核受体NR4A1在卵巢卵泡膜细胞内调节雄激素的生成

目的:孤儿核受体NR4A1是核受体超家族中的一员,其广泛分布于不同的细胞类型并参与多种生物学过程的调控.探讨在卵泡膜细胞中NR4A1对甾体激素生成酶的转录及雄激素生成的影响.方法:构建小鼠NR4A1重组腺病毒载体AdCMV-NR4A1及AdH1-NR4A1,重组病毒感染卵泡24h后,蛋白质印迹(Western Blot...     

核受体NR4A1在卵巢卵泡膜细胞内调节雄激素的生成

目的:孤儿核受体NR4A1是核受体超家族中的一员,其广泛分布于不同的细胞类型并参与多种生物学过程的调控。探讨在卵泡膜细胞中NR4A1对甾体激素生成酶的转录及雄激素生成的影响。方法:构建小鼠NR4A1重组腺病毒载体AdCMV-NR4A1及AdH1-NR4A1,重组病毒感染卵泡24 h后,蛋白质印迹(Western Blot)验证NR4A1在卵泡膜细胞中的超表达及干涉效果。实时定量反转录聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)检测Nr4a1超表达及干涉后对雄激素生成酶(Star,Cyp11a1,Cyp17a1,Hsd3b2)的转录调节,放射免疫法测定培养液中睾酮的浓度。结果:AdCMV-NR4A1感染卵泡膜细胞后NR4A1蛋白的表达水平显著升高。NR4A1在卵泡膜细胞内超表达后明显促进Star,Cyp11a1,Cyp17a1,Hsd3b2的转录,增加睾酮合成。相反,AdH1-NR4A1感染卵泡膜细胞后,NR4A1蛋白的表达水平显著降低。NR4A1干涉后明显抑制Star,Cyp11a1,Cyp17a1,Hsd3b2的表达,降低睾酮的合成。此外,在卵泡培养液中加入cAMP/PKA通路激动剂———福斯高林后,N...     

孤核受体NR4A1参与能量代谢的调节

孤核受体NR4A1(nuclear receptor subfamily4,goupA,member 1)是核受体超家族中的一员,在多种细胞中表达,同时功能十分广泛,不仅参与细胞周期调控(增殖或凋亡),还与神经性疾病、类固醇激素的生成、肿瘤以及动脉粥样硬化的形成及能量调控密切相关.近年来,NR4A1与能量代谢的关系逐渐...     

孤核受体NR4A1参与能量代谢的调节

孤核受体NR4A1(nuclear receptor subfamily4,goupA,member 1)是核受体超家族中的一员,在多种细胞中表达,同时功能十分广泛,不仅参与细胞周期调控(增殖或凋亡),还与神经性疾病、类固醇激素的生成、肿瘤以及动脉粥样硬化的形成及能量调控密切相关.近年来,NR4A1与能量代谢的关系逐渐引起人们的广泛关注,在能量平衡调控中发挥了重要作用.     

四溴双酚A对HepG2细胞线粒体膜电位及凋亡的影响

目的研究不同浓度四溴双酚A(TBBPA)暴露对人肝癌(Hep G2)细胞凋亡的影响。方法以不同浓度TBBPA染毒Hep G2细胞,采用MTS法检测细胞存活率,JC-1荧光探针检测细胞线粒体膜电位变化,以AnnexinⅤ与PI联合标记并使用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 Hep G2细胞存活率随着TBBPA暴露浓度升高相应降低;与对照组相比,20和30μmol/L TBBPA暴露组Hep G2细胞线粒体膜电位显著下降(P0.01);Hep G2凋亡细胞随TBBPA暴露浓度升高有增加趋势,其中30μmol/L TBBPA暴露组与对照组相比差异显著(P0.01)。结论 TBBPA可能通过降低线粒体膜电位引起细胞凋亡。     

甲基苯丙胺对SH-SY5Y细胞PINK1/Parkin介导的自噬流及凋亡影响

目的 观察甲基苯丙胺(METH)对SH-SY5Y细胞PINKl/Parkin介导的线粒体自噬的作用,探讨自噬流进程及对细胞凋亡的影响.方法 在体外培养的SH-SY5Y细胞中加入含不同浓度的METH(0.0、1.0、1.5、2.0 mmol/L)培养基,诱导24 h后,流式细胞术检测细胞凋亡情况;透射电镜观察线粒体自噬现...     

