Pa<0.05),伴睡眠障碍组携带等位基因Per35明显多于不伴睡眠障碍组(χ2=15.028,P<0.001;OR=2.760,95%CI:1.635～4.658)。结论 Per3基因54 bp-VNTR多态性可能与ADHD的易感性无关,但可能与ADHD伴睡眠障碍有关。     

肿瘤坏死因子α和白细胞介素10 基因启动子区多态性与川崎病的相关性研究

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-ɑ)和白细胞介素10(IL-10)基因启动子区多态性与中国汉族儿童川崎病的易感性和临床表型的关系.方法应用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法检测TNF-ɑ和IL-10基因启动子区4个多态性位点,对96例川崎病患儿及160例正常对照儿童进行相关性分析.结果 (1)中国汉族健康儿童TNF-ɑ基因-308(A/G)位点等位基因频率与日本人和美国白人正常人群相近;而IL-10基因-1082(G/A)、-819(C/T)、-592(A/C)3个位点等位基因频率与英国正常人群差异有显著性(P均<0.01);(2)TNF-ɑ基因-308位点等位基因频率在川崎病组和健康对照组间差异无显著性;IL-10 -1082、-819、-592的3个位点等位基因频率和单体型在两组之间比较差异亦无显著性;(3)临床表型分析发现,TNF-α-308 A基因型在静脉注射免疫球蛋白(IVIG)非敏感型川崎病患者中的发生频率高于TNF-α-308 G基因型,比较差异有显著性(67% vs 5%,χc2=90.48,P<0.01),前者发生静脉注射用IVIG非敏感型川崎病的相对危险度(RR)是后者的42.25倍(RR 95% CI=15.81～112.88,P<0.01).IL-10-1082A/-819T/-592A单体型在川崎病合并冠状动脉损伤患者中的发生频率高于Non-ATA单体型, 比较差异有显著性 (52%vs 20%,χ2=18.36, P<0.01), IL-10基因启动子区ATA单体型合并冠状动脉损伤的RR是Non-ATA单体型的4.26倍(RR 95% CI=2.20～8.25,P<0.01).结论 TNF-α、IL-10基因启动子区多态性可能是影响川崎病疗效和预后的重要因素.     

维生素D受体基因多态性与维生素D缺乏性佝偻病易感性的研究

目的 通过研究维生素D受体(VDR)基因多态性与维生素D缺乏性佝偻病易感性的相关性,探讨维生素D缺乏性佝偻病的遗传易感因素。方法 利用限制性内切酶FokI,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR—RFLP)分析、基因测序等技术测定48例维生素D缺乏性佝偻病患儿(病例组)和92名正常儿童(对照组)的VDR基因多态性,比较两组VDR基因型和等位基因的分布频率,并计算基因型优势比(OR)。结果 在48例佝偻病患儿中FF、Ff和ff基因型分布频率分别为46％、33％和21％;而在92名正常儿童中FF、Ff和ff基因型分布频率分别为22％、52％和26％。两组VDR基因型的分布频率差异有显著性(x^2=8．912,P=0．012),病例组中FF基因型占明显优势(OR=3．046)。两组VDR基因等位基因的分布频率差异也有显著性(x^2=5．451,P=0．020),病例组中F等位基因分布频率高于对照组。结论 VDR基因多态性与维生素D缺乏性佝偻病有相关性,提示VDR基因多态性可能在决定个体维生素D缺乏性佝偻病遗传易感性方面有重要作用。     

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目的探讨抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体检测在幼年特发性关节炎(JIA)诊断中的意义。方法对华中科技大学同济医学院同济医院2002-06—2004-08收治的JIA患儿66例、其他风湿病患儿11例及正常儿童29名,运用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测血清中抗CCP抗体,比较各组抗CCP抗体阳性率,并探讨抗CCP抗体在诊断JIA中的意义。结果66例JIA患儿中抗CCP抗体阳性率为16·7%(11/66),其中类风湿因子(RF)阳性多关节型阳性率为57·1%(4/7),RF阴性多关节型为19·0%(4/21)、少关节型为23·1%(3/13),22例全身型和3例附着点炎相关关节炎(ERA)患儿,抗CCP抗体均为阴性。其他风湿病患儿组和对照组抗CCP抗体亦为阴性。JIA组与正常对照组抗CCP阳性率比较有统计学意义(P<0·05),其中多关节型及少关节型与正常对照组比较亦有统计学意义,而其他亚型与正常对照组比较无统计学意义。结论抗CCP抗体尚不能作为JIA早期诊断的新的可靠的血清学指标。抗CCP抗体主要见于JIA多关节型和少关节型,推测抗CCP抗体对JIA分型及预后评价可能有指导意义。