shRNA慢病毒对人口腔鳞状细胞癌细胞端粒酶卡侯体蛋白1基因的沉默效应

目的：探讨shRNA慢病毒对人口腔鳞状细胞癌Cal27细胞系端粒酶新蛋白,即端粒酶卡侯体蛋白1（TCAB1）基因的沉默效应,以期探索肿瘤基因治疗的新途径。方法：根据TCAB1基因,构建慢病毒shTCAB1-A~D,测定病毒滴度;用重组慢病毒体外感染Cal27细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达推断感染效率;半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测TCAB1 mRNA水平;Western blot检测TCAB1蛋白质的表达水平;四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测细胞体外增殖能力;Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力改变。结果：经PCR与测序鉴定证实成功构建靶向TCAB1的慢病毒RNAi载体,病毒滴度为1.5×108~3×108 U·mL-1。荧光显微镜观察显示,绝大部分细胞表达绿色荧光。与空白细胞对照组相比,4种不同的shTCAB1-A~D慢病毒感染组TCAB1 mRNA表达下调48.7%~62.0%;蛋白抑制率达45.6%~77.5%,shTCAB1-C组最明显。shTCAB1-C慢病毒能明显抑制Cal27细胞增殖能力,也能降低其侵袭能力,穿过人工基底膜的平均细胞数明显低于空白对照组及非特异性对照组,侵袭抑制率高达67.5%（P〈0.05）。结论：成功构建并包装了端粒酶新蛋白TCAB1靶向的RNAi慢病毒,该病毒可高效感染人口腔鳞状细胞癌细胞,产生特异性的基因沉默效应。     

环状RNA hsa_circ_0002203对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响

目的 探讨环状RNA hsa_circ_0002203对口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞系恶性生物学行为的影响。方法 纳入OSCC患者40例,使用实时荧光聚合酶链反应检测环状RNA hsa_circ_0002203在OSCC组织、癌旁组织、OSCC细胞系和人口腔黏膜角质形成细胞（HOK）中的表达水平。慢病毒感染SCC15和CAL27细胞,实时荧光聚合酶链反应检测环状RNA hsa_circ_0002203的表达,细胞计数（CCK-8）实验检测细胞增殖能力,划痕实验和Transwell迁移及侵袭实验检测细胞迁移侵袭能力,流式细胞凋亡实验检测细胞凋亡水平,蛋白质印迹法检测细胞增殖凋亡侵袭相关蛋白的表达。通过裸鼠成瘤实验观察hsa_circ_0002203对SCC15细胞体外成瘤能力的影响。结果 环状RNA hsa_ circ_0002203在OSCC组织的表达低于癌旁组织（P<0.01）,在OSCC细胞系中的表达低于人类角质形成细胞（P< 0.001）。慢病毒感染SCC15和CAL27细胞后hsa_circ_0002203的表达增加;SCC15和CAL27细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降,凋亡水平增加;裸鼠肿瘤体积、质量减小,生长速度降低。结论 环状RNA hsa_circ_ 0002203在口腔鳞状细胞癌中的低表达可以增强肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制肿瘤细胞凋亡。     

环状RNA hsa_circ_0002203对口腔鳞状细胞癌 细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响

目的 探讨环状RNA hsa_circ_0002203对口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞系恶性生物学行为的影响。方法 纳入OSCC患者40例,使用实时荧光聚合酶链反应检测环状RNA hsa_circ_0002203在OSCC组织、癌旁组织、OSCC细胞系和人口腔黏膜角质形成细胞（HOK）中的表达水平。慢病毒感染SCC15和CAL27细胞,实时荧光聚合酶链反应检测环状RNA hsa_circ_0002203的表达,细胞计数（CCK-8）实验检测细胞增殖能力,划痕实验和Transwell迁移及侵袭实验检测细胞迁移侵袭能力,流式细胞凋亡实验检测细胞凋亡水平,蛋白质印迹法检测细胞增殖凋亡侵袭相关蛋白的表达。通过裸鼠成瘤实验观察hsa_circ_0002203对SCC15细胞体外成瘤能力的影响。结果 环状RNA hsa_ circ_0002203在OSCC组织的表达低于癌旁组织（P<0.01）,在OSCC细胞系中的表达低于人类角质形成细胞（P< 0.001）。慢病毒感染SCC15和CAL27细胞后hsa_circ_0002203的表达增加;SCC15和CAL27细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降,凋亡水平增加;裸鼠肿瘤体积、质量减小,生长速度降低。结论 环状RNA hsa_circ_ 0002203在口腔鳞状细胞癌中的低表达可以增强肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制肿瘤细胞凋亡。     