自噬基因Beclin1过表达诱导人卵巢癌细胞SKOV3自噬和凋亡的研究

目的:探讨自噬基因Beclin 1在人卵巢癌SKOV3细胞中过表达对其体外生长活性的影响。方法:构建自噬基因Beclin 1的真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1,将其稳定转染SKOV3细胞,实现Beclin 1在SKOV3中的过表达;用MTT法分析Beclin1过表达对SKOV3增殖的影响,用流式细胞仪检测凋亡和自噬情况,电镜和荧光显微镜下观察自噬现象。结果:pcD-NA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后Beclin 1在mRNA和蛋白水平均高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组。Beclin 1在SKOV3中的稳定过表达后G1期细胞明显增多,S期细胞比例明显减少,细胞增殖受到抑制,凋亡率为(21.26±3.89)%,高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后MDC标记的自噬囊泡平均荧光强度高于pcDNA3.1转染组和未转染组。pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后在电镜下可见大量自噬囊泡形成。在荧光显微镜下见pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞中MDC标记的自噬囊泡明显增加。结论:自噬基因Beclin1过表达可诱导人卵巢癌细胞SKOV3自噬和凋亡,针对自噬基因Beclin1的卵巢癌基因治疗可能具有可行性。     

NR2E1对MIN6细胞内质网应激时CHOP、BiP mRNA表达及细胞凋亡的影响

目的 观察过表达NR2E1能否保护MIN6细胞抵抗棕榈酸(palmitate,PA)所致的内质网应激凋亡,为糖尿病分子流行病学研究策略提供新的思路.方法 建立过表达NR2E1小鼠胰岛细胞系MIN6细胞株,随后给予5001μmol/L PA处理24h,利用流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时定量PCR(RT-PCR)法检测CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(C/EBP-homologousprotein,CHOP)和重链结合蛋白(heavy-chain binding protein,BiP) mRNA的表达变化.结果 过表达NR2E1能减少PA诱导的MIN6细胞凋亡率(P＜0.01)和CHOP mRNA表达(P＜0.01),增加BiP mRNA表达(P＜0.05).结论 过表达NR2E1可以抵抗PA诱导的胰岛β细胞内质网应激凋亡,在分子水平为预防糖尿病发生发展提供了一些参考.     

GLi1通过调控自噬参与脂多糖诱导的脓毒血症体外模型

目的 探讨GLi1是否通过调控自噬参与脂多糖诱导的脓毒血症体外模型.方法 体外培养肾小管上皮细胞HK-2细胞系,LPS处理浓度梯度为0μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml、40 μg/ml、80μg/ml,24 h后CCK8测细胞活性,并收集蛋白;时间梯度为40μg/ml的LPS处理细胞Oh、6h、12 h、...     

视黄酸受体和类视黄醇X受体激动剂对脐血单个核细胞IL-4和IFN-γ表达的影响

目的观察视黄酸受体(RARs)激动剂四氢四甲基萘丙烯苯甲酸乙酯(TTNPB)和类视黄醇X受体(RXRs)激动剂甲氧普烯酸(MA)对脐血单个核细胞表达IL-4和IFN-γ的影响。方法采用ELISA和RT-PCR,分别从蛋白质和基因水平上观察TTNPB和MA对脐血单个核细胞表达IL-4和IFN-γ的影响。结果 ELISA显示10-8、10-6、10-5、10-4mol/L的TTNPB和10-8、10-5、10-4mol/L的MA显著降低IFN-γ/IL-4蛋白含量比值(P0.05);RT-PCR显示10-4mol/L的MA显著降低IFN-γ/IL-4mRNA比值(P0.05),而10-5mol/L的TTNPB和10-7、10-6mol/L的MA显著升高IFN-γ/IL-4mRNA比值(P0.05)。结论适当浓度的TTNPB和MA可以在蛋白质水平上下调IFN-γ/IL-4的比值;不同浓度的TTNPB和MA在基因水平上对IFN-γ/IL-4的比值有不同影响。     

CD4、CCR5、CXCR4和DC-SIGN分子在 HIV-1感染者及正常人晚孕胎盘及早孕绒毛的表达

目的 明确CD4、CCR5、CXCR4和DC-SIGN分子在HIV-1不同感染状态晚孕胎盘和早孕绒毛的存在及表达情况,为探索HIV-1宫内传播的分子机制提供理论依据.方法 收集11例HIV-1感染孕妇胎盘、13例正常孕妇胎盘和10例早孕流产绒毛,免疫组化检测并比较3组孕妇胎盘或绒毛组织中HIV-1相关受体CD4、CCR5、CXCR4和DC -SIGN分子的存在情况及其表达强度.结果 CD4在早孕绒毛和晚孕胎盘中的表达存在个体差异,早孕组、对照组和病例组CD4阳性率分别为70.00％、61.54％、72.73％,3组阳性率差异无统计学意义(P=0.902).CCR5、CXCR4和DC-SIGN分子在胎盘均有表达,均定位于滋养细胞和绒毛间质细胞和/或Hofbauer细胞,且在早孕绒毛中的表达强度均低于晚孕胎盘组,差异均有统计学意义(t1=-4.09,P1＜0.001;t2=-4.80,P2＜0.001;t3=-4.57,P3=0.001).结论 胎盘组织中存在多种HIV-1受体相关分子,具备感染的分子基础.胎盘滋养细胞上是否存在CD4分子具有个体差异;CCR5、CXCR4和DC-SIGN分子在晚孕胎盘中的表达高于早孕的绒毛,可能是HIV-1感染宫内传播多发生于孕晚期的原因之一.     

Apoptosis and pathogenesis of avian influenza A (H5N1) virus in humans

The pathogenesis of avian influenza A (H5N1) virus in humans has not been clearly elucidated. Apoptosis may also play an important role. We studied autopsy specimens from 2 patients who died of infection with this virus. Apoptosis was observed in alveolar epithelial cells, which is the major target cell type for the viral replication. Numerous apoptotic leukocytes were observed in the lung of a patient who died on day 6 of illness. Our data suggest that apoptosis may play a major role in the pathogenesis of influenza (H5N1) virus in humans by destroying alveolar epithelial cells. This pathogenesis causes pneumonia and destroys leukocytes, leading to leukopenia, which is a prominent clinical feature of influenza (H5N1) virus in humans. Whether observed apoptotic cells were a direct result of the viral replication or a consequence of an overactivation of the immune system requires further studies.     

SDF-1/CXCR4表达与妊娠期高血压疾病及新生儿出生体重的关系

目的:研究胎盘中趋化因子SDF-1/CXCR4表达与妊娠期高血压疾病及新生儿出生体重之间的关系。方法:以10例妊娠期高血压患者为高血压组,10例轻度子痫前期患者为轻度子痫前期组,12例重度子痫前期患者为重度子痫前期组,35例正常产妇为对照组,以采用免疫组织化学法检测胎盘中SDF-1/CXCR4的表达强度,记录新生儿出生体重。结果:随着妊娠期高血压疾病病情加重,胎盘中SDF-1/CXCR4表达强度呈渐进性下降趋势,均低于对照组。对照组胎盘中SDF-1/CXCR4的表达与新生儿出生体重无统计学相关性。妊娠期高血压疾病患者胎盘中SDF-1、CXCR4的表达与新生儿出生体重有显著相关性。结论:胎盘中SDF-1、CXCR4表达强度变化与妊娠期高血压疾病发病及新生儿出生体重有重要关系。     

重庆市主城区长江和嘉陵江水中有机污染物对H4IIE细胞CYP1A1表达的诱导

目的以重庆市主城区大溪沟(嘉陵江)和寸滩(长江)两个点为代表,研究2004～2005年度重庆市水源水中有机污染物对H4IIE细胞细胞色素P4501A1(CYP1A1)表达的诱导。方法固相萃取法萃取水中有机污染物,将萃取的有机污染物溶于二甲基亚砜(DMSO)中,对H4IIE细胞进行染毒,用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增CYP1A1mRNA,比较不同水样诱导H4IIE细胞CYP1A1mRNA表达的差异,用电泳迁移率实验(EMSA)检测CYP1A1启动子的激活情况。结果CYP1A1引物则可以将4个水样12h和24h处理组细胞的cDNA扩增出条带,48h处理组只有2005年1月寸滩样和2005年1月大溪沟样处理的细胞能扩增出CYP1A1基因的条带,所有样品的72h处理组细胞都没有CYP1A1基因的扩增;4个水样处理H4IIE细胞24h后,均可在细胞核内形成可与标记的XRE探针结合的芳烃受体-芳烃受体核转移蛋白(AHR-ARNT)二聚体,从而在AHR-ARNT二聚体蛋白处呈现发光条带。结论各水样均可激活CYP1A1基因的启动子XRE,也均可诱导H4IIE细胞CYP1A1mRNA的表达,CYP1A1mRNA的表达量随处理时间的差异有所不同。     

Quercetin Reduces the Development of 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin-Induced Cleft Palate in Mice by Suppressing CYP1A1 via the Aryl Hydrocarbon Receptor