siRNA抑制人舌癌细胞VEGF表达对MMP-2、-9及TIMP-1、-2蛋白表达的影响

【摘要】目的利用小干扰RNA （ small interfering RNA ,siRNA） 抑制人舌癌TcaSll3细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF ）表达,观察其对培养细胞和移植瘤基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases, MMPs ）2、-9及基质金属蛋白酶抑制剂（tissue inhibitors of metalloproteinases ,T IMPs）-1、-2蛋白表达的影响。方法以稳定转染携带VEGF．siRNA真核表达载体的Tca8113细胞（VEGF—siRNAl、VEGF—siRNA2）为实验组,以转染空载体的及未转染的Tca8113细胞为实验对照组和空白对照组。将细胞分别接种于裸鼠皮下,用免疫组化法分别测定各组培养细胞和移植瘤VEGF、MMP-2、-9及TIMP．1、-2的蛋白表达。结果各组培养细胞及移植瘤VEGF免疫组化染色：VEGF．siRNAl组、VEGF—siRNA2组与实验和空白对照组相比,平均阳性率降低,平均灰度值增高（P〈0．05）;各组培养细胞均未检测出MMP-2、-9及TIMP-1、-2蛋白的阳性表达。各组移植瘤MMP-9、TIMP-1、-2可见阳性表达,但各组染色平均阳性率及平均灰度值之间的差异无统计学意义（P〉0．05）,而MMP-2未见明显阳性表达。结论以siRNA干扰沉默人舌癌Tca8113细胞VEGF基因,可明显抑制细胞及移植瘤内VEGF蛋白表达,但是对MMP-2、-9及TIMP-1、-2蛋白的表达无明显影响。     

PU-VEGF-siRNA对裸鼠皮下舌癌移植瘤生长的影响

目的：探讨针对血管内皮生长因子WEGF）的小干扰RNA（siRNA）对舌癌Tca8113细胞移植瘤在裸鼠体内生长的影响。方法：将两对特异性针对VEGF的siRNA真核表达载体（PU-VEGF-siRNA1,PU-VEGF-siRNA2）,经脂质体转染人舌癌TCA8113细胞,经G418筛选后获得稳定表达,以空载体组做实验对照,以未转染舌癌细胞作空白对照。将各组细胞接种裸鼠背部皮下,每组5只,观察裸鼠肿瘤生长情况,免疫组织化学染色法观察裸鼠肿瘤组织VEGF的表达。结果：与实验对照组和空白对照组相比,实验组肿瘤生长速度明显减缓,VEGF表达降低（P〈0.05）。结论：siRNA抑制VEGF的表达,可显著抑制舌癌移植瘤在裸鼠体内的生长。     

半乳糖凝集素-3基因在口腔鳞状细胞癌增殖、侵袭、凋亡中的作用及机制研究

目的 探讨抑制口腔鳞状细胞癌（OSCC）中半乳糖凝集素-3（Galectin-3）基因的表达对癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响及机制。方法 逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹（Western blotting）分别检测OSCC中Galectin-3 mRNA和蛋白表达;人OSCC Tca8113分为空白组、阴性对照组和Galectin-3转染组,转染48 h后,Western blotting检测各组细胞中Galectin-3、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）、β-连环蛋白（β-catenin）、细胞周期素D1（Cyclin D1）蛋白表达;CCK8检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡。结果 OSCC中Galectin-3 mRNA及蛋白表达均显著高于癌旁组织（P<0.01）;RNA干扰Galectin-3表达后Tca8113细胞中Galectin-3蛋白表达明显降低;Galectin-3转染组细胞存活率、细胞侵袭能力及MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达均显著低于空白组,细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3蛋白表达均显著高于空白组（P<0.01）。结论 抑制OSCC中Galectin-3基因表达可显著降低癌细胞的增殖及侵袭能力,诱导细胞凋亡,其机制与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

miR-15b对口腔鳞癌细胞Cal27增殖与凋亡能力影响研究

目的    研究口腔鳞癌（OSCC）中miR-15b的表达及其对OSCC Cal27细胞增殖和凋亡能力的影响。 方法    实时定量PCR检测2013年1月至2015年1月期间中国医科大学附属口腔医院外科50例住院患者OSCC组织中miR-15b基因的表达水平。培养OSCC Cal27细胞,将miR-15b的前体转染Cal27细胞,MTT法及双标流式法检测转染前后Cal27细胞的增殖和凋亡能力。 结果    与癌旁组织相比,miR-15b在OSCC组织中的表达显著下调,且与OSCC的分级相关。miR-15b的前体能够使Cal27细胞的增殖能力明显下降,且能够诱导Cal27细胞发生凋亡。结论    miR-15b的异常表达与OSCC相关,miR-15b能够抑制OSCC细胞增殖并诱导其凋亡,在OSCC中发挥肿瘤抑制基因的作用。     

Fas转染及抗体处理对舌鳞癌细胞Tca8113移植瘤形成和增殖的影响

目的　研究Fas转染和抗Fas单克隆抗体对舌鳞癌细胞系Tca8113裸鼠体内移植瘤形成和增殖的影响,探讨相关机制。方法　脂质体法以真核表达重组质粒pBK-fas转染舌鳞癌细胞系Tca8113。部分转染细胞行抗Fas单克隆抗体处理。未转染细胞、Fas转染细胞、Fas转染抗体处理细胞分别接种裸鼠皮下。观测移植瘤生长,绘制生长曲线。RT-PCR检测肿瘤细胞Fas mRNA表达。流式细胞术(FCM)检测肿瘤细胞凋亡、增殖及Fas蛋白表达。结果　Fas转染和抗体处理延迟肿瘤形成,抑制肿瘤增殖。Fas转染上调移植瘤Fas mRNA表达,提高Fas蛋白表达强度和凋亡指数,但不影响Fas蛋白阳性表达率和增殖指数。抗体处理不影响Fas mRNA和蛋白表达,但可提高凋亡指数,降低增殖指数。结论　Fas转染抑瘤效应是上调Fas转录和表达、促进凋亡的结果。抗Fas单克隆抗体抑瘤效应则与激活凋亡和抑制增殖有关。     

shRNA干扰Rce1基因表达对口腔鳞癌细胞放射敏感性的影响

目的:观察shRNA干扰Ras转化酶1（Rce1）基因表达对口腔鳞癌（OSCC）细胞放射敏感性的影响。方法:取对数期CAL27细胞,随机分为Control组、shRNA-NC组、shRNA-Rce1组。Control组不处理,shRNA-NC组、shRNA-Rce1组分别采用脂质体转染法转染shRNA-NC、shRNA-Rce1表达载体。采用二甲基噻唑（MTT）法检测不同放射剂量（2、4、6、8、10 Gy）射线照射对CAL27细胞增殖抑制率的影响,计算放射对细胞的半数抑制剂量。利用AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,Western免疫印迹法检测细胞B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、存活蛋白（Survivin）、半胱天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）蛋白表达量。采用SPSS 19.0软件包对数据进行统计学分析。结果:与Control组、shRNA-NC组相比,不同放射剂量对shRNA-Rce1组CAL27细胞的增殖抑制率显著升高,半数抑制剂量显著降低（P<0.05）;与Control组、shRNA-NC组相比,shRNA-Rce1组凋亡率显著升高（P<0.05）;与Control组、shRNA-NC组相比,shRNA-Rce1组Bcl-2、Survivin蛋白表达量显著降低,Caspase-3蛋白表达量显著升高（P<0.05）。结论:shRNA干扰Rce1基因表达可增强OSCC细胞放射敏感性,降低半数抑制剂量,促进细胞凋亡,并减少凋亡抑制蛋白Bcl-2、Survivin表达,增加凋亡蛋白Caspase-3表达。     

上调Decorin对口腔鳞癌荷瘤裸鼠EGFR、C-Myc、p21表达的影响

目的: 探讨饰胶蛋白聚糖基因（decorin,DCN）过表达对口腔鳞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）裸鼠荷瘤中表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）、骨髓细胞瘤病毒癌基因（cellular-myelocytomatosis viral oncogene,C-Myc）和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂（cyclin dependent kinase inhibitor,p21）表达水平的影响。方法: 通过脂质体转染法上调人口腔鳞癌细胞（HSC-3）中DCN基因的表达,使用裸鼠作为OSCC疾病模型构建载体,建立OSCC裸鼠荷瘤模型。H-E法确定各组裸鼠荷瘤组织的病理分级,免疫组织化学染色检测DCN过表达后各组裸鼠荷瘤组织中EGFR、C-Myc和p21蛋白的表达差异,RT-qPCR及Western印迹定量检测DCN过表达后各组裸鼠荷瘤组织中EGFR、C-Myc和p21在转录水平和蛋白水平上的表达差异,明确DCN过表达对OSCC裸鼠荷瘤组织中EGFR、C-Myc和p21表达的影响。采用SPSS 20.0软件包对数据进行统计学分析。结果: H-E染色结果显示,OSCC动物疾病模型构建成功。重量分析结果显示,质粒组裸鼠荷瘤组织轻于空载组和未转染组（P<0.05）。IHC结果显示,DCN、EGFR、C-Myc和p21蛋白在各组裸鼠荷瘤组织中均有表达,质粒组中DCN、EGFR和C-Myc蛋白的表达水平差异有统计学意义（P<0.05）,各组中p21蛋白的表达水平无统计学差异（P>0.05）。RT-qPCR和Western印迹结果显示,DCN、EGFR、C-Myc和p21在各组裸鼠荷瘤组织中均有不同程度表达（P<0.05）。结论: 上调DCN可抑制OSCC裸鼠荷瘤的生长。在OSCC裸鼠荷瘤组织中,DCN过表达下调EGFR及C-Myc的表达,上调p21的表达。DCN可能通过以上机制调节OSCC的发生、发展,发挥抑癌作用。     

血管内皮生长因子小干扰RNA抑制人舌鳞状细胞癌细胞移植瘤生长及血管生成的实验

目的 观察小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达对人舌癌Tca8113细胞移植瘤的治疗作用.方法 构建Tea8113细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分成4组,A组、B组为实验组,C组:以空载体注射为治疗对照组,D组:未治疗为空白对照组,每组5只.脂质体法将两对VEGF siRNA真核表达载体(PU-VEGF-siRNAl、PU-VEGF-siRNA2)作瘤体内及瘤周注射,1次/3 d,共10次后处死裸鼠;测量瘤体积及瘤重;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blotting和免疫组化法分别检测瘤组织VEGF-mRNA及VEGF蛋白表达,并检测瘤内微血管密度;流式细胞仪检测肿瘤细胞悬液的细胞周期比例,Tunel法检测组织细胞凋亡.结果 B组瘤体积(0.402±0.158)cm3、瘤重量(2.12±0.58)g,均低于C、D组,细胞G1期比例为(40.26±1.42)%,较C、D组增加,B组瘤组织VEGF mRNA(0.752±0.048)和蛋白表达(1.12±0.15),组织切片VEGF阳性细胞表达率(12.56±1.30)%、平均灰度值(164.2±15.42)及微血管密度(3.50±1.58)个,均低于C、D组(P<0.05),凋亡细胞增加(P<0.01).结论 siRNA能在体内抑制舌癌VEGF表达,减少肿瘤血管生成,延缓肿瘤生长.不同的干扰片段体内作用效果存在差异.     

VEGFsiRNA对人舌癌Tca8113细胞移植瘤血管生成影响的研究

目的:观察小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达对裸鼠皮下人舌癌Tca8113细胞移植瘤血管生成的影响.方法:构建人舌癌Tca8113细胞20只裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为4组.将两对针对VEGF的siRNA真核表达载体(Pu-VEGF-siRNA1,Pu-VEGF-siRNA2)脂质体法作瘤体内及瘤周注射;以注射空质粒组作实验对照组;未注射组作空白对照组.注射1次/3 d×10次,末次注射3d后,剥离瘤体,RT-PCR检测瘤组织VEGF-mRNA表达,免疫印迹技术检测瘤组织VEGF蛋白表达.免疫组化染色法观察VEGF阳性染色及微血管参数.结果:Pu-VEGF-siRNA2组移植瘤VEGF-mRNA表达及VEGF蛋白表达、总体微血管密度、有腔微血管密度、有腔血管平均血管周长及管腔面积均较空质粒组及空白对照组低(p＜0.05).而Pu-VEGF-siRNA1组未观察到上述差别(P＞0.05).结论:siRNA能在体内抑制舌癌VEGF表达,有效减少肿瘤血管生成.不同的干扰片段体内作用效果存在差异.     

nm23-H1质粒和顺铂白蛋白联合治疗裸鼠移植瘤

目的 研究nm23-H1质粒和顺铂白蛋白联合应用对裸鼠移植瘤的影响。方法 将15只BALB/C雌性裸鼠随机等量分为3组,即对照组、顺铂白蛋白组和顺铂白蛋白＋nm23-H1质粒组。每只裸鼠均皮下注射浓度为每毫升 3.1×106个的舌鳞癌Tca8113细胞,2周后顺铂白蛋白＋nm23-H1质粒组移植瘤瘤体内注射质粒-脂质体复合物,3 d后顺铂白蛋白＋nm23-H1质粒组和顺铂白蛋白组瘤体内注射顺铂白蛋白。观察裸鼠的重量、移植瘤体积和瘤体重量的变化。结果 对照组裸鼠重量最轻。nm23-H1质粒和顺铂白蛋白联合治疗组肿瘤体积最小,瘤体重量最轻。结论 nm23-H1基因治疗和顺铂白蛋白联合可以明显抑制裸鼠移植瘤的生长。     

Curcumin suppresses the proliferation and tumorigenicity of Cal27 by modulating cancer‐associated fibroblasts of TSCC

Cancer‐associated fibroblasts (CAFs) are “activated” fibroblasts in the tumor microenvironment (TME) and play a vital role in all steps of cancer development. Increasing evidence focusing on the function of CAFs suggests that CAFs are candidate therapeutic targets and that drugs targeting the modification of CAFs would suppress tumor progression and be beneficial to tumor treatment and prevention. In the present study, we found that curcumin reversed the phenotype of CAFs to that of peri‐tumor fibroblast (PTF)‐like cells by downregulating the expression of α‐SMA (a special marker for CAFs) and inhibiting the secretion of pro‐carcinogenic cytokines, including transforming growth factor‐β1 (TGF‐β1), matrix metalloproteinases 2 (MMP2), and stromal cell‐derived factor‐1 (SDF‐1). We further demonstrated that the conditioned medium (CM) derived from CAFs promoted the proliferation of Cal27, and this effect was confirmed by the xenograft model. More importantly, we found that curcumin blocked the CAF‐mediated enhancement of Cal27 proliferation in vitro and in vivo. In conclusion, our data suggest that curcumin reverses cell phenotype from CAF to PTF‐like cells and suppresses the CAF‐mediated proliferation and tumorigenicity of Cal27 by inhibiting TSCC CAFs.     

生存素小干扰RNA对人腺样囊性癌ACC-2细胞移植瘤体生长的抑制作用

目的观察生存素（Survivin）小干扰RNA（siRNA）在体内是否能抑制腺样囊性癌移植瘤体的生长。方法裸鼠体内注射稳定转染靶向Survivin基因的shRNA真核表达载体pGenesil-shRNA-Survivin后的人腺样囊性癌细胞株ACC-2,观察移植肿瘤生长情况,以空白对照组及阴性质粒对照组作为对照。处死裸鼠后测量移植瘤体积;采用苏木精-伊红染色病理证实移植瘤后,免疫组织化学法检测移植瘤的Survivin蛋白表达情况,半定量RT-PCR检测Survivin mRNA表达情况。结果处死裸鼠后测量移植瘤体积表明,pGenesil-shRNA-Survivin组移植瘤体积明显减小;其Survivin mRNA及蛋白表达明显降低（P<0.05）。结论siRNA能在体内明显抑制腺样囊性癌Survivin的表达,Survivin siRNA能有效抑制腺样囊性癌裸鼠体内移植瘤的生长。     

切取活检对裸鼠舌部Tca8113移植瘤生物学行为影响的研究

目的 通过建立裸鼠Tca8113移植瘤切取活检动物模型来了解活检对肿瘤生物学行为的影响,并初步探讨其机制。方法 将裸鼠分为两组。舌部注射Tca8113细胞,成瘤后建立切取活检模型。观测裸鼠生存情况,原发灶生长及淋巴结转移状况,并通过免疫组织化学染色检测肿瘤原发灶核因子κB（NF-κB）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、血管内皮生长因子（VEGF）、基质衍生因子-1（SDF-1）、细胞增殖抗原标记物（Ki67）表达水平及肿瘤淋巴结微转移情况。结果 移植瘤成瘤率达97.92%。切取活检后实验组原发灶生长速度,淋巴结转移率,微血管密度,NF-κB、MMP-9及SDF-1表达均高于对照组。各项指标表达具有一定相关性。结论 切取活检对肿瘤的生物学行为具有一定影响,可能加速原发灶的生长及转移。     

敲减TULP3对头颈鳞癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨敲减TULP3对头颈鳞状细胞癌(HNSCC)细胞生物学行为的影响。方法 应用TCGA数据比较头颈鳞癌组织与癌旁组织中TULP3表达水平;体外培养人HNSCC细胞系HN4、HN6、CAL27、HSC3、SCC4及正常口腔上皮角质细胞HOK并应用Western Blot比较TULP3蛋白表达水平,免疫组化分析TULP3在HNSCC组织中表达情况。构建RNA干扰寡核苷酸si-TULP3及si-NC转染HN4、HN6,应用CCK-8实验、平板克隆形成实验、划痕愈合实验、Transwell侵袭实验检测敲减TULP3对HNSCC细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响。实时定量逆转录PCR及Western Blot检测细胞周期及上皮间质转化(EMT)相关指标变化。构建HN6-shTULP3及HN6-shNC细胞株接种于裸鼠皮下,分析裸鼠移植瘤体积差异。结果 TCGA数据显示头颈鳞癌组织TULP3表达量显著高于癌旁组织(P<0.000 1);HN4、HN6、CAL27、HSC3细胞中TULP3蛋白表达量均高于HOK细胞,TULP3在HNSCC组织中呈阳性表达。HN4、HN6细胞转染si-TUL...     

短发夹RNA干扰血管内皮生长因子对舌癌耐药细胞移植瘤的影响

目的 研究短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达对人舌癌耐药细胞Tca-顺铂(Cisplatin,DDP)移植瘤的影响及可能机制.方法 以人舌癌Tca8113细胞系为亲本诱导建立耐药Tca-DDP细胞系,将其接种于裸鼠背侧皮下,建立移植瘤模型.模型动物分为4组,即空白对照组(非转染)、空载体组(转染空质粒载体)、无关片段组(转染无关对照质粒)、干扰质粒组(转染靶向VEGF的shRNA表达载体),每组6只,每3天以脂质体为载体作瘤体内及瘤周多点注射.观测移植瘤生长曲线,转染l0次后取瘤体称重,免疫组化法检测移植瘤微血管密度,原位杂交法检测移植瘤VEGFmRNA,免疫组化技术检测移植瘤VEGF、多药耐药蛋白P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、B细胞淋巴瘤-白血病因子2(B cell lymphoma/leukemia-2,bcl-2)及胞外信号调节激酶2蛋白(extracellular signal-regulated kinase 2,ERK-2).结果 干扰质粒组的瘤体生长明显受到抑制(P＜0.05),移植瘤重量(0.4781±0.0860)g及微血管密度(7.35±1.31)个/视野,低于其他3组(P＜0.05),且VEGF的mRNA及蛋白、P-gp、bcl-2及ERK-2的相对表达量分别为(0.0767±0.0234)、(0.1301±0.0433)、(0.1517±0.0184)、(0.1218±0.0251)及(0.1178±0.0291),表达均显著减少(P＜0.05).结论 RNA干扰抑制VEGF的表达,可抑制人舌癌Tca8113耐药细胞移植瘤的生长及血管生成,下调P-gp、bcl-2及ERK-2表达水平,提示靶向抑制VEGF可能是治疗耐药舌癌途径之一.

Abstract：

Objective To study the in vivo interference effects of vascular endothelial growth factor (VEGF) short hairpin RNA (shRNA) on xenografts of drug-resistant tongue cancer cells. Methods Drugresistant tongue caner cells Tca/Cisplatin(DDP) were injected subcutaneously into nude mice to establish xenograft models, which were randomly divided into non-transfected group, mock control group, control group transfected with scrambled sequence plasmid, interference group transfected with VEGF-shRNA expression plasmid. Liposome-mediated plasmid transfection was done in the latter three groups every three days. Xenografts were observed and tumor growth curve was measured. After the 10th transfection, tumors were anatomized and weigh. Microvessel density was detected by immunohistochemical staining. In situhybridization assay was used to test VEGF mRNA, and immunohistochemistry to test VEGF, P-glycoprotein ( P-gp), B cell lymphoma/leukemia-2 ( bcl-2 ) and extracellular signal-regultaed kinase 2 (ERK-2) protein. Results Tumor growth in VEGF-shRNA interference group was significantly slow. Tumor weight was (0.4781 ±0.0860) g, microvessel density (7.35 ± 1.31)/view, VEGF mRNA(0.0767 ±0.0234), VEGF protein (0.1301 ± 0.0433 ), P-gp (0.1517 ± 0.0184 ), bcl-2 ( 0.1218 ± 0.0251 ) and ERK-2 protein (0.1178 ±0.0291 ) in VEGF-shRNA interference group; all of them were less than those in the other three groups( P ＜ 0.05 ). Conclusions Inhibition targeting VEGF may become a potential therapy for drugresistant tongue cancer.