Quercetin is a flavonoid with a wide range of pharmacological activities, including anticancer, antioxidant, and anti-inflammatory effects. Since it is a nutrient that can be consumed with a regular diet, quercetin has recently garnered interest. Quercetin acts as a phytochemical ligand for the aryl hydrocarbon receptor (AhR). Cleft lip and palate are among the most frequently diagnosed congenital diseases, and exposure to 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) during pregnancy induces cleft palate via AhR. In this study, we investigated the preventive effect of quercetin intake on the TCDD-induced cleft palate and its mechanism of action. The in vivo results suggest that quercetin intake by pregnant mice can prevent cleft palate in fetal mice. In vitro, the addition of TCDD induced a reduction in cell migration and the proliferation of mouse embryonic palatal mesenchymal cells, which was mitigated by the addition of quercetin. The addition of quercetin did not alter the mRNA expression levels of the AhR repressor but significantly suppressed mRNA expression of CYP1A1. In addition, the binding of AhR to a xenobiotic responsive element was inhibited by quercetin, based on a chemically activated luciferase expression assay. In conclusion, our results suggest that quercetin reduces the development of TCDD-induced cleft palate by inhibiting CYP1A1 through AhR.     

2009甲型H1N1流感病毒的血凝素和神经氨酰酶基因变异分析

目的探讨2009新型甲型流感病毒H1N1的血凝素和神经氨酰酶基因的进化规律。方法通过NCBI数据库下载最新收录的A/H1N1的基因序列,采用Molecular Evolutionary Genetics Analysis version4.0(MEGA4.0)软件来排列和修剪流感病毒各段基因序列并构建进化树。结果不同地区分离到的2009年新型甲型H1N1流感病毒血凝素和神经氨酰酶编码基因均具有高度同源性,同一国别的亲缘关系更近,不同国别的亲缘关系稍远。结论说明此次新型甲型H1N1流行病毒来自同一传染源,且病毒到目前还没有变异。     

Ginsenoside Rh4 Suppresses Metastasis of Gastric Cancer via SIX1-Dependent TGF-β/Smad2/3 Signaling Pathway

Gastric cancer (GC) is the leading causes of cancer-related death worldwide. Surgery remains the cornerstone of gastric cancer treatment, and new strategies with adjuvant chemotherapy are currently gaining more and more acceptance. Ginsenoside Rh4 has excellent antitumor activity. Conversely, the mechanisms involved in treatment of GC are not completely understood. In this study, we certified that Rh4 showed strong anti-GC efficiency in vitro and in vivo. MTT and colony formation assays were performed to exhibit that Rh4 significantly inhibited cellular proliferation and colony formation. Results from the wound healing assay, transwell assays, and Western blotting indicated that Rh4 restrained GC cell migration and invasion by reversing epithelial–mesenchymal transition (EMT). Further validation by proteomic screening, co-treatment with disitertide, and SIX1 signal silencing revealed that SIX1, a target of Rh4, induced EMT by activating the TGF-β/Smad2/3 signaling pathway. In summary, our discoveries demonstrated the essential basis of the anti-GC metastatic effects of Rh4 via suppressing the SIX1–TGF-β/Smad2/3 signaling axis, which delivers a new idea for the clinical treatment of GC.     

脂氧素A4对子痫前期患者脐静脉内皮细胞分泌内皮素-1的影响

目的:研究脂氧素A4(lipoxinA4,LXA4)对子痫前期患者脐静脉内皮细胞分泌内皮素-1(endothelin-1,ET-1)的影响。方法:取子痫前期患者和正常孕妇组脐带及脐静脉血清,分离并培养脐静脉内皮细胞(human umbilical veinendothelial cell,HUVEC),分为正常细胞对照组、子痫前期细胞组和LXA4药物干预组(1 nmol/L,10 nmol/L,100 nmol/L)。RT-PCR检测各组细胞ET-1mRNA水平;酶联免疫吸附试验检测各组细胞上清液中ET-1的分泌水平。结果:LXA4降低子痫前期患者HUVEC内ET-1mRNA基因表达水平(P<0.05),而对正常细胞组无影响(P>0.05);LXA4明显抑制子痫前期脐静脉内皮细胞分泌ET-1(P<0.01),对正常细胞亦无影响(P>0.05)。结论:LXA4抑制子痫前期脐静脉内皮细胞ET-1 mRNA表达及分泌,为临床应用LXA4治疗妊娠期高血压疾病提供重要的实验依据